一種去除紅細(xì)胞處理液及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及細(xì)胞生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種去除紅細(xì)胞處理液及用途。
【背景技術(shù)】
[0002]臨床上皮組織取樣時(shí)，取樣不慎或者取樣部位損傷導(dǎo)致出血，就形成血性樣本，腹水細(xì)胞學(xué)檢查時(shí)，在抽取腹水過程必然帶有大量血液，也會(huì)形成血性樣本。支氣管等部位灌洗取樣過程，也有可能出血，也會(huì)形成血性樣本，血性樣本在制片過程嚴(yán)重影響觀察，主要表現(xiàn)在:血紅細(xì)胞大量貼附在制片區(qū)，甚至覆蓋病理細(xì)胞，影響病理細(xì)胞的判讀、血紅細(xì)胞碎片凝集的小團(tuán)塊通過過濾網(wǎng)，貼附在制片區(qū)，影響病理細(xì)胞的判讀、被染液染色過的血紅蛋白粘附于玻片上。造成背景復(fù)雜，影響病理細(xì)胞判讀。因此能否處理血紅細(xì)胞成了血性樣本制片成功的關(guān)鍵。目前臨床上普遍采用高濃度的冰醋酸來處理，主要方式有:1、直接向保存液中加入一定比例的冰醋酸，裂解后離心，再向沉渣中加入冰醋酸，重復(fù)離心，達(dá)到去除紅細(xì)胞的效果；2、用酒精和冰醋酸混合物來裂解紅細(xì)胞，處理方法同第一種方式；3、用溶血?jiǎng)﹣砹呀饧t細(xì)胞，采用帶有氰化鉀的裂解液，處理方法同第一種。
[0003]三種方法中，方法I和方法2主要特點(diǎn)都是靠加入大量的冰醋酸來達(dá)到裂解紅細(xì)胞的效果，裂解完全，但是大量的高濃度冰醋酸會(huì)將一部分的正常細(xì)胞，以及病變細(xì)胞也一同裂解，因此在去除紅細(xì)胞的同時(shí)可能會(huì)因?yàn)椴∽兗?xì)胞也被裂解而造成漏檢。同時(shí)不同取樣部位的細(xì)胞可能因?yàn)楦邼舛鹊谋姿嵩斐蛇^酸而裂解。方法3采用溶血?jiǎng)﹣砹呀饧t細(xì)胞，目前市售的溶血?jiǎng)┯休^強(qiáng)的溶血效果，但是含有氰化鉀劇毒成分，對(duì)操作者和環(huán)境都是一種很大的威脅。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種高效、無毒、專一且成本低的去除紅細(xì)胞處理液。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種去除紅細(xì)胞處理液，其特征在于，由醇類、氯化鈉、磷酸鹽緩沖液、抗凝劑、表面活性劑、冰醋酸和雙蒸水組成。
[0006]進(jìn)一步，所述醇類占處理液總體積15%_30%，氯化鈉含量為5-10g/L、磷酸鹽緩沖液0.01-0.1M，抗凝劑含量為l_5g/L，表面活性劑含量為l_6g/L，冰醋酸l_5g/L，雙蒸水補(bǔ)充不足的處理液體積。
[0007]進(jìn)一步，所述醇類占處理液總體積20%_25%，氯化鈉含量為8_9g/L、磷酸鹽緩沖液0.05-0.1M，抗凝劑含量為2-4g/L，表面活性劑含量為3_5g/L，冰醋酸3_5g/L，雙蒸水補(bǔ)充不足的處理液體積。
[0008]進(jìn)一步，所述醇類為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇中的一種或任意一種以上，質(zhì)量濃度為 95%-100%。
[0009]進(jìn)一步，所述磷酸鹽緩沖液為2.2g磷酸氫二鈉和0.1g磷酸二氫鈉定容IL組成的
0.1MPB緩沖溶液，其以下使用濃度可用上述配制溶液稀釋而成。
[0010]進(jìn)一步，所述抗凝劑是乙二胺四乙酸二鈉。
[0011]進(jìn)一步，所述表面活性劑為吐溫-20、吐溫-80、十六烷三甲基氯化銨、十六烷二甲基芐基氯化銨、十六烷基三甲基溴化銨的一種或一種以上的組合物。
[0012]另一方面，本發(fā)明保護(hù)所述去除紅細(xì)胞處理液用于去除細(xì)胞樣品中的血紅細(xì)胞成分的用途。
[0013]進(jìn)一步，1ml細(xì)胞樣品與去除紅細(xì)胞處理液的體積比為10:6。
[0014]另一方面，本發(fā)明保護(hù)所述去除紅細(xì)胞處理液來去除血性細(xì)胞中紅細(xì)胞的方法，其特征在于，其步驟為:將血性樣品1ml混勻，經(jīng)過800g，5分鐘離心濃縮后，去除上清，向沉淀加入6ml去除紅細(xì)胞處理液，重新混勾lmin，再2000r/min離心5min，去除上清即可；若顏色未退去，重復(fù)以上步驟直至顏色褪去為止；優(yōu)選的，血性樣品中含有體積分?jǐn)?shù)多10%的血量。
[0015]本發(fā)明所述醇類占處理液總體積為15%_30%，既可以固定細(xì)胞，又不會(huì)使血紅蛋白迅速變性，有利于維持細(xì)胞形狀和清除血紅蛋白。低于本發(fā)明的濃度，細(xì)胞不能得到有效固定，變形。高于該濃度，容易使裂解釋放出來的血紅蛋白變性，難以復(fù)溶，很難排除干擾。
[0016]本發(fā)明所述冰醋酸含量為l_5g/L，合適的冰醋酸濃度，既可裂解紅細(xì)胞，又對(duì)病變細(xì)胞和正常細(xì)胞無損害，最大程度保留病變細(xì)胞供醫(yī)師判讀。若高于上限濃度會(huì)使細(xì)胞膨脹，細(xì)胞長時(shí)間在高濃度情況下，會(huì)破裂，損失細(xì)胞。若低于下限，則無法有效裂解紅細(xì)胞。
[0017]所述磷酸鹽為緩沖體系，處理液整體呈弱酸性，緩沖范圍廣，能維持多個(gè)取材部位的細(xì)胞正常形狀。
[0018]本發(fā)明所述表面活性劑為吐溫-20、吐溫-80、十六烷三甲基氯化銨、十六烷二甲基芐基氯化銨、十六烷基三甲基溴化銨、十四烷基三甲基溴化銨的一種或者一種以上的組合物，表面活性劑能起到溶解紅細(xì)胞的作用，又能清除污垢，增加溶液的溶解度，不易形成血紅蛋白復(fù)合物，更容易清除血紅細(xì)胞。本發(fā)明所用表面活性劑濃度優(yōu)選地在l_6g/L，高于上限影響細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。低于下限無法達(dá)到預(yù)期效果。
[0019]本發(fā)明所述去除紅細(xì)胞處理液的有益效果是:
1、所用試劑成本低廉，均采用普通的化學(xué)藥品；
2、無毒，不含氰化鉀等劇毒化學(xué)藥品，避免了對(duì)環(huán)境的污染，也給技術(shù)人員提供了一個(gè)安全的操作環(huán)境；
3、盡可能的降低對(duì)細(xì)胞的損害，能在去除紅細(xì)胞的同時(shí)保證病理細(xì)胞的完整性；
4、采用本發(fā)明所述去除紅細(xì)胞處理液處理細(xì)胞，只裂解紅細(xì)胞和清除血紅蛋白，對(duì)病變細(xì)胞和正常細(xì)胞無損害，最大程度保留病變細(xì)胞，維持細(xì)胞形狀，制片效果好，背景簡單，清晰，很容易判斷結(jié)果。
【附圖說明】
[0020]圖1是未經(jīng)過處理的血性宮頸細(xì)胞制片的10倍光鏡圖；
圖2是經(jīng)過本發(fā)明的去除紅細(xì)胞處理液處理后的血性宮頸細(xì)胞制片的10倍光鏡圖； 圖3是經(jīng)過市售的溶血?jiǎng)┨幚砗蟮难詫m頸細(xì)胞制片的10倍光鏡圖；
圖4是經(jīng)過濃冰醋酸和乙醇混合物處理后的血性宮頸細(xì)胞制片的10倍光鏡圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021]下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標(biāo)號(hào)表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0022]實(shí)施例1:去除紅細(xì)胞處理液的制備原料:
甲醇150ml ；
氯化鈉5g ；
冰醋酸1.0 ml ；
乙二胺四乙酸二鈉1.0g;
吐溫-201.0ml ；
PB0.0lM ；
蒸餾水定容至1000 ml。
[0023]制備方法:
按上述成分稱量和量取后，攪拌溶解即可。
[0024]用本實(shí)施例所制備得到的去除紅細(xì)胞處理液處理宮頸細(xì)胞標(biāo)本，制片效果比較好，背景比較簡單，清晰，很容易判斷結(jié)果。
[0025]實(shí)施例2:去除紅細(xì)胞處理液的制備原料:
乙醇300ml ；
氯化鈉1g ；
冰醋酸5.0ml ；
乙二胺四乙酸二鈉5.0g;
吐溫-206.0ml ；
PB0.1M ；
蒸餾水定容至1000 ml。
[0026]制備方法:同實(shí)施例1。
[0027]用本實(shí)施例所制備得到的去除紅細(xì)胞處理液處理痰液細(xì)胞標(biāo)本，制片效果比較好，背景比較簡單，清晰，很