專利名稱：細(xì)胞裂解物的藥用組合物及其生產(chǎn)和使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種包含不能生活的(nonviable)細(xì)胞裂解物和至少一種抗絮凝劑和/或抗沉降劑的藥用組合物。本發(fā)明中含有細(xì)胞裂解物的藥用組合物以溶液或懸液或冷凍干燥物的形式存在，尤其是，均化的細(xì)胞裂解物組合物以溶液或懸液或冷凍干燥物的形式存在。本發(fā)明進(jìn)一步公布了生產(chǎn)和使用該藥用組合物的方法。
背景技術(shù)：
在生產(chǎn)溶液或懸液形式的不能生活的細(xì)胞制劑中的藥用組合物例如細(xì)胞裂解物時(shí)，經(jīng)常會(huì)遇到聚集、絮凝和/或沉降這些問題。此問題導(dǎo)致產(chǎn)物不均一，致使質(zhì)或者量的不一致，尤其當(dāng)產(chǎn)物不得不分裝到多個(gè)容器時(shí)。此外，它也可能導(dǎo)致多批產(chǎn)物彼此間的不均一。
例如，在生產(chǎn)諸如角質(zhì)細(xì)胞裂解物的傷口愈合組合物，尤其是培養(yǎng)的人角質(zhì)細(xì)胞裂解物時(shí)，生產(chǎn)過程中的均化作用(裂解)步驟過后就會(huì)看到溶液或者懸液中含有的細(xì)胞裂解物快速的聚集、絮凝和部分沉降。這樣的聚集、絮凝和/或沉降導(dǎo)致細(xì)胞裂解物溶液或者懸液的不均一并進(jìn)一步使其工藝流程復(fù)雜化，有時(shí)，這甚至能造成組合物無法用于預(yù)期目的。所以，有必要做一些改動(dòng)，該改動(dòng)可通過防止絮凝或者沉降在均化作用前或均化作用后輔助流程步驟。
眾所周知，化學(xué)試劑刺激導(dǎo)致沉淀的蛋白絮凝或者聚集。美國專利號(hào)4,565,635描述了一種水溶性化學(xué)試劑“黃原膠”，已知可作為絮凝佐劑。類似地，美國專利號(hào)3,956,519描述了一種方法，其中水溶液中的蛋白被溶解的脫支低-DE麥芽糖糊精或者脫支支鏈淀粉誘導(dǎo)聚集。
在制藥部門，黃原膠被用于制造冷凍干燥藥用片劑，正如WOApplication No.9501782中所描述的，其中黃原膠促進(jìn)液體混合物中的顆粒治療劑懸浮并且對片劑應(yīng)用時(shí)的分散質(zhì)量和結(jié)構(gòu)沒有任何不良作用。
相反，US 6,010,719描述了用黃原膠作為增稠劑，它提高了懸液的粘性且適合用來阻止固體藥物顆粒沉降。類似地，黃原膠也被用于懸浮大的生物顆粒來達(dá)到穩(wěn)定流式細(xì)胞術(shù)中細(xì)胞懸液從而阻止沉降的目的(Cytometry 10803-806(1989))。另一個(gè)例子表明黃原膠的存在抑制了乳清蛋白分離物的聚集和分層從而得到均一混合物(FoodHydrocolloids 12469-479(1998))。
然而，所有這些例子適應(yīng)于相對簡單原封未動(dòng)的細(xì)胞懸液或特定的蛋白。
另一方面，裂解細(xì)胞得到細(xì)胞裂解物，它釋放各種形式的多種組分，形成諸如蛋白、糖蛋白、多糖、脂類、核酸等組分的非常復(fù)雜的混合物。所有這些組分可能彼此相互作用，極大地增加了復(fù)合物形成和絮凝的可能性，最終得到一個(gè)不穩(wěn)定的溶液或者懸液以及這些組分一部分的沉降。
因此，可見仍然需要提供一種含有細(xì)胞裂解物的均一、穩(wěn)定的藥用組合物。一個(gè)此類組合物的例子含有角質(zhì)細(xì)胞裂解物，其適于傷口愈合目的。仍然需要以溶液或者懸液的形式提供此類細(xì)胞裂解物的藥用組合物，該組合物是均化的且如有需要可進(jìn)一步干燥或者冷凍干燥處理。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及一種包含細(xì)胞裂解物和至少一種抗絮凝劑和/或抗沉降劑的藥用組合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種干燥或者冷凍干燥形式的均一藥用組合物。
本發(fā)明提供一種包含細(xì)胞裂解物和至少一種抗絮凝劑和/或抗沉降劑的藥用組合物，其中抗絮凝劑和/或抗沉降劑是黃原膠。
本發(fā)明進(jìn)一步提供一種藥用組合物，其中抗絮凝劑和/或抗沉降劑是黃原膠和麥芽糖糊精的組合。
此外，藥用組合物可能含有緩沖試劑。可用于這方面的緩沖液的例子包括檸檬酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、或者其他任何本領(lǐng)域已知的適當(dāng)緩沖液，優(yōu)選臨床可接受的緩沖試劑。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了生產(chǎn)基本沒有不一致性的溶液或者懸液形式的細(xì)胞裂解物藥用組合物的方法。此藥用組合物的實(shí)例為角質(zhì)細(xì)胞裂解物的均一冷凍干燥藥用組合物。
本發(fā)明也提供了生產(chǎn)溶液或者懸液形式的角質(zhì)細(xì)胞裂解物的均一、無菌組合物的方法。
本發(fā)明中的藥用組合物可能在多種治療應(yīng)用中有用而且可能進(jìn)一步包含一種制藥上可接受的載體或者媒介物或者受體。一個(gè)實(shí)例是在對諸如燒傷或者皮膚潰瘍的傷口處理中有用的角質(zhì)細(xì)胞裂解物組合物。
本發(fā)明提供了一種促進(jìn)傷口愈合的藥用組合物；其中所述組合物包括不能生活的角質(zhì)細(xì)胞裂解物和制藥上可接受的媒介物。所述制藥上可接受的媒介物為干粉、懸液或者溶液。此外，在這一點(diǎn)上，所述制藥上可接受的媒介物為凝膠、乳膏、軟膏或者除凝膠外的生物相容基質(zhì)。
本發(fā)明也提供了一種處理哺乳動(dòng)物表面?zhèn)谝源龠M(jìn)愈合的方法，包括以下步驟(a)將藥用組合物施于所述表面?zhèn)?；?b)促進(jìn)所述表面?zhèn)诘挠稀?br> 這里公開的本發(fā)明是溶液或者懸液或者其冷凍干燥形式的細(xì)胞裂解物藥用組合物，其進(jìn)一步特征為基本不存在不一致性。該細(xì)胞裂解物溶液或者懸液或者其冷凍干燥形式包括黃原膠和/或麥芽糖糊精，該黃原膠和/或麥芽糖糊精作為抗絮凝劑用以防止可能沉降的溶液或者懸液中形成絮凝。
本發(fā)明公開了一種生產(chǎn)均化的藥用組合物的方法，包括培養(yǎng)、裂解以及干燥細(xì)胞，該方法特征為，裂解后立即加入抗絮凝劑和/或抗沉降劑以穩(wěn)定細(xì)胞裂解物混合物。所述試劑為黃原膠或黃原膠和麥芽糖糊精的組合，它可以防止可能會(huì)在溶液或者懸液中沉降的絮凝形成。而且，此方法可以任選地包括冷凍干燥或者干燥溶液或者懸液以獲得無水產(chǎn)物。
發(fā)明詳述本發(fā)明的藥用組合物為溶液或者懸液形式的細(xì)胞裂解物組合物。這些含有細(xì)胞裂解物的藥用組合物進(jìn)一步包括了一種緩沖成分和至少一種抗絮凝劑和/或抗沉降劑。這些組合物可能經(jīng)冷凍干燥或者干燥進(jìn)一步處理，得到具有更加長期穩(wěn)定性的基本無水的產(chǎn)物。
本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“不一致性”指細(xì)胞裂解物組合物非均一的狀況，其方式為一部分裂解物的組合物可能不同于另一部分裂解物的組合物。
術(shù)語“細(xì)胞裂解物”指通過裂解細(xì)胞獲得的不能生活的細(xì)胞懸液或其級(jí)分。本發(fā)明的溶液或者懸液中的細(xì)胞裂解物可能是裂解步驟后獲得的整個(gè)細(xì)胞、細(xì)胞部分或者任何級(jí)分或者它們的混合物。
細(xì)胞裂解物可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的多種方法中任何一種來獲得。例如，整個(gè)細(xì)胞可以如US 6,126,935中描述的那樣來獲得。細(xì)胞的部分可以通過裂解整個(gè)細(xì)胞，將所得裂解物離心來獲得，其中所得細(xì)胞裂解物的某些部分在沉淀部分，而所得細(xì)胞裂解物的某些其他部分在上清液中，且兩部分只有一部分被使用。在US 6,126,935中公開了這種方法的一個(gè)例子。
術(shù)語“細(xì)胞裂解”指任何類型的細(xì)胞(即原核的或者真核的)并且包括用化學(xué)、生物、機(jī)械或者熱處理等可能導(dǎo)致細(xì)胞生物組分釋放的處理方法來破碎細(xì)胞(以溶液或者懸液形式存在)的細(xì)胞壁和/或細(xì)胞膜的作用。
現(xiàn)已開發(fā)并公布了許多機(jī)械裂解方法。其中包括壓力、空化(cavitation)、聲波或者超聲波、機(jī)械振蕩或者機(jī)械研磨(Sadeva，Biopharm 7(2)26-36，1994)。
細(xì)胞裂解物可以通過機(jī)械均化細(xì)胞獲得。本發(fā)明角質(zhì)細(xì)胞裂解物可以優(yōu)選采用US 6,126,935中描述的方法獲得。
應(yīng)該明白，文中用到的術(shù)語“均化作用或者均化”是指通過以這樣的方式使所述混合物均一來處理細(xì)胞裂解物混合物，從而保證上述混合物任何給定部分與同一混合物其它任一部分有相同的組成和理化性質(zhì)。某些均化作用過程也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞裂解，在此意義上術(shù)語均化作用或者均化也可能指裂解。
本發(fā)明組合物中的細(xì)胞裂解物的濃度依組合物中細(xì)胞裂解物的類型而變化，同時(shí)也依其預(yù)期的應(yīng)用變化。在這一點(diǎn)上，細(xì)胞裂解物濃度為0.02到5％w/v(百分?jǐn)?shù)指細(xì)胞裂解物中總蛋白的重量百分?jǐn)?shù)，用適當(dāng)?shù)牡鞍锥糠治龃_定)。優(yōu)選地，細(xì)胞裂解物濃度為0.05到2％w/v。更優(yōu)選地，細(xì)胞裂解物濃度為0.1到1％w/v。
本發(fā)明的溶液/懸液的液體成分可能為任何適于支持溶液或者懸液中細(xì)胞裂解物的液體。此類液體成分的實(shí)例為水、油或者乳濁液(諸如油包水或者水包油乳濁液)以及其它類似液體。
本發(fā)明涉及角質(zhì)細(xì)胞裂解物藥用組合物的情形中，預(yù)期會(huì)用到氯化鈉等滲溶液(用來調(diào)節(jié)滲透性)、磷酸鹽緩沖液和已裂解的細(xì)胞。優(yōu)選地，補(bǔ)加一種lyoprotectant(諸如蔗糖、麥芽糖糊精、甘氨酸、山梨糖醇、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇或者其它任何一種合適的lyoprotectant或者它們的組合)和一種檸檬酸鹽緩沖液(諸如檸檬酸鈉)的溶液來輔助隨后冷凍干燥組合物。
此外，本發(fā)明的藥用組合物還可能含有其它緩沖液或緩沖液系統(tǒng)。此類緩沖液的實(shí)例可能包括磷酸鹽、檸檬酸鹽或者其它任何一種可作為pH-緩沖液的組合物。
一個(gè)特殊的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種藥用組合物，該組合物通過如下方法獲得，該方法包括裂解細(xì)胞的步驟，而后向不能生活的細(xì)胞裂解物溶液或者懸液中加入至少一種抗絮凝劑和/或抗沉降劑。
在一個(gè)特殊的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種含有細(xì)胞裂解物和抗絮凝劑和/或抗沉降劑的藥用組合物，其中抗絮凝劑/抗沉降劑為黃原膠。
黃原膠可以通過商業(yè)途徑或者發(fā)酵得到。本發(fā)明中細(xì)胞裂解物的藥用組合物中黃原膠的濃度為0.001到5％w/v，更優(yōu)選0.01到1％w/v，最優(yōu)選0.05到0.5％w/v。
在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及角質(zhì)細(xì)胞裂解物的藥用組合物，應(yīng)用黃原膠可幫助防止角質(zhì)細(xì)胞裂解物溶液或者懸液在使用或者進(jìn)一步處理前或者過程當(dāng)中絮凝和沉降。因此，避免了溶液或者懸液中形成不一致。這有助于進(jìn)一步處理和利用角質(zhì)細(xì)胞裂解物溶液或者懸液制成用于傷口愈合的組合物，例如，處理皮膚潰瘍或者燒傷。
在一個(gè)特殊的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種含有細(xì)胞裂解物和抗絮凝劑和/或抗沉降劑的藥用組合物，其中抗絮凝劑/抗沉降劑為麥芽糖糊精。
本發(fā)明溶液/懸液中麥芽糖糊精濃度為0.01到10％w/v?；蛘撸灰部梢允褂脻舛葹?.5到2％w/v的麥芽糖糊精。
在這一點(diǎn)上，應(yīng)該注意在某些情形中，希望本發(fā)明的組合物有一個(gè)特定的pH和/或保持在特定的pH范圍。例如，對于本發(fā)明中角質(zhì)細(xì)胞的藥用組合物，優(yōu)選組合物的pH基本維持在6.8。因此，可用一種緩沖溶液來達(dá)到這一目的。在這方面有用的緩沖液的實(shí)例包括檸檬酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液或者本領(lǐng)域已知的其它任何一種適當(dāng)緩沖液，優(yōu)選那些也被臨床接受的。最終溶液或者懸液中含有的緩沖液的確切濃度將根據(jù)包括緩沖液強(qiáng)度和組合物所需的pH等多種因素而變化。但是，在此可以預(yù)見，當(dāng)涉及角質(zhì)細(xì)胞裂解物懸液時(shí)，本發(fā)明的組合物中緩沖液終濃度為5到200mM，優(yōu)選10到100mM，更優(yōu)選20到50mM。這可以通過向組合物中加入緩沖液濃縮貯存液來實(shí)現(xiàn)，例如加入濃度大約1500mM的貯存液。
在需要干燥或者凍干本發(fā)明的藥用組合物，特別是本發(fā)明溶液/懸液時(shí)，它們可能還要包括蔗糖。本發(fā)明組合物中蔗糖濃度根據(jù)組合物類型和組合物的用途而變化。在這一點(diǎn)上，蔗糖濃度為1到30％w/w，優(yōu)選2到20％w/w，更優(yōu)選5到10％w/w。這可以通過向組合物中加入蔗糖粉或者蔗糖濃縮貯存液來實(shí)現(xiàn)，例如加入濃度大約50％的貯存液。很明顯，除了蔗糖也可以使用另一種適當(dāng)濃度的lyoprotectant，諸如甘氨酸、海藻糖、山梨糖醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇或者其它任何一種本領(lǐng)域已知的適當(dāng)?shù)膌yoprotectant或者它們的組合。
本發(fā)明的藥用組合物可能進(jìn)一步包含了所涉及的特殊細(xì)胞裂解物和/或組合物的預(yù)期用途需要的其它不同成分。
本發(fā)明的溶液/懸液也有可能進(jìn)一步包含了附加的組分，它們中的一些是取得生物(細(xì)胞)材料的結(jié)果。這些成分的實(shí)例包括蛋白、培養(yǎng)基、洗滌介質(zhì)和其它易于絮凝和/或沉降或者促使其它組分絮凝和/或沉降的有機(jī)和/或無機(jī)材料。
這些附加的組分的確切濃度主要依賴于組合物、組合物的用途以及涉及的確切的附加組分而變化。
在特殊的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)均化的藥用組合物的方法，包括培養(yǎng)、裂解和干燥細(xì)胞的步驟，所述方法的特征在于，裂解之后立即加入抗絮凝劑和/或抗沉降劑以穩(wěn)定細(xì)胞裂解物混合物。
在特殊實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)均化的藥用組合物的方法，包括培養(yǎng)、裂解和干燥細(xì)胞的步驟，所述方法的特征在于，裂解之后立即加入黃原膠作為抗絮凝劑和/或抗沉降劑以穩(wěn)定細(xì)胞裂解物混合物。
在特殊實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)均化的藥用組合物的方法，包括培養(yǎng)、裂解和干燥細(xì)胞的步驟，所述方法的特征在于，裂解之后立即加入黃原膠與麥芽糖糊精的混合物作為抗絮凝劑和/或抗沉降劑以穩(wěn)定細(xì)胞裂解物混合物。
在特殊實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)溶液或者懸液或者冷凍干燥的溶液或者懸液形式的多種生物材料的藥用組合物的方法，其中含有生產(chǎn)溶液或者懸液或者冷凍干燥的溶液或者懸液形式的細(xì)胞裂解物組合物時(shí)用到的組合物。用本發(fā)明的方法生產(chǎn)溶液或者懸液或者冷凍干燥的溶液或者懸液形式的角質(zhì)細(xì)胞裂解物組合物是一特殊應(yīng)用。
通過組合(例如，混合)細(xì)胞裂解物和一種或者多種適合的可能為液體形式的賦形劑來形成溶液或者懸液，其中細(xì)胞裂解物可通過任何一種本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法獲得。這可以通過任何一種本領(lǐng)域技術(shù)人員已經(jīng)熟知的方法實(shí)現(xiàn)，該方法適于應(yīng)用特殊生物材料和/或包括在內(nèi)的液體組分。在此可以預(yù)期(正如上文討論的)，尤其在涉及到角質(zhì)細(xì)胞的情形中，細(xì)胞裂解物的溶液或者懸液會(huì)通過下面的方式形成，即，分別或者同時(shí)得到細(xì)胞裂解物和賦形劑(可能為液體形式)，以能形成細(xì)胞裂解物溶液或者懸液的方式混合細(xì)胞物質(zhì)和賦形劑。
角質(zhì)細(xì)胞裂解物可以制備成0.9％(w/w)氯化鈉、磷酸緩沖鹽溶液或者其它任何一種合適介質(zhì)的等滲溶液的形式。然后將細(xì)胞裂解物機(jī)械均化，如有需要于-70℃保存。然后解凍冷凍的均化物并通過添加賦形劑進(jìn)行補(bǔ)充，該賦形劑由6.5％終濃度的蔗糖(作為lyoprotectant)和30mM終濃度的檸檬酸鹽組成。
本發(fā)明方法中，細(xì)胞裂解物的濃度以及加到組合物中的液體組分的濃度將依據(jù)組合物中細(xì)胞裂解物的類型和預(yù)期的用途而變化。
可以用任何一種適當(dāng)?shù)?、本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式向細(xì)胞裂解物懸液或者溶液中添加黃原膠。例如，可以在有助于溶解并在溶液或者懸液中均勻分散的條件下向溶液或者懸液中加入固態(tài)的黃原膠，或者可以在加入到細(xì)胞裂解物懸液/溶液以前，先將其溶于液體，諸如水中。正如上文提到的，均化作用之后立即加入黃原膠允許它發(fā)揮抗絮凝/抗沉降的特性，無需把黃原膠加到均化作用步驟，那樣會(huì)給它的粘性帶來負(fù)面影響。
在特殊實(shí)施方案中，本發(fā)明中生產(chǎn)溶液或者懸液形式細(xì)胞裂解物組合物的方法可能在加入黃原膠以前進(jìn)一步包括了均化本發(fā)明的細(xì)胞裂解物形成的組合物。
可以采用任何一種已知的適當(dāng)?shù)那覟楸绢I(lǐng)域技術(shù)人員熟知的均化技術(shù)進(jìn)行均化，包括機(jī)械方法和化學(xué)方法，且在裂解所需細(xì)胞所需的方法條件下。
在這一點(diǎn)上，用高壓均化作用來均化溶液或者懸液對角質(zhì)細(xì)胞裂解物溶液/懸液尤其重要。此類均化作用可用任何適當(dāng)?shù)脑O(shè)備，諸如細(xì)胞破碎機(jī)(cell breaker)(Constant Systems，英國)來進(jìn)行。在此特定實(shí)施方案中，均化作用在4到20℃2000巴壓力下進(jìn)行。產(chǎn)物為懸液形式的細(xì)胞裂解物。在這一點(diǎn)上應(yīng)該注意，傳統(tǒng)上抗絮凝劑在均化前加到細(xì)胞裂解物組合物中。這樣做是為了簡化過程且?guī)椭柚咕^程中的絮凝。但是，這可能也會(huì)對抗絮凝劑的粘性性質(zhì)產(chǎn)生負(fù)面影響，尤其當(dāng)用黃原膠作為抗絮凝劑時(shí)，會(huì)造成組合物形成不一致。
令人驚奇的是，這里我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在均化作用之前組合物中沒有必要存在抗絮凝劑和/或抗沉降劑。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，如果在(高壓)均化作用以后立即向組合物中加入抗絮凝劑和/或抗沉降劑，組合物中的絮凝依然能被基本阻止同時(shí)抗絮凝劑的粘性性質(zhì)不會(huì)受負(fù)面影響。本發(fā)明中生產(chǎn)溶液或者懸液形式的細(xì)胞裂解物組合物的方法可能進(jìn)一步由向本發(fā)明的細(xì)胞裂解物組合物中加入上面也曾提到的濃度的檸檬酸鹽緩沖液和/或蔗糖(二者可以像上面描述的那樣獲得)組成。
正如此處公開的，本發(fā)明的組合物和方法尤其適用于且尤其有利于形成溶液或者懸液形式的角質(zhì)細(xì)胞裂解物的藥用組合物。在這一點(diǎn)上，角質(zhì)細(xì)胞裂解物可以如US 6,126,935中描述的那樣獲得。
在特定實(shí)施方案中，在此公布的是溶液或者懸液形式的細(xì)胞裂解物的藥用組合物，尤其是溶液或者懸液形式的角質(zhì)細(xì)胞裂解物，或者它們的冷凍干燥形式，其濃度為0.2到50mg/ml，優(yōu)選5到20mg/ml，更優(yōu)選1到10mg/ml(提供的濃度指裂解物中的蛋白濃度)。這些細(xì)胞裂解物的溶液/懸液包含黃原膠作為抗絮凝劑，以阻止形成可能會(huì)在溶液或者懸液中沉降的絮凝。本發(fā)明的細(xì)胞裂解物的藥用組合物(溶液或懸液形式)中黃原膠的終濃度為0.001到5％w/v，更優(yōu)選0.01到1％w/v，最優(yōu)選0.05到0.5％w/v。
在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明的細(xì)胞裂解物的藥用組合物可能進(jìn)一步包含麥芽糖糊精作為抗絮凝劑，以阻止形成可能會(huì)在溶液或者懸液中沉降的絮凝。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的細(xì)胞裂解物的藥用組合物中麥芽糖糊精的終濃度為0.01到10％w/v，更優(yōu)選0.1到5％w/v，最優(yōu)選0.5到2％w/v。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的細(xì)胞裂解物的藥用組合物可能進(jìn)一步包含檸檬酸鹽緩沖液和/或蔗糖。
在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明的細(xì)胞裂解物的藥用組合物可能進(jìn)一步包含賦形劑，尤其是形成凝膠的賦形劑。
在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，本發(fā)明的細(xì)胞裂解物組合物被均化。
在本發(fā)明的另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，均化的組合物可能進(jìn)一步進(jìn)行干燥處理。干燥可以以本領(lǐng)域已知的多種方法進(jìn)行，諸如蒸發(fā)、真空干燥、噴霧干燥、流化床干燥、紅外線干燥、微波干燥或其它除去溶液或者懸液中水分的方法，只要干燥過程對最終組合物的性質(zhì)沒有負(fù)面影響。冷凍干燥是許多去除水分優(yōu)選方法中的一個(gè)。
在本發(fā)明關(guān)于這方面的特定實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法用來制造溶液或者懸液形式的細(xì)胞裂解物組合物，尤其是，溶液或者懸液形式，可能是干燥形式的角質(zhì)細(xì)胞裂解物組合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，加到本發(fā)明細(xì)胞裂解物的藥用組合物中的黃原膠的終濃度為0.001到5％w/v。在另一個(gè)實(shí)施方案中，黃原膠的濃度可能為0.05到0.5％w/v。
在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明生產(chǎn)溶液或者懸液形式的細(xì)胞裂解物組合物的方法可能進(jìn)一步包括向細(xì)胞裂解物組合物中加入麥芽糖糊精，從而麥芽糖糊精作為抗絮凝劑，阻止形成可能會(huì)在溶液或者懸液中沉降的絮凝。
在特定實(shí)施方案中，加到本發(fā)明的細(xì)胞裂解物藥用組合物中的麥芽糖糊精終濃度為0.01到10％w/v。對大多數(shù)應(yīng)用而言，麥芽糖糊精濃度0.5到2％w/v可能就足夠了。
在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種生產(chǎn)均化的藥用組合物的方法，包括細(xì)胞培養(yǎng)、裂解以及干燥的步驟，所述方法的特征在于，通過高壓均化作用裂解后立即加入黃原膠和/或麥芽糖糊精的混合物作為抗絮凝劑和/或抗沉降劑以穩(wěn)定細(xì)胞裂解物混合物。
在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種生產(chǎn)均化的藥用組合物的方法，包括角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)、裂解以及干燥的步驟，所述方法的特征在于，通過高壓均化作用裂解后立即加入黃原膠和/或麥芽糖糊精的混合物作為抗絮凝劑和/或抗沉降劑以穩(wěn)定角質(zhì)細(xì)胞裂解物混合物。
在本發(fā)明的另一方面，公開于此的是以本發(fā)明的方法獲得的本發(fā)明的溶液或者懸液形式的細(xì)胞裂解物的藥用組合物。
在本發(fā)明此方面的一個(gè)特定實(shí)施方案中，公開于此的是以本發(fā)明的方法獲得的溶液或者懸液形式的角質(zhì)細(xì)胞裂解物的藥用組合物。在進(jìn)一步的特定實(shí)施方案中，含有角質(zhì)細(xì)胞裂解物的藥用組合物為冷凍干燥或其它干燥形式。
在本發(fā)明另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，公開于此的是一種通過施用含有有效量細(xì)胞裂解物或細(xì)胞裂解物級(jí)分的組合物來治療傷口的方法。而且，組合物可以通過多種不同載體系統(tǒng)和藥物劑量形式施用，例如乳膏、軟膏、凝膠、粉末、噴霧劑、溶液、懸液、乳濁液、凍干粉末、氣溶膠。
在另一個(gè)特定實(shí)施方案中，公開于此的是一種溶液或者懸液形式的細(xì)胞裂解物的組合物，獲取方法包括形成溶液或者懸液形式的細(xì)胞裂解物，向溶液或者懸液形式的細(xì)胞裂解物組合物中加入至少一種抗絮凝劑和/或至少一種抗沉降劑，穩(wěn)定已加入至少一種抗絮凝劑和/或至少一種抗沉降劑的細(xì)胞裂解物溶液或者懸液的組合物。
在特定實(shí)施方案中，公開于此的是本發(fā)明的細(xì)胞裂解物溶液或者懸液的組合物，獲取方法包括在向不能生活的細(xì)胞裂解物溶液或者懸液的組合物中加入至少一種抗絮凝劑和/或至少一種抗沉降劑之前裂解細(xì)胞的步驟。高壓均化作用可能為此類裂解方法之一。
在特定實(shí)施方案中，公開于此的是本發(fā)明的細(xì)胞裂解物溶液或者懸液的組合物，獲取方法包括在向不能生活的細(xì)胞裂解物溶液或者懸液的組合物中加入濃度為0.001到5％w/v，更優(yōu)選0.01到1％w/v，最優(yōu)選0.05到0.5％w/v的黃原膠作為一種抗絮凝劑和/或至少一種抗沉降劑之前裂解細(xì)胞的步驟。高壓均化作用可能為此類裂解方法之一。
在特定實(shí)施方案中，公開于此的是本發(fā)明的細(xì)胞裂解物溶液或者懸液的組合物，獲取方法包括在向不能生活的細(xì)胞裂解物溶液或者懸液的組合物中加入濃度為0.001到5％w/v，更優(yōu)選0.01到1％w/v，最優(yōu)選0.05到0.5％w/v的黃原膠以及濃度為0.01到10％w/v，更優(yōu)選0.5到2％w/v的麥芽糖糊精的組合混合物作為一種抗絮凝劑和/或至少一種抗沉降劑之前裂解細(xì)胞的步驟。高壓均化作用可能為此類裂解方法之一。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明生產(chǎn)溶液或者懸液形式(可能是干燥或者冷凍干燥形式)的細(xì)胞裂解物的組合物的方法可能進(jìn)一步由在向其中加入黃原膠后對細(xì)胞裂解物的組合物進(jìn)行滅菌處理組成。這種滅菌可以通過化學(xué)處理、熱處理(包括使用微波能)或者照射，諸如紫外線、γ射線或者電子束照射進(jìn)行。當(dāng)用γ射線或者電子束照射時(shí)，對組合物的滅菌優(yōu)選在干燥(諸如冷凍干燥或者噴霧干燥)以后進(jìn)行，以使可能對組合物的生物活性造成的影響最小化。
在描述了本發(fā)明的細(xì)胞裂解物組合物及其生產(chǎn)方法之后，現(xiàn)在給出下面的實(shí)施例僅是為了說明的目的而不意味著也不應(yīng)該將其看作是限制性的。
對上面公開的組合物、程序、使用和方法可能會(huì)作一些不脫離本發(fā)明基本精神的改動(dòng)。所以，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該清楚，在附加的權(quán)利要求范圍內(nèi)，可能會(huì)以不同于此出特別描述的方式對本發(fā)明進(jìn)行應(yīng)用。
實(shí)施例實(shí)施例1培養(yǎng)人角質(zhì)細(xì)胞以及制備角質(zhì)細(xì)胞裂解物從新生兒包皮分離角質(zhì)細(xì)胞。為使表皮和真皮分離，使包皮樣品在含有25U/mL的分散酶(Dispase)的溶液中4℃溫育過夜。收集表皮部分并進(jìn)一步在含有0.05％胰蛋白酶和0.02％的EDTA的溶液中于37℃溫育處理30分鐘，以獲得單個(gè)角質(zhì)細(xì)胞。然后加入胰蛋白酶抑制劑中和胰蛋白酶，將細(xì)胞離心、重懸于含DMSO的深低溫保藏溶液并在液氮中深低溫保藏。
解凍后，用3T3飼養(yǎng)成纖維細(xì)胞技術(shù)(Rheinwald J和Green H.Cell(1975)6331-344Serial cultivation of strains of human epidermalkeratinocytesthe formation of keratinizing colonies from single cells)或者在可購得的低鈣角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)分離的角質(zhì)細(xì)胞。經(jīng)過培養(yǎng)，在含有氯化鈉和磷酸鹽緩沖液的等滲溶液中通過機(jī)械刮取收集細(xì)胞，機(jī)械均化并在-70℃冷凍。解凍后，向所得的粗裂解液(BulkUnprocessed Product)中補(bǔ)充lyoprotectant(蔗糖)和檸檬酸鹽緩沖液并用細(xì)胞破碎機(jī)(Constant Systems，英國)進(jìn)一步通過高壓均化作用進(jìn)行處理。然后將所得的懸液(Bulk Formulated Lysate)裝瓶和凍干。
實(shí)施例2用黃原膠和/或麥芽糖糊精防止絮凝和沉降如實(shí)施例1中描述的那樣制備未處理的大量(bulk)裂解物(BUP)。配制的大量產(chǎn)物組成了200克BUP(含有大約2mg/ml的總蛋白)，向其中加入了13克蔗糖粉。把該材料分成3等分試樣，處理如下等分試樣IA用Constant Systems高壓均化器于800巴壓力處理(一個(gè)循環(huán))。經(jīng)過處理后，向12.5ml的均化材料中補(bǔ)充下列任何一個(gè)-1.25ml的水(IAl)-0.33ml 20％w/v Lutrol F127溶液(IA2)-1.25ml 1％w/v黃原膠/10％w/v麥芽糖糊精的溶液(IA3)-1.25ml 1％w/v黃原膠/10％w/v麥芽糖糊精的溶液和0.32ml 20％w/v Lutrol F127溶液(IA4)等分試樣IB用Constant Systems高壓均化器于2000巴壓力處理(一個(gè)循環(huán))。經(jīng)過處理后，向12.5ml的均化材料中補(bǔ)充下列任何一個(gè)-1.25ml的水(IBl)-0.33ml 20％w/v Lutrol F127溶液(IB2)-1.25ml 1％w/v黃原膠/10％w/v麥芽糖糊精的溶液(IB3)-1.25ml 1％w/v黃原膠/10％w/v麥芽糖糊精的溶液和0.32ml 20％w/v Lutrol F127溶液(IB4)等分試樣II再分成4個(gè)25ml的等分試樣，先補(bǔ)充下列任何一個(gè)
-2.5ml的水(II1)-0.65ml 20％w/v Lutrol F127溶液(II2)-2.5ml 1％w/v黃原膠/10％w/v麥芽糖糊精的溶液(II3)-2.5ml 1％w/v黃原膠/10％w/v麥芽糖糊精的溶液和0.65ml20％w/v Lutrol F127溶液(II4)然后將這些配好的樣品經(jīng)過高壓均化器，壓力為800巴(II1A，II2A，II3A，II4A)或者2000巴(II1B，II2B，II3B，II4B)。把已處理過的配制的大量產(chǎn)物的等分試樣裝入15ml干凈塑料試管中，2-8℃放置不動(dòng)。對于本實(shí)施例以及后面的實(shí)施例，要在固定的時(shí)間間隔對絮凝或沉降進(jìn)行目測，采用0-5級(jí)計(jì)分系統(tǒng)(0/0＝?jīng)]有絮凝/沉降，5/5最大絮凝/沉降，5/0最大絮凝，沒有沉降，等等)。
4℃進(jìn)行2小時(shí)后估計(jì)結(jié)果并總結(jié)在表1表1
L＝Lutrol F127；M＝麥芽糖糊精；X＝黃原膠；1，幾乎沒有任何可見的絮片，均一無沉降；2，均化作用后可能很差的Lutrol-MX混合。
本實(shí)施例表明1％的麥芽糖糊精和0.1％黃原膠的組合抑制裂解物材料絮凝和沉降。但是，令人驚訝的是這一有益效果只有當(dāng)添加劑在高壓均化作用之后而不是之前加入的時(shí)候才能夠觀察到。而且，加入麥芽糖糊精和黃原膠不會(huì)對裂解物的生物活性帶來負(fù)面干擾。
實(shí)施例3用黃原膠/麥芽糖糊精阻止?jié)饪s裂解物懸液絮凝和沉降如實(shí)施例1中描述的那樣完成未經(jīng)處理的大量裂解物(BUP)的制備。
-配制的大量產(chǎn)物制備如下1)向105ml BUP中加入87.5ml檸檬酸鹽緩沖液(120mM，pH6.8)溶液12)向128ml溶液1中加入15克蔗糖粉(溶液2)-制劑A(無抗絮凝劑)將64ml溶液2在800巴壓力下用Constant Systems均化器處理，然后補(bǔ)充52ml水。
-制劑B(有抗絮凝劑)將64ml溶液2在800巴壓力下用Constant Systems均化器處理，然后補(bǔ)充29ml水和23ml含有5％麥芽糖糊精和0.5％黃原膠的溶液。
3)制劑C(有抗絮凝劑，沒有蔗糖)將64ml溶液1在800巴壓力下用Constant Systems均化器處理，然后補(bǔ)充29ml水和23ml含有5％麥芽糖糊精和0.5％黃原膠的溶液。
經(jīng)過處理后，樣品在4℃保存24小時(shí)，用0-5級(jí)(0＝?jīng)]有絮凝/沉降，5＝最大絮凝/沉降)對絮凝/沉降進(jìn)行計(jì)分。樣品也要凍干，通過電子束滅菌進(jìn)行處理并估計(jì)定生物活性。結(jié)果示于表2表2
S蔗糖6.5％；C檸檬酸鹽30mM，pH 6.8；M麥芽糖糊精1％；X黃原膠0.1％；H，均化作用后；L，凍干后；L+E，凍干和31 kGy電子束照射后。
這些數(shù)據(jù)表明在檸檬酸鹽緩沖液存在下加入1％麥芽糖糊精/0.1％黃原膠可以抑制低濃度裂解物絮凝和沉降達(dá)24小時(shí)。但是，當(dāng)使用更高濃縮的裂解物并省去檸檬酸鹽緩沖液的時(shí)候，均化作用后1.5小時(shí)就已經(jīng)出現(xiàn)明顯的絮凝和沉降了。數(shù)據(jù)進(jìn)一步證實(shí)了麥芽糖糊精和黃原膠對裂解物生物活性無負(fù)面影響且與電子束照射相容(盡管裂解物的內(nèi)在生物活性被照射降低)。
實(shí)施例4用黃原膠或者黃原膠/麥芽糖糊精阻止含有不同濃度蛋白的裂解物懸液絮凝和沉降-如實(shí)施例1中描述的那樣制備未經(jīng)處理的大量裂解物(BUP)制備配制的大量產(chǎn)物1.制劑3XA和3XB-BUP(大約0.98mg/ml) 94克-300mM檸檬酸鹽緩沖液pH6.820克-蔗糖粉13克-水33克通過高壓均化器于2000巴處理-經(jīng)過處理后，裂解物分成2個(gè)80克的等分試樣，向其中加入20克含5％麥芽糖糊精/0.5％黃原膠的溶液(制劑3XA)或者20克含0.5％黃原膠的溶液(制劑3XB)。
2.制劑1XA和1XB-BUP(大約0.98mg/ml)30.3克-300mM檸檬酸鹽緩沖液pH6.8 20克-蔗糖粉 13.2克-水 96.5克通過高壓均化器于2000巴處理-經(jīng)過處理后，裂解物分成2個(gè)80克的等分試樣，向其中加入20克含5％麥芽糖糊精/0.5％黃原膠的溶液(制劑1XA)或者20克含0.5％黃原膠的溶液(制劑1XB)。
3.制劑0.3XA和0.3XB向25克制劑1XA中加入下列成分制備制劑0.3XA-蔗糖 3.25克
-300mM檸檬酸鹽緩沖液pH6.8 5克-PBS緩沖液31.75克-5％麥芽糖糊精/0.5％黃原膠10克向25克制劑1XB中加入下列成分制備制劑0.3XB-蔗糖3.25克-300mM檸檬酸鹽緩沖液pH6.85克-PBS緩沖液 31.75克-5％麥芽糖糊精/0.5％黃原膠 10克該材料保存在4℃，在不同的時(shí)間點(diǎn)估計(jì)絮凝/沉降。進(jìn)一步估計(jì)該材料的生物活性。結(jié)果總結(jié)在表3表3
(*)由于此裂解物制劑的生物活性通常很低，生物測定結(jié)果可能不可靠；M麥芽糖糊精1％；X黃原膠0.1％；C檸檬酸鹽緩沖液30mM，pH6.8；S蔗糖6.5％。
本實(shí)施例表明，在不同的蛋白終濃度，單純黃原膠的抗沉降和絮凝的效率與麥芽糖糊精和黃原膠的組合相當(dāng)。
實(shí)施例5用黃原膠或者黃原膠/麥芽糖糊精阻止裂解物懸液絮凝和沉降以及加入抗絮凝劑的時(shí)間選擇效應(yīng)-如實(shí)施例1中描述的那樣制備未經(jīng)處理的大量裂解物(BUP)制備配制的大量產(chǎn)物1.制劑A和B(無蔗糖)-BUP(大約2.74mg/ml)27.9克-300mM檸檬酸鹽緩沖液pH6.8 20克
-水 112.1克通過高壓均化器于2000巴進(jìn)行均化作用處理。
將均化的材料分成每份80克的2個(gè)等分試樣，向其中加20克含5％麥芽糖糊精/0.5％黃原膠的溶液(制劑A)或者20克含0.5％黃原膠的溶液(制劑B)。
2.制劑C-J(含有蔗糖)-BUP(大約2.74mg/ml)111.5克-300mM檸檬酸鹽緩沖液pH6.8 80克-蔗糖粉 52.1克-水 398.1克將混合物分成每份80克的8個(gè)等分試樣。
-2個(gè)等分試樣補(bǔ)充20克含5％麥芽糖糊精/0.5％黃原膠的溶液(制劑I)或者20克含0.5％黃原膠的溶液(制劑J)隨后經(jīng)高壓均化器于2000巴處理。
-6個(gè)等分試樣先經(jīng)高壓均化器于2000處理，隨后補(bǔ)充抗絮凝劑添加劑，可以選擇在均化作用之后立即加入(制劑G、H)或者在均化作用以后5分鐘(制劑E、F)或者30分鐘加入(制劑C、D)。用到的添加劑可以是20克含5％麥芽糖糊精/0.5％黃原膠的溶液(制劑C、E、G)也可以是20克含0.5％黃原膠的溶液(制劑D、F、H)。
將處理過的樣品保存在4℃并用0-5級(jí)估計(jì)絮凝/沉降。也檢測樣品的生物活性。結(jié)果總結(jié)在表4中表4
(*)由于此裂解物制劑的生物活性通常很低，生物測定結(jié)果可能不可靠；M麥芽糖糊精1％；X黃原膠0.1％；C檸檬酸鹽緩沖液30mM，pH6.8；S蔗糖6.5％。
本實(shí)施例表明，黃原膠具有與麥芽糖糊精/黃原膠的組合相似的抑制裂解物懸液絮凝和沉降的功效。也證實(shí)了抗絮凝劑需在高壓均化作用這一步之后加入才能有效這一驚人的發(fā)現(xiàn)。為了使隨后的絮凝最小化，優(yōu)選在均化作用之后盡可能快地加入抗絮凝劑。
實(shí)施例6使用黃原膠，麥芽糖糊精或者黃原膠/麥芽糖糊精阻止裂解物懸液絮凝或者沉降以及在均化作用前或均化作用后添加的效果-如實(shí)施例1中描述的那樣制備未經(jīng)處理的大量裂解物(BUP)通過添加終濃度6.5％的蔗糖(制劑1、2、3)或者濃度為5％的麥芽糖糊精(制劑4、5)制備配制的大量產(chǎn)物。隨后在800巴壓力下均化懸液并補(bǔ)充下面一種(百分?jǐn)?shù)指終濃度)制劑1麥芽糖糊精1％，黃原膠0.1％制劑2麥芽糖糊精1％制劑3黃原膠0.1％制劑4無添加劑制劑5黃原膠0.1％經(jīng)過處理后，將該材料保存在4℃，在不同的時(shí)間點(diǎn)估計(jì)絮凝/沉降。結(jié)果總結(jié)在表5表5
M麥芽糖糊精1％或5％；X黃原膠0.1％；S蔗糖6.5％。
本實(shí)施例表明，麥芽糖糊精和黃原膠的組合阻止絮凝比單獨(dú)黃原膠更有效。單獨(dú)使用麥芽糖糊精能對絮凝起到有限的抑制但無法長期抑制沉降。
實(shí)施例7在有或者沒有蔗糖存在的情況下用黃原膠/麥芽糖糊精阻止不同濃度的裂解物懸液絮凝和沉降-如實(shí)施例1中描述的那樣制備未經(jīng)處理的大量裂解物(BUP)制備配制的大量產(chǎn)物1. 制劑A和B(蔗糖)-BUP(大約3.1mg/ml) 30ml-150mM檸檬酸鹽緩沖液pH6.8 20ml-蔗糖粉 6.5克通過高壓均化器于800巴進(jìn)行均化作用處理。
將均化的材料分成每份25ml的2個(gè)等分試樣，向其中加入25ml水(制劑A)或者15ml水以及10ml含5％麥芽糖糊精/0.5％黃原膠的溶液(制劑B)。
2.制劑C(無蔗糖)-BUP(大約3.1mg/ml) 15ml-150mM檸檬酸鹽緩沖液pH6.8 10ml通過高壓均化器于800巴進(jìn)行均化作用處理。
向均化的材料中加入15ml水以及10ml含5％麥芽糖糊精/0.5％黃原膠的溶液(制劑B)。
3.制劑D(更高蛋白濃度，無檸檬酸鹽緩沖液)-BUP(大約3.1mg/ml 45ml-蔗糖粉 3.7克通過高壓均化器于800巴進(jìn)行均化作用處理。
向均化的材料中加入12ml含5％麥芽糖糊精/0.5％黃原膠的溶液(制劑B)。
將樣品保存在4℃并在不同的時(shí)間點(diǎn)估計(jì)絮凝和沉降，檢測生物活性。結(jié)果總結(jié)在表6中表6
M麥芽糖糊精1％；X黃原膠0.1％；C檸檬酸鹽緩沖液30mM，pH6.8；S蔗糖6.5％。
本實(shí)施例表明，1％麥芽糖糊精/0.1％黃原膠的組合顯著抑制裂解物絮凝和沉降至少達(dá)均化作用后23小時(shí)。有蔗糖存在會(huì)稍微改善麥芽糖糊精/黃原膠的效果。經(jīng)過更長時(shí)間的溫育(96小時(shí))后，甚至在麥芽糖糊精/黃原膠存在的情況下也會(huì)發(fā)生沉降和絮凝，尤其當(dāng)?shù)鞍诐舛雀邥r(shí)。麥芽糖糊精和黃原膠的存在不影響裂解物的生物活性。
權(quán)利要求
1.包含不能生活的細(xì)胞裂解物和至少一種抗絮凝劑和/或抗沉降劑的藥用組合物。
2.權(quán)利要求1中的藥用組合物，其中抗絮凝劑和/或抗沉降劑為黃原膠。
3.權(quán)利要求1和2中的藥用組合物，其中抗絮凝劑和/或抗沉降劑為黃原膠和麥芽糖糊精的組合。
4.權(quán)利要求1到3中的藥用組合物，進(jìn)一步包含緩沖試劑。
5.干燥形式的權(quán)利要求1到4中的藥用組合物。
6.冷凍干燥形式的權(quán)利要求1到4中的藥用組合物。
7.權(quán)利要求1到6中的藥用組合物，其中細(xì)胞裂解物為角質(zhì)細(xì)胞裂解物。
8.權(quán)利要求1到7中的藥用組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包含了制藥上可接受的載體/賦形劑/媒介物。
9.用于促進(jìn)傷口愈合的權(quán)利要求1到8中的藥用組合物，其中所述組合物包含不能生活的細(xì)胞裂解物和制藥上可接受的媒介物。
10.權(quán)利要求8和9中的藥用組合物，其中所述的制藥上可接受的媒介物是一種干粉、懸液或者溶液。
11.權(quán)利要求8和9中的藥用組合物，其中所述的制藥上可接受的媒介物是凝膠、乳膏、軟膏或者生物相容基質(zhì)。
12.生產(chǎn)均化的藥用組合物的方法，包括培養(yǎng)、裂解以及干燥細(xì)胞的步驟，所述方法的特征在于，裂解后立即加入抗絮凝劑和/或抗沉降劑以穩(wěn)定細(xì)胞裂解物混合物。
13.權(quán)利要求12中的方法，其中通過冷凍干燥來干燥細(xì)胞。
14.權(quán)利要求12和13中的方法，其中細(xì)胞裂解物為角質(zhì)細(xì)胞裂解物。
15.權(quán)利要求12到14中的方法，其中抗絮凝劑和/或抗沉降劑為黃原膠。
16.權(quán)利要求12到15中的方法，其中抗絮凝劑和/或抗沉降劑為黃原膠和麥芽糖糊精的組合。
17.權(quán)利要求1到11中的組合物在治療燒傷或者皮膚潰瘍中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種包含不能生活的細(xì)胞裂解物和至少一種抗絮凝劑和/或抗沉降劑的藥用組合物。本發(fā)明中含有細(xì)胞裂解物的藥用組合物以溶液或懸液或冷凍干燥物的形式存在，尤其是，均化的細(xì)胞裂解物組合物以溶液或懸液或冷凍干燥物的形式存在。本發(fā)明進(jìn)一步公開了生產(chǎn)和使用該藥用組合物的方法。
文檔編號(hào)A61P17/00GK1720064SQ200380104974
公開日2006年1月11日 申請日期2003年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月3日
發(fā)明者C·韋爾韋特, J·-P·雷蒙, B·德萊, P·德韋勒 申請人:基因創(chuàng)新有限公司