判斷菊花是否經過硫熏的hplc檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及菊花是否經過硫熏的檢測方法，具體地，涉及菊花是否經過硫熏的 HPLC檢測方法。
【背景技術】
[0002] 菊花為菊科植物菊花（ChrysanthemummorifoliumRamat)的干燥頭狀花序，具疏 風、清熱、明目、解毒之功效。茶用、藥用皆宜，茶用可去火、養(yǎng)肝明目，藥用可抗菌、消炎、降 壓、防冠心病等，應用價值高。近年來各種以菊花為原料的保健茶飲品開發(fā)與上市，菊花原 料需求量猛增。硫磺熏蒸具干燥、漂白、防蟲及防霉變，延長儲藏期等作用。由于硫熏具備 以上"美容"作用，可以使藥材外觀顏色鮮亮，迎合大眾審美需求。近年來，受藥材等級的經 濟利益驅使，菊花也成為常用硫磺熏蒸加工的大宗品種之一。但硫磺熏蒸后的菊花藥味會 變酸，造成主要成分損失而影響臨床療效，同時殘存二氧化硫，造成毒性疊加。研宄發(fā)現，硫 磺在熏蒸過程中會與氧結合，產生二氧化硫，二氧化硫是對人體有害的物質，長期接觸可致 粘膜細胞產生變異，對人體的呼吸道粘膜、消化道粘膜有嚴重的損害作用，對肝腎功能也有 直接影響。藥材加工過程中，過期藥材反復熏蒸，甚至直接噴灑硫磺，嚴重影響了藥材品質； "二氧化硫事件"一度熱炒成了中草藥界的"三聚氰胺"，成為威脅公眾健康的焦點問題，弓丨 起社會廣泛關注。韓國基于TBT(技術性貿易壁皇）的考慮，率先制定>氧化硫殘留標準， 致使近年來硫磺熏事件被高度關注。
[0003] 目前，常用的HPLC檢測菊花是否經過硫熏的方法，檢測時程長，近100分鐘，梯度 洗脫基線漂移，造成積分困難，樣品測定結果的重現性、準確性等差。
[0004] 因此，本領域迫切需要提供一種運行時間短、基線穩(wěn)定、分離度良好的HPLC檢測 方法。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發(fā)明的一個目的 在于提出一種運行時間短、基線穩(wěn)定、分離度良好的判斷菊花是否經過硫熏的HPLC檢測方 法。
[0006] 因而，根據本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提供了一種判斷菊花是否經過硫熏的HPLC 檢測方法。根據本發(fā)明的實施例，該包括：（1)利用水、醇或醇的水溶液提取待檢測菊花，以 便得到供試樣品；（2)利用HPLC檢測所述供試樣品，色譜條件如下：色譜柱：C18色譜柱；檢 測波長：350±5nm;流動相：A:乙腈或甲醇，B:含有0. 05-0. 2體積％有機酸的溶液，梯度洗 脫程序：〇 ~lOmin，12 ~16%A;10 ~llmin，16 ~20%A;11 ~25min，20 ~26%A;25 ~ 55min，26%~65%A。
[0007] 發(fā)明人驚奇的發(fā)現，采用本發(fā)明的方法檢測菊花是否經過硫熏，出峰時間早，僅20 分鐘左右就出峰，檢測的運行時間短，僅需50分鐘左右，并且能夠同時表征出15個以上硫 熏前后有差異的色譜峰，顯著節(jié)省了試劑用量和人力，并且HPLC檢測的基線穩(wěn)定、目標物 分離度良好，從而達到利用HPLC快速、準確判斷菊花是否經過硫熏的目的。
[0008] 另外，根據本發(fā)明上述實施例的判斷菊花是否經過硫熏的HPLC檢測方法，還可以 具有如下附加的技術特征：
[0009] 根據本發(fā)明的實施例，所述流動相的流速為1.OmL?min'由此，峰型較其它流速 有改善，樣品出峰速度加快。
[0010] 根據本發(fā)明的實施例，所述醇或醇的水溶液為甲醇或甲醇的水溶液。由此，對菊花 的成分的提取效果好。
[0011] 根據本發(fā)明的實施例，所述有機酸選自甲酸、乙酸和磷酸的至少之一。由此，待測 物與雜質峰的分離效果好。優(yōu)選地，所述有機酸為甲酸。由此，待測物與雜質峰的分離效果 更佳。
[0012] 根據本發(fā)明的實施例，所述菊花為杭白菊和亳菊。由此，能夠快速、準確的判斷杭 白菊和亳菊是否經過硫熏。
[0013] 根據本發(fā)明的實施例，所述有機酸的濃度為0. 1體積％。由此，峰型有顯著改善， 峰與峰之間的分離度提高。
[0014] 根據本發(fā)明的實施例，所述色譜柱的柱溫為25±5攝氏度。由此，峰拖尾現象改 善，峰左右對稱度提高。根據本發(fā)明的實施例，所述色譜柱的尺寸為4. 6mmX250mm，5ym。 由此，樣品各峰之間分離度能滿足定性鑒別的要求
[0015] 根據本發(fā)明的實施例，所述甲醇水溶液的甲醇濃度為40-80體積％。由此，對菊花 所含有的有機物的提取效果好。優(yōu)選地，所述甲醇水溶液的甲醇濃度為60體積％。由此， 對菊花所含有的有機物的提取效果更佳。
[0016] 根據本發(fā)明的實施例，步驟（1)中，所述提取的方法選自回流、超聲、浸漬或滲漉。 由此，能夠充分的提取菊花所含的有機物。
[0017] 根據本發(fā)明的實施例，步驟（2)中，進一步包括：選取綠原酸、木犀草苷、異綠原酸A、蒙花苷、木犀草素、芹菜素、香葉木素和金合歡素標準品的至少之一作為對照品。由此，通 過對菊花中的上述有效成分出峰時間和相對含量的檢測，可以準確的判斷菊花是否經過硫 熏。
[0018] 本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。
【附圖說明】
[0019] 本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點從結合下面附圖對實施例的描述中將變 得明顯和容易理解，其中：
[0020] 圖1顯示了根據本發(fā)明一個實施例的硫熏與未熏杭白菊樣品HPLC鏡像圖，其中， A為杭白菊經硫熏樣品，B為杭白菊未經硫熏熱風干燥樣品；
[0021] 圖2顯示了根據本發(fā)明一個實施例的混標對照品的HPLC色譜圖，其中a-h色譜峰 對應的化合物分別為：a:綠原酸、b:木犀草苷、c:異綠原酸A、d:蒙花苷、e:木犀草素、f: 芹菜素、g:香葉木素和h:金合歡素；
[0022] 圖3顯示了根據本發(fā)明一個實施例的5批不同產地熱風干燥杭白菊樣品HPLC色 譜圖；
[0023]圖4顯示了根據本發(fā)明一個實施例的5批杭菊硫熏樣品HPLC色譜圖；
[0024]圖5顯示了根據本發(fā)明一個實施例的硫熏與未熏亳菊樣品HPLC鏡像圖，其中，A為 亳菊經硫熏樣品，B為亳菊未經硫熏熱風干燥樣品；
[0025] 圖6顯示了根據本發(fā)明一個實施例的5批不同產地熱風干燥亳菊樣品HPLC色譜 圖；以及
[0026] 圖7顯示了根據本發(fā)明一個實施例的5批不同產地硫熏加工亳菊樣品HPLC色譜 圖。
【具體實施方式】
[0027] 下面詳細描述本發(fā)明的實施例，所述實施例的示例在附圖中示出，其中自始至終 相同或類似的標號表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附 圖描述的實施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。
[0028] 根據本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提供了一種判斷菊花是否經過硫熏的HPLC檢測 方法。根據本發(fā)明的實施例，該包括：（1)利用水、醇或醇的水溶液提取待檢測菊花，以便 得到供試樣品；（2)利用HPLC檢測所述供試樣品，色譜條件如下：色譜柱：C18色譜柱；檢測 波長：350±5nm;流動相：A:乙腈，B:含有0. 05-0. 2體積％有機酸的溶液，梯度洗脫程序： 0 ~lOmin，12 ~16%A;10 ~llmin，16 ~20%A;11 ~25min，20 ~26%A;25 ~55min， 26%~65%A。
[0029] 發(fā)明人驚奇的發(fā)現，采用本發(fā)明的方法檢測菊花是否經過硫熏，出峰時間早，僅20 分鐘左右就出峰，檢測的運行時間短，僅需50分鐘左右，顯著節(jié)省了試劑用量和人力，并且 HPLC檢測的基線穩(wěn)定、目標物分離度良好，從而達到利用HPLC快速、準確判斷菊花是否經 過硫熏的目的。
[0030] 根據本發(fā)明的實施例，所述流動相的流速為1.OmL?mirT1。由此，峰型較其它流速 有改善，樣品出峰速度加快。根據本發(fā)明的實施例，所述有機酸的種類不受特別的限制，只 要能用于分離菊花的目標峰和雜質峰即可。優(yōu)選地，所述有機酸選自甲酸、乙酸和磷酸的至 少之一。由此，待測物與雜質峰的分離效果好。進一步優(yōu)選地，所述有機酸為甲酸。由此， 待測物與雜質峰的分離效果更佳。
[0031] 根據本發(fā)明的實施例，所述菊花為杭白菊和亳菊。由此，能夠快速、準確的判斷杭 白菊和亳菊是否經過硫熏。
[0032] 根據本發(fā)明的實施例，所述有機酸的濃度為0. 1體積％。由此，峰型明顯改善，峰 與峰之間的分離度提高。根據本發(fā)明的實施例，所述色譜柱的柱溫為25±5攝氏度。由此， 峰拖尾現象改善，峰左右對稱度提高。
[0033] 根據本發(fā)明的實施例，所述色譜柱的尺寸為4. 6mmX250mm，5ym。由此，峰拖尾現 象改善，峰左右對稱度提高。根據本發(fā)明的實施例，所述甲醇水溶液的甲醇濃度為40-80體 積％。由此，對菊花所含有的有機物的提取效果好。優(yōu)選地，所述甲醇水溶液的甲醇濃度為 為60體積％。由此，對菊花所含有的有機物的提取效果更佳。
[0034] 根據本發(fā)明的實施例，步驟（1)中，所述提取的方法選自回流、超聲、浸漬或滲漉。 由此，能夠充分的提取菊花所含的有機物。
[0035] 根據本發(fā)明的實施例，步驟（2)中，進一步包括：選取綠原酸、木犀草苷、異綠原酸 A、蒙花苷、木犀草素、芹菜素、香葉木素和金合歡素標準品的至少之一作為對照品。由此，通 過對上述有機物含量的檢測，可以準確的判斷菊花是否經過硫熏。
[0036] 下面參考具體實施例，對本發(fā)明進行說明，需要說明的是，這些實施例僅僅是說明 性的，而不能理解為對本發(fā)明的限制。
[0037] 下面將結合實施例對本發(fā)明的方案進行解釋。本領域技術人員將會理解，下面的 實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應視為限定本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體技術或條 件的，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀 器未注明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產品，例如可以采購自Sigma公司。 [0038] 實施例1
[0039] 采用本發(fā)明的方法，對從各道地產區(qū)直接收集的多種硫熏與未熏的杭白菊和和亳 菊進行檢測，判斷菊花是否經過硫熏，具體如下：
[0040] 1 材料
[0041] 1.1實驗儀器
[0042] Agilent1260 高效液相色譜系統(tǒng)，色譜柱DiamonsilC18 (4. 6mmX250mm，5ym)。
[0043] 1. 2試劑及藥材<