5] 當然也可W采用破碎法采集乳液。
[0046]<橡膠粒子的純化〉
[0047] 在步驟1)的純化過程中，可W對植物橡膠乳液進行離屯、來去除雜質(zhì)。離屯、后的 樣品在離屯、管中分為=部分，最上層為橡膠粒子層，橡膠粒子表面是橡膠合成的部位，含有 SRPP。第二層為清液，也可能含有少量SRPP。必要時可W將最上層和第二層一起收集。也 可在離屯、后僅將最上層分離出。優(yōu)選使用低溫PBS緩沖液混勻稀釋離屯、得到的最上層和/ 或第二層物質(zhì)，W保證包含橡膠粒子的乳液在SH?流道中的流動均一性。
[0048] 在步驟1)的純化過程中，離屯、可W進行1次，也可W進行2次或更多次。每次離 屯、時間不受特別限制，可W是例如10~30分鐘。離屯、速度可W是例如5000~150(K)巧m， 優(yōu)選10000~1300化pm，更優(yōu)選1200化pm。離屯、優(yōu)選在低溫例如4攝氏度左右進行。
[0049] 步驟1)的純化也可W采用過膜法來去除雜質(zhì)。過膜法使用濾膜過濾植物橡膠乳 液。過膜法使用針管和濾膜。過膜法可W例如采用如下方式進行：將天然橡膠膠乳抽到針 管（例如塑料針管），取下針頭（例如金屬針頭），在針管的針頭處接上一個孔徑為微米級 的濾膜（例如，〇.22um孔徑），然后將橡膠膠乳推出去，即可達到過濾效果。過膜法具有步 驟簡單、樣品用量少的優(yōu)點。
[0050] 當植物橡膠乳液樣品量充足的情況下，純化可W使用離屯、和過膜兩種方式的組合 來去除雜質(zhì)，例如可W采用先離屯、再過膜的方式來去除雜質(zhì)。
[0051]如果在乳液采集之后采用上述過膜法，則不僅具有簡便、快速的優(yōu)點，還可W省去 下述的水洗過程。過膜法更適合野外或現(xiàn)場檢測。
[0052] 過膜法所用膜可W是對溶液和抗體呈惰性的高分子膜，例如，聚四氣己締膜、聚偏 氣己締膜、聚離諷膜等。所述膜的孔徑可W是0. 45ymW下，優(yōu)選0. 22ym左右。
[00閲 < 水洗過程〉
[0054]在步驟1)中的可選的水洗過程中，對純化步驟獲得的橡膠粒子反復進行4攝氏度 左右的低溫PBS緩沖液復溶混勻、離屯、。每次離屯、后收集最上層。最上層含有大量的橡膠 粒子。因第二層清液中有時可能也會含有SRPP，必要時可W將最上層和第二層一起收集。 [00巧]步驟2)的水洗過程中的離屯、條件可W與步驟1)的純化過程的離屯、條件相同。離 屯、次數(shù)可W是2~10次，優(yōu)選4~7次，更優(yōu)選6次。
[005引 < 抗體的固定化〉
[0057] 在抗體的固定化中，首先活化巧片，然后將抗體固定化，最后將巧片的未反應基團 封閉（即，封閉巧片）?？贵w在巧片表面的固定化可W采用本領域公知的方法，例如，氨基偶 聯(lián)法，在合適的抑和抗體濃度的條件下，固定抗體。
[0058] 巧片可W自行制備W使巧片上具有金膜和駿甲基葡聚糖，也可W采用巧片上已有 金膜和駿甲基葡聚糖的商業(yè)巧片，例如，GE公司制造的CM-5,直接活化后使用即可。
[0059] 巧片可W使用邸C(1- (3-二甲氨基丙基）-3-己基碳二亞胺）/N服(N-哲基班巧酷 亞胺）活化。
[0060]EDC的濃度可W為0. 4M。N服的濃度可W為0. 1M。邸C和N服可W用水、DMF(二 甲諷）、己醇或THF(四氨快喃）等溶劑稀釋。
[0061] 當邸(：為0.4]\1、畑8為0.謹時，邸(：/畑8的體積比可^是5:2~2:5，優(yōu)選為1:1。
[0062] 具體地說，例如，可如下方式進行：在合適的抑和抗體濃度的條件下，選擇 SPR檢測儀的向?qū)Ｊ剑褂媒鹉ど虾序E甲基葡聚糖的巧片。首先用邸C/N服活化巧片， 產(chǎn)生活性醋。然后注入一定濃度的抗體稀釋液，抗體上的氨基與活性醋發(fā)生取代反應，由此 將抗體偶聯(lián)在駿甲基葡聚糖上，再用己醇胺水溶液等將未反應的活性醋封閉。
[0063] 本發(fā)明中，抗體可W是SRPP單克隆抗體，也可W是SRPP多克隆抗體，優(yōu)選SRPP單 克隆抗體。
[0064] 抗體可W用己酸錠-己酸緩沖水溶液、己酸鋼-己酸緩沖水溶液等己酸鹽-己酸 緩沖水溶液稀釋。己酸鹽-己酸緩沖水溶液是W-定濃度（例如，lOmM)將己酸鹽溶于水 中，然后用己酸調(diào)節(jié)目標抑得到的。
[0065] 固定化所用的抗體濃度（抗體試劑與抑4. 0的lOmM己酸鹽-己酸緩沖水溶液的 體積比）可W為1:1000~1:10,優(yōu)選為1:500~1:50,更優(yōu)選為1:100左右。
[0066] 封閉抗體所用的己醇胺水溶液的濃度為0. 5M~1. 5M，更優(yōu)選為0. 8M~1. 2M，最 優(yōu)選為1M左右。封閉步驟的時間為幾分鐘即可，例如7分鐘。
[0067] 抗體固定化步驟中，抗體稀釋液的抑為3. 8~5. 5,優(yōu)選為4. 0~5. 0,更優(yōu)選為 4. 0左右。
[006引< 通過SPR檢測植物橡膠乳液中的SRPP〉
[0069] 在上述步驟3)中，將純化后的橡膠粒子乳液稀釋后或直接通入已固定好抗體的 巧片上的SH?流通通道即抗體通道中，進行檢測。
[0070] 由于植物橡膠乳液樣品中成分復雜，為了避免引起非特異性吸附，可W優(yōu)選用任 選地含有牛血清白蛋白炬SA)、Tween-20等的磯酸鹽緩沖液（PBS緩沖液）稀釋植物橡膠乳 液樣品。所述磯酸鹽緩沖液中的牛血清白蛋白炬SA)濃度優(yōu)選為0.1質(zhì)量/體積％左右， Tween-20濃度優(yōu)選為0. 05體積/體積％左右，但是并不限定于該濃度。
[0071] 每次進樣檢測完成后用化0H水溶液洗脫，W洗去與巧片結合的抗體，對巧片進行 再生。整個檢測過程中，緩沖液一直在流動，該緩沖液例如可W為抑7.2的lOmMPBS緩沖 液。最終的特異性信號增加由抗體通道和參比通道兩者之差得到。其中，抗體通道和參比 通道均是巧片的一部分?？贵w通道固定有抗體。參比通道未固定抗體，但要與抗體通道同 樣地通入SRPP樣品。
[007引SRPP的檢測10分鐘即可，更優(yōu)選7分鐘左右即可。檢測時間可W在SPR檢測儀上 設置。
[0073]PBS(磯酸鹽緩沖液）可W為中性，優(yōu)選為抑7. 2左右，PBS的濃度為5~15mM，優(yōu) 選為lOmM。
[0074] 檢測過程在室溫下進行即可，例如25°C左右。
[00巧]SPR檢測系統(tǒng)可W使用商用系統(tǒng)，例如，Biacore系統(tǒng)。在Biacore系統(tǒng)中，由于SRPP與抗體結合后，巧片表面的RI和共振角發(fā)生變化，Biacore平臺隨后將該種變化轉變 為共振單位RUaOOORU相當于0.r的變化。1000RU代表Ing/mm2蛋白質(zhì)，即1RU約對應 于Ipg/mm2。CM5巧片的面積約可W例如為1.2mm2。故在1200化pm離屯、20分鐘后被稀釋 至50體積％ (用PBS緩沖溶液稀釋）的純化橡膠乳液（即實施例1的乳液）注入后，約有 78. 7化gSRPP可被巧片上的抗體捕獲。
[0076] <SPR免疫傳感器〉
[0077] 本發(fā)明還提供一種生物巧片一一SPR免疫傳感器，其包括巧片和固定于巧片上的 SRPP抗體。在該巧片上固定SRPP抗體之前，該巧片按照上述方法經(jīng)邸C/N服活化。該抗體 巧片優(yōu)選具有金膜和駿甲基葡聚糖。
[0078] 所述抗體可W為單克隆抗體或多克隆抗體。但是出于特異性的考慮，優(yōu)選為SRPP 單克隆抗體。
[0079] 本發(fā)明的SPR免疫傳感器的一個例子如圖1所示。
[0080] 實施例
[0081] 下面通過實施例對本發(fā)明進行更詳細的說明，但只要不超出其要點，本發(fā)明并不 限于該些實施例。
[0082] <材料與儀器〉
[0083] 己西橡膠樹（別名，S葉橡膠樹化evea brasiliensis))乳液由中國熱帶農(nóng)業(yè)科 學院湛江試驗站提供。該己西橡膠樹乳液是從己西橡膠樹上采集后未經(jīng)任何處理的橡膠乳 液。
[0084] 蒲公英橡膠草由黑龍江省科學院提供。其中k445是一種蒲公英的品系名稱，是來 自俄羅斯的一種蒲公英。
[00財1-己基-(3-二甲基氨基丙基）碳酷二亞胺鹽酸鹽、N-哲基班巧酷亞胺、己酸錠、 己醇胺購自Sigma公司。
[0086] SRPP單克隆抗體試劑（商品名Mouse Monoclonal Antibody)購自Icosagen AS (Tartu, Estonia)公司，W下有時稱為SRPP單克隆抗體或抗體。
[0087] 所有溶液均用超純水配制并在使用前用孔徑0. 22 ym的下述濾膜過濾。
[0088]SPR實驗在GE公司生產(chǎn)的BiacoreT200操作平臺上實現(xiàn)。
[0089] 巧片型號是CM5,購自GE公司。
[0090] 濾膜是天津津騰公司生產(chǎn)的水系膜，材料是PES(聚離諷），原材料膜是德國 MEMBRANA公司進口膜，孔徑是0. 22um。
[0091]BSA(牛血清蛋白）購自Sigma公司。
[0092]OVA(卵清蛋白）購自Sigma公司。
[009引KLH(血藍蛋白）購自Sigma公司。
[0094]SA(鏈霉親和素）購自Sigma公司。
[0095] 磯酸鹽（PBS)緩沖液購自Sigma公司。
[0096] 化0H購自Sigma公司。
[0097] 其他試劑亦購自Sigma公司。
[0098] < 實驗〉
[0099]1)橡膠樹乳液的采集和純化
[0100] 蒲公英植物橡膠乳液的提取采用如下步驟：切開蒲公英橡膠草的根部，然后用毛 細管吸取乳液后，再用一次性注射器將乳液打入0. 22um孔徑的膜過濾器，進行過膜過濾。
[0101] 2)巧片的準備
[0102] 將巧片插入儀器，通入PBS緩沖液，流速10y