一種補體c3檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，提供一種補體C3檢測方法，具有靈敏度高，特異性強， 試劑配制簡單的特點，值得進(jìn)一步推廣使用。
【背景技術(shù)】：
[0002] C3是血清中含量最高的補體成分，由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴組織、骨髓、腹膜和 肝臟等合成的一種β球蛋白，在C3轉(zhuǎn)化酶的作用下，裂解成C3a和C3b兩個片段，在補體 經(jīng)典激活途徑和旁路激活途徑中均發(fā)揮重要作用。
[0003] C3是補體各成分中含量最高的一種，且是補體激活途徑中最重要的環(huán)節(jié)，故其含 量的測定非常重要。C3增多與減少與總補體活性基本相符，但更為敏感。約70%-80%的 急性腎小球腎炎、狼瘡性腎炎患者血清C3含量減少，病情緩解后可恢復(fù)正常，故C3的測定 不僅有助于診斷，還可以觀察療效和監(jiān)測預(yù)后。C3降低還可見于自身免疫性疾病、新生兒呼 吸窘迫綜合征、菌血癥、組織損害和慢性肝炎。
[0004] 補體C3的檢測方法有單向免疫擴散法、ELISA法、免疫透射比濁法等。單向免疫擴 散法費時，變異大，結(jié)果不易觀察，測量直徑不精確；ELISA法重復(fù)性不好，易出現(xiàn)假陽性， 受溫度和時間影響最大；免疫透射比濁法相對優(yōu)于之前兩種方法，但存在所需抗血清量大 的缺點。本發(fā)明采用膠乳增強免疫比濁法，不僅靈敏度高，準(zhǔn)確性好，不費時的優(yōu)點，而且所 需的樣本量極少，更加經(jīng)濟節(jié)約。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明的目的在于，大量制備補體C3膠乳試劑，以提高補體C3檢測效率，增強檢 測準(zhǔn)確性。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案：應(yīng)用化學(xué)方法交聯(lián)，通過水溶性碳化二亞胺（EDC)與N-羥基 琥珀酰亞胺（NHS)使羊抗人補體C3抗血清與羧化聚苯乙烯膠乳共價交聯(lián)，形成補體C3膠 乳試劑。具體操作如下：
[0007] 補體C3膠乳試劑的制備：
[0008] 取粒徑為10011111濃度為5%膠乳微球11111，加入100臟〇1/1，？冊.0的磷酸鹽緩沖 液9ml，混合均勻后分別加入5mg水溶性碳化二亞胺（EDC)與N-羥基琥珀酰亞胺（NHS)， 室溫攪拌20min，2-8°C離心30min (轉(zhuǎn)速12000)，用100mmol/L，PH6. 0的磷酸鹽緩沖液洗 滌三次，除去上清液，取沉淀用100mm〇l/L，PH6. 0的磷酸鹽緩沖液Iml重懸，并加入200 μ 1 羊抗人補體〇3抗血清，室溫攪拌511，2-8°0離心3〇1^11(轉(zhuǎn)速12000)，沉淀用含0.05%吐 溫-20 (Tween 20)，100mm〇l/L，ΡΗ6. 0的磷酸鹽緩沖液洗滌三次，除去上清液，所得沉淀用 100mm〇l/L，PH6. 0的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行稀釋，2-8°C密封保存。
[0009] 本檢測方法的原理為將羊抗人補體C3抗體交聯(lián)于膠乳微粒上，與待測樣品中的 補體C3發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，引起微粒凝集，形成一定的池度，在340nm波長下，通過同樣 處理的校準(zhǔn)品對照，定量檢測出樣品中補體C3的含量。
【附圖說明】：
[0010] 圖1分別采用本發(fā)明試劑與市售試劑A，采用奧林巴斯400全自動生化分析儀，對 50份樣本（包含正常和異常樣本），按各自參數(shù)進(jìn)行測定，并對測定值進(jìn)行相關(guān)分析。其 中X軸表示的是本發(fā)明試劑的測定值，Y軸表示的是市售試劑A的測定值。相關(guān)系數(shù)：r 2 = 0· 9948,線性方程為：y = L 041χ-0· 054。
[0011] 圖2 :采用奧林巴斯400全自動生化分析儀，對5個梯度濃度的試劑進(jìn)行測定，并 對測定值進(jìn)行相關(guān)分析。其中X軸表示的是稀釋濃度，Y軸表示的是測定值均值。相關(guān)系 數(shù)：r 2= 0· 9963,線性方程為：y = I. 0272X-0. 0007。
【具體實施方式】：
[0012] 實施例
[0013] 將本發(fā)明方法配制成試劑盒，進(jìn)行與市售試劑盒進(jìn)行性能比較：
[0014] 本發(fā)明試劑配成試劑盒的具體成分如下：
【主權(quán)項】
1. 本發(fā)明提供一種補體C3檢測方法，所述檢測方法基于膠乳增強免疫比濁法，為液體 雙試劑，包括試劑Rl與R2,所述試劑Rl含PH6. O磷酸鹽緩沖液，吐溫-20 (Tween 20)，乙二 胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na)，氯化鈉，聚乙二醇（PEG6000)，疊氮鈉；試劑R2為含有補體C3膠 乳顆粒的溶液，其特點在于應(yīng)用化學(xué)方法交聯(lián)，通過水溶性碳化二亞胺（EDC)與N-羥基琥 珀酰亞胺（NHS)使羊抗人補體C3抗血清與羧化聚苯乙烯膠乳共價交聯(lián)，形成補體C3膠乳 試劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述化學(xué)交聯(lián)方法制備補體C3膠乳試劑，其特征在于所用的羧化聚 苯乙稀膠乳粒徑為l〇〇nm。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述化學(xué)交聯(lián)方法制備補體C3膠乳試劑，其特征在于羧化聚苯乙烯 膠乳與羊抗人C3抗血清共價交聯(lián)過程中分別添加水溶性碳化二亞胺（EDC)與N-羥基琥珀 酰亞胺（NHS)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述，其特征在于樣品中mAlb的計算公式為： 樣品中補體C3濃度（g/L) = CsX AAtMAs 式中：ΛΑΤ以空白管吸光度為對照的樣品管吸光度； Λ As以空白管吸光度為對照的校準(zhǔn)管吸光度； Cs校準(zhǔn)液中補體C3的濃度。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種補體C3檢測方法，所述檢測方法基于膠乳增強免疫比濁法，為液體雙試劑，包括試劑R1與R2，所述試劑R1含PH6.0磷酸鹽緩沖液，吐溫-20(Tween 20)，乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)，氯化鈉，聚乙二醇(PEG6000)，疊氮鈉；試劑R2為含有補體C3膠乳顆粒的溶液，其特點在于應(yīng)用化學(xué)方法交聯(lián)，通過水溶性碳化二亞胺(EDC)與N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)使羊抗人補體C3抗血清與羧化聚苯乙烯膠乳共價交聯(lián)，形成補體C3膠乳試劑。本試劑靈敏度高，特異性強，試劑配制簡單，值得進(jìn)一步推廣使用。
【IPC分類】G01N33-68, G01N21-33
【公開號】CN104833810
【申請?zhí)枴緾N201510226757
【發(fā)明人】王賢俊, 鄭蓓蕾, 郭二豪, 江新濤
【申請人】王賢俊
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年5月2日