一種抗酸染色法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種細(xì)菌染色方法，尤其是涉及一種抗酸染色法。
【背景技術(shù)】
[0002]抗酸染色法(acid-faststaining method)是 1882 年由埃利希(F.Ehrlich)首創(chuàng)并經(jīng)F.齊爾(Ziehl)改進(jìn)而創(chuàng)造出的細(xì)菌染色法。其中最具代表性的為對(duì)結(jié)核菌的齊爾-尼爾森(Ziehl-Neelsen)染色法和齊爾_加貝特(Ziehl-Gabbet)染色法。用石炭酸復(fù)紅染色后，用鹽酸乙醇脫色，再用美藍(lán)進(jìn)行對(duì)比染色。
[0003]抗酸染色的原理如下:分枝桿菌(含結(jié)核菌)的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過(guò)加熱和延長(zhǎng)染色時(shí)間來(lái)促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色。
[0004]齊爾-尼爾森抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美藍(lán)復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。
[0005]抗酸染色一般步驟如下:
[0006]I)初染:用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開(kāi)，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，加熱5分鐘，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。
[0007]2)脫色:3%鹽酸酒精脫色3分鐘；用水沖洗。
[0008]3)復(fù)染:用堿性美藍(lán)溶液復(fù)染30秒，水洗，用吸水紙吸干后用油鏡觀察。
[0009]上述抗酸染色過(guò)程中染液的配制如下:
[0010]1、石炭酸復(fù)紅:堿性品紅酒精飽和溶液1mL及5%石炭酸90mL混合；
[0011]2、3%鹽酸酒精:濃鹽酸3mL與95%酒精97mL混合；
[0012]3、呂氏美藍(lán)液:美藍(lán)酒精飽和液30mL與氫氧化鉀(1:10000) 10mL混合。
[0013]以上是常規(guī)的抗酸染色步驟,為三步染色和三次水洗,其操作比較復(fù)雜、浪費(fèi)水和時(shí)間長(zhǎng)。現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室工作繁忙和成本高，對(duì)各項(xiàng)技術(shù)方法有力求簡(jiǎn)便和節(jié)約的要求，以便在有限的時(shí)間和成本內(nèi)完成更多的任務(wù)。
[0014]中國(guó)專(zhuān)利CN101126689A公開(kāi)了一種革蘭染色二步法，該方法是取潔凈的載玻片，從試劑盒中取10?30ML(1小滴)初染劑(A劑)滴加到載玻片上，再取約與染液等量的待檢材料均勻涂片，15秒后，涂片不用干，立即滴加30?60ML(2小滴)的復(fù)染劑(B劑)覆蓋標(biāo)本，15秒左右，水洗，干后鏡檢。在涂片處，可見(jiàn)到染成淺紅色的革蘭陰性菌和染成深紫色的革蘭陽(yáng)性菌，對(duì)比鮮明。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)便、方法可靠、性?xún)r(jià)比好、結(jié)果易于觀察和判斷、且不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)。但是革蘭染色與抗酸染色在細(xì)菌學(xué)上是兩種不同的染色法，其用途和實(shí)際意義不一樣，革蘭染色法對(duì)于抗菌染色法的參考意義不大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0015]本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種染色步驟簡(jiǎn)單、染色時(shí)間短、染色可不加熱的抗酸染色法。
[0016]本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):
[0017]一種抗酸染色法，包括以下步驟:
[0018](I)取潔凈的玻片，將待檢材料涂片在玻片上，并干燥、固定，得到標(biāo)本；
[0019](2)滴加初染劑覆蓋住標(biāo)本，染色I(xiàn)?2分鐘，可加熱和不加熱，傾去初染劑，不水洗；
[0020](3)滴加脫色復(fù)染劑，覆蓋住標(biāo)本，染色25?35秒，水洗，干后鏡檢。
[0021]進(jìn)一步地，所述的初染劑為含1.0?2.0wt %的堿性品紅和5?7wt%的苯酚的溶液。
[0022]更進(jìn)一步地,所述的初染劑為含1.6wt%的堿性品紅和6.4界1:%的苯酹的溶液。
[0023]進(jìn)一步地，所述的溶液為蒸餾水、丙酮或體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇。
[0024]進(jìn)一步地，所述的脫色復(fù)染劑為0.6?0.8wt%的美藍(lán)溶液。
[0025]更近一步地，所述的脫色復(fù)染劑為0.Swt %的美藍(lán)溶液。
[0026]進(jìn)一步地,所述的待檢材料包括細(xì)菌培養(yǎng)物、送檢分泌物或體液。
[0027]進(jìn)一步地,所述的初染劑的滴加量為I?3ml,所述的脫色復(fù)染劑的滴加量為I?3ml。
[0028]進(jìn)一步地，步驟(3)中鏡檢后，染成紅色的待檢材料為抗酸陽(yáng)性菌，染成藍(lán)色的待檢材料為抗酸陰性菌，對(duì)比鮮明。
[0029]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)及有益效果:
[0030](I)本發(fā)明的抗酸染色法，是只用二種染色液和只需二步染色及一次水洗，可做到快速簡(jiǎn)便節(jié)水的染色。而經(jīng)典的抗酸染色三步法，染液有初染液、脫色液和復(fù)染液三種，染色需三步染色、三次水洗和加溫，染色時(shí)間8分鐘30秒，整個(gè)過(guò)程要10分鐘左右。因此本發(fā)明的方法比常歸使用的齊爾-尼爾森染色法，染色時(shí)間節(jié)省60%，水節(jié)省60%以上和染液生產(chǎn)及包裝物流成本各降低25%。本發(fā)明的方法在染色時(shí)加熱和不加熱均可；可用于人工和自動(dòng)化染色，有利于染色標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化。本發(fā)明的方法可靠、結(jié)果鮮明易于觀察和判斷。
[0031](2)本發(fā)明的抗酸染色法或試劑盒將有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值和很好的市場(chǎng)前景，有利于生物或醫(yī)療實(shí)踐，有利于商品化運(yùn)輸，且安全可靠，有很大的潛在市場(chǎng)，可產(chǎn)生明顯的社會(huì)及經(jīng)濟(jì)效益。
[0032](3)本發(fā)明的方法是更快速、更方便、更節(jié)約、更人性化的抗酸染色方法。
【具體實(shí)施方式】
[0033]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0034]實(shí)施例1
[0035]取潔凈的玻片和待檢材料(體液)按常規(guī)要求涂片，干燥和火焰或丙酮固定。先滴加3ml初染劑(為含1.6wt%的堿性品紅和6.4wt%的苯酚的蒸餾水溶液)覆蓋標(biāo)本，染色2分鐘，頃斜去染液，不水洗，再滴加3ml脫色復(fù)染劑(0.8wt%的美藍(lán)溶液)覆蓋標(biāo)本，染色30秒，水洗，干后鏡檢。在涂片中可見(jiàn)到，染成紅色的為抗酸陽(yáng)性菌和染成蘭色的為抗酸陰性菌，對(duì)比鮮明。
[0036]實(shí)施例2
[0037]取潔凈的玻片和待檢材料(送檢分泌物)按常規(guī)要求涂片，干燥和火焰或丙酮固定。先滴加2ml初染劑(為含1.0wt^的堿性品紅和5.4wt%的苯酚的丙酮溶液)覆蓋標(biāo)本，染色I(xiàn)分鐘，頃斜去染液，不水洗，再滴加2ml脫色復(fù)染劑(0.8wt%的美藍(lán)溶液)覆蓋標(biāo)本，染色30秒，水洗，干后鏡檢。在涂片中可見(jiàn)到，染成紅色的抗酸陽(yáng)性菌和染成蘭色的抗酸陰性菌，對(duì)比鮮明。
[0038]實(shí)施例3
[0039]取潔凈的玻片和待檢材料(細(xì)菌培養(yǎng)物)按常規(guī)要求涂片，干燥和火焰或丙酮固定。先滴加Iml初染劑(為含2.0wt%的堿性品紅和7.0wt%的苯酚的乙醇溶液)覆蓋標(biāo)本，染色1.5分鐘，頃斜去染液，不水洗，再滴加Iml脫色復(fù)染劑(0.8wt%的美藍(lán)溶液)覆蓋標(biāo)本，染色30秒，水洗，干后鏡檢。在涂片中可見(jiàn)到，染成紅色的為抗酸陽(yáng)性菌和染成蘭色的為抗酸陰性菌，對(duì)比鮮明。
[0040]實(shí)施例4
[0041]一種抗酸染色法，包括以下步驟:
[0042](I)取潔凈的玻片，將待檢材料(細(xì)菌培養(yǎng)物)涂片在玻片上，并干燥、固定，得到標(biāo)本；
[0043](2)滴加Iml初染劑(為含1.0wt %的堿性品紅和5wt%的苯酚的丙酮溶液)覆蓋住標(biāo)本，染色I(xiàn)分鐘，傾去初染劑，不水洗；
[0044](3)滴加Iml脫色復(fù)染劑(0.6wt%的美藍(lán)溶液)，覆蓋住標(biāo)本,染色25秒,/K洗，干后鏡檢，鏡檢后，染成紅色的待檢材料為抗酸陽(yáng)性菌，染成藍(lán)色的待檢材料為抗酸陰性菌，對(duì)比鮮明。
[0045]實(shí)施例5
[0046]一種抗酸染色法，包括以下步驟:
[0047](I)取潔凈的玻片，將待檢材料(細(xì)菌培養(yǎng)物)涂片在玻片上，并干燥、固定，得到標(biāo)本；
[0048](2)滴加3ml初染劑(為含2.0wt %的堿性品紅和7wt %的苯酚的水溶液)覆蓋住標(biāo)本，染色2分鐘，傾去初染劑，不水洗；
[0049](3)滴加3ml脫色復(fù)染劑(0.7wt%的美藍(lán)溶液)，覆蓋住標(biāo)本,染色35秒,/K洗，干后鏡檢，鏡檢后，染成紅色的待檢材料為抗酸陽(yáng)性菌，染成藍(lán)色的待檢材料為抗酸陰性菌，對(duì)比鮮明。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種抗酸染色法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將待檢材料涂片在玻片上，并干燥、固定，得到標(biāo)本； (2)滴加初染劑覆蓋住標(biāo)本，染色I(xiàn)?2分鐘，傾去初染劑； (3)滴加脫色復(fù)染劑,覆蓋住標(biāo)本,染色25?35秒，水洗，干后鏡檢。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗酸染色法，其特征在于，所述的初染劑為含1.0?.2.0wt%的堿性品紅和5?7被％的苯酚的溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種抗酸染色法，其特征在于，所述的初染劑為含1.6wt%的堿性品紅和6.4被％的苯酚的溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的一種抗酸染色法，其特征在于，所述的溶液為蒸餾水、丙酮或體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗酸染色法，其特征在于，所述的脫色復(fù)染劑為0.6?.0.8wt%的美藍(lán)溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種抗酸染色法，其特征在于，所述的脫色復(fù)染劑為0.8wt%的美藍(lán)溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗酸染色法，其特征在于，所述的待檢材料包括細(xì)菌培養(yǎng)物、送檢分泌物或體液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗酸染色法，其特征在于，所述的初染劑的滴加量為I?.3ml，所述的脫色復(fù)染劑的滴加量為I?3ml。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗酸染色法，其特征在于，步驟(3)中鏡檢后，染成紅色的待檢材料為抗酸陽(yáng)性菌，染成藍(lán)色的待檢材料為抗酸陰性菌，對(duì)比鮮明。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種抗酸染色法，其特征在于，包括以下步驟：(1)將待檢材料涂片在玻片上，并干燥、固定，得到標(biāo)本；(2)滴加初染劑覆蓋住標(biāo)本，染色1～2分鐘，傾去初染劑；(3)滴加脫色復(fù)染劑，覆蓋住標(biāo)本，染色25～35秒，水洗，干后鏡檢；初染劑為含1.0～2.0wt％的堿性品紅和5～7wt％的苯酚的溶液，脫色復(fù)染劑為0.6～0.8wt％的美藍(lán)溶液。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的方法在染色時(shí)加熱和不加熱均可；可用于人工和自動(dòng)化染色，有利于染色標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化，本發(fā)明的方法可靠、結(jié)果鮮明易于觀察和判斷。
【IPC分類(lèi)】G01N1-30
【公開(kāi)號(hào)】CN104568551
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201310495973
【發(fā)明人】葉鷹, 葉鴻, 楊玄墨, 徐燕萍, 徐晨
【申請(qǐng)人】蘇州微利特生物科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2013年10月18日