專利名稱：一種新型的ana、抗dna聯(lián)合檢測法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種實(shí)驗(yàn)室的免疫檢測技術(shù)，具體地說，也就是涉及到一種醫(yī)學(xué)疾病診斷方法的檢測。
系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是侵犯皮膚、關(guān)節(jié)、腎臟、肝臟、心臟等多器官的自身免疫性疾病，患者血清中存在有多種自身抗體，其中主要有抗核抗體(ANA)和抗雙鏈的脫氧核糖核酸抗體(ds-DNA)。血清中ANA陽性率高達(dá)0.80-0.96%，但其他風(fēng)濕性性疾病如皮肌炎、硬皮病、結(jié)締組織周圍炎等ANA亦可陽性。因此為了鑒別這些疾病，尋找一種特異性高又靈敏、快速的檢測方法，本發(fā)明用錐蟲和肝細(xì)胞配合后組成雙抗原底物，可同時(shí)檢出ANA和抗DNA抗體。
經(jīng)聯(lián)機(jī)檢索美國專利近40年及世界專利近10年無此檢測方法，近期首都醫(yī)院徐世正等“測定雙鏈DNA抗體新方法”一文，其主要方法為用感染錐蟲的小鼠剪其尾部滴血直接制片，制成的血片蟲體堆積，血細(xì)胞極少或沒有有核細(xì)胞，此片只能做抗DNA單一染色，無法做ANA染色。
本發(fā)明的任務(wù)在于為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，并能同時(shí)在一張玻片上、一個(gè)視野里發(fā)現(xiàn)兩種抗體的存在為目的而實(shí)現(xiàn)的。
本發(fā)明通過以下幾個(gè)途徑完成(一)錐蟲的形態(tài)及結(jié)構(gòu)錐蟲是一種單細(xì)胞原生動物，能寄生于許多動物體內(nèi)，如牛、羊、馬、狗、兔、鼠均可被感染而患錐蟲病。錐蟲的蟲體呈紡錘狀、梭形、柳葉形等，伊氏錐蟲體長15.6-31.3μ左右、寬1.5-2.5μ，瑞士染色鏡下可見紫紅色的體核和動基體，淺紅色的波動膜和鞭毛。
(二)雙抗原底物的制備取錐蟲數(shù)條用無菌生理鹽水混和腹腔接種小白鼠，防蚊、防蠅喂養(yǎng)3-7天，待小鼠發(fā)病至睡眠狀態(tài)后，尾部取血作錐蟲計(jì)數(shù)，錐蟲達(dá)5-107/mm2時(shí)用肝素抗凝，小白鼠臨死前1-1.5小時(shí)作眼球后取血，再將死鼠解剖取出肝臟，用肝臟的切面沾上含有錐蟲的血液在潔凈玻片上輕輕壓印一下，制成一層薄的具有肝細(xì)胞和錐蟲的雙抗原底物。室溫涼干后，用玻璃紙包好置于5--40℃最佳4--30℃內(nèi)保存?zhèn)溆谩?br>
(三)檢測方法取患者血清。用間接免疫熒光法(同ANA法)、FITC最大吸收光譜520-530nm，每例標(biāo)本做原配血清1∶10、1∶20、1∶40、1∶80五個(gè)滴度，將上述血清分別加于五個(gè)含有錐蟲和肝細(xì)胞的印片上，經(jīng)染色后鏡檢有翠綠色熒光者為陽性，錐蟲的體核和動基體發(fā)出一大一小亮綠色熒光為雙鏈DNA抗體陽性，肝細(xì)胞亮綠色為抗核抗體陽性，無綠色熒光者為陰性。
本發(fā)明的特殊功能在于一種檢測手段可得出兩種檢策效果，患紅斑狼瘡的病人能夠很快明確診斷，得到及時(shí)治療;使用本方法省時(shí)、省力、節(jié)約試劑，減輕病人經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
權(quán)利要求
1.一種新型的ANA、抗DNA聯(lián)合檢測法，其特征在于利用感染錐蟲的實(shí)驗(yàn)動物肝臟切面沾上含有錐蟲的血液在潔凈玻片上輕輕壓印一下，制成具有肝細(xì)胞和錐蟲的雙抗原底物，置5-40℃最佳溫度為4-30℃保存?zhèn)溆谩?br>
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新型的ANA、抗DNA聯(lián)合檢測法，其特征在于實(shí)驗(yàn)動物以小白鼠為最好，并在小白鼠感染錐蟲后臨死前1-1.5小時(shí)取其肝臟切片。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的一種新型的ANA、抗DNA聯(lián)合檢測法，其特征在于取臨終前小白鼠的眼球血粘在肝切面上，再印在玻片上。
全文摘要
本發(fā)明所涉及的是醫(yī)學(xué)免疫的一種新型的ANA、抗DNA聯(lián)合檢測法。主要用于紅斑狼瘡特異性檢查。本方法主要是將感染錐蟲的小白鼠眼球血與其肝臟切面混合后印在玻片上制成雙抗原底物，取病人血清滴在底物上經(jīng)熒光染色在電鏡下檢測ANA及抗DNA。本方法提高了對紅斑狼瘡病的診斷率，同時(shí)省時(shí)、省力、節(jié)約試劑，減輕了病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
文檔編號G01N33/53GK1059033SQ9110574
公開日1992年2月26日 申請日期1991年8月15日 優(yōu)先權(quán)日1991年8月15日
發(fā)明者肖麗文, 馮柏莊, 高靜雯 申請人:中山醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院