本發(fā)明屬于檢測，特別涉及一種裂解劑triton?n-101含量的檢測方法。

背景技術(shù)：

1、triton?n-101別名聚乙二醇單辛基苯基醚，是一種非離子型表面活性劑，具有一定的刺激性。在流感病毒裂解疫苗和亞單位疫苗生產(chǎn)過程中，需加入裂解劑(如triton?n-101)進(jìn)行病毒裂解，再經(jīng)過純化，制備得到流感病毒裂解疫苗和亞單位疫苗?，F(xiàn)行版《中國藥典》三部“流感病毒裂解疫苗”中規(guī)定半成品中triton?n-101殘留量應(yīng)小于300μg/ml，因此triton?n-101殘留量的檢測對(duì)于監(jiān)控疫苗產(chǎn)品質(zhì)量較為重要。

2、目前對(duì)于triton?n-101殘留量檢測的相關(guān)研究較少，張鵬艷報(bào)道了硫氰鈷胺比色法檢測triton?n-101殘留量(張鵬艷,楊欣.硫氰鈷胺比色法檢測流感裂解疫苗中tritonn-101殘留量[c]//第五次全國免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編.2011.)，依據(jù)《中國藥典》“3203聚山梨酯80殘留量測定法”進(jìn)行檢定，其原理是triton?n-101含有和聚山梨酯80(吐溫80)相同的聚乙氧基，該基團(tuán)能夠和銨鈷硫氰酸鹽反應(yīng)形成藍(lán)色復(fù)合物，可溶于二氯甲烷，從而用比色法測定出流感裂解疫苗和亞單位疫苗中的triton?n-101殘留量。

3、但是該檢測方法僅適用于疫苗中不含有聚山梨酯80和/或含聚乙氧基的干擾物存在，并且實(shí)驗(yàn)步驟過于繁瑣。張艷報(bào)道了另一種比色法測定triton?n-101殘留量(張艷,潘曉男,任靜.流感疫苗中裂解劑tritonn-101殘余量的快速檢測方法[j].中國生物制品學(xué)雜志,2007,20(9):3.)，通過扣除樣品中蛋白吸光度值的差值來計(jì)算樣品中的裂解劑含量，但實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣，專屬性較差。因此，實(shí)踐中亟需一種快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定的檢測疫苗中tritonn-101殘留量的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明提供了一種triton?n-101含量的測定方法，所述方法包括將待測樣品采用rp-hplc-elsd法進(jìn)行檢測的操作；所述rp-hplc-elsd法中采用的流動(dòng)相包括流動(dòng)相a、流動(dòng)相b和流動(dòng)相c；其中，流動(dòng)相a為水，流動(dòng)相b為甲醇，流動(dòng)相c為異丙醇；所述方法采用所述流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。

2、優(yōu)選地，所述梯度洗脫的過程和參數(shù)包括：

3、0.0-1.0min時(shí)，流動(dòng)相a、流動(dòng)相b和流動(dòng)相c的體積比為保持(40-60):(40-60):0；優(yōu)選保持50:50:0；

4、1.0-3.0min時(shí)，流動(dòng)相a、流動(dòng)相b和流動(dòng)相c的體積比為從(40-60):(40-60):0線性變化至(10-30):(70-90):0；優(yōu)選為從50:50:0線性變化至20:80:0；

5、3.0-6.0min時(shí)，流動(dòng)相a、流動(dòng)相b和流動(dòng)相c的體積比為從(10-30):(70-90):0線性變化至(0-10):(90-100):0；優(yōu)選為從20:80:0線性變化至5:95:0；

6、6.0-7.0min時(shí)，流動(dòng)相a、流動(dòng)相b和流動(dòng)相c的體積比為(0-10):(90-100):0線性變化至(0-5)：(0-10)：(85-100)；優(yōu)選為從5:95:0線性變化至0:0:100；

7、7.0-9.0min時(shí)，流動(dòng)相a、流動(dòng)相b和流動(dòng)相c的體積比為保持(0-5)：(0-10)：(85-100)；優(yōu)選保持0:0:100；

8、9.0-9.01min時(shí)，流動(dòng)相a、流動(dòng)相b和流動(dòng)相c的體積比為從(0-5)：(0-10)：(85-100)線性變化至(40-60):(40-60):0；優(yōu)選為從0:0:100線性變化至50:50:0；

9、9.01-11.0min時(shí)，流動(dòng)相a、流動(dòng)相b和流動(dòng)相c的體積比為保持(40-60):(40-60):0；優(yōu)選保持50:50:0。

10、本發(fā)明提供的裂解劑triton?n-101含量的檢測方法，尤其適用于含乳佐劑的亞單位流感疫苗中triton?n-101殘留量的準(zhǔn)確測定，該檢測方法快速、準(zhǔn)確、線性、專屬性好，不受乳佐劑各組分和樣品制劑組分中其他成分干擾，對(duì)于含乳佐劑的亞單位流感疫苗中triton?n-101殘留量檢測具有指導(dǎo)意義。

技術(shù)特征：

1.一種triton?n-101含量的測定方法，所述方法包括將待測樣品采用rp-hplc-elsd法進(jìn)行檢測的操作；所述rp-hplc-elsd法中采用的流動(dòng)相包括流動(dòng)相a、流動(dòng)相b和流動(dòng)相c；其中，流動(dòng)相a為水，流動(dòng)相b為甲醇，流動(dòng)相c為異丙醇；所述方法采用所述流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于檢測技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種Triton?N?101含量的測定方法，包括將待測樣品采用RP?HPLC?ELSD法進(jìn)行檢測的操作；所述RP?HPLC?ELSD法中采用的流動(dòng)相包括流動(dòng)相A、流動(dòng)相B和流動(dòng)相C；其中，流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為甲醇，流動(dòng)相C為異丙醇；該方法采用所述流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。本發(fā)明提供的方法可以準(zhǔn)確測定含乳佐劑的亞單位流感疫苗中Triton?N?101的殘留量，快速、準(zhǔn)確、線性、專屬性好，不受乳佐劑各組分和樣品制劑組分中其他成分干擾。

技術(shù)研發(fā)人員：喬曼,劉志磊,王少燕
受保護(hù)的技術(shù)使用者：易慧生物技術(shù)（上海）有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19