本發(fā)明屬于化學(xué)分析，具體涉及一種分離并測定恩扎盧胺sm3及其相關(guān)雜質(zhì)的hplc方法。

背景技術(shù)：

1、恩扎盧胺(enzalutamide)是一種雄激素受體抑制劑，主要用于治療晚期去勢耐受前列腺癌的治療，可有效延長患者生存期。恩扎盧胺能夠競爭性地抑制雄激素與受體的結(jié)合，并且能抑制雄激素受體的核轉(zhuǎn)運(yùn)以及該受體與dna的相互作用。

2、sm3為合成恩扎盧胺的起始原料，其化學(xué)名為4-氨基-2-(三氟甲基)苯甲腈，分子式為c8h5f3n2，結(jié)構(gòu)式如式ⅰ所示。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，恩扎盧胺起始原料sm3中可能存在雜質(zhì)sm3a、雜質(zhì)sm3b、雜質(zhì)sm3c、雜質(zhì)sm3d、雜質(zhì)sm3e、雜質(zhì)sm3f、雜質(zhì)sm3g、雜質(zhì)sm3h、雜質(zhì)sm3i、雜質(zhì)sm3j、雜質(zhì)sm3k和雜質(zhì)sm2a共計12種雜質(zhì)，這些雜質(zhì)的存在直接影響著終產(chǎn)物恩扎盧胺的產(chǎn)率和純度。

3、

4、在前期研究中，我們探索了恩扎盧胺和恩扎盧胺原料sm3中其他雜質(zhì)的分析方法并申請了專利，包括申請?zhí)枮?02211214015.9、202211214058.7等的發(fā)明專利，其中202211214015.9專利提出以水為流動相a、甲醇為流動相b，分離測定恩扎盧胺原料sm3及雜質(zhì)sm3k和其他10個已知雜質(zhì)；202211214058.7專利則以三氟乙酸水溶液為流動相a，以乙腈/甲醇/四氫呋喃的混合溶液為流動相b，分離測定恩扎盧胺和/或恩扎盧胺z3中的26種雜質(zhì)。雖然上述專利公開了恩扎盧胺原料sm3及其分析方法，但是無法實(shí)現(xiàn)恩扎盧胺原料sm3中雜質(zhì)sm3a、雜質(zhì)sm3b、雜質(zhì)sm3c、雜質(zhì)sm3d、雜質(zhì)sm3e、雜質(zhì)sm3f、雜質(zhì)sm3g、雜質(zhì)sm3h、雜質(zhì)sm3i和雜質(zhì)sm3j的分離測定。

5、目前暫無可以將恩扎盧胺起始原料sm3中sm3a、sm3b、sm3c等雜質(zhì)進(jìn)行分離的法定分析方法，也未檢索到相關(guān)文獻(xiàn)分析資料，因此有必要進(jìn)一步探索出簡單有效的方法來實(shí)現(xiàn)恩扎盧胺起始原料sm3中sm3a、sm3b、sm3c等雜質(zhì)的分離測定。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種利用hplc方法分離恩扎盧胺sm3及其相關(guān)雜質(zhì)的方法，該方法可同時分離恩扎盧胺起始原料sm3與雜質(zhì)sm3a、雜質(zhì)sm3b、雜質(zhì)sm3c、雜質(zhì)sm3d、雜質(zhì)sm3e、雜質(zhì)sm3f、雜質(zhì)sm3g、雜質(zhì)sm3h、雜質(zhì)sm3i和雜質(zhì)sm3j，且方法靈敏度高、耐用性好，為后續(xù)相關(guān)雜質(zhì)的定性和定量提供了技術(shù)支持。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

3、利用hplc方法分離恩扎盧胺sm3及其相關(guān)雜質(zhì)的方法，所述相關(guān)雜質(zhì)為雜質(zhì)sm3a、雜質(zhì)sm3b、雜質(zhì)sm3c、雜質(zhì)sm3d、雜質(zhì)sm3e、雜質(zhì)sm3f、雜質(zhì)sm3g、雜質(zhì)sm3h、雜質(zhì)sm3i和雜質(zhì)sm3j中的任一種或多種；所述恩扎盧胺sm3的結(jié)構(gòu)式如式ⅰ所示；所述雜質(zhì)sm3a的結(jié)構(gòu)式如式ⅱ所示，所述雜質(zhì)sm3b的結(jié)構(gòu)式如式ⅲ所示，所述雜質(zhì)sm3c的結(jié)構(gòu)式如式ⅳ所示，所述雜質(zhì)sm3d的結(jié)構(gòu)式如式ⅴ所示，所述雜質(zhì)sm3e的結(jié)構(gòu)式如式ⅵ所示，所述雜質(zhì)sm3f的結(jié)構(gòu)式如式ⅶ所示，所述雜質(zhì)sm3g的結(jié)構(gòu)式如式ⅷ所示，所述雜質(zhì)sm3h的結(jié)構(gòu)式如式ⅸ所示，所述雜質(zhì)sm3i的結(jié)構(gòu)式如式ⅹ所示，所述雜質(zhì)sm3j的結(jié)構(gòu)式如式?所示；所述hplc方法是采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，采用流動相a和流動相b為流動相，通過所述梯度洗脫依次將雜質(zhì)sm3c、雜質(zhì)sm3d、雜質(zhì)sm3b、恩扎盧胺sm3、雜質(zhì)sm3j、雜質(zhì)sm3h、雜質(zhì)sm3f、雜質(zhì)sm3a、雜質(zhì)sm3i、雜質(zhì)sm3g和雜質(zhì)sm3e進(jìn)行分離；所述流動相a為三氟乙酸水溶液，所述流動相b為乙腈；

4、

5、

6、進(jìn)一步，梯度洗脫程序為：

7、0min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為79-81:21-19；

8、3min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為80:20；

9、15min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為60:40；

10、40min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為30:70；

11、45min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為30:70；

12、46min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為80:20；

13、55min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為80:20。

14、作為優(yōu)選，所述梯度洗脫程序為：

15、0min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為80:20；

16、3min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為80:20；

17、15min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為60:40；

18、40min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為30:70；

19、45min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為30:70；

20、46min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為80:20；

21、55min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為80:20。

22、進(jìn)一步，所述三氟乙酸水溶液的體積分?jǐn)?shù)為0.05％。

23、進(jìn)一步，所述流動相的流速為0.9ml/min-1.1ml/min，優(yōu)選為1.0ml/min；所述色譜柱柱溫為28℃-32℃，優(yōu)選為30℃。

24、進(jìn)一步，進(jìn)樣體積20μl。

25、本發(fā)明的目的之二在于提供一種基于目的一所述的方法鑒定恩扎盧胺sm3及其相關(guān)雜質(zhì)的方法，該方法實(shí)現(xiàn)了恩扎盧胺起始原料sm3與雜質(zhì)sm3a、雜質(zhì)sm3b、雜質(zhì)sm3c、雜質(zhì)sm3d、雜質(zhì)sm3e、雜質(zhì)sm3f、雜質(zhì)sm3g、雜質(zhì)sm3h、雜質(zhì)sm3i和/或雜質(zhì)sm3j的定性鑒別。

26、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

27、鑒定恩扎盧胺sm3及其相關(guān)雜質(zhì)的方法，利用目的一所述的方法分離所述恩扎盧胺sm3及其相關(guān)雜質(zhì)，并采用檢測器進(jìn)行檢測；所述檢測器的檢測波長為254nm。

28、11種組分的保留時間由短到長依次為：雜質(zhì)sm3c、雜質(zhì)sm3d、雜質(zhì)sm3b、恩扎盧胺sm3、雜質(zhì)sm3j、雜質(zhì)sm3h、雜質(zhì)sm3f、雜質(zhì)sm3a、雜質(zhì)sm3i、雜質(zhì)sm3g和雜質(zhì)sm3e；根據(jù)保留時間的長短可實(shí)現(xiàn)恩扎盧胺sm3及其相關(guān)雜質(zhì)的定性。

29、作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述流動相a為體積分?jǐn)?shù)為0.05％的三氟乙酸水溶液，所述流動相b為乙腈；所述流動相的流速為1.0ml/min，所述色譜柱柱溫為30℃；檢測波長為254nm；所述色譜柱的規(guī)格為4.6mm×150mm×3μm；按照梯度洗脫程序進(jìn)行洗脫并得到色譜圖，所述梯度洗脫程序設(shè)置如下：

30、0min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為80:20；

31、3min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為80:20；

32、15min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為60:40；

33、40min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為30:70；

34、45min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為30:70；

35、46min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為80:20；

36、55min，所述流動相a和所述流動性b的體積比為80:20。

37、進(jìn)一步，保留時間在2.7±0.5min時，判斷為雜質(zhì)sm3c；保留時間在9.0±0.5min時，判斷為雜質(zhì)sm3d；保留時間在15.0±0.5min時，判斷為雜質(zhì)sm3b；保留時間在18.6±0.5min時，判斷為恩扎盧胺sm3；保留時間在21.4±0.5min時，判斷為雜質(zhì)sm3j；保留時間在21.9±0.5min時，判斷為雜質(zhì)sm3h；保留時間在23.0±0.5min時，判斷為雜質(zhì)sm3f；保留時間在26.2±0.5min時，判斷為雜質(zhì)sm3a；保留時間在28.4±0.5min時，判斷為雜質(zhì)sm3i；保留時間在30.3±0.5min時，判斷為雜質(zhì)sm3g；保留時間在30.9±0.5min時，判斷為雜質(zhì)sm3e。

38、本發(fā)明的目的之三在于提供一種檢測恩扎盧胺sm3及其相關(guān)雜質(zhì)含量的方法，本發(fā)明方法可在55min內(nèi)或大于55min的時間檢測恩扎盧胺起始原料sm3與雜質(zhì)sm3a、雜質(zhì)sm3b、雜質(zhì)sm3c、雜質(zhì)sm3d、雜質(zhì)sm3e、雜質(zhì)sm3f、雜質(zhì)sm3g、雜質(zhì)sm3h、雜質(zhì)sm3i和/或雜質(zhì)sm3j的含量；該方法簡單、快速，且專屬性強(qiáng)，靈敏度高。

39、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

40、檢測恩扎盧胺sm3及其相關(guān)雜質(zhì)含量的方法，包括以下步驟：

41、(1)分離：利用目的一所述的方法將恩扎盧胺sm3及其相關(guān)雜質(zhì)分離；

42、(2)鑒定：利用目的二所述的方法對恩扎盧胺sm3及其相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行檢測，并獲得色譜圖；

43、(3)含量計算：根據(jù)步驟(2)得到的色譜圖，采用加校正因子的主成分自身對照法利用峰面積計算各雜質(zhì)含量。

44、進(jìn)一步，分離前，采用溶劑配置供試品溶液、對照溶液和系統(tǒng)適用性溶液；所述溶劑為乙腈和水的混合溶液，所述溶劑中乙腈和水的體積比為50:50；具體方法如下：

45、1.配置樣品溶液：取本品適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成濃度約為1mg/ml的溶液，作為樣品溶液。

46、2.配置對照溶液：精密量取供試品溶液2ml，置100ml量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。

47、3.檢測：精密量取供試品溶液、對照溶液，如20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖；然后采用加校正因子的主成分自身對照法利用峰面積計算各雜質(zhì)含量。

48、進(jìn)一步，雜質(zhì)含量計算公式如下：

49、1、

50、2、

51、式中，a雜質(zhì)為雜質(zhì)峰面積；

52、a對照為自身對照溶液峰面積；

53、f為已知雜質(zhì)校正因子。

54、進(jìn)一步，所述雜質(zhì)sm3c的校正因子為0.57，所述雜質(zhì)sm3d的校正因子為0.80，所述雜質(zhì)sm3b的校正因子為2.4，所述雜質(zhì)sm3j的校正因子為0.65，所述雜質(zhì)sm3h的校正因子為0.48，所述雜質(zhì)sm3a的校正因子為0.40，所述雜質(zhì)sm3g的校正因子為0.71，所述雜質(zhì)sm3e的校正因子為1.2，所述雜質(zhì)sm3f的校正因子為0.64，所述雜質(zhì)sm3i的校正因子為1.9。

55、本發(fā)明的有益效果在于：

56、本發(fā)明方法采用高靈敏度、高耐用性色譜方法，可在55分鐘內(nèi)將供試品主峰及供試品中可能存在的10個已知雜質(zhì)很好分離，提供了現(xiàn)有技術(shù)未能解決的恩扎盧胺起始原料sm3與可能存在的雜質(zhì)分離測定問題；本發(fā)明提出的分析方法時間短、靈敏度高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、操作簡單可行。