本發(fā)明屬于納米功能材料、免疫分析以及生物傳感技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
乙肝是一類遭遇乙肝病毒而導(dǎo)致肝臟損傷的有著傳染性的疾病，生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移速度快，對(duì)人類的健康有極大的危害。鑒于乙肝具有耐藥性和對(duì)體內(nèi)免疫力都會(huì)造成巨大傷害等很多乙肝的病因。現(xiàn)階段世界上還沒(méi)有治愈乙肝的特效藥，因此早期診斷對(duì)乙肝的預(yù)防和治療具有重要的臨床意義。
hbc、hbe、hbs等常見(jiàn)的乙肝病毒標(biāo)志物，對(duì)乙肝的早期診斷具有重要意義。目前，對(duì)于病毒標(biāo)志物的檢測(cè)方法很多，如放射免疫分析法、免疫放射分析法、化學(xué)免疫發(fā)光分析法、時(shí)間分辨熒光免疫分析法等，但多數(shù)檢測(cè)方法繁瑣，操作復(fù)雜，費(fèi)用昂貴，檢出限高，因此，建立一種快速、簡(jiǎn)便、靈敏的檢測(cè)方法有重要意義。
夾心型免疫傳感器將高特異性的免疫分析技術(shù)和高靈敏的電化學(xué)分析技術(shù)相結(jié)合，具有靈敏度高、制備簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速、成本低等優(yōu)點(diǎn)，在臨床檢驗(yàn)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全控制、生物監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域都有重要的應(yīng)用價(jià)值。而構(gòu)建電化學(xué)免疫傳感器的關(guān)鍵有兩點(diǎn)：其一是采用簡(jiǎn)單、快速、有效的方法將標(biāo)志物抗原、抗體等固定在電極表面；其二是開(kāi)發(fā)傳感器的信號(hào)放大技術(shù)。
多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子具有大的比表面積和生物相容性，可以顯著提高捕獲抗體ab1的固載量；良好的導(dǎo)電性可以加速電子傳遞，提高反應(yīng)速率；新穎復(fù)合納米材料mos2@cu2o/pt具有良好的電催化性能，并且各組分協(xié)同作用，可以實(shí)現(xiàn)多重信號(hào)放大。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)了不同乙肝病毒標(biāo)志物的高靈敏檢測(cè)。
本發(fā)明的目的之一是以mos2@cu2o/pt作為檢測(cè)抗體標(biāo)記物，構(gòu)建一種超靈敏的夾心型免疫傳感器。
本發(fā)明的目的之二是將所制備的夾心型免疫傳感器用于乙肝病毒標(biāo)志物的檢測(cè)。
本發(fā)明的技術(shù)方案，包括以下步驟。
1.一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法，所述免疫傳感器包括固定有乙肝病毒標(biāo)志物抗體ab1的多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子修飾的電極和mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備，其中固定有乙肝病毒標(biāo)志物抗體ab1的多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子修飾的電極的制備步驟如下：
(1)將直徑為3~5mm的玻碳電極用al2o3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)將6μl、0.5~2.0mg/ml的多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子溶液滴涂在電極表面，晾干，用超純水沖洗，晾干；
(3)繼續(xù)將6μl、8~12μg/ml的乙肝病毒標(biāo)志物抗體ab1溶液滴涂到電極表面，4℃冰箱中晾干；
(4)超純水沖洗掉未結(jié)合的ab1后，繼續(xù)將3~5μl、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1~1.0%的牛血清白蛋白bsa溶液滴加到電極表面，以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，4℃冰箱中晾干。
2.如權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法，所述多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子，制備步驟如下：
將8~12ml、0.5mg/ml氧化石墨烯與200μl、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的haucl4?4h2o和20μl、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%聚乙二醇溶液混合，超聲1h，使混合液均勻分散；將混合液轉(zhuǎn)移到聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，加熱至160～200℃，反應(yīng)10～14h；冷卻至室溫，超純水離心洗滌3次；凍干機(jī)干燥，制得多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子。
3.如權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法，所述mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液，制備步驟如下：
（1）mos2@cu2o的制備
將8~10ml、1.0~1.5mg/ml的(nh4)2mos4溶液和10ml、4mg/ml的cu(no3)2·3h2o溶液分別超聲10min；將兩種溶液混合并加入100μl水合肼，超聲30min；混合液轉(zhuǎn)移到聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，加熱至150~250℃，維持8~12h；冷卻至室溫，所得沉淀分別用超純水和無(wú)水乙醇洗滌三次,分散在3ml超純水中，凍干機(jī)中干燥24h，得到mos2@cu2o；
（2）氨基化mos2@cu2o的制備
將30~70mg的mos2@cu2o加入到10ml的無(wú)水甲苯中，加入0.2~0.4ml的3-氨丙基三乙氧基硅烷，70℃回流1.5~2.5h，超純水離心洗滌三次；80℃干燥12h，得到氨基化mos2@cu2o；
(3)mos2@cu2o/pt的制備
將8~12mg的氨基化mos2@cu2o加入到25~35ml的pt納米粒子溶液中，振蕩24h，離心分離，得到mos2@cu2o/pt，超純水離心洗滌三次，干燥；
所述pt納米粒子溶液是用100ml、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01%的h2ptcl6·6h2o溶液加熱至沸騰，逐滴加入10ml、38.8mmol/l的檸檬酸鈉溶液，回流反應(yīng)45~55min，停止加熱，繼續(xù)攪拌10min，冷卻至室溫制得；
④mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備
在2ml、2.0~3.0mg/ml的mos2@cu2o/pt加入2ml、8~12μg/ml的乙肝病毒標(biāo)志物檢測(cè)抗體ab2溶液，4℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12h；超純水離心洗滌三次，重新分散到2ml、ph=6.98磷酸鹽緩沖溶液，得到mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液，4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>
4.如權(quán)利要求1所述一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法制備的傳感器，用于乙肝病毒標(biāo)志物的檢測(cè)，檢測(cè)步驟如下：
(1)使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測(cè)試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10ml、50mmol/l的ph5.1~8.6磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測(cè)試；
(2)用計(jì)時(shí)電流法對(duì)乙肝病毒標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，輸入電壓為-0.4v，取樣間隔0.1s，運(yùn)行時(shí)間300s；
(3)當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50s向10ml、50mmol/l的ph=6.98磷酸鹽緩沖溶液中注入10μl、5mol/l的雙氧水溶液，記錄電流變化。
所述腫瘤標(biāo)志物選自下列之一：hbc、hbe或hbs。
本發(fā)明所用原材料均可在化學(xué)試劑公司或生物制藥公司購(gòu)買。
本發(fā)明的有益成果
(1)本發(fā)明使用多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子作為基底材料，具有大的比表面積和生物相容性，可以顯著提高捕獲抗體ab1的固載量，其良好的導(dǎo)電性可以加速電子傳遞，對(duì)于實(shí)現(xiàn)傳感器的高靈敏度以及低檢測(cè)限具有重要意義；(2)首次采用mos2@cu2o/pt作為檢測(cè)抗體標(biāo)記物構(gòu)建夾心型電化學(xué)免疫傳感器，利用復(fù)合材料中各組分的化學(xué)性能以及對(duì)過(guò)氧化氫的良好電催化優(yōu)勢(shì)，通過(guò)各組分協(xié)同作用，實(shí)現(xiàn)多重信號(hào)放大；提高了傳感器的靈敏度，降低了檢測(cè)限；
(3)將新穎mos2@cu2o/pt納米粒子直接與乙肝病毒標(biāo)志物檢測(cè)抗體結(jié)合，構(gòu)建無(wú)酶免疫傳感器，避免因酶的失活或泄露引起檢測(cè)誤差；同時(shí)簡(jiǎn)化了檢測(cè)抗體標(biāo)志物的制備，降低了成本，并顯著提高所設(shè)計(jì)的電化學(xué)免疫傳感器的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性；
(4)一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器對(duì)hbs的檢測(cè)，其線性范圍10pg/ml～200ng/ml，檢測(cè)限最低3.3pg/ml；對(duì)hbe進(jìn)行檢測(cè)，其線性范圍為5.0pg/ml~100ng/ml，檢測(cè)限為1.7pg/ml；對(duì)hbc進(jìn)行檢測(cè)，其線性范圍為5.0pg/ml~100ng/ml，檢測(cè)限為1.7pg/ml；表明一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器可以達(dá)到靈敏定量檢測(cè)的目的。
具體實(shí)施方式
現(xiàn)將本發(fā)明通過(guò)具體實(shí)施方式進(jìn)一步說(shuō)明，但不限于此。
實(shí)施例1一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法，所述免疫傳感器包括固定有乙肝病毒標(biāo)志物抗體ab1的多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子修飾的電極和mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備，其中固定有乙肝病毒標(biāo)志物抗體ab1的多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子修飾的電極的制備步驟如下：
(1)將直徑為3mm的玻碳電極用al2o3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)將6μl、0.5mg/ml的多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子溶液滴涂在電極表面，晾干，用超純水沖洗，晾干；
(3)繼續(xù)將6μl、8μg/ml的乙肝病毒標(biāo)志物抗體ab1溶液滴涂到電極表面，4℃冰箱中晾干；
(4)超純水沖洗掉未結(jié)合的ab1后，繼續(xù)將3μl、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.0%的牛血清白蛋白bsa溶液滴加到電極表面，以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，4℃冰箱中晾干。
實(shí)施例2一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法，所述免疫傳感器包括固定有乙肝病毒標(biāo)志物抗體ab1的多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子修飾的電極和mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備，其中固定有乙肝病毒標(biāo)志物抗體ab1的多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子修飾的電極的制備步驟如下：
(1)將直徑為4mm的玻碳電極用al2o3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)將6μl、1.0mg/ml的多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子溶液滴涂在電極表面，晾干，用超純水沖洗，晾干；
(3)繼續(xù)將6μl、10μg/ml的乙肝病毒標(biāo)志物抗體ab1溶液滴涂到電極表面，4℃冰箱中晾干；
(4)超純水沖洗掉未結(jié)合的ab1后，繼續(xù)將4μl、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的牛血清白蛋白bsa溶液滴加到電極表面，以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，4℃冰箱中晾干。
實(shí)施例3一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法，所述免疫傳感器包括固定有乙肝病毒標(biāo)志物抗體ab1的多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子修飾的電極和mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備，其中固定有乙肝病毒標(biāo)志物抗體ab1的多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子修飾的電極的制備步驟如下：
(1)將直徑為5mm的玻碳電極用al2o3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)將6μl、2.0mg/ml的多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子溶液滴涂在電極表面，晾干，用超純水沖洗，晾干；
(3)繼續(xù)將6μl、12μg/ml的乙肝病毒標(biāo)志物抗體ab1溶液滴涂到電極表面，4℃冰箱中晾干；
(4)超純水沖洗掉未結(jié)合的ab1后，繼續(xù)將5μl、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的牛血清白蛋白bsa溶液滴加到電極表面，以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，4℃冰箱中晾干。
實(shí)施例4一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法，所述多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子，制備步驟如下：
將8ml、0.5mg/ml氧化石墨烯與200μl、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的haucl4?4h2o和20μl、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%聚乙二醇溶液混合，超聲1h，使混合液均勻分散；將混合液轉(zhuǎn)移到聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，加熱至160℃，反應(yīng)14h；冷卻至室溫，超純水離心洗滌3次；凍干機(jī)干燥，制得多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子。
實(shí)施例5一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法，所述多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子，制備步驟如下：
將10ml、0.5mg/ml氧化石墨烯與200μl、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的haucl4?4h2o和20μl、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%聚乙二醇溶液混合，超聲1h，使混合液均勻分散；將混合液轉(zhuǎn)移到聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，加熱至180℃，反應(yīng)12h；冷卻至室溫，超純水離心洗滌3次；凍干機(jī)干燥，制得多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子。
實(shí)施例6一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法，所述多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子，制備步驟如下：
將12ml、0.5mg/ml氧化石墨烯與200μl、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的haucl4?4h2o和20μl、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%聚乙二醇溶液混合，超聲1h，使混合液均勻分散；將混合液轉(zhuǎn)移到聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，加熱至200℃，反應(yīng)14h；冷卻至室溫，超純水離心洗滌3次；凍干機(jī)干燥，制得多孔石墨烯負(fù)載金納米粒子。
實(shí)施例7一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法，所述mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液，制備步驟如下：
（1）mos2@cu2o的制備
將8ml、1.0mg/ml的(nh4)2mos4溶液和10ml、4mg/ml的cu(no3)2·3h2o溶液分別超聲10min；將兩種溶液混合并加入100μl水合肼，超聲30min；混合液轉(zhuǎn)移到聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，加熱至150℃，維持12h；冷卻至室溫，所得沉淀分別用超純水和無(wú)水乙醇洗滌三次,分散在3ml超純水中，凍干機(jī)中干燥24h，得到mos2@cu2o；
（2）氨基化mos2@cu2o的制備
將30mg的mos2@cu2o加入到10ml的無(wú)水甲苯中，加入0.2ml的3-氨丙基三乙氧基硅烷，70℃回流1.5h，超純水離心洗滌三次；80℃干燥12h，得到氨基化mos2@cu2o；
(3)mos2@cu2o/pt的制備
將8mg的氨基化mos2@cu2o加入到25ml的pt納米粒子溶液中，振蕩24h，離心分離，得到mos2@cu2o/pt，超純水離心洗滌三次，干燥；
所述pt納米粒子溶液是用100ml、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01%的h2ptcl6·6h2o溶液加熱至沸騰，逐滴加入10ml、38.8mmol/l的檸檬酸鈉溶液，回流反應(yīng)45min，停止加熱，繼續(xù)攪拌10min，冷卻至室溫制得；
④mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備
在2ml、2.0mg/ml的mos2@cu2o/pt加入2ml、8μg/ml的乙肝病毒標(biāo)志物檢測(cè)抗體ab2溶液，4℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12h；超純水離心洗滌三次，重新分散到2ml、ph=6.98磷酸鹽緩沖溶液，得到mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液，4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>
實(shí)施例8一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法，所述mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液，制備步驟如下：
（1）mos2@cu2o的制備
將9ml、1.2mg/ml的(nh4)2mos4溶液和10ml、4mg/ml的cu(no3)2·3h2o溶液分別超聲10min；將兩種溶液混合并加入100μl水合肼，超聲30min；混合液轉(zhuǎn)移到聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，加熱至200℃，維持10h；冷卻至室溫，所得沉淀分別用超純水和無(wú)水乙醇洗滌三次,分散在3ml超純水中，凍干機(jī)中干燥24h，得到mos2@cu2o；
（2）氨基化mos2@cu2o的制備
將50mg的mos2@cu2o加入到10ml的無(wú)水甲苯中，加入0.3ml的3-氨丙基三乙氧基硅烷，70℃回流2.0h，超純水離心洗滌三次；80℃干燥12h，得到氨基化mos2@cu2o；
(3)mos2@cu2o/pt的制備
將10mg的氨基化mos2@cu2o加入到30ml的pt納米粒子溶液中，振蕩24h，離心分離，得到mos2@cu2o/pt，超純水離心洗滌三次，干燥；
所述pt納米粒子溶液是用100ml、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01%的h2ptcl6·6h2o溶液加熱至沸騰，逐滴加入10ml、38.8mmol/l的檸檬酸鈉溶液，回流反應(yīng)50min，停止加熱，繼續(xù)攪拌10min，冷卻至室溫制得；
④mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備
在2ml、2.5mg/ml的mos2@cu2o/pt加入2ml、10μg/ml的乙肝病毒標(biāo)志物檢測(cè)抗體ab2溶液，4℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12h；超純水離心洗滌三次，重新分散到2ml、ph=6.98磷酸鹽緩沖溶液，得到mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液，4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>
實(shí)施例9一種檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的免疫傳感器的制備方法，所述mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液，制備步驟如下：
（1）mos2@cu2o的制備
將10ml、1.5mg/ml的(nh4)2mos4溶液和10ml、4mg/ml的cu(no3)2·3h2o溶液分別超聲10min；將兩種溶液混合并加入100μl水合肼，超聲30min；混合液轉(zhuǎn)移到聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，加熱至250℃，維持8h；冷卻至室溫，所得沉淀分別用超純水和無(wú)水乙醇洗滌三次,分散在3ml超純水中，凍干機(jī)中干燥24h，得到mos2@cu2o；
（2）氨基化mos2@cu2o的制備
將70mg的mos2@cu2o加入到10ml的無(wú)水甲苯中，加入0.4ml的3-氨丙基三乙氧基硅烷，70℃回流2.5h，超純水離心洗滌三次；80℃干燥12h，得到氨基化mos2@cu2o；
(3)mos2@cu2o/pt的制備
將12mg的氨基化mos2@cu2o加入到35ml的pt納米粒子溶液中，振蕩24h，離心分離，得到mos2@cu2o/pt，超純水離心洗滌三次，干燥；
所述pt納米粒子溶液是用100ml、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01%的h2ptcl6·6h2o溶液加熱至沸騰，逐滴加入10ml、38.8mmol/l的檸檬酸鈉溶液，回流反應(yīng)55min，停止加熱，繼續(xù)攪拌10min，冷卻至室溫制得；
④mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備
在2ml、3.0mg/ml的mos2@cu2o/pt加入2ml、12μg/ml的乙肝病毒標(biāo)志物檢測(cè)抗體ab2溶液，4℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12h；超純水離心洗滌三次，重新分散到2ml、ph=6.98磷酸鹽緩沖溶液，得到mos2@cu2o/pt-ab2檢測(cè)抗體孵化物溶液，4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>
實(shí)施例10hbs的檢測(cè)
(1)使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測(cè)試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10ml、50mmol/l的ph5.1~8.6磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測(cè)試；
(2)用計(jì)時(shí)電流法對(duì)乙肝病毒標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，輸入電壓為-0.4v，取樣間隔0.1s，運(yùn)行時(shí)間300s；
(3)當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50s向10ml、50mmol/l的ph=6.98磷酸鹽緩沖溶液中注入10μl、5mol/l的雙氧水溶液，記錄電流變化；
(4)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定樣品中hbs的線性范圍為10pg/ml~200ng/ml，檢測(cè)限為3.3pg/ml。
實(shí)施例11hbe的檢測(cè)
按照實(shí)施例10的方法對(duì)樣品中hbe進(jìn)行檢測(cè)，其線性范圍為5.0pg/ml~100ng/ml，檢測(cè)限為1.7pg/ml。
實(shí)施例12hbc的檢測(cè)
按照實(shí)施例10的方法對(duì)樣品中hbc進(jìn)行檢測(cè)，其線性范圍為5.0pg/ml~100ng/ml，檢測(cè)限為1.7pg/ml。