本發(fā)明屬于檢測試紙技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種尿液酪氨酸的檢測試紙。

背景技術(shù)：

在世界范圍內(nèi)，惡性腫瘤已超越其他疾病成為人類的第一大死亡病因，且發(fā)病率呈上升趨勢，嚴(yán)重威脅人類健康。常用診斷腫瘤的方法有胸透、ct、核磁共振、穿刺、抽血等。其中，有些方法使用的儀器精密而造價昂貴，有些方法被檢者受到皮肉之苦，甚至?xí)l(fā)生交叉感染等問題。因此必須開發(fā)一種操作簡便快捷、成本低、特異性強、靈敏度高、重復(fù)性好的檢測方法。近年來，越來越多的代謝組學(xué)研究表明，體液代謝產(chǎn)物可作為早期發(fā)現(xiàn)或檢測多種腫瘤進(jìn)程的標(biāo)志物，如乳腺癌、結(jié)腸癌、肝癌、胃癌、前列腺癌等。人體細(xì)胞在發(fā)生癌變的早、中期，由于惡性腫瘤細(xì)胞的異常增殖會引起正常細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致人體內(nèi)氨基酸類物質(zhì)的代謝異常，異常代謝的反應(yīng)產(chǎn)物中含有一類相對分子質(zhì)量不大的蛋白質(zhì)或多肽類物質(zhì)(如酪氨酸)，其濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過健康人，并可從尿液中排出。酪氨酸是人體黑色素合成的前體物質(zhì)，青年人正常的尿酪氨酸濃度約1mmol/l左右，中老年人正常的尿酪氨酸濃度約1.3mmol/l左右。正如痣變可能是癌癥的前兆，癌癥發(fā)生的早期常常伴隨著尿液酪氨酸濃度的升高。尿酪氨酸濃度大于2.5mmol/l為異常，判斷為陽性。醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌、卵巢癌、宮頸癌、大腸癌患者的尿酪氨酸陽性率約80～85％，肝癌、胃癌患者的尿酪氨酸陽性率約70％。以尿液中的酪氨酸作為惡性腫瘤標(biāo)志物，可應(yīng)用于早期癌癥篩查，且取材方便，無創(chuàng)傷，適合大規(guī)模推廣。

中國專利cn201510962013.1公開了一種用于檢測人體尿液中酪氨酸類腫瘤標(biāo)志物的試劑，由硝酸汞溶液、硫酸汞溶液、硝酸鎳溶液、硫酸鈷溶液組成。中國專利cn201510537446.2公開了一種對羥基苯丙氨酸酪氨酸尿液檢測試劑，試劑含有h⁺、ni²⁺、hg⁺、no^3-離子和磷鉬酸和/或磷鉬酸可溶性鹽?，F(xiàn)有的酪氨酸檢測專利的反應(yīng)原理基本采用millon反應(yīng)，根據(jù)化學(xué)反應(yīng)原理，在汞鹽和其他螯合劑的輔助下，在酸性介質(zhì)中，汞鹽和酪氨酸發(fā)生螯合反應(yīng)，生產(chǎn)磚紅色螯合物，以此檢測酪氨酸。雖然這些方法在應(yīng)用中有一定效果，但仍有以下不足之處：(1)不準(zhǔn)確，該方法容易受尿樣的顏色、尿中所含蛋白、尿中所含還原性物質(zhì)、尿液酸堿度以及無機(jī)鹽干擾；(2)不安全，在生理上，汞的化合物可通過呼吸道、皮膚或消化道等不同途徑侵入人體，集聚于肝、腎、大腦等部位，且具有累積性，造成神經(jīng)性中毒和深部組織病變；(3)不環(huán)保，廢棄的汞鹽會污染環(huán)境，并能通過食物鏈在生物體內(nèi)富集，進(jìn)而進(jìn)入人體，汞鹽若處理不當(dāng)，對人體以及環(huán)境都有極大的危害；(4)不方便，由于millon試劑具有劇毒、腐蝕性和揮發(fā)性，所以目前產(chǎn)品常用安瓿瓶盛裝試劑，但對消費者而言開啟困難而且容易產(chǎn)生外傷事故。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有尿酪氨酸檢測試劑不準(zhǔn)確、不安全、不環(huán)保、不方便的缺點，本發(fā)明的目的是提供一種尿液酪氨酸的檢測試紙。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

一種尿液酪氨酸的檢測試紙，由支撐塊1、酪氨酸檢測塊2、維生素c檢測塊3和比色卡組成，所述酪氨酸檢測塊2和維生素c檢測塊3由粘結(jié)層4粘結(jié)到所述支撐塊1上。

優(yōu)選地，所述酪氨酸檢測塊和維生素c檢測塊以吸水棉紙作為載體。

所述酪氨酸檢測塊含有生物復(fù)合酶、穩(wěn)定劑和激活劑。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述生物復(fù)合酶包括多酚氧化酶和抗壞血酸氧化酶。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述穩(wěn)定劑為化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的廣譜抗生素，包括氯霉素、土霉素、四環(huán)素中的一種，優(yōu)選氯霉素。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述激活劑為能增加多酚氧化酶活力的植物提取物，優(yōu)選綠原酸。

多種植物提取物均對多酚氧化酶有激活作用，可加入一種或多種植物提取物增加多酚氧化酶的活性，如丹參、何首烏、黃芩、蒲公英、金銀花等植物的提取物。植物提取物的制備方法為：用50％乙醇浸泡回流提取有效成分，蒸餾水稀釋制備成濃度為1mg/ml-10mg/ml的溶液。

所述酪氨酸檢測塊制備方法為：用吸水棉紙浸泡含有生物復(fù)合酶、穩(wěn)定劑和激活劑的溶液，然后冷凍干燥。

優(yōu)選地，所述多酚氧化酶溶液濃度為800u/ml-1500u/ml，所述抗壞血酸氧化酶濃度為400u/ml-800u/ml，所述穩(wěn)定劑濃度為0.5mg/ml-2mg/ml，所述激活劑濃度為5mg/l-15mg/l；進(jìn)一步優(yōu)選地，所述多酚氧化酶溶液濃度為1000u/ml，所述抗壞血酸氧化酶濃度為500u/ml，所述穩(wěn)定劑溶液濃度為1mg/ml，所述激活劑濃度為10mg/ml。

優(yōu)選地，所述酪氨酸檢測塊長度為5mm、寬度為5mm、厚度為1mm。

所述維生素c檢測塊由浸泡過2，6-二氯靛酚鈉溶液的吸水棉紙在25℃、常壓條件下干燥而成。

優(yōu)選地，所述2，6-二氯靛酚鈉溶液濃度為1-4％；進(jìn)一步優(yōu)選地，所述2，6-二氯靛酚鈉溶液濃度為2％。

優(yōu)選地，所述維生素c檢測塊長度為5mm、寬度為5mm、厚度為1mm。

所述比色卡包括9個顏色梯度，對應(yīng)酪氨酸含量分別為0mmol/l、0.5mmol/l、1.0mmol/l、1.5mmol/l、2.0mmol/l、2.5mmol/l、3.0mmol/l、3.5mmol/l和4.0mmol/l。

本發(fā)明通過多酚氧化酶與酪氨酸反應(yīng)，酪氨酸催化氧化成o-苯醌，聚合生成黑色素，通過黑色深淺可以判斷酪氨酸濃度；多酚氧化酶和抗壞血酸氧化酶一起作用，借助氧使酚類氧化，生成苯醌，加快反應(yīng)速度；綠原酸能增加酶活力，消除多酚氧化酶的遲滯時間；氯霉素能抑制微生物生長，保證生物復(fù)合酶的活性。干擾試驗中發(fā)現(xiàn)，維生素c濃度達(dá)2.8mmol/l時，酪氨酸氧化反應(yīng)顏色變淺，造成假陰性。因此，酪氨酸檢測試紙中加入維生素c檢測塊可增加酪氨酸檢測試紙的靈敏度。

本發(fā)明的試紙的使用方法：用尿液沾濕試紙，輕輕甩去多余液體。讓試紙在空氣中反應(yīng)4小時，然后觀察試紙顏色，判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：

若維生素c檢測塊為藍(lán)色，酪氨酸檢測塊變?yōu)楹谏?，檢測結(jié)果為酪氨酸陽性；

若維生素c檢測塊為藍(lán)色，酪氨酸檢測塊變?yōu)榛疑虬咨?，檢測結(jié)果為酪氨酸陰性；

若維生素c檢測塊變?yōu)榘咨?，檢測結(jié)果為維生素c陽性，受維生素c干擾無效。

將檢測結(jié)果為酪氨酸陽性的酪氨酸檢測塊與比色卡對照，估讀酪氨酸的濃度。若尿液酪氨酸濃度持續(xù)增加應(yīng)引起重視，提示氨基酸代謝紊亂，即使未達(dá)到陽性濃度也應(yīng)進(jìn)行進(jìn)一步診斷。

本發(fā)明的有益效果：

與現(xiàn)有的尿酪氨酸/對羥基苯丙氨酸檢測試劑相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：

(1)利用生物復(fù)合酶催化酪氨酸發(fā)生特異性顯色反應(yīng)，除了維生素c外不受尿液其他物質(zhì)的干擾，結(jié)果準(zhǔn)確；

(2)試紙無毒性、腐蝕性，使用安全；

(3)試紙中含有的化學(xué)物質(zhì)都是生物可降解的，對環(huán)境沒有污染；

(4)由于劑型是試紙，小便時直接將尿液沾濕試紙即可，使用非常方便。

此外，本發(fā)明的尿酪氨酸檢測試紙通過尿液檢測能夠預(yù)警早期癌癥，取樣、操作簡便快捷，免除了抽血痛苦和交叉感染的機(jī)會，不需特殊儀器且成本低，適用于基層醫(yī)院及邊遠(yuǎn)山區(qū)腫瘤普查的推廣。

附圖說明

圖1是本發(fā)明尿液酪氨酸的檢測試紙的主視圖；

圖2是本發(fā)明尿液酪氨酸的檢測試紙的俯視圖；

1為支撐塊，2為酪氨酸檢測塊，3為維生素c檢測塊，4為粘結(jié)層；

圖3是尿液酪氨酸的檢測試紙的比色卡，濃度單位mmol/l。-：陰性；+/-：弱陽性；+：陽性。

具體實施方式

實施例1

本發(fā)明的尿液酪氨酸檢測試紙包括支撐塊、酪氨酸檢測塊、維生素c檢測塊和比色卡，酪氨酸檢測塊和維生素c檢測塊以吸水棉紙作為載體，長度為5mm、寬度為5mm、厚度為1mm。

酪氨酸檢測塊制備工藝如下：

(1)配制濃度為1000u/ml的多酚氧化酶溶液，將1mm厚吸水棉紙放入裝有配制好的多酚氧化酶溶液的容器中，待吸水棉紙充分浸潤后，取出冷凍干燥；

(2)配制濃度為500u/ml的抗壞血酸氧化酶溶液，將步驟(1)處理的吸水棉紙放入裝有配制好的抗壞血酸氧化酶溶液的容器中，待吸水棉紙充分浸潤后，取出冷凍干燥；

(3)配制濃度為1mg/ml的氯霉素溶液，將步驟(2)處理的吸水棉紙放入裝有配制好的氯霉素溶液的容器中，待吸水棉紙充分浸潤后，取出冷凍干燥；

(4)配制濃度為10mg/l的綠原酸溶液，將步驟(3)處理的吸水棉紙放入裝有配制好的綠原酸溶液的容器中，待吸水棉紙充分浸潤后，取出冷凍干燥，裁剪成5mm×5mm，即得酪氨酸檢測塊。

維生素c檢測塊制備工藝如下：

配制濃度為2％的2，6-二氯靛酚鈉溶液，將1mm厚吸水棉紙放入裝有配制好的2，6-二氯靛酚鈉溶液的容器中，待吸水棉紙充分浸潤后，取出在25℃、常壓條件下干燥，裁剪成5mm×5mm，即得維生素c檢測塊。

將制得的酪氨酸檢測塊和維生素c檢測塊固定在支撐塊上，制得尿液酪氨酸檢測試紙。

與尿液酪氨酸檢測試紙配套的比色卡制備方法如下：

配制濃度為0mmol/l、0.5mmol/l、1.0mmol/l、1.5mmol/l、2.0mmol/l、2.5mmol/l、3.0mmol/l、3.5mmol/l和4.0mmol/l的酪氨酸溶液，將制得的酪氨酸檢測塊放入不同濃度的酪氨酸溶液中，待反應(yīng)完畢后，記錄結(jié)果顏色，制作標(biāo)準(zhǔn)比色卡。

實施例2

制備人工尿質(zhì)控液代替正常尿液，配方為：蒸餾水、尿素1.8％、尿酸0.05％、氯化鈉1.1％，向尿質(zhì)控液中加入酪氨酸，最終濃度為3mmol/l。

用實施例1制備的尿液酪氨酸檢測試紙沾取人工尿質(zhì)控液，輕輕甩去多余液體，在空氣中反應(yīng)4小時，觀察顏色變化。

結(jié)果：維生素c檢測塊為藍(lán)色，酪氨酸檢測塊變?yōu)楹谏瑱z測結(jié)果為酪氨酸陽性。

實施例3

制備人工尿質(zhì)控液代替正常尿液，配方為：蒸餾水、尿素1.8％、尿酸0.05％、氯化鈉1.1％，向尿質(zhì)控液中加入酪氨酸，最終濃度為1.3mmol/l。

用實施例1制備的尿液酪氨酸檢測試紙沾取人工尿質(zhì)控液，輕輕甩去多余液體，在空氣中反應(yīng)4小時，觀察顏色變化。

結(jié)果：維生素c檢測塊為藍(lán)色，酪氨酸檢測塊變?yōu)榛疑?，檢測結(jié)果為酪氨酸陰性。

實施例4

制備人工尿質(zhì)控液代替正常尿液，配方為：蒸餾水、尿素1.8％、尿酸0.05％、氯化鈉1.1％，向人工尿質(zhì)控液中加入維生素c使其濃度為2.8mmol/l，加入酪氨酸使其濃度為2.5mmol/l。

用實施例1制備的尿液酪氨酸檢測試紙沾取人工尿質(zhì)控液，輕輕甩去多余液體，在空氣中反應(yīng)4小時，觀察顏色變化。

結(jié)果：維生素c檢測塊藍(lán)色褪色，酪氨酸檢測塊變?yōu)闇\灰色，說明結(jié)果受維生素c干擾導(dǎo)致假陰性。

實施例5

健康人24小時禁食中西藥物和高維生素c食物后，取新鮮晨尿，加入酪氨酸，最終濃度為2.5mmol/l。

用實施例1制備的試紙沾取新鮮尿液，輕輕甩去多余液體，在空氣中反應(yīng)4小時，觀察顏色變化。

結(jié)果：維生素c檢測塊為藍(lán)色，酪氨酸檢測塊變?yōu)楹谏瑱z測結(jié)果為酪氨酸陽性。