本發(fā)明屬于醫(yī)學檢驗用試劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種血細胞分析用溶血劑。
背景技術(shù)：
溶血劑是血液細胞分析儀最常用的試劑之一，也是白細胞及各分群計數(shù)、hgb含量測定的關(guān)鍵試劑。被稀釋的血液加入溶血劑后，紅細胞溶解，釋放血紅蛋白，后者與溶血劑中相關(guān)成分結(jié)合形成血紅蛋白衍生物，進入血紅蛋白檢測系統(tǒng)，在特定波長(一般在530～550nm)下比色，吸光度的變化與液體中血紅蛋白含量成正比，儀器便可顯示其濃度；同時，不同類型的白細胞(淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞等)經(jīng)溶血劑作用后形成明顯的差異，根據(jù)這些差異，儀器可以將血液樣本中的白細胞分成幾個類群，并對白細胞總數(shù)及各類群的數(shù)量進行統(tǒng)計。
目前，國內(nèi)外臨床檢驗中常用無氰化溶血劑替代kcn使用。現(xiàn)有技術(shù)中公開了多種用于白細胞分類的試劑，如cn2011100744709涉及一種用于白細胞五分類計數(shù)的溶血劑及用途。所述溶血劑由溶血劑a與溶血劑b組成。溶血劑a由聚氧乙烯型非離子表明活性劑、有機酸、季銨鹽陽離子表面活性劑助溶劑、穩(wěn)定劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑組成；溶血劑b由堿性無機鹽和滲透壓調(diào)節(jié)劑組成。該溶血劑能夠?qū)准毎譃榱馨图毎?、單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜中性粒細胞和嗜堿性粒細胞，獲得各類白細胞數(shù)量。
陰離子表面活性劑可以與血紅蛋白作用，形成穩(wěn)定的有色衍生物，波峰為538nm，血紅蛋白含量與538nm處吸光度值成正比，從而測定血紅蛋白含量。但是，此類溶血劑仍然存在測定值準確性低的問題。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提出一種血細胞分析用溶血劑，該溶血劑解決了陰離子表面活性劑加量不足與過量的難題，提高了血紅蛋白含量測定的準確性。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的：
一種血細胞分析用溶血劑，至少包括陰離子表面活性劑與吡啶硫酮鹽，陰離子表面活性劑的含量與吡啶硫酮鹽的含量之比為1.5～3:1。
作為優(yōu)選，陰離子表面活性劑為十二烷基硫酸鈉，吡啶硫酮鹽為吡啶硫酮鈉。
進一步，本發(fā)明的一些實施例中，還含有緩沖液，該緩沖劑調(diào)節(jié)溶血劑的ph為6～8。
進一步，所述緩沖液選自蘋果酸、丁二酸、鄰苯二甲酸、檸檬酸、酒石酸、草酸、甲酸、馬來酸、甘胺酸及它們各自的鹽，以及鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸。
進一步，所述緩沖液為磷酸氫二鈉與草酸鈉。
進一步，為消除陰離子表面活性劑帶來氣泡的影響，本發(fā)明的一些實施例，還包括消泡劑，本發(fā)明消泡劑為溶血劑中常用消泡劑，其含量少量達到消除氣泡目的即可，一般為0.5～2g/l。
十二烷基硫酸鈉，白色或淡黃色粉狀，溶于水，對堿和硬水不敏感；具有去污、乳化和優(yōu)異的發(fā)泡力；是一種對人體微毒的陰離子表面活性劑。其生物降解度>90％。用途：用作乳化劑、滅火劑、發(fā)泡劑及紡織助劑；也用作牙膏和膏狀、粉狀、洗發(fā)香波的發(fā)泡劑。
吡啶硫酮鈉，分子式c5h4nosna，是一種防霉抗菌原料產(chǎn)品。純品為白色或類白色粉末，易溶于水和乙醇等有機溶劑。其一般配置成40％液劑，呈淡黃色到黃褐色透明液體，易溶于水。在酸性條件下使用持效下降，在堿性或中性條件下穩(wěn)定。
本發(fā)明中wbc即白細胞(英文名：leukocyte，whitebloodcell，簡稱：wbc)，舊稱白血球。
本發(fā)明中rbc為紅細胞又稱紅血球或紅血細胞，是血液中最多的一種血細胞。紅細胞中含有血紅蛋白，因而使血液呈紅色。血紅蛋白能和空氣中的氧結(jié)合，因此紅細胞能通過血紅蛋白將吸入肺泡中的氧運送給組織，而組織中新陳代謝產(chǎn)生的二氧化碳也通過紅細胞運到肺部并被排出體外。
本發(fā)明中hgb(hemoglobin；haemoglobin；hb；hgb)每一血紅蛋白分子由四分子的珠蛋白和四分子亞鐵血紅素組成，每個血紅素又由4個吡咯環(huán)組成，在環(huán)中央有一個鐵原子。血紅蛋白中的鐵在二價狀態(tài)時，可與氧呈可逆性結(jié)合(氧合血紅蛋白)，如果鐵氧化為三價狀態(tài)。
本發(fā)明中plt(bloodplatelet)為血小板，是哺乳動物血液中的有形成分之一，是從骨髓成熟的巨核細胞胞質(zhì)裂解脫落下來的具有生物活性的小塊胞質(zhì)。
市場售溶血劑，加入陰離子表面活性劑特別是sds(十二烷基硫酸鈉)，但sds加量很難把握，因為血液樣本中血紅蛋白濃度過高時，如果sds加量不足，sds與血紅蛋白結(jié)合不完全，造成血紅蛋白含量測定不準確，如果sds加量過量，會對白細胞結(jié)構(gòu)造成破壞，并且改變白細胞體積，從而影響白細胞計數(shù)及分類。發(fā)明人通過大量試驗，驚奇地發(fā)現(xiàn)吡啶硫酮鹽也可以與血紅蛋白作用，形成穩(wěn)定的有色衍生物，波峰為538nm，血紅蛋白含量與538nm處吸光度值成正比，從而測定血紅蛋白含量。此外，吡啶硫酮鹽對白細胞結(jié)構(gòu)和體積沒有影響，不會影響白細胞計數(shù)和分類。加入適量的吡啶硫酮鹽，解決了sds加量不足與過量的難題，保證了血紅蛋白含量測定的準確性。
具體實施方式
實施例1
一種血細胞分析用溶血劑，具有以下組分：
十二烷基硫酸鈉10g/l，磷酸氫二鈉1g/l，草酸鈉0.8g/l，吡啶硫酮鈉5g/l，消泡劑2g/l。
將各組分按照要求準確稱量，用水溶解后混合、定容，然后用2.2μm濾膜過濾分裝。
實施例2
一種血細胞分析用溶血劑，具有以下組分：
十二烷基硫酸鈉12g/l，磷酸氫二鈉1g/l，草酸鈉0.8g/l，吡啶硫酮鉀6g/l，消泡劑2g/l。
將各組分按照要求準確稱量，用水溶解后混合、定容，然后用2.2μm濾膜過濾分裝。
實施例3
一種血細胞分析用溶血劑，具有以下組分：
十二烷基硫酸鈉12g/l，磷酸氫二鈉1g/l，草酸鈉0.8g/l，吡啶硫酮鉀5g/l，消泡劑2g/l。
將各組分按照要求準確稱量，用水溶解后混合、定容，然后用2.2μm濾膜過濾分裝。
試驗例
將實施例1的溶血劑與市場售溶血劑進行了比較研究，測定了溶血速度、血紅蛋白(hgb)、白細胞(wbc)、紅細胞(rbc)、血紅蛋白(hgb)、血小板(plt)等參數(shù)。
1材料與方法
1.1儀器
1.1.1邁瑞bc-3000血細胞分析儀
1.2試劑
1.1.1邁瑞bc-3000血細胞分析儀原廠配套試劑：稀釋液、原廠溶血劑、清洗液。
1.2.2實施例1溶血劑(簡稱實例1溶血劑)。
1.2.3標本實驗當日加入edta-k2抗凝的臨床病人靜脈血，采血后4小時內(nèi)檢測完畢。
1.2.4質(zhì)控血：四川邁克(批號：1509176)。
1.3實驗方法
1.3.1溶血速度觀察
實驗室溫度設(shè)定20℃，取10ml比色管2支，加入稀釋液5ml，同一抗凝血20μl，然后分別加入原廠溶血劑和發(fā)明溶血劑各1ml，并搖勻，立即觀察紅細胞溶解情況，記錄紅細胞完全溶解時間。
抽取20個正常標本和20個異常標本，進行上述實驗。
1.3.2臨床檢測
實驗前實驗室溫度設(shè)定20℃，在bc-3000血細胞分析儀上測定質(zhì)控血，檢測各項目是否在參考值范圍內(nèi)，確保儀器正常工作。
抽取20個正常標本和20個異常標本，分別使用原廠溶血劑和本發(fā)明溶血劑在血細胞分析儀上進行檢測，記錄hgb、wbc、rbc、plt等各項檢測結(jié)果。
通過人工鏡檢方式進行檢測上述20個正常標本和20個異常標本，記錄hgb、wbc、rbc、plt等各項檢測結(jié)果。
以人工鏡檢方式作為各檢測項目的標準值。
2結(jié)果與分析
2.1溶血速度
原廠溶血劑和實施例1溶血劑溶血速度見表1和表2。
表1正常標本原廠溶血劑和實例1溶血劑溶血速度對照
表2異常標本原廠溶血劑和實例1溶血劑溶血速度對照
從表1可以看出，正常標本的原廠溶血劑和實施例1溶血劑溶血速度基本相同，均在8-10s內(nèi)使紅細胞完全溶解。
從表2可以看出，異常標本的原廠溶血劑溶血速度在7-12s內(nèi)，實施例1溶血劑溶血速度在8-10s內(nèi)，實例1溶血劑對于異常標本溶血時間比原廠溶血劑更穩(wěn)定。
2.2臨床檢測結(jié)果及分析
分別用原廠溶血劑、實例1溶血劑及人工鏡檢方式臨床測定20個正常標本和20個異常標本，主要參數(shù)統(tǒng)計結(jié)果見表3和表4。
表3正常標本兩種試劑及人工鏡檢臨床測定結(jié)果比較
表4異常標本兩種試劑及人工鏡檢臨床測定結(jié)果比較
從表3中可以看出，正常標本hgb檢測結(jié)果兩種試劑與人工鏡檢基本一致，無顯著性差異。
從表4中可以看出，異常標本hgb檢測結(jié)果，原廠溶血劑測定hgb與人工鏡檢有顯著性差異，實施例1溶血劑測定hgb與人工鏡檢無顯著性差異，發(fā)明溶血劑臨床檢測結(jié)果更接近真實值。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。