本發(fā)明涉及化學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，尤其是一種hplc-cad同時(shí)測(cè)定葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯、鈉含量的方法。

背景技術(shù)：

中國(guó)藥典2010版記載了葡萄糖注射液中葡萄糖測(cè)定的方法，其3.6.1節(jié)記錄采用旋光度法測(cè)定注射液中的葡萄糖的含量，該方法對(duì)環(huán)境溫度控制要求高，測(cè)定時(shí)受環(huán)境因素影響較大，其3.6.2節(jié)記錄采用硝酸銀滴定法測(cè)定注射液中的氯化鈉的含量，該方法對(duì)操作人員專業(yè)技能要求高，不同測(cè)試人員測(cè)試結(jié)果存在一定的偏差?，F(xiàn)有國(guó)標(biāo)中并未記載同時(shí)測(cè)量葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯、鈉含量的測(cè)定方法，即使采用傳統(tǒng)的hplc的測(cè)量方法，其線性率在整個(gè)測(cè)量范圍內(nèi)并不服從嚴(yán)格的線性分布標(biāo)準(zhǔn)。

電噴霧檢測(cè)器(cad)是目前通用的檢測(cè)器，與hplc聯(lián)用時(shí)，hplc洗脫液經(jīng)霧化器中氮?dú)獾淖饔枚F化,其中較大的液滴在碰撞器的作用下經(jīng)廢液管流出，較小的溶質(zhì)(分析物)液滴在室溫下干燥，形成溶質(zhì)顆粒。同時(shí)，用于載氣的氮?dú)夥至餍纬傻牡诙傻獨(dú)饬鹘?jīng)過電暈式裝置(含高壓鉑金絲電極)形成帶正電荷的氮?dú)忸w粒，與溶質(zhì)顆粒反向相遇時(shí)經(jīng)碰撞使溶質(zhì)顆粒帶上正電。它不依賴于分析物的結(jié)構(gòu)，也不需要將分析物電離，只要該物質(zhì)屬于半揮發(fā)性或非揮發(fā)性化合物就可以被檢出，且靈敏度可以達(dá)到pg級(jí)別，重現(xiàn)性良好，是紫外(uv)、質(zhì)譜(ms)、示差折光(ri)與蒸發(fā)光散射(elsd)等常用檢測(cè)器的有力補(bǔ)充。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)上述不足，本發(fā)明旨在提供一種測(cè)定準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)單的hplc-cad同時(shí)測(cè)定葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯、鈉含量的方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：一種hplc-cad同時(shí)測(cè)定葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯、鈉含量的方法，依次包括下述步驟：

1)取葡萄糖氯化鈉注射液1ml用水定容至1000ml，搖勻，過濾，得供試品溶液；

2)采用高效液相色譜法進(jìn)行分析，參數(shù)設(shè)置如下：

色譜柱：thermomixed-modehilic，2.1×150mm，1.3μm；

流速：0.3ml/min；

柱溫：40℃；

進(jìn)樣量：10μl；

流動(dòng)相：50mmol/l醋酸銨-乙腈。

進(jìn)一步的，所述的高效液相色譜儀的型號(hào)為：thermo-u3000高效液相色譜儀，所述的thermo-u3000高效液相色譜儀附帶coronaultra電噴霧檢測(cè)器。

進(jìn)一步的，所述的流動(dòng)相中50mmol/l醋酸銨-乙腈的體積比為15～80：20～85。

進(jìn)一步的，所述的流動(dòng)相采用梯度洗脫的方法加入，其中具體的參數(shù)如下：

洗脫總時(shí)間為10分鐘；

第0-2分鐘，流動(dòng)相中50mmol/l醋酸銨-乙腈的體積比為15：85；

第4-5分鐘，流動(dòng)相中50mmol/l醋酸銨-乙腈的體積比為80：20；

第6-10分鐘，流動(dòng)相中50mmol/l醋酸銨-乙腈的體積比為15：85。

進(jìn)一步的，所述的供試品溶液的制備需過0.45μm濾膜。

本發(fā)明的有益效果如下：

采用上述方案可以同時(shí)測(cè)量葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯、鈉的濃度，避免了國(guó)標(biāo)測(cè)試的人員操作和環(huán)境因素影響，同時(shí)hplc結(jié)合電噴霧檢測(cè)器(cad)，可以保證在整個(gè)濃度范圍內(nèi)符合線性分布的規(guī)律，避免了極低濃度下的傳統(tǒng)hplc測(cè)試方法帶來的不準(zhǔn)確性。

coronaultra電噴霧檢測(cè)器(cad)技術(shù)的工作原理是將分析物轉(zhuǎn)化成溶質(zhì)顆粒，顆粒的大小隨著被分析物的含量而增加；溶質(zhì)顆粒與帶正電荷的氮?dú)忸w粒相撞，電荷隨之轉(zhuǎn)移到顆粒上(溶質(zhì)顆粒越大，帶電越多)；溶質(zhì)顆粒把它們的電荷轉(zhuǎn)移給收集器，通過高靈敏度的靜電檢測(cè)計(jì)測(cè)出溶質(zhì)顆粒的帶電量，由此產(chǎn)生的信號(hào)電流與溶質(zhì)的含量成正比；檢測(cè)結(jié)果與分析物顆粒有關(guān)，信號(hào)電流與樣品中分析物的質(zhì)量成正比。

上述測(cè)試方法采用梯度洗脫的方式進(jìn)行洗脫，能夠在較寬的范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)待測(cè)成分的有效分離，同時(shí)，采用coronaultra電噴霧檢測(cè)器能夠?qū)崿F(xiàn)極低濃度時(shí)的準(zhǔn)確測(cè)量，克服了傳統(tǒng)測(cè)試方法的人工操作帶來的不穩(wěn)定性。

附圖說明

圖1為超純水的高效液相色譜圖；

圖2為葡萄糖氯化鈉注射液的高效液相色譜圖。

具體實(shí)施方法

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)權(quán)利要求書做進(jìn)一步說明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制，任何在對(duì)本發(fā)明做有限次修改所得到的技術(shù)方案仍然屬于本發(fā)明所要保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1

1儀器與試劑

thermo-u3000高效液相色譜儀(美國(guó)熱電公司，附帶coronaultra電噴霧檢測(cè)器)，色譜柱為thermomixed-modehilic(2.1×150mm，1.3μm)。

醋酸銨(分析純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；

葡萄糖對(duì)照品(批號(hào)：e1407051，aladdin，含量≥99.5％)；

氯化鈉對(duì)照品(批號(hào)：gbw(e)060024，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，含量＝99.99％)；

250ml葡萄糖氯化鈉注射液(批號(hào)：e131102k2，湖南科倫制藥有限公司)；250ml葡萄糖氯化鈉注射液(批號(hào)：131228804，安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司)；250ml葡萄糖氯化鈉注射液(批號(hào)：h13121609，廣西裕源藥業(yè)有限公司)；均由醫(yī)院提供；

乙腈(色譜純，美國(guó)sigma-aldrich公司)；

提取用水為超純水。

2.方法

2.1供試品溶液的制備

取葡萄糖氯化鈉注射液1ml用水定容至1000ml，搖勻，過濾，濾液過0.45μm濾膜，得供試品溶液。

2.2對(duì)照品溶液的制備

參照《中國(guó)藥典》2015年版二部中葡萄糖氯化鈉注射液規(guī)格(7)項(xiàng)下配制，取葡萄糖約12.5g和氯化鈉約2.25g，精密稱定，置于250ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3線性配制

精密移取對(duì)照品貯備液1ml置于10ml量瓶中，加超純水稀釋并定容至刻度，搖勻，再精密移取各1ml分別置于100ml、50ml、25ml、10ml、5ml量瓶中，加超純水稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。

制成表1所示線性溶液。

表1

2.4色譜條件

流速：0.3ml/min，柱溫40℃，進(jìn)樣量10μl，流動(dòng)相為a(50mmol/l醋酸銨)：b(乙腈)。

所述的流動(dòng)相采用梯度洗脫的方法加入，其中具體的參數(shù)如下：

洗脫總時(shí)間為10分鐘；

第0-2分鐘，流動(dòng)相中50mmol/l醋酸銨-乙腈的體積比為15：85；

第4-5分鐘，流動(dòng)相中50mmol/l醋酸銨-乙腈的體積比為80：20；

第6-10分鐘，流動(dòng)相中50mmol/l醋酸銨-乙腈的體積比為15：85。

3.結(jié)果

3.1專屬性試驗(yàn)

取適量超純水，按“2.4”項(xiàng)下色譜條件上機(jī)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖1，表明超純水中clo^-對(duì)檢測(cè)無(wú)干擾。

3.2結(jié)果及線性關(guān)系

按“2.4”項(xiàng)下色譜條件，葡萄糖、cl^-、na⁺分離度良好，且不受溶劑超純水中雜質(zhì)clo^-等干擾，色譜圖見圖1、圖2。

精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸。

葡萄糖在0.5～1.0mg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程y＝125.8386x+1.2101(r＝0.9993)；氯、鈉在0.09～1.80mg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程分別為y＝33.6836x+0.6429(r＝0.9999)、y＝17.3087x+0.0395(r＝0.9999)。

3.3精密度試驗(yàn)

精密精取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，分別計(jì)算葡萄糖、cl^-和na⁺的rsd，分別為0.25％、0.11％、0.14％。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

3.4重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品6份，按“2.1”供試品方法制備，測(cè)定峰面積。分別計(jì)算6份樣品中葡萄糖、cl^-和na⁺的平均含量分別為12.51g/250ml、2.25g/250ml、2.25g/250ml，rsd分別為1.50％、0.95％和1.58％。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好。

3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品，在0、4、8、12、16、20、24h內(nèi)進(jìn)樣7次，測(cè)定峰面積，分別計(jì)算樣品中不同時(shí)間點(diǎn)的葡萄糖、cl^-和na⁺含量的rsd為0.93％、0.85％、1.04％。結(jié)果表明，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

3.6回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品6份，每份約1ml，精密稱定。分別精密加入“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液1ml，按“2.1”供試品方法制備，測(cè)定。結(jié)果見表2，葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、cl^-和na⁺的平均回收率分別為100.4％、99.8％、100.1％，rsd分別為1.11％、1.02％、1.15％。

下表以葡萄糖回收率為例。

表2

4、討論

4.1由于葡萄糖和氯化鈉沒有紫外吸收官能團(tuán)，不能通過常規(guī)的高效液相色譜-紫外檢測(cè)法(hplc-uv)同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。本文建立了一種準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便的高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器法同時(shí)測(cè)定葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯和鈉的含量。可應(yīng)用于其質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究，對(duì)其類似化合物的測(cè)定也具有參考價(jià)值?？勺鳛獒t(yī)院常用的葡萄糖氯化鈉注射液含量檢測(cè)的一種有效手段。

4.2由于使用了thermomixed-modehilic-13μm2.1×150mm色譜柱，其具有混合模式固定相結(jié)合兩種反相液相色譜法(rp)和親水性交互(hilic)屬性，使同時(shí)測(cè)定氯和鈉兩種陰陽(yáng)離子成為可能。

4.3電噴霧檢測(cè)器(cad)是近年來發(fā)展起來的一種新型通用檢測(cè)器，在靈敏度、重現(xiàn)性和線性方面均具有優(yōu)異的性能，且操作簡(jiǎn)便。其基于獨(dú)特的新檢測(cè)原理，它的檢測(cè)技術(shù)不依賴于化合物的分子結(jié)構(gòu)，可實(shí)際應(yīng)用于任何非揮發(fā)或半揮發(fā)化合物，使得不具有示差折光檢測(cè)器和離子色譜的情況下，能完成對(duì)葡萄糖和氯化鈉2個(gè)陰陽(yáng)離子的檢測(cè)。

4.4《中國(guó)藥典》2015年版二部采用的含量測(cè)定方法繁瑣耗時(shí)，分別用旋光度法測(cè)定葡萄糖含量，硝酸銀滴定法測(cè)定氯化鈉中氯含量。本發(fā)明改用hplc-cad法進(jìn)行測(cè)定，樣品用超純水直接溶解上機(jī)，大大節(jié)省了前處理時(shí)間，同時(shí)檢測(cè)三個(gè)成分含量，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性和耐用性。且葡萄糖、氯和鈉的分離效果好，此方法抗干擾能力強(qiáng)。

以上僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例，凡在本發(fā)明的精神和原則范圍內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。