本發(fā)明屬于醫(yī)用材料技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種凝膠懸浮緩沖液、由其處理得到的凝膠、檢測卡及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
在臨床治療中，輸血是搶救傷病員生命的重要手段和措施。為保證輸血的安全，選用可靠的實(shí)驗(yàn)方法，采用特異性、靈敏度高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)是非常重要的。血型是人類血液的主要特征之一，表達(dá)了血液各種成份抗原的遺傳性狀，其中abo血型及rhd血型成為輸血和器官移植中重要的血型系統(tǒng)。早在1907年，hoktoen就首先提出了血型檢定對輸血治療的重要性，ottenberg等在1908年進(jìn)一步提出了供受體血液交叉配合試驗(yàn)的概念，更強(qiáng)調(diào)血型檢定對臨床輸血的深遠(yuǎn)意義。abo血型不相容輸血，幾乎毫無例外要發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)癥狀：彌漫性血管內(nèi)凝血、腎衰以致死亡。因此，abo血型的準(zhǔn)確定型至關(guān)重要。2000年衛(wèi)生部頒發(fā)的《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》(衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2000]184號)第四章第十五條明確規(guī)定：“輸血科(血庫)要逐項(xiàng)核對輸血申請單、受血者和供血者血樣，復(fù)查受血者和供血者abo血型(正反定型)，并常規(guī)檢查患者的rh(d)血型，正確無誤時(shí)可進(jìn)行交叉配血。”英國藥典中特別強(qiáng)調(diào)“檢測abo血型要檢測紅細(xì)胞抗原和血清或血漿中抗體兩方面?！?990年，lapierre發(fā)表了微柱凝膠免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)，這是人類紅細(xì)胞血型學(xué)發(fā)展的里程碑。美國輸血學(xué)會《輸血技術(shù)手冊》第12版(1996年)起就已經(jīng)將該技術(shù)列入紅細(xì)胞血型檢測的常規(guī)技術(shù)中。如今，在世界先進(jìn)國家，該新技術(shù)正在取代應(yīng)用多年的血凝試驗(yàn)，應(yīng)用在紅細(xì)胞血型血清學(xué)臨床常規(guī)檢驗(yàn)工作中。
抗人球蛋白試驗(yàn)，又稱coombs’試驗(yàn)，是診斷自身免疫性溶血性貧血(aiha)的重要依據(jù)。直接試驗(yàn)是檢查被檢紅細(xì)胞上有無不完全抗體，間接試驗(yàn)是檢查血清中游離的不完全抗體。直接coombs’試驗(yàn)較間接試驗(yàn)對aiha更有診斷價(jià)值。用特異性單價(jià)抗血清可將aiha分為三型：igg/c3陽性，占67％；單獨(dú)igg性，占20％；單獨(dú)c3性，占13％；抗人球蛋白檢測卡，主要用于血型交叉配血、不規(guī)則抗體篩查和不規(guī)則抗體鑒定等方面的應(yīng)用，具體指采用微柱凝膠技術(shù)進(jìn)行直接或間接的抗人球蛋白試驗(yàn)，即coombs’試驗(yàn)。微柱凝膠技術(shù)，是1984年yveslapierre發(fā)明的，1988年瑞士達(dá)亞美將專利產(chǎn)品推向市場。其原理是基于游離紅細(xì)胞和聚集紅細(xì)胞是否通過具有分子篩作用的凝膠顆粒構(gòu)成的膠體介質(zhì)，從而使不同狀態(tài)的紅細(xì)胞得以分離，是一種在微柱管中用凝膠介質(zhì)進(jìn)行的凝集反應(yīng)。微柱凝膠廣譜抗人球蛋白試劑檢測卡是微柱凝膠技術(shù)和抗人球蛋白試驗(yàn)方法相結(jié)合的新型產(chǎn)品，近年得到廣泛應(yīng)用。微柱凝膠技術(shù)相對于傳統(tǒng)試管法的抗人球蛋白試驗(yàn)，省略了繁瑣的洗滌程序和在陰性反應(yīng)試管中加入igg類型抗體致敏的紅細(xì)胞，用于確認(rèn)陰性反應(yīng)是否準(zhǔn)確可靠的步驟，且微柱凝膠技術(shù)使用標(biāo)本量小，操作簡便、人為因素干擾小，易于標(biāo)準(zhǔn)化操作和自動(dòng)化操作，結(jié)果易于判斷，便于存放及復(fù)查等優(yōu)點(diǎn)，適于大規(guī)模標(biāo)本的檢測。
目前國內(nèi)外已有一些廠家生產(chǎn)各種不同功能的微柱凝膠卡，但存在一些不足：一是凝膠懸浮緩沖液的懸浮性差，在灌裝時(shí)，凝膠沉降速度快，造成凝膠灌裝時(shí)難度大，二是凝膠在灌裝前，未進(jìn)行排氣泡操作，導(dǎo)致灌卡后成品合格率低。
因此，在本領(lǐng)域期望開發(fā)一種可以有效解決凝膠灌裝時(shí)的懸浮性問題以及灌裝后出現(xiàn)氣泡問題的微柱凝膠檢測卡。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種凝膠懸浮緩沖液、由其處理得到的凝膠、檢測卡及其應(yīng)用。
為達(dá)到此發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
一方面，本發(fā)明提供一種凝膠懸浮緩沖液，所述凝膠懸浮緩沖液包括如下成分：
在本發(fā)明中，通過使用含有如上所述成分的凝膠懸浮緩沖液不僅緩沖作用強(qiáng)，而且更接近人體紅細(xì)胞的存在環(huán)境，且咪唑溶液很穩(wěn)定，而葡聚糖溶于水后，可提高其懸浮能力，減緩凝膠在其中的沉降速度，鈉鹽則保證了凝膠懸浮緩沖液的離子強(qiáng)度。采用proclin300作為防腐劑，具有廣譜抗菌活性，能在比較長的時(shí)間內(nèi)抑制細(xì)菌、真菌和酵母菌等微生物的生長，同時(shí)，它又具有良好的與酶的相容性，不會影響與酶或抗體的相關(guān)反應(yīng)，使用劑量少即可達(dá)到抑菌的目的，其使用劑量較低對人畜無害。采用吐溫20作為潤滑劑，它是非離子表面活性劑，具有乳化、擴(kuò)散、增溶、穩(wěn)定等作用，最主要使得紅細(xì)胞通過凝膠間隙時(shí)獲得合適的潤滑能力，使無凝集的紅細(xì)胞能完全通過凝膠顆粒間隙，而凝集的紅細(xì)胞則被凝膠阻隔留在凝膠膠面以上或凝膠膠柱內(nèi)。
在本發(fā)明中，所述凝膠懸浮緩沖液中咪唑的含量為0.7-0.99g/l，例如0.7g/l、0.73g/l、0.75g/l、0.78g/l、0.8g/l、0.83g/l、0.85g/l、0.88g/l、0.9g/l、0.93g/l、0.95g/l或0.99g/l。
在本發(fā)明中，所述凝膠懸浮緩沖液中nacl的含量為0.6-0.9g/l，例如0.6g/l、0.63g/l、0.65g/l、0.68g/l、0.7g/l、0.74g/l、0.78g/l、0.8g/l、0.83g/l、0.85g/l、0.88g/l或0.9g/l。
在本發(fā)明中，所述凝膠懸浮緩沖液中tween20的質(zhì)量百分含量為0.05-0.2％，例如0.05％、0.08％、0.1％、0.12％、0.14％、0.16％、0.18％或0.2％。
在本發(fā)明中，所述凝膠懸浮緩沖液中proclin300的質(zhì)量百分含量為0.05-0.2％，例如0.05％、0.08％、0.1％、0.12％、0.14％、0.16％、0.18％或0.2％。
在本發(fā)明中，所述凝膠懸浮緩沖液中葡聚糖的質(zhì)量百分含量為1％、1.2％、1.4％、1.6％、1.8％、2％、2.3％、2.5％、2.7％、2.9％或3％。
在本發(fā)明中將如上所述成分溶解在純化水中得到所述凝膠懸浮緩沖液。
優(yōu)選地，所述凝膠懸浮緩沖液包括如下成分：
優(yōu)選地，所述凝膠懸浮緩沖液的ph為7.2～7.4，例如7.2、7.25、7.3、7.35或7.4。
另一方面，本發(fā)明提供一種由如上所述的凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠。
優(yōu)選地，所述處理的方法為：將聚丙烯酰胺凝膠離心，棄去上清后，使用等體積的純化水清洗3-5次，除去凝膠破損碎片和聚集的凝膠顆粒以及凝膠中過多的鹽離子，然后再使用等量的生理鹽水清洗凝膠3次，再使用凝膠懸浮緩沖液清洗至少兩次后，棄去上清，得到所述凝膠。
本發(fā)明處理得到的凝膠顆粒大小均勻且完整呈球形，利用所述凝膠懸浮緩沖液清洗后可以減緩凝膠的沉降速度，減少凝膠灌裝時(shí)的難度，易于灌裝。
另一方面，本發(fā)明提供一種檢測卡，所述檢測卡中包括如上所述的凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠。
優(yōu)選地，所述檢測卡為血型檢測卡，所述血型檢測卡包含六個(gè)微管，第一個(gè)微管中含有如上所述的凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠和抗a單克隆抗體的工作液，第二個(gè)微管中含有如上所述的凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠和抗b單克隆抗體的工作液，第三個(gè)微管中含有如上所述的凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠和抗d單克隆抗體的工作液，第四至第六個(gè)微管中均為不含任何抗體的中性凝膠。
優(yōu)選地，所述第一個(gè)微管中抗a單克隆抗體的工作液與凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠的體積比為2:(2-5)，例如2:2、2:2.3、2:2.5、2:2.8、2:3、2:3.3、2:3.5、2:3.8、2:4、2:4.3、2:4.5、2:4.7或2:5，優(yōu)選2:3。
優(yōu)選地，所述第二個(gè)微管中抗b單克隆抗體的工作液與凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠的體積比為2:(2-5)，例如2:2、2:2.3、2:2.5、2:2.8、2:3、2:3.3、2:3.5、2:3.8、2:4、2:4.3、2:4.5、2:4.7或2:5，優(yōu)選2:3。
優(yōu)選地，所述第三個(gè)微管中抗d單克隆抗體的工作液與凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠的體積比為2:(2-5)，例如2:2、2:2.3、2:2.5、2:2.8、2:3、2:3.3、2:3.5、2:3.8、2:4、2:4.3、2:4.5、2:4.7或2:5，優(yōu)選2:3。
優(yōu)選地，所述中性凝膠的配制方法為：將如上所述的凝膠懸浮緩沖液與凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠按照體積比2:(2-5)(例如2:2、2:2.3、2:2.5、2:2.8、2:3、2:3.3、2:3.5、2:3.8、2:4、2:4.3、2:4.5、2:4.7或2:5)混合得到所述中性凝膠。
優(yōu)選地，所述凝膠懸浮緩沖液與凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠按照體積比2:3混合。
優(yōu)選地，在灌裝至第一至第六個(gè)微管前對所述利用凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠以及中性凝膠進(jìn)行真空抽濾，排出氣泡。使得得到的凝膠顆粒之間無氣泡和異物。
在本發(fā)明中對凝膠進(jìn)行真空抽濾，排出氣泡后，按照每管26～30微升的量分別加入到空白凝膠卡的六個(gè)微管中的相應(yīng)位置，得到abo、rhd血型定型檢測卡。
本發(fā)明為了保證制備的abo、rhd血型定型檢測卡和抗人球蛋白檢測卡的質(zhì)量，對用于配置的抗體原料進(jìn)行了篩選。
優(yōu)選地，所述抗a單克隆抗體的工作液效價(jià)≥128。
優(yōu)選地，所述抗a單克隆抗體的工作液由凝膠懸浮緩沖液稀釋抗a單克隆抗體得到。
優(yōu)選地，所述抗b單克隆抗體的工作液效價(jià)≥128。
優(yōu)選地，所述抗b單克隆抗體的工作液由凝膠懸浮緩沖液稀釋抗b單克隆抗體得到。
優(yōu)選地，所述抗d單克隆抗體的工作液效價(jià)≥64。
優(yōu)選地，所述抗d單克隆抗體的工作液由凝膠懸浮緩沖液稀釋抗d單克隆抗體得到。
優(yōu)選地，所述檢測卡為抗人球蛋白檢測卡，所述抗人球蛋白檢測卡包含六個(gè)微管，所述六個(gè)微管中均含有抗人球蛋白凝膠，所述抗人球蛋白凝膠由抗人球蛋白試劑與如上所述的凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠按照體積比2:(2-5)混合得到。
即在本發(fā)明中，所述抗人球蛋白凝膠的配制方法為：將抗人球蛋白試劑與如上所述的凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠按照體積比2:(2-5)(例如2:2、2:2.3、2:2.5、2:2.8、2:3、2:3.3、2:3.5、2:3.8、2:4、2:4.3、2:4.5、2:4.7或2:5)混合得到所述抗人球蛋白凝膠。
優(yōu)選地，所述抗人球蛋白試劑與所述的凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠按照體積比2:3混合。
在本發(fā)明中，所述抗人球蛋白試劑為廣譜抗人球蛋白試劑(抗igg+c3d)，其與igg型抗d致敏紅細(xì)胞或c3d致敏紅細(xì)胞發(fā)生陽性反應(yīng)，與既無igg抗體又無c3d抗體致敏的紅細(xì)胞發(fā)生陰性反應(yīng)。
優(yōu)選地，在灌裝至第一至第六個(gè)微管前對所述利用凝膠懸浮緩沖液處理得到的凝膠、以及抗人球蛋白凝膠進(jìn)行真空抽濾，排出氣泡。使得得到的凝膠顆粒之間無氣泡和異物。
在本發(fā)明中對凝膠進(jìn)行真空抽濾，排出氣泡后，按照每管26～30微升的量分別加入到空白凝膠卡的六個(gè)微管中的相應(yīng)位置，得到抗人球蛋白檢測卡。
另一方面，本發(fā)明提供了如上所述的檢測卡在血型或抗人球蛋白檢測中的應(yīng)用。
相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下有益效果：
本發(fā)明的凝膠懸浮緩沖液的緩沖作用強(qiáng)，更接近人體紅細(xì)胞的存在環(huán)境，提高了懸浮能力，減緩凝膠的沉降速度，克服灌裝難度大的問題，并且本發(fā)明的凝膠懸浮緩沖液具有廣譜抗菌活性，且不會影響與酶或抗體的相關(guān)反應(yīng)，成分簡單，易于配制，在制備血型檢測卡時(shí)利用該凝膠懸浮緩沖液，使凝膠更易懸浮，延長沉降時(shí)間，同時(shí)使用真空抽濾方法排除凝膠中的氣泡，然后進(jìn)行凝膠灌裝，得到凝膠顆粒之間無氣泡和異物，提高檢測準(zhǔn)確度。
附圖說明
圖1為本發(fā)明的檢測卡的結(jié)構(gòu)示意圖，其中1-6分別為第一個(gè)微管、第二個(gè)微管、第三個(gè)微管、第四個(gè)微管、第五個(gè)微管和第六個(gè)微管。
具體實(shí)施方式
下面通過具體實(shí)施方式來進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明了，所述實(shí)施例僅僅是幫助理解本發(fā)明，不應(yīng)視為對本發(fā)明的具體限制。
實(shí)施例1
(1)在本實(shí)施例中，凝膠懸浮緩沖液的配方如下：
以上試劑用純化水溶解，調(diào)整ph為7.2～7.4，得到凝膠懸浮緩沖液。
(2)利用本實(shí)施例得到的凝膠懸浮緩沖液制備凝膠，制備方法如下：
先將聚丙烯酰胺凝膠離心，棄去上清后，使用等體積的純化水清洗3-5次，除去凝膠破損碎片和聚集的凝膠顆粒以及凝膠中過多的鹽離子，然后再使用等量的生理鹽水清洗凝膠3次，再使用凝膠懸浮緩沖液清洗兩次后，棄去上清，得到顆粒大小均勻且完整呈球形的凝膠。
(3)抗體的選擇
選擇igm性質(zhì)的抗a抗體，并使用凝膠懸浮緩沖液稀釋使其效價(jià)≥128，得到抗a溶液。
選擇igm性質(zhì)的抗b抗體，并使用凝膠懸浮緩沖液稀釋使其效價(jià)≥128，得到抗b溶液。
選擇igm性質(zhì)的抗d抗體，并使用凝膠懸浮緩沖液稀釋使其效價(jià)≥64，得到抗d溶液。
(4)凝膠的配制
特異性凝膠的配制：分別取步驟三抗a溶液、抗b溶液、抗d溶液與步驟二制備的凝膠按照2:3比例混合均勻，然后在抗a溶液配制的凝膠中加入終濃度為0.02mg/ml的亞甲藍(lán)，在抗b溶液配制的凝膠中加入終濃度為0.1mg/ml的酒石黃，即得分別含有抗a單克隆抗體、抗b單克隆抗體、抗d單克隆抗體的特異性凝膠。
中性凝膠的配制：取步驟一配制的凝膠懸浮緩沖液與步驟二制備的凝膠按照2:3比例混合均勻，即得中性凝膠。
(5)凝膠灌裝
將步驟四配制的各半成品凝膠，均在分裝前使用真空抽濾泵進(jìn)行抽濾排出氣泡，然后按照每管26～30微升的量分別加入到空白凝膠卡的六個(gè)微管中的相應(yīng)位置，第一個(gè)微管中加入含有抗a單克隆抗體的特異性凝膠，第二個(gè)微管中加入含有抗b單克隆抗體的特異性凝膠，第三個(gè)微管中加入含有抗d單克隆抗體的凝特異性凝膠，第四至第六微管中均加入不含任何抗體的中性凝膠，形成abo、rhd血型定型檢測卡。
(6)封口
使用鋁箔對微柱凝膠卡的管口進(jìn)行熱力塑封，得到血型檢測卡。
實(shí)施例2：
利用實(shí)施例1制備得到的abo、rhd血型定型檢測卡進(jìn)行血型檢測，方法如下：
abo、rhd血型定型檢測卡由聚丙烯塑料透明卡片，卡片上并排六支微柱型管中充填葡聚糖凝膠，從左向右順序第一支至第三支微管凝膠中分別充填抗a、抗b、抗d單克隆抗體igm試劑，稱之為特異性凝膠，檢測人紅細(xì)胞abo、rhd抗原。第四支至第六支微管中只有凝膠，稱之為中性凝膠，第四支微管作為陰性對照管；第五支和第六支微管作為abo血型反定型管。
將微柱凝膠試劑卡的六支凝膠微管標(biāo)號，如圖1所示。
將待檢者0.5％～0.8％紅細(xì)胞懸液分別加入第一至第四支微管中，每管50μl。
將待檢者血清分別加入第五支和第六支微管中，每管50μl。
將已知a型和b型紅細(xì)胞0.5％～0.8％濃度懸液分別加入第五和第六支微管中，每管50μl。
即刻使用專用離心機(jī)離心5分鐘(900rpm2min，2500rpm3min)，取出肉眼判定結(jié)果。判定結(jié)果示于表1中。
結(jié)果判定的標(biāo)準(zhǔn)如下：
陽性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中形成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應(yīng)。
反應(yīng)強(qiáng)度：特異性紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物位于膠表面，為強(qiáng)陽性反應(yīng)；復(fù)合物在膠中為弱陽性反應(yīng)；愈靠近膠底部顆粒愈小，反應(yīng)愈弱。
陰性結(jié)果：被檢紅細(xì)胞抗原無相應(yīng)的抗體結(jié)合，不出現(xiàn)特異性抗原抗體復(fù)合物，紅細(xì)胞沉于微柱凝膠的底部。
表1
實(shí)施例3
(1)在本實(shí)施例中，凝膠懸浮緩沖液的配方如下：
以上試劑用純化水溶解，調(diào)整ph為7.2～7.4，得到凝膠懸浮緩沖液。
(2)利用本實(shí)施例得到的凝膠懸浮緩沖液制備凝膠，制備方法如下：
先將聚丙烯酰胺凝膠離心，棄去上清后，使用等體積的純化水清洗3-5次，除去凝膠破損碎片和聚集的凝膠顆粒以及凝膠中過多的鹽離子，然后再使用等量的生理鹽水清洗凝膠3次，再使用凝膠懸浮緩沖液清洗兩次后，棄去上清，得到顆粒大小均勻且完整呈球形的凝膠。
(3)抗體的選擇
選擇廣譜抗人球蛋白試劑(抗igg+c3d)，與igg型抗d致敏紅細(xì)胞或c3d致敏紅細(xì)胞發(fā)生陽性反應(yīng)，與既無igg抗體又無c3d抗體致敏的紅細(xì)胞發(fā)生陰性反應(yīng)。
(4)凝膠的配制
抗人球蛋白凝膠的配制：取步驟三選擇的廣譜抗人球蛋白試劑與步驟二制備的凝膠按照2:3比例混合均勻，即得半成品抗人球蛋白凝膠。
(5)凝膠灌裝
將步驟四配制的各半成品凝膠，均在分裝前使用真空抽濾泵進(jìn)行抽濾排出氣泡，然后按照每管26～30微升的量分別加入到空白凝膠卡的六個(gè)微管中，形成抗人球蛋白檢測卡。
(6)封口
使用鋁箔對微柱凝膠卡的管口進(jìn)行熱力塑封，得到血型檢測卡。。
實(shí)施例4
利用實(shí)施例3制備得到的抗人球蛋白檢測卡進(jìn)行抗人球蛋白檢測，方法如下：
本品系在聚丙烯塑料透明卡片上的六支微柱型管中填充葡聚糖凝膠和抗人球蛋白(多抗)，制成抗人球蛋白檢測卡，凝膠微管分為反應(yīng)腔和凝膠分離柱兩部分。
檢驗(yàn)方法如下：
直接抗人球蛋白試驗(yàn)(dat)
將微柱凝膠試劑卡的微管做好標(biāo)記，如圖1所示。
將各待檢者紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌后配成0.5％～0.8％紅細(xì)胞生理鹽水懸液。
陰性對照紅細(xì)胞：將健康男性o型紅細(xì)胞配成0.5％～0.8％紅細(xì)胞生理鹽水懸液。
將各待檢者0.5％～0.8％紅細(xì)胞生理鹽水懸液50μl加入1號至5號管中，陰性對照紅細(xì)胞50μl加入6號管中。
即刻使用專用離心機(jī)離心5分鐘(900rpm2分鐘，2500rpm3分鐘)，取出，肉眼判斷結(jié)果。
間接抗人球蛋白試驗(yàn)(iat)
將微柱凝膠試劑卡的微管做好標(biāo)記，如圖1所示。
將0.5％～0.8％標(biāo)準(zhǔn)o型紅細(xì)胞(取自健康成年男性)低離子溶液懸液(只適用于交叉配血和不規(guī)則抗體篩檢)分別加入1-6號管中，每管50μl。
陰性對照血清：取自健康男性ab型血清。
將各待檢血清50μl加入1號管至5號管中，陰性對照血清50μl加入6號管中。
加樣后的試劑卡，置37℃孵育器中15分鐘。
即刻使用專用離心機(jī)離心5分鐘(900rpm2分鐘，2500rpm3分鐘)，取出，肉眼判斷結(jié)果。
檢測結(jié)果：
6號管應(yīng)呈陰性結(jié)果，若呈陽性結(jié)果，重新離心一遍，如仍為陽性結(jié)果，應(yīng)重復(fù)該試驗(yàn)或考慮凝膠分離柱可能存在質(zhì)量問題。
6號管陰性結(jié)果成立時(shí)：
直接抗人球蛋白試驗(yàn)
1號管至5號管中呈陰性結(jié)果的，表面紅細(xì)胞標(biāo)本在體內(nèi)未被igg致敏。
1號管至5號管中呈陽性結(jié)果的，表面紅細(xì)胞標(biāo)本在體內(nèi)已被igg致敏。
間接抗人球蛋白試驗(yàn)
1號管至5號管中呈陰性結(jié)果，表明被檢血清中不含有該標(biāo)準(zhǔn)o型紅細(xì)胞(或其它待檢紅細(xì)胞標(biāo)本)抗原特異性的igg類不完全抗體。
1號管至5號管中呈陽性結(jié)果，表明被檢血清中含有該標(biāo)準(zhǔn)o型紅細(xì)胞(或其它待檢紅細(xì)胞標(biāo)本)抗原特異性的igg類不完全抗體。
不規(guī)則抗體篩檢
將試劑卡做好標(biāo)記，如圖1所示。分離被檢者血清，將篩檢紅細(xì)胞或譜紅細(xì)胞配成0.5％～0.8％濃度，分別加入標(biāo)記好的微管中，各1滴(或50μl)。分別立即加入被檢者血清1滴(或50μl)。
加樣后的試劑卡，置37℃中孵育15分鐘。使用專用離心機(jī)離心5分鐘(900rpm2分鐘，2500rpm3分鐘)，取出肉眼觀察結(jié)果。
結(jié)果判斷
根據(jù)所提供的篩檢紅細(xì)胞或譜紅細(xì)胞的反應(yīng)格局來判斷結(jié)果。
交叉配血
將受血者與獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞血清分離。
分別將受血者與獻(xiàn)血者紅細(xì)胞配成0.5％～0.8％生理鹽水懸液。
將受血者血清1滴(或50微升)與獻(xiàn)血者紅細(xì)胞1滴(或50微升)加入主側(cè)管中。
將受血者紅細(xì)胞1滴(或50微升)與獻(xiàn)血者血清1滴(或50微升)加入次側(cè)管中。
加樣后的試劑卡，置37℃中孵育15分鐘。
使用專用離心機(jī)離心5分鐘(900rpm2分鐘，2500rpm3分鐘)，取出肉眼觀察結(jié)果。
檢驗(yàn)結(jié)果：
凝集表現(xiàn)為紅細(xì)胞停留于凝膠分離介質(zhì)上表面或分布在分離介質(zhì)中；未凝集則表現(xiàn)為紅細(xì)胞通過分離介質(zhì)留在微柱的底部。
紅細(xì)胞凝集是陽性結(jié)果，無論是否發(fā)生凝集，溶血的存在視為陽性結(jié)果：交叉配血試驗(yàn)的陽性結(jié)果表明交叉配血的供血者和受血者的血樣不相容，抗體篩查試驗(yàn)的陽性結(jié)果表明待檢者血漿中含有不規(guī)則抗體。
無溶血及紅細(xì)胞未凝集是陰性結(jié)果：交叉配血試驗(yàn)中的陰性結(jié)果表明交叉配血的供血者和受血者的血樣相容，抗體篩查試驗(yàn)中的陰性結(jié)果表明待檢者血漿不含有相應(yīng)不規(guī)則抗體。
hdn母體igg抗體效價(jià)
取待檢血清，將同體積的血清和dtt(或2-me)混勻，37℃孵育30～60分鐘。
將卡標(biāo)記好，在試管中倍比稀釋經(jīng)dtt(或2-me)處理的母體血清。
依次將倍比稀釋血清50μl加入標(biāo)記孔中。
在所有孔中加入50μl健康人o型0.5％～0.8％紅細(xì)胞懸液(測定孕婦abo血型系統(tǒng)以外igg血型抗體)或在所有孔中加入50μl健康人a型或b型0.5％～0.8％紅細(xì)胞懸液(測定孕婦abo血型系統(tǒng)igg血型抗體)。
37℃孵育15分鐘。
用專用離心機(jī)離心5分鐘，900rpm2分鐘，2500rpm3分鐘。
取出，肉眼判斷結(jié)果。
新生兒溶血病胎(嬰)兒不完全抗體
卡1～3孔用于檢測新生兒血清或血漿中游離抗a、抗b及abo系統(tǒng)外的igg型抗體；第4～6孔用于檢測新生兒紅細(xì)胞放散液中的抗a、抗b及abo系統(tǒng)外的igg型抗體。
操作步驟：
熱放散：取待檢紅細(xì)胞，用等滲鹽水洗滌3～4次，取壓積紅細(xì)胞和同體積的6％牛血清白蛋白混勻，置56℃水浴10分鐘，期間不斷搖動(dòng)，2000rpm，離心2～3分鐘，取上清，即放散液。
將試劑卡進(jìn)行標(biāo)記。
將a1型紅細(xì)胞懸液50μl分別加入1、4孔；將b型紅細(xì)胞懸液50μl分別加入2、5孔；將o型紅細(xì)胞懸液50μl分別加入3、6孔中。
1～3孔分別加入50μl新生兒血清，4～6孔分別加入50μl放散液。
37℃孵育15分鐘。
用專用離心機(jī)離心5分鐘，900rpm2分鐘，2500rpm3分鐘。
取出，根據(jù)新生兒血型判讀結(jié)果。
申請人聲明，本發(fā)明通過上述實(shí)施例來說明本發(fā)明的凝膠懸浮緩沖液、由其處理得到的凝膠、檢測卡及其應(yīng)用，但本發(fā)明并不局限于上述實(shí)施例，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述實(shí)施例才能實(shí)施。所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對本發(fā)明的任何改進(jìn)，對本發(fā)明所選用原料的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍和公開范圍之內(nèi)。