本發(fā)明涉及中醫(yī)中藥
技術領域：
,特別涉及一種中藥刺激咽喉程度的評價方法。
背景技術：
：目前，評價中藥刺激性的實驗有家兔眼結膜刺激性實驗、家鴿嘔吐實驗等，其評價方法簡單，指標單一，缺乏客觀的技術參數(shù)，不能全面、準確地評價中藥對咽喉的刺激性。現(xiàn)有的對聲音的采集和測評專利也只局限于單純的采集分析設備，主要應用于工業(yè)生產、通信等領域，應用范圍較窄。遠志為遠志科植物遠志PolygalatenuifoliaWilld.或卵葉遠志PolygalasibiricaL.的干燥根，具有安神益智、交通心腎、祛痰，消腫等功效，常用于心腎不交引起的失眠多夢、健忘驚悸、神志恍惚、咳痰不爽、瘡瘍腫毒、乳房脹痛。該藥始載于《神農本草經》，列為上品，被視為延年益智之良藥。但遠志生用有毒，“戟人咽喉”。清代賈九如在《藥品化義》中記載遠志“辛重暴悍，戟喉刺舌，與南星、半夏相類”?！夺t(yī)學衷中參西錄》稱“若末服至二錢可作嘔吐”?，F(xiàn)代臨床研究發(fā)現(xiàn)，遠志常規(guī)用量偶可引起輕度惡心，若大劑量服用可引起惡心、嘔吐、腹瀉、溶血等不良反應，還可引起面神經麻痹、舌麻木、張口困難等癥狀（劉大偉，康利平，馬百平.遠志化學及藥理作用研究進展.國際藥學研究雜志，2012，39(1):32-36.）。因此，中醫(yī)臨床上均使用其炮制品。歷代對遠志的炮制方法主要有切段、甘草制、蜜制、朱砂制等，現(xiàn)代主要采用甘草制，《中國藥典》2015年版收載了遠志和制遠志（甘草汁煮遠志）兩種飲片規(guī)格。甘草汁煮遠志可減緩其“戟人咽喉”毒性，增強安神益智作用（單建學.遠志的炮制及臨床應用.湖南中醫(yī)藥導報，2001，7(2):89.）?，F(xiàn)代研究表明，生遠志對大鼠胃腸功能呈明顯的抑制毒性，而甘草制遠志對大鼠胃腸運動和消化功能的抑制作用明顯減弱（王建，郭娟，武云.遠志不同炮制品對胃腸運動及消化功能的影響.中藥藥理與臨床，2006，22(3):120-124.）。甘草制遠志可提高小鼠學習記憶能力，其作用顯著強于生遠志（王光志，陳林，萬德光，等.不同炮制方法對遠志藥效學的比較研究.成都醫(yī)學院學報，2011，6(4):280-282.）。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明針對上述中藥咽喉刺激性評價技術的缺陷，提供了一種中藥刺激咽喉程度的評價方法，通過運用錄音設備對豚鼠灌藥前后進行聲音采集，采取客觀分析，對豚鼠聲音進行綜合測評，進而反映中藥的咽喉刺激性。該方法操作簡單，成本低，能夠全面、客觀地評價中藥刺激咽喉的程度。本發(fā)明是通過以下步驟得到的：（1）灌藥前，利用自帶錄音設備的蘋果手機對待灌藥動物進行聲音采集，并自動保存為MPEG格式；（2）灌藥后，對灌藥動物再次進行聲音采集，并自動保存為MPEG格式；（3）借助電腦，對步驟（1）、（2）采集的聲音使用音頻軟件轉化為聲波，截取聲音信號中噪音少、聲音較平穩(wěn)的目標波段；（4）對所選豚鼠聲音的目標波段執(zhí)行音頻軟件中的“掃描”操作，得到豚鼠聲音振幅常規(guī)數(shù)據(jù)，包括最大、最小和平均均方根（RMS）振幅；取各組RMS振幅數(shù)據(jù)絕對值，導入SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行處理，通過分析聲波的振幅絕對值和連續(xù)性差異，判斷中藥對咽喉的刺激程度。所述的評價方法，優(yōu)選所述灌藥動物為豚鼠。所述的評價方法，優(yōu)選聲音采集操作為用大拇指和食指捏住豚鼠的脖子，音頻輸入口對準豚鼠口部1cm處進行叫聲錄音，并自動保存為MPEG格式。所述的評價方法，優(yōu)選音頻軟件為AdobeAuditionCS6或CoolEditPro2.0。所述的評價方法，優(yōu)選步驟（3）中采集的聲音使用音頻軟件轉化為聲波后，截取聲音信號中噪音少、聲音較平穩(wěn)的目標波段。所述的評價方法，優(yōu)選所灌藥物為對咽喉粘膜有刺激性作用的中藥提取物。所述的評價方法，優(yōu)選所灌藥物為中藥遠志提取物。所述的評價方法，優(yōu)選步驟（1）、（2）采集的聲音轉化為聲波后，聲波振幅絕對值越大，聲波分布均勻性越差、能量密集性越差，所灌藥物對豚鼠咽喉刺激性越大。使用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行分析，得到最大振幅、最小振幅和平均振幅數(shù)據(jù)統(tǒng)計。遠志提取物對咽喉刺激作用強弱順序為：70%乙醇部位＞70%乙醇部位炮制品＞40%乙醇部位＞40%乙醇部位炮制品＞25%乙醇部位＞25%乙醇部位炮制品。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明巧妙地將聲音采集分析技術與中藥對咽喉的刺激性作用聯(lián)系在一起，通過對采集的聲音片段進行掃描和振幅常規(guī)數(shù)據(jù)的提取，使具有客觀的參數(shù)比較，使對中藥刺激咽喉程度的評價更加客觀、全面和準確，提高測評中藥咽喉刺激性的準確度。附圖說明圖1生理鹽水組給藥組豚鼠聲音波形圖，圖2為25%乙醇部位組給藥組豚鼠聲音波形圖，圖3為25%乙醇部位炮制品組給藥組豚鼠聲音波形圖，圖4為40%乙醇部位組給藥組豚鼠聲音波形圖，圖5為40%乙醇部位炮制品組給藥組豚鼠聲音波形圖，圖6為70%乙醇部位組給藥組豚鼠聲音波形圖，圖7為70%乙醇部位炮制品組給藥組豚鼠聲音波形圖。具體實施方式下面結合具體實施例對本發(fā)明進行進一步說明：實施例11實驗材料1.1藥品與試劑甘草汁的制備：取凈甘草15g，加水150mL煎煮30min，濾過，殘渣繼續(xù)加水120mL煎煮30min，濾過，合并濃縮液至150mL。即1g甘草相當于甘草汁濃縮液10mL。遠志大孔樹脂不同洗脫部位的制備：稱取遠志藥材500g，用70%乙醇回流提取2次，每次70%醇用量為藥材重量的8倍，提取時間第一次2h，第二次1h。合并兩次提取液，過濾，60℃減壓濃縮、回收溶劑，得到黑褐色浸膏。取該浸膏，加適量蒸餾水混懸，用正丁醇萃?。ㄋ幰海赫〈?1:1），減壓回收溶劑，得正丁醇萃取物。取正丁醇萃取物，用水溶解，上D101大孔吸附樹脂，依次用水、25%乙醇、40%乙醇、70%乙醇洗脫，減壓濃縮干燥，得遠志25%乙醇部位粉末10g、40%乙醇部位粉末25g、70%乙醇部位粉末35g。分別稱取上述藥品粉末4、10、14g，精密稱定，加水溶解并定容至200mL，即得濃度分別為20、50、70mg/mL的藥液，即25%乙醇部位溶液、40%乙醇部位溶液、70%乙醇部位溶液。遠志大孔樹脂不同洗脫部位模擬炮制品的制備：稱取遠志25%、40%、70%乙醇部位粉末4、10、14g，分別置燒杯中，精密稱定，加甘草汁50ml，蒸餾水150mL，超聲溶解，水浴100℃加熱模擬炮制，每隔1h加水200mL，煮制15h，濃縮至200mL，即得濃度分別為20、50、70mg/mL的藥液，即25%乙醇部位炮制品溶液、40%乙醇部位炮制品溶液、70%乙醇部位炮制品溶液。豚鼠胃蛋白酶測試試劑盒（96T，批號：201605，上海將來實業(yè)有限公司）；色譜純乙腈、甲醇購自德國默克公司，色譜純甲酸購自美國Tedia公司；水為Milli-QUltra-purewater(Millipore,Billerica,MA,USA)；其余試劑為分析純。1.2動物健康、聲音正常的豚鼠，體重300±20g，雄性，購自濟南金豐實驗動物有限公司，合格證書為SYXK(魯)20160019。實驗前豚鼠在實驗室適應性喂養(yǎng)3天，室溫20±2℃，相對濕度40%～60%。2方法與結果2.1豚鼠灌藥取健康、聲音正常的雄性豚鼠56只，隨機分為7組，每組8只，給藥組分別按1mL/100g的劑量灌胃給予遠志25%乙醇部位溶液、40%乙醇部位溶液、70%乙醇部位溶液、25%乙醇部位炮制品溶液、40%乙醇部位炮制品溶液、70%乙醇部位炮制品溶液（每組灌胃劑量相當于生藥量10g/kg），對照組給予同體積的生理鹽水，每日1次，連續(xù)灌胃7天。2.2豚鼠聲音的采集用自帶錄音設備的蘋果手機收集豚鼠灌藥期間的聲音變化，存為MPEG格式。具體采集方式為：在豚鼠灌胃給藥前30min，用大拇指和食指捏住豚鼠的脖子，手機音頻輸入口對準豚鼠口部1cm處，采集15s內豚鼠的聲音信息。每日豚鼠灌胃給藥30min后，重復上述錄音操作，連續(xù)測定7天。2.3豚鼠聲音的分析2.3.1客觀分析將錄制的聲音信息導入AdobeAuditionCS6音頻處理軟件中轉化為聲波。由于在豚鼠聲音錄制過程中，會受到周圍環(huán)境、個人操作及個體聲音調整等因素的影響，錄音信號不一定保持平穩(wěn)，故實際截取聲音信號中噪音少、聲音較平穩(wěn)的3s時間內的目標波段進行分析，豚鼠灌胃給藥7天后的聲波圖見圖1。對所選豚鼠聲音的目標波段片段執(zhí)行音頻軟件中的“掃描”操作，得到豚鼠聲音振幅常規(guī)數(shù)據(jù)，包括最大、最小和平均均方根（RMS）振幅（RMS值基于特定振幅的普遍性，通常反映比絕對或平均振幅更好的感知響度）；取各組RMS振幅數(shù)據(jù)絕對值，導入SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行處理分析，最終結果以（±S）表示，聲音的響度與振幅絕對值呈反比，振幅絕對值越小，聲音響度越大，豚鼠灌胃給藥7天后的各組數(shù)據(jù)見表1。觀察圖1，發(fā)現(xiàn)在相同的3s時間內，生理鹽水組豚鼠的聲波含有3個波段，分布比較均勻、密集，連續(xù)性很好；25%乙醇部位組含有5個波段，而25%乙醇部位炮制組減少為4個波段，且較其炮制前聲波分布更加均勻和連續(xù)；40%乙醇部位組聲波分布較稀疏，連續(xù)性較差，有失真現(xiàn)象，經炮制后失真現(xiàn)象消失；70%乙醇部位給藥組分布極稀疏、短促，連續(xù)性差，有失真現(xiàn)象，其炮制后失真現(xiàn)象減弱。分析表1中數(shù)據(jù)，與生理鹽水組比較，各給藥組平均RMS振幅數(shù)據(jù)絕對值均呈升高趨勢，聲音響度降低；與25%乙醇部位組比較，25%乙醇部位炮制組平均RMS振幅絕對值降低，能量較多而集中，顯示有差異性；與40%乙醇部位組比較，40%乙醇部位炮制組最大和平均RMS振幅絕對值均顯著降低，能量較集中，聲音響度增加；與70%乙醇部位組比較，70%乙醇部位組炮制組最大和平均RMS振幅絕對值也顯著降低，但能量仍較分散，聲音響度較低。以上說明，遠志25%、40%、70%乙醇部位給藥組對豚鼠咽喉具有刺激性，且經炮制后刺激性均有減弱趨勢。各給藥組刺激作用大小順序為：25%乙醇部位炮制品＜25%乙醇部位＜40%乙醇部位炮制品＜40%乙醇部位＜70%乙醇部位炮制品＜70%乙醇部位。表1豚鼠聲音客觀評價統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)（±S）注：與生理鹽水組比較，*p＜0.05；與25%乙醇部位比較，※p＜0.05；與40%乙醇部位比較，#p＜0.05；與70%乙醇部位比較，△p＜0.05。2.3.2主觀分析由試聽人員憑主觀聽覺感受，對比生理鹽水組豚鼠聲音，按照5分制對各給藥組存活的豚鼠聲音截取的目標波段進行打分，評分標準見表2，豚鼠給藥7天后的各組評分結果見表3。結果顯示，與生理鹽水組比較，豚鼠的聲音均具有顯著性差異，各灌藥組豚鼠聲音均有不同程度的嘶啞；40%乙醇部位組、70%乙醇部位組及其各自的炮制品部位組均出現(xiàn)了豚鼠死亡現(xiàn)象，其中，以70%乙醇部位組動物死亡最多；經模擬炮制后豚鼠死亡數(shù)量減少，聲音有所恢復。說明生遠志確有毒性和咽喉刺激性，以70%乙醇部位毒性最大，經炮制后可降低其毒性，減少其對豚鼠咽喉的刺激性。表2豚鼠聲音主觀評分標準等級分值評價標準一級5分（優(yōu)）響亮、連續(xù)二級4分（良）低吟、短促三級3分（中）低吟、撕扯感四級2分（差）嘶啞、失真五級1分（劣）失聲表3豚鼠聲音主觀評價統(tǒng)分表組別總數(shù)（只）死亡數(shù)（只）嘶啞數(shù)（只）存活豚鼠聲音得分（分）生理鹽水8004.96±0.0725%乙醇部位8013.98±0.68*25%乙醇部位炮制品8004.38±0.43*40%乙醇部位8242.52±0.66*40%乙醇部位炮制品8123.11±0.50*#70%乙醇部位8440.98±0.17*70%乙醇部位炮制品8332.12±0.62*△注：與生理鹽水組比較，*p＜0.05；與40%乙醇部位比較，#p＜0.05；與70%乙醇部位比較，△p＜0.05。上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受實施例的限制，其它任何未背離本發(fā)明的精神實質與原理下所做的改變、修飾、組合、替代、簡化均應為等效替換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內。當前第1頁1 2 3