本實(shí)用新型涉及大型溞快速檢測(cè)水質(zhì)毒性技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種利用大型蚤檢測(cè)急性毒性的試劑盒。

背景技術(shù)：

大型溞屬于節(jié)肢動(dòng)物門、甲殼綱、枝角類，是常見的浮游甲殼動(dòng)物，是淡水食物鏈中不可缺少的組成成分。因其生活周期短、生長(zhǎng)快、生殖量高、易培養(yǎng)、對(duì)水環(huán)境脅迫敏感等特點(diǎn)使其成為國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室廣泛使用的模式生物，在農(nóng)藥、化學(xué)品的急慢性毒性和環(huán)境激素效應(yīng)的測(cè)試方面具有重要的作用，且其在水域生態(tài)系統(tǒng)中具有重要的地位，因此受到眾多國(guó)家毒理學(xué)工作者的重視。大型溞是敏感性較強(qiáng)，非常有代表性的一種浮游動(dòng)物，現(xiàn)已成為一種標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)生物，被廣泛用于水生生物毒理學(xué)的研究中。目前，ISO標(biāo)準(zhǔn)、OECD指南、美國(guó)EPA標(biāo)準(zhǔn)以及我國(guó)國(guó)標(biāo)中都有涉及大型溞的生長(zhǎng)抑制和繁殖的標(biāo)準(zhǔn)。

大型蚤急性毒性試驗(yàn)以蚤體的死亡和運(yùn)動(dòng)抑制表征急性毒性，大型蚤的急性毒性測(cè)定即用大型蚤為試驗(yàn)生物，測(cè)定物質(zhì)或廢水的24或48小時(shí)的半數(shù)抑制濃度(24h-EC₅₀或48h-EC₅₀)，或半數(shù)致死濃度(24h-LC₅₀或48h-LC₅₀)，以反映物質(zhì)或廢水的毒性程度。

在水質(zhì)物質(zhì)對(duì)溞類(大型溞)的急性毒性測(cè)定方法中的測(cè)定原理主要是：24h-EC₅₀、48h-EC₅₀指在24h或48h內(nèi)百分之五十的受試蚤運(yùn)動(dòng)受抑制時(shí)被測(cè)物濃度。(運(yùn)動(dòng)受抑制是指反復(fù)轉(zhuǎn)動(dòng)試驗(yàn)容器，15s之內(nèi)失去活動(dòng)能力的大型蚤，被認(rèn)為運(yùn)動(dòng)受抑制；即使其觸角仍能活動(dòng)，也應(yīng)算做不活動(dòng)的個(gè)體。)24h-LC₅₀、48h-LC₅₀指在24h或48h內(nèi)百分之五十的受試蚤死亡時(shí)被測(cè)物的濃度，以受試蚤心臟停止跳動(dòng)為其死亡標(biāo)志。以試驗(yàn)樣品濃度(或其對(duì)數(shù))和相應(yīng)濃度下大型蚤的死亡率(或運(yùn)動(dòng)受抑制率)為基礎(chǔ)建立正相關(guān)關(guān)系，并據(jù)此估算得到該物質(zhì)對(duì)大型蚤的LC₅₀、EC₅₀值，因此如果能結(jié)合此原理快速測(cè)定液體毒性，從物理的角度直觀的表征方便判斷，那么就是對(duì)此方法應(yīng)用的更大進(jìn)步。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本實(shí)用新型的目的是提供一種利用大型蚤檢測(cè)急性毒性的試劑盒，設(shè)計(jì)合理、結(jié)果直觀、使用方便，檢測(cè)效率高。

本實(shí)用新型的技術(shù)方案為：一種利用大型蚤檢測(cè)急性毒性的的試劑盒，試劑盒主要包括：包裝殼、觀察通道、加液通道、補(bǔ)光系統(tǒng)、培養(yǎng)容器；所述的觀察通道為白色的透光片，所述的加液通道為漏斗形的加液管連接的管路，所述的補(bǔ)光系統(tǒng)是由發(fā)光裝置、導(dǎo)線、開關(guān)、電池組成，所述的培養(yǎng)容器分為兩組，對(duì)照組和試驗(yàn)組，每組包含稀釋水母液容器、餌料容器和大型溞卵容器；所述的觀察通道安裝在培養(yǎng)容器上方，所述的補(bǔ)光系統(tǒng)安裝在培養(yǎng)容器的下方，所述的加液通道分別連接對(duì)照組和試驗(yàn)組的培養(yǎng)容器。

進(jìn)一步的，所述的試劑盒的制備方法主要包括以下步驟：a.挑選大型溞幼蟲進(jìn)行培養(yǎng)，然后選擇母溞制備溞卵，保存溞卵，備用；b.制備稀釋水母液、餌料；c.制備試劑盒盒體，并將觀察通道、加液通道、補(bǔ)光系統(tǒng)、培養(yǎng)容器進(jìn)行生產(chǎn)組裝，即得到所述的利用大型蚤檢測(cè)急性毒性的的試劑盒。

進(jìn)一步的，所述的餌料容器是將小球藻經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)后進(jìn)行脫水，離心，將收集到的小球藻冷凍干燥后按照常規(guī)工藝制備凍干粉，得到的餌料放入餌料容器中保存。所述的稀釋水母液容器使用的是白色PE塑料瓶，所述的餌料容器使用的是黑色PE塑料瓶，所述的大型溞卵容器使用的是藍(lán)色PE塑料瓶。

進(jìn)一步的，所述的發(fā)光裝置是指LED燈管，所述的LED燈管為與觀察通道的白色的透光片相同的輪廓形狀，所述的開關(guān)通過導(dǎo)線連接，螺絲固定在包裝殼外側(cè)正前方，所述的電池為兩節(jié)5號(hào)電池。

進(jìn)一步的，所述的加液通道的漏斗形狀管與進(jìn)液管之間裝有流量控制開關(guān)。

進(jìn)一步的，所述的試劑盒部件均選用無毒材料制成，每個(gè)組成部分都有明確的中英文標(biāo)記。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型的試劑盒的有益效果體現(xiàn)在：由于該試劑盒是將優(yōu)選的大型溞卵直接孵化測(cè)定的，過程直接簡(jiǎn)單，有效的排除因?yàn)橥饨绛h(huán)境對(duì)溞卵生長(zhǎng)特性的影響，通過物理補(bǔ)光系統(tǒng)，可以優(yōu)先判斷待測(cè)液的毒性，提高定性檢測(cè)效率，然后更進(jìn)一步的進(jìn)行定量檢測(cè)計(jì)算，節(jié)省檢測(cè)時(shí)間，應(yīng)用范圍廣，待測(cè)物質(zhì)不僅僅局限于水質(zhì)等其他液體，固體或不同狀態(tài)的物質(zhì)也可以使用。

附圖說明

圖1是本實(shí)用新型所述的一種利用大型蚤檢測(cè)急性毒性的試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2是本實(shí)用新型所述的一種利用大型蚤檢測(cè)急性毒性的試劑盒的補(bǔ)光系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖；

其中，1-包裝殼，2-觀察通道，3-加液通道，4-補(bǔ)光系統(tǒng)，5-試驗(yàn)組，6-對(duì)照組，7-發(fā)光裝置，8-開關(guān)，9-電池，10-導(dǎo)線。

具體實(shí)施方式

為使本實(shí)用新型實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合本實(shí)用新型的附圖，對(duì)本實(shí)用新型實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例是本實(shí)用新型一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒緦?shí)用新型中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本實(shí)用新型保護(hù)的范圍。

為便于對(duì)本實(shí)用新型實(shí)施例的理解，下面將結(jié)合附圖及具體實(shí)施例為例做進(jìn)一步的解釋說明，實(shí)施例并不構(gòu)成對(duì)本實(shí)用新型實(shí)施例的限定。

實(shí)施例1：如圖1所示，一種利用大型蚤檢測(cè)急性毒性的的試劑盒，試劑盒主要包括：包裝殼1、觀察通道2、加液通道3、補(bǔ)光系統(tǒng)4、培養(yǎng)容器；觀察通道2為白色的透光片，加液通道3為漏斗形的加液管連接的管路，如圖2所示，補(bǔ)光系統(tǒng)4是由發(fā)光裝置7、導(dǎo)線10、開關(guān)8、電池9組成，培養(yǎng)容器分為兩組，對(duì)照組6和試驗(yàn)組5，每組包含稀釋水母液容器、餌料容器和大型溞卵容器；觀察通道2安裝在培養(yǎng)容器上方，補(bǔ)光系統(tǒng)4安裝在培養(yǎng)容器的下方，加液通道3分別連接對(duì)照組6和試驗(yàn)組5的培養(yǎng)容器。

試劑盒的制備方法主要包括以下步驟：

a.挑選大型溞幼蟲進(jìn)行培養(yǎng)，然后選擇母溞制備溞卵，保存溞卵，備用；

b.制備稀釋水母液、餌料容器：餌料容器是將小球藻經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)后進(jìn)行脫水，離心，將收集到的小球藻冷凍干燥后按照常規(guī)工藝制備凍干粉，得到的餌料放入餌料容器中保存；

c.制備試劑盒盒體，并將觀察通道2、加液通道3、補(bǔ)光系統(tǒng)4、培養(yǎng)容器進(jìn)行生產(chǎn)組裝，即得到利用大型蚤檢測(cè)急性毒性的的試劑盒。

稀釋水母液容器使用的是白色PE塑料瓶；餌料容器使用的是黑色PE塑料瓶，大型溞卵容器使用的是藍(lán)色PE塑料瓶。

發(fā)光裝置7是指LED燈管，LED燈管為與觀察通道2的白色的透光片相同的輪廓形狀，開關(guān)8通過導(dǎo)線連接，螺絲固定在包裝殼1外側(cè)正前方，電池9為兩節(jié)5號(hào)電池。

加液通道3的漏斗形狀管與進(jìn)液管之間裝有流量控制開關(guān)。試劑盒部件均選用無毒材料制成，每個(gè)組成部分都有明確的中英文標(biāo)記。

實(shí)施例1制備的試劑盒的使用方法為：

(1)取以上四種稀釋水母液25mL混合，稀釋至1L，必要時(shí)可用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值，使其穩(wěn)定在7.8，標(biāo)準(zhǔn)稀釋水應(yīng)容許大型蚤在其中生存至少48h，檢查稀釋水中不含有任何已知的對(duì)大型蚤有毒的物質(zhì)，例如：氯、重金屬、農(nóng)藥、氨或多氯聯(lián)苯等。

(2)將大型溞容器中的溞卵使用純凈水進(jìn)行沖洗，將保存液沖洗干凈；將沖洗干凈的大型蚤卵轉(zhuǎn)至孵化皿中，加入已配好的標(biāo)準(zhǔn)稀釋水15ml，將試劑盒整體放入光照培養(yǎng)箱中，在22℃，6000LUX，72h的環(huán)境下進(jìn)行孵化；

(3)根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果確定正式試驗(yàn)的濃度范圍，按幾何級(jí)數(shù)的濃度系列，即等比級(jí)數(shù)間距設(shè)計(jì)6個(gè)濃度；等比級(jí)系數(shù)不超過2.2，如1、2、4、8、16等比級(jí)系數(shù)為2，最高濃度處理組抑制或死亡率為100％，最低濃度處理組抑制或死亡率為0，系列濃度中以能出現(xiàn)一個(gè)大型蚤運(yùn)動(dòng)抑制率在50％的濃度最為理想；

(4)給培養(yǎng)容器中滴加待測(cè)液，平均每蚤的待測(cè)液不低于2mL，每個(gè)濃度至少有5個(gè)平行，對(duì)照組內(nèi)裝相等體積的稀釋水，試驗(yàn)開始后，打開補(bǔ)光系統(tǒng)開關(guān)8，應(yīng)于36h內(nèi)每隔12h定期通過觀察通道觀察每個(gè)孔中仍能活動(dòng)的水蚤數(shù)，測(cè)定100％大型蚤不活動(dòng)或死亡的濃度范圍，并記錄它們?nèi)魏尾徽５男袨?，通過對(duì)照試驗(yàn)首先來判斷待測(cè)液是否具有毒性，然后計(jì)算每個(gè)濃度中不活動(dòng)的試驗(yàn)蚤，包括死亡蚤，占試驗(yàn)總數(shù)的百分比，用概率單位目測(cè)法，計(jì)算EC₅₀，也可用計(jì)算機(jī)EC₅₀程序即寇氏修正法處理，獲得EC₅₀。

最后應(yīng)說明的是：以上實(shí)施例僅用以說明本實(shí)用新型的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對(duì)前述實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本實(shí)用新型實(shí)施例技術(shù)方案的精神和范圍。