本發(fā)明屬于藥品檢測(cè)的技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種基于近紅外光譜技術(shù)的小規(guī)格口服固體制劑中活性藥物成分快速測(cè)定方法。

背景技術(shù)：

近紅外光是指波長(zhǎng)介于可見光與中紅外光之間的電磁波，波長(zhǎng)范圍為780～2500nm(12820～4000cm^-1)。近紅外光譜分析指利用近紅外光譜區(qū)包含的物質(zhì)信息，其主要譜峰反映分子中C-H(甲基、亞甲基、甲氧基、羧基、芳香基團(tuán))、N-H(伯胺、仲胺、叔胺和季胺鹽)、O-H、S-H等含氫基團(tuán)的倍頻和合頻吸收，用于有機(jī)物定性和定量分析的一種技術(shù)。

近紅外光譜早在1800年就被Herchel發(fā)現(xiàn)，但在20世紀(jì)70年代以前發(fā)展一直很緩慢，隨著上世紀(jì)80年代的光譜學(xué)技術(shù)的成熟、計(jì)算機(jī)和化學(xué)定量學(xué)的發(fā)展，近紅光譜外分析技術(shù)已廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、石油、化工、煙草、食品、制藥、生物燃料等領(lǐng)域。近紅外光譜技術(shù)具有分析速度快、分析效率高、適用樣品范圍廣、樣品處理操作簡(jiǎn)單，采用化學(xué)計(jì)量學(xué)的多元校正算法，分析結(jié)果的準(zhǔn)確度與傳統(tǒng)高效液相色譜法或紫外分光光度計(jì)法接近，方法具有較高的精密度和重現(xiàn)性。近年來，近紅外光譜分析技術(shù)在藥品生產(chǎn)領(lǐng)域應(yīng)用也日趨廣泛，但分析對(duì)象多為原料藥或輔料的定性鑒別或常量組分的定量測(cè)定。由于輔料成分復(fù)雜，對(duì)活性藥物成分有一定干擾，采用常規(guī)裝置對(duì)小規(guī)格口服固體制劑中活性藥物成分進(jìn)行定量分析，預(yù)測(cè)值與真實(shí)值有較大差異。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種基于近紅外光譜技術(shù)的小規(guī)格口服固體制劑中活性藥物成分快速測(cè)定方法，能夠用于小規(guī)格口服固體制劑中活性藥物成分的快速、準(zhǔn)確測(cè)定。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是：提供一種專門樣品裝置，以提高近紅外光譜信號(hào)響應(yīng)，并采用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

本發(fā)明的有益效果是采用近紅外光譜技術(shù)對(duì)小規(guī)格口服固體制劑中活性藥物成分進(jìn)行快速、準(zhǔn)確定量分析。

本發(fā)明的方法步驟流程包括模型建立、模型優(yōu)化與評(píng)估、模型驗(yàn)證、模型應(yīng)用、模型維護(hù)。

本發(fā)明的模型建立包括制備建立模型所需的一系列濃度梯度的樣品、對(duì)樣品進(jìn)行近紅外光譜數(shù)據(jù)采集、確定合適的特征波譜。

本發(fā)明所述的模型優(yōu)化與評(píng)估包括對(duì)近紅外原始光譜進(jìn)行一階導(dǎo)數(shù)、二階導(dǎo)數(shù)處理，并結(jié)合外部驗(yàn)證結(jié)果選擇合適的模型。

本發(fā)明的所述的模型驗(yàn)證包括對(duì)方法進(jìn)行專屬性、線性和范圍、精密度、準(zhǔn)確度、耐用性等進(jìn)行考察。

本發(fā)明的所述的模型應(yīng)用包括取樣、樣品處理及樣品分析及結(jié)果應(yīng)用。

本發(fā)明的所述的模型維護(hù)包括根據(jù)處方或工藝的變化情況對(duì)模型進(jìn)行修正。

本發(fā)明的測(cè)定方法，能夠采用一種專用裝置測(cè)定小規(guī)格口服固體制劑中活性藥物成分。

本發(fā)明的測(cè)定方法，能夠選擇對(duì)活性藥物成分占比在1％以下的產(chǎn)品進(jìn)行準(zhǔn)確定量分析。

本發(fā)明的測(cè)定方法，利用OPUS定量軟件中的自動(dòng)優(yōu)化功能，對(duì)建模樣品進(jìn)行優(yōu)化，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，并利用標(biāo)準(zhǔn)加入法準(zhǔn)確測(cè)定小規(guī)格口服固體制劑中活性藥物成分的含量。

本發(fā)明的測(cè)定方法，利用所建立模型對(duì)樣品進(jìn)行驗(yàn)證，得出預(yù)測(cè)值，同時(shí)將樣品進(jìn)行紫外分光光度計(jì)法或高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，對(duì)比兩者數(shù)據(jù)，從而對(duì)模型進(jìn)行優(yōu)化與評(píng)估，預(yù)測(cè)得到更準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。

根據(jù)以上原理，本發(fā)明提供一種基于近紅外光譜技術(shù)的小規(guī)格口服固體制劑中活性藥物成分快速測(cè)定方法，所述方法，步驟如下：

(1)模型建立：

校正集樣品制備：按處方稱輔料，混合均勻；分別加入不同百分比的原料藥，混勻，制粒，用壓片機(jī)壓片制備得到不同濃度的藥物制劑，其中每個(gè)濃度制備多批，每批多片，稱重，根據(jù)片劑重量棄去較低片重，和較高片重，取中間重量的片做為校正集樣品；

近紅外光譜測(cè)定：每批樣品隨機(jī)抽取數(shù)片，使用近紅外光譜儀的漫反射光線探頭壓住藥片，每片正反面各測(cè)定1次，取平均光譜做為校正集樣品光譜；光譜條件：以儀器內(nèi)置背景為參比，掃描范圍為12000～4000cm^-1，分辨率為8cm^-1，掃描次數(shù)為64次；

對(duì)光譜圖進(jìn)行預(yù)處理后，采用軟件進(jìn)行建模；

(2)模型優(yōu)化與評(píng)估

外部驗(yàn)證集：采用高效液相色譜法測(cè)定對(duì)校正集的樣品進(jìn)行原料藥的含量測(cè)定；

根據(jù)含量測(cè)定結(jié)果對(duì)模型進(jìn)行修正，優(yōu)化評(píng)估，選擇合適的特征譜帶，按均方根誤差(RMSEP)由小到大排列，選擇校正集和驗(yàn)證集，選擇均方根誤差最小的模型做為定量模型。

(3)模型驗(yàn)證

對(duì)模型進(jìn)行專屬性、線性和范圍、精密度、準(zhǔn)確度、耐用性等方面的驗(yàn)證，以確定模型是否滿足檢測(cè)要求。

本發(fā)明的模型可以用于對(duì)樣品進(jìn)行結(jié)果預(yù)測(cè)和判定，以評(píng)估生產(chǎn)過程中制劑產(chǎn)品含量均勻度。

優(yōu)選的，本發(fā)明的方法，以4mg伊潘立酮片劑為例，步驟如下：

(4)模型建立：

校正集樣品制備：按處方比例稱配各輔料(包括交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素、乳糖、二氧化硅、硬脂酸鎂)，混合均勻。用十萬分之一天平準(zhǔn)確稱量混合輔料5份，分別加入伊潘立酮原料藥(相當(dāng)于4mg伊潘立酮原料藥的25％、50％、100％、150％、200％)，混勻，制粒，用壓片機(jī)壓片制備得到5個(gè)濃度梯度的伊潘立酮片，每個(gè)濃度梯度制備10批，每批100片，稱重，根據(jù)片劑重量棄去較低偏重25片，較高偏重25片，取中間50片做為校正集樣品。

近紅外光譜測(cè)定：每批樣品隨機(jī)抽取10片，使用近紅外光譜儀的漫反射光線探頭壓住藥片，每片正反面各測(cè)定1次，取平均光譜做為校正集樣品光譜。光譜條件：以儀器內(nèi)置背景為參比，掃描范圍為12000～4000cm^-1，分辨率為8cm^-1，掃描次數(shù)為64次。

(4)模型優(yōu)化與評(píng)估

外部驗(yàn)證集：采用高效液相色譜法測(cè)定對(duì)校正集的樣品進(jìn)行含量測(cè)定，方法如下：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Kromasil C18，4.6×250mm，5μm)，以2％二乙胺溶液(取水1000ml，加冰醋酸14.8ml,二乙胺20ml,搖勻)-乙腈(65:35)，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)275nm，柱溫為30℃。取本品1片，置10ml量瓶中，加流動(dòng)相適量振搖，使伊潘立酮片溶解，超聲5分鐘，靜置室溫，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，測(cè)定含量。

選擇合適的特征譜帶，按均方根誤差(RMSEP)由小到大排列，選擇校正集和驗(yàn)證集，選擇均方根誤差最小的模型做為定量模型。

(5)模型驗(yàn)證

專屬性：對(duì)單一輔料、原料藥進(jìn)行近紅外光譜掃描，用樣品的馬氏距離與限定值比較，結(jié)果表明單一輔料的馬氏距離均大于0.17。

線性：在2.88％～5.59％濃度范圍內(nèi)，以近紅外光譜預(yù)測(cè)值與濃度求得線性方程為y＝0.9813x+0.2021，r＝0.9971。

精密度：取1批自制產(chǎn)品和1批參比制劑各10片，每片正反面各測(cè)定1次，取平均光譜做為待測(cè)品光譜，分別用伊潘立酮片定量分析模型得到伊潘立酮的含量，方法的精密度RSD為2.3％

準(zhǔn)確度：校正集樣品與外部驗(yàn)證集樣品比較，平均相對(duì)偏差為1.62％，最大相對(duì)誤差為4.25％。將校正集樣品預(yù)測(cè)結(jié)果與外部驗(yàn)證集結(jié)果在95％置信區(qū)間內(nèi)進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，結(jié)果無顯著差異。

穩(wěn)定性：取1批自制產(chǎn)品和1批參比制劑各10片，分別在1、2、3天內(nèi)測(cè)定近紅外光譜，用定量分析模型預(yù)測(cè)含量，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果的RSD分別為1.25％、1.08％。

(6)模型應(yīng)用

對(duì)自制產(chǎn)品生產(chǎn)過程中不同階段，每個(gè)階段各10片樣品進(jìn)行近紅外光譜掃描，用定量分析模型進(jìn)行結(jié)果預(yù)測(cè)，采用該含量測(cè)定結(jié)果，計(jì)算含量均勻度，符合中國(guó)藥典2015年版要求。

本發(fā)明的方法可以適用于任何一種小規(guī)格口服固體制劑，優(yōu)選的為片劑，更優(yōu)選的為伊潘立酮片劑，其規(guī)格為1mg、2mg、4mg、6mg、8mg、10mg和12mg/片。最優(yōu)選的是針對(duì)輔料為交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素、乳糖、二氧化硅、硬脂酸鎂的伊潘立酮片劑，本發(fā)明通過對(duì)該片劑的研究，使用針對(duì)該產(chǎn)品的近紅外光譜檢測(cè)專用裝置，開發(fā)一種近紅外光譜測(cè)定法，以達(dá)到快速檢測(cè)伊潘立酮片劑中原料藥的含量和均勻度的目的，使用本發(fā)明的方法，可以在最短時(shí)間內(nèi)得到相應(yīng)的數(shù)據(jù)，以適用于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)的需要。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的一種基于近紅外光譜技術(shù)的小規(guī)格口服固體制劑中活性藥物成份快速測(cè)定方法的工作流程圖。

圖2是本發(fā)明實(shí)施例提供的一種用于小規(guī)格口服固體制劑中活性藥物成分檢測(cè)的樣品裝置結(jié)構(gòu)圖。

具體實(shí)施方式

為更明確說明本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及工作流程，結(jié)合實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)闡述。應(yīng)當(dāng)理解，此處所述的具體實(shí)施案例，僅用于解釋本發(fā)明，但并不限定于本發(fā)明。

如圖1所示，一種基于近紅外光譜技術(shù)的小規(guī)格口服固體制劑中活性藥物成份快速測(cè)定方法的工作流程包括模型建立、模型優(yōu)化與評(píng)估、模型驗(yàn)證、模型應(yīng)用、模型維護(hù)。

所述的小規(guī)格口服固體制劑指制劑生產(chǎn)工藝中的中間體(混合、壓片、包衣等工序)及成品，其中活性藥物成分占比小于1％的品種。

所述的模型建立指采用近紅外光譜儀對(duì)各濃度梯度的一系列樣品進(jìn)行近紅外光譜掃描，并記錄光譜圖。對(duì)原始光譜圖進(jìn)行預(yù)處理(一階導(dǎo)數(shù)、二階導(dǎo)數(shù))后，采用合適的軟件進(jìn)行建模。

所述的模型優(yōu)化與評(píng)估指根據(jù)預(yù)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確率對(duì)模型進(jìn)行適當(dāng)修正，并結(jié)合外部驗(yàn)證數(shù)據(jù)進(jìn)行模型優(yōu)化評(píng)估。

所述的模型驗(yàn)證指對(duì)模型進(jìn)行專屬性、線性和范圍、精密度、準(zhǔn)確度、耐用性等方面的驗(yàn)證，以確定模型是否滿足檢測(cè)要求。

所述的模型應(yīng)用指利用模型對(duì)樣品進(jìn)行結(jié)果預(yù)測(cè)，該預(yù)測(cè)結(jié)果將用于計(jì)算制劑產(chǎn)品含量均勻度。

所述的模型維護(hù)指在針對(duì)模型應(yīng)用過程中如初預(yù)測(cè)結(jié)果嚴(yán)重偏離預(yù)期或生產(chǎn)過程中出現(xiàn)改變處方或工序等情況，需要進(jìn)行模型修正或重新建立模型。

實(shí)施例1：

(1)模型建立：

校正集樣品制備：按處方比例稱配各輔料(包括交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素、乳糖、二氧化硅、硬脂酸鎂)，混合均勻。用十萬分之一天平準(zhǔn)確稱量混合輔料5份，分別加入伊潘立酮原料藥(相當(dāng)于4mg伊潘立酮原料藥的25％、50％、100％、150％、200％)，混勻，制粒，用壓片機(jī)壓片制備得到5個(gè)濃度梯度的伊潘立酮片，每個(gè)濃度梯度制備10批，每批100片，稱重，根據(jù)片劑重量棄去較低偏重25片，較高偏重25片，取中間50片做為校正集樣品。

近紅外光譜測(cè)定：每批樣品隨機(jī)抽取10片，使用近紅外光譜儀的漫反射光線探頭壓住藥片，每片正反面各測(cè)定1次，取平均光譜做為校正集樣品光譜。光譜條件：以儀器內(nèi)置背景為參比，掃描范圍為12000～4000cm^-1，分辨率為8cm^-1，掃描次數(shù)為64次。

(2)模型優(yōu)化與評(píng)估

外部驗(yàn)證集：采用高效液相色譜法測(cè)定對(duì)校正集的樣品進(jìn)行含量測(cè)定，方法如下：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Kromasil C18，4.6×250mm，5μm)，以2％二乙胺溶液(取水1000ml，加冰醋酸14.8ml,二乙胺20ml,搖勻)-乙腈(65:35)，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)275nm，柱溫為30℃。取本品1片，置10ml量瓶中，加流動(dòng)相適量振搖，使伊潘立酮片溶解，超聲5分鐘，靜置室溫，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，測(cè)定含量。

選擇合適的特征譜帶，按均方根誤差(RMSEP)由小到大排列，選擇校正集和驗(yàn)證集，選擇均方根誤差最小的模型做為定量模型。

(3)模型驗(yàn)證

專屬性：對(duì)單一輔料、原料藥進(jìn)行近紅外光譜掃描，用樣品的馬氏距離與限定值比較，結(jié)果表明單一輔料的馬氏距離均大于0.17。

線性：在2.88％～5.59％濃度范圍內(nèi)，以近紅外光譜預(yù)測(cè)值與濃度求得線性方程為y＝0.9813x+0.2021，r＝0.9971。

精密度：取1批自制產(chǎn)品和1批參比制劑各10片，每片正反面各測(cè)定1次，取平均光譜做為待測(cè)品光譜，分別用伊潘立酮片定量分析模型得到伊潘立酮的含量，方法的精密度RSD為2.3％

準(zhǔn)確度：校正集樣品與外部驗(yàn)證集樣品比較，平均相對(duì)偏差為1.62％，最大相對(duì)誤差為4.25％。將校正集樣品預(yù)測(cè)結(jié)果與外部驗(yàn)證集結(jié)果在95％置信區(qū)間內(nèi)進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，結(jié)果無顯著差異。

穩(wěn)定性：取1批自制產(chǎn)品和1批參比制劑各10片，分別在1、2、3天內(nèi)測(cè)定近紅外光譜，用定量分析模型預(yù)測(cè)含量，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果的RSD分別為1.25％、1.08％。

(4)模型應(yīng)用

對(duì)自制產(chǎn)品生產(chǎn)過程中不同階段，每個(gè)階段各10片樣品進(jìn)行近紅外光譜掃描，用定量分析模型進(jìn)行結(jié)果預(yù)測(cè)，采用該含量測(cè)定結(jié)果，計(jì)算含量均勻度，符合中國(guó)藥典2015年版要求。

實(shí)施例2：

(1)模型建立：

校正集樣品制備：按處方比例稱配各輔料(包括交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素、乳糖、二氧化硅、硬脂酸鎂)，混合均勻。用十萬分之一天平準(zhǔn)確稱量混合輔料5份，分別加入伊潘立酮原料藥(相當(dāng)于1mg伊潘立酮原料藥的25％、50％、100％、150％、200％)，混勻，制粒，用壓片機(jī)壓片制備得到5個(gè)濃度梯度的伊潘立酮片，每個(gè)濃度梯度制備10批，每批100片，稱重，根據(jù)片劑重量棄去較低偏重25片，較高偏重25片，取中間50片做為校正集樣品。

近紅外光譜測(cè)定：每批樣品隨機(jī)抽取10片，使用近紅外光譜儀的漫反射光線探頭壓住裝有藥片的小規(guī)格制劑產(chǎn)品專用檢測(cè)裝置，每片正反面各測(cè)定1次，取平均光譜做為校正集樣品光譜。光譜條件：以儀器內(nèi)置背景為參比，掃描范圍為12000～4000cm^-1，分辨率為8cm^-1，掃描次數(shù)為64次。

(2)模型優(yōu)化與評(píng)估

外部驗(yàn)證集：采用高效液相色譜法測(cè)定對(duì)校正集的樣品進(jìn)行含量測(cè)定，方法如下：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Kromasil C18，4.6×250mm，5μm)，以2％二乙胺溶液(取水1000ml，加冰醋酸14.8ml,二乙胺20ml,搖勻)-乙腈(65:35)，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)275nm，柱溫為30℃。取本品1片，置10ml量瓶中，加流動(dòng)相適量振搖，使伊潘立酮片溶解，超聲5分鐘，靜置室溫，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，測(cè)定含量。

選擇合適的特征譜帶，按均方根誤差(RMSEP)由小到大排列，選擇校正集和驗(yàn)證集，選擇均方根誤差最小的模型做為定量模型。

(3)模型驗(yàn)證

專屬性：對(duì)單一輔料、原料藥進(jìn)行近紅外光譜掃描，用樣品的馬氏距離與限定值比較，結(jié)果表明單一輔料的馬氏距離均大于0.17。

線性：在0.37％～1.46％濃度范圍內(nèi)，以近紅外光譜預(yù)測(cè)值與濃度求得線性方程為y＝0.9724x+0.2021，r＝0.9923。

精密度：取1批自制產(chǎn)品和1批參比制劑各10片，每片正反面各測(cè)定1次，取平均光譜做為待測(cè)品光譜，分別用伊潘立酮片定量分析模型得到伊潘立酮的含量，方法的精密度RSD為1.4％

準(zhǔn)確度：校正集樣品與外部驗(yàn)證集樣品比較，平均相對(duì)偏差為0.98％，最大相對(duì)誤差為3.18％。將校正集樣品預(yù)測(cè)結(jié)果與外部驗(yàn)證集結(jié)果在95％置信區(qū)間內(nèi)進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，結(jié)果無顯著差異。

穩(wěn)定性：取1批自制產(chǎn)品和1批參比制劑各10片，分別在1、2、3天內(nèi)測(cè)定近紅外光譜，用定量分析模型預(yù)測(cè)含量，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果的RSD分別為0.87％、0.93％。

(4)模型應(yīng)用

對(duì)自制產(chǎn)品生產(chǎn)過程中不同階段，每個(gè)階段各10片樣品進(jìn)行近紅外光譜掃描，用定量分析模型進(jìn)行結(jié)果預(yù)測(cè)，采用該含量測(cè)定結(jié)果，計(jì)算含量均勻度，符合中國(guó)藥典2015年版要求。