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紙基電化學(xué)發(fā)光轉(zhuǎn)化器的制備及在癌胚抗原檢測中的應(yīng)用的制作方法

文檔序號:12466192閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.紙基電化學(xué)發(fā)光轉(zhuǎn)化器的制備及在癌胚抗原檢測中的應(yīng)用,其特征是包括以下步驟:

(1)在計(jì)算機(jī)上設(shè)計(jì)紙基電化學(xué)發(fā)光轉(zhuǎn)化器的疏水蠟批量打印圖案,分別定義為紙芯片1和紙芯片2;

(2)利用蠟打印機(jī)在A4大小的紙芯片1和紙芯片2上打印上疏水蠟批量圖案,隨后將打印有疏水蠟批量圖案的紙芯片放置到烘箱中加熱直至蠟融化,使其在紙芯片上形成疏水區(qū)域;

(3)采用絲網(wǎng)印刷的方法將參比電極、對電極印刷圖案依次印刷到步驟(2)中所得紙芯片1的正面左側(cè)親水區(qū)域上,其中正面右側(cè)為親水的工作區(qū),正面左側(cè)為參比區(qū),紙芯片1的正面右側(cè)工作區(qū)的反面印有工作電極;

(4)對紙芯片2的親水區(qū)域功能化,在紙芯片上完成由蛋白質(zhì)輸入信號轉(zhuǎn)化為特定適配體鏈輸出信號的轉(zhuǎn)變;

(5)對紙芯片1的親水區(qū)域功能化,完成由特定適配體鏈引發(fā)的電化學(xué)發(fā)光信號的變化,實(shí)現(xiàn)癌胚抗原的檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求 1 所述的紙基電化學(xué)發(fā)光轉(zhuǎn)化器的制備及在癌胚抗原檢測中的應(yīng)用,其特征在于:步驟(4)中所述對紙芯片2的親水區(qū)域功能化,在紙芯片上完成由蛋白質(zhì)輸入信號轉(zhuǎn)化為特定適配體鏈輸出信號的轉(zhuǎn)變;

首先在紙芯片上生長Au納米花:在紙芯片上重復(fù)三次滴加Au納米粒子的種子溶液,等待干燥后,將15 μL 1%的HAuCl4和15μL 20 mM的抗壞血酸混合,立即滴加到紙芯片表面,待反應(yīng)完成后,去離子水沖洗電極表面,室溫下干燥即可;其次,將適配體鏈固定在電極表面:將5 μL修飾有一抗的適配體序列,定義為S0,其中,其5’端修飾上巰基,其3’端修飾上羧基,固定在親水區(qū)域,將5 μL另一適配體序列,定義為S1,其中,其3’端修飾上六個(gè)亞甲基以及巰基,固定在親水區(qū)域,室溫下孵育20 min,隨后用巰基己醇封鎖活性位點(diǎn),然后再向電極表面滴加與S1堿基互補(bǔ)配對的適配體鏈,定義為S2,最后將目標(biāo)抗原,也就是癌胚抗原連接在電極表面,引發(fā)分子轉(zhuǎn)化反應(yīng):向電極表面滴加不同濃度的癌胚抗原,室溫下孵育40 min,而后向電極表面滴加二抗功能化的適配體鏈,定義為S3,其中,其3’端修飾上氨基,室溫下反應(yīng)50 min。

3.根據(jù)權(quán)利要求 1 所述的紙基電化學(xué)發(fā)光轉(zhuǎn)化器的制備及在癌胚抗原檢測中的應(yīng)用,其特征在于:步驟(5)中所述對紙芯片1的親水區(qū)域功能化,完成由特定適配體鏈引發(fā)的電化學(xué)發(fā)光信號的變化,實(shí)現(xiàn)癌胚抗原的檢測;

首先在紙芯片上生長Pt納米粒子層:向紙芯片1的親水區(qū)域上重復(fù)三次滴加Pt納米粒子,室溫下干燥后,將20 mM的NaBH4和200 mM的H2PtCl6等體積混合后,快速滴加到電極表面,等待反應(yīng)完成后,用二次水沖洗電極表面;其次將多巴胺修飾的適配體鏈連接到電極表面:將5 μL適配體鏈,定義為S4,其中,其5’端修飾上巰基,固定在親水區(qū)域,隨后用巰基己醇封鎖活性位點(diǎn),而后將紙芯片2放置到紙芯片1上,兩紙芯片親水區(qū)域上下重疊且緊密接觸,向紙芯片2親水的工作區(qū)域內(nèi)滴加10 μL二次水,將紙芯片2親水的工作區(qū)域內(nèi)通過分子轉(zhuǎn)化法置換出來的適配體鏈轉(zhuǎn)移到紙芯片1的工作區(qū)域內(nèi),隨后將兩紙芯片分開,向紙芯片1的工作區(qū)域上滴加30 μL多巴胺功能化的適配體鏈,定義為S5,其中,其5’端修飾上羧基,室溫下反應(yīng)20 min;最后測定魯米諾的發(fā)光強(qiáng)度,實(shí)現(xiàn)癌胚抗原的檢測:將紙芯片2折疊,向工作區(qū)域上滴加40 μL含有發(fā)光試劑魯米諾和H2O2的磷酸鹽電解液,連接電化學(xué)工作站,測定魯米諾的發(fā)光強(qiáng)度,繪制魯米諾與癌胚抗原濃度關(guān)系曲線,完成癌胚抗原的檢測。

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