本發(fā)明屬于新型功能材料與生物傳感檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種針對(duì)兩種腫瘤標(biāo)志物的新型電位尋址模式的光電化學(xué)傳感方法。

背景技術(shù)：
近年來(lái)，在醫(yī)療診斷和病原體識(shí)別中利用高效的生物傳感器的構(gòu)建實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單的蛋白質(zhì)檢測(cè)得到越來(lái)越廣泛的關(guān)注。預(yù)測(cè)及診斷癌癥以能夠早期干預(yù)和更好的管理疾病，作為診斷工具，腫瘤標(biāo)志物發(fā)揮了重要的作用。針對(duì)腫瘤早期診斷中的的假陽(yáng)性與假陰性的問(wèn)題，開(kāi)發(fā)針對(duì)多種腫瘤標(biāo)志物的快速靈敏檢測(cè)方法，就成為了目前亟待解決的問(wèn)題。光電化學(xué)（PEC）檢測(cè)，是基于光電化學(xué)過(guò)程和化學(xué)/生物識(shí)別過(guò)程建立起來(lái)的一種新的分析方法。該方法以光作為激發(fā)信號(hào)，以光電流作為檢測(cè)信號(hào)，具有靈敏度高、響應(yīng)快速、設(shè)備簡(jiǎn)單和易微型化等優(yōu)點(diǎn)，為臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)與食品安全等領(lǐng)域提供了一種強(qiáng)有力手段。光電化學(xué)分析使用光作為激發(fā)信號(hào)，檢測(cè)的是電信號(hào)，通過(guò)采用不同形式的能量作為激發(fā)信號(hào)和檢測(cè)信號(hào)，使激發(fā)和檢測(cè)信號(hào)互不干擾，因而背景信號(hào)較低，可獲得較高的靈敏度。但目前的光電檢測(cè)方法多僅能針對(duì)單一目標(biāo)物而開(kāi)展檢測(cè)。目前尚無(wú)研究是利用不同光電活性材料的臨界電壓，運(yùn)用電位調(diào)制技術(shù)，借助電位尋址技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)于以兩種腫瘤標(biāo)志物為代表的兩種目標(biāo)物的檢測(cè)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的之一是針對(duì)兩種目標(biāo)物的電位尋址模式光電化學(xué)傳感器的制備。本發(fā)明的目的之二是將該光電化學(xué)傳感器可實(shí)現(xiàn)對(duì)于白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原為代表的兩種腫瘤標(biāo)志物的高靈敏檢測(cè)。為實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種基于電位尋址模式的雙腫瘤標(biāo)志物的光電檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）雙圓盤(pán)玻碳電極（DDCE）的預(yù)處理：DDCE首先在鋪有氧化鋁粉末的麂皮上機(jī)械打磨拋光，用二次水洗去表面殘留粉末，再移入超聲水浴中清洗，直至清洗干凈，最后依序用乙醇，稀酸和水徹底洗滌；（2）PAAD@CAM/DDCE修飾電極的制備：將100μL濃度為3mg/ml的二氧化鈦介觀晶體（CAM）溶液與100μL濃度為0.5wt%的聚酰胺胺溶液相混合，超聲3個(gè)小時(shí)；在3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下將該溶液離心，去除上清液，隨后加入200μL超純水，搖勻，獲得均一的修飾溶液；分別滴加4μL該修飾溶液于雙圓盤(pán)玻碳電極上，紅外燈下烘干，冷卻至室溫，即得到PAAD@CAM/DDCE修飾電極；通過(guò)將該P(yáng)AAD@CAM/DDCE修飾電極浸泡于濃度為5.0wt.%的戊二醛溶液中50分鐘，然后分別在兩個(gè)PAAD@CAM/DDCE修飾電極滴涂20μL濃度為1ngmL-1前列腺特異抗原和20μLof1ngmL-1白細(xì)胞介素-6，作用45分鐘后，依次用清水清洗，隨后，將該修飾電極浸入濃度為1.0wt.%的牛血清白蛋白1h，封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)；用pH7.4的磷酸緩沖溶液沖洗電極表面并在室溫條件下自然晾干，制得修飾電極；（3）前列腺特異抗原的抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab1@g-C3N4）：混合100μL濃度為0.5wt%的殼聚糖溶液與1mL濃度為3mgmL-1的石墨相氮化碳（g-C3N4）溶液，超聲48小時(shí),將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀，烘干；將3mg該沉淀物分散于1mL二次水溶液，即得到濃度為3mgmL-1的殼聚糖-石墨相氮化碳光電化學(xué)探針，移取120μL濃度為0.3mgmL-1的殼聚糖-石墨相氮化碳溶液與20μL前列腺特異抗原的抗體相混合，然后滴加30μL濃度為0.5wt%的戊二醛溶液，室溫下反應(yīng)3小時(shí)，隨后將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀；然后再加入1mL磷酸鹽緩沖溶液，超聲分散，即獲得前列腺特異抗原的抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab1@g-C3N4）；（4）白細(xì)胞介素-6抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab2@CS-AgI）：混合100μL濃度為0.5wt%的殼聚糖溶液與1mL濃度為3mgmL-1的納米碘化銀（AgI）溶液，超聲48小時(shí)，將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀，烘干，將3mg該沉淀物分散于1mL二次水溶液，即得到濃度為3mgmL-1的殼聚糖-納米碘化銀光電化學(xué)探針；移取120μL濃度為0.3mgmL-1的殼聚糖-納米碘化銀溶液與20μL白細(xì)胞介素-6抗體相混合，然后滴加30μL濃度為0.5wt%的戊二醛溶液，室溫下反應(yīng)3小時(shí)，隨后將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀，然后再加入1mL磷酸鹽緩沖溶液，超聲分散，即獲得白細(xì)胞介素-6抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab2@CS-AgI）；（5）白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原的檢測(cè)：采用三電極體系進(jìn)行測(cè)定，以所構(gòu)建步驟（2）所獲得的白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原的PAAD@CAM/DDCE修飾電極為工作電極，Ag/AgCl為參比電極，鉑絲電極為對(duì)電極，利用光電化學(xué)工作站進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)免疫分析策略，固載于PAAD@CAM/DDCE修飾電極上的白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原，分別與待測(cè)溶液中的白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，放入待測(cè)溶液中的步驟（3）所制得的前列腺特異抗原的抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab1@g-C3N4）用于結(jié)合固載于PAAD@CAM/DDCE修飾電極上的前列腺特異抗原和待測(cè)溶液中游離的前列腺特異抗原，放入待測(cè)溶液中的步驟（4）制得的白細(xì)胞介素-6抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab2@CS-AgI）用于結(jié)合固載于PAAD@CAM/DDCE修飾電極上的白細(xì)胞介素-6和待測(cè)溶液中游離的白細(xì)胞介素-6；分別設(shè)置電壓為+0.12V和-0.135V，每隔10s進(jìn)行開(kāi)關(guān)燈，氙燈發(fā)射的單色光激發(fā)光源使用前由單色儀過(guò)濾；在pH7.4的PBS緩沖溶液中，通過(guò)記錄開(kāi)關(guān)燈前后產(chǎn)生的不同電流信號(hào)，在+0.12V電壓下，可繪制針對(duì)前列腺特異抗原的工作曲線；在-0.135V電壓下，可繪制針對(duì)白細(xì)胞介素-6的工作曲線，檢測(cè)的結(jié)果可通過(guò)工作曲線查得。具體地說(shuō)，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：本發(fā)明所述的一種基于電位尋址模式的雙腫瘤標(biāo)志物的光電檢測(cè)方法，包括如下步驟：(1)雙圓盤(pán)玻碳電極（DDCE）的預(yù)處理：DDCE首先在鋪有氧化鋁粉末的麂皮上機(jī)械打磨拋光，用二次水洗去表面殘留粉末，再移入超聲水浴中清洗，直至清洗干凈，最后依序用乙醇，稀酸和水徹底洗滌；(2)PAAD@CAM/DDCE修飾電極的制備：將100μL濃度為3mg/ml的二氧化鈦介觀晶體（CAM）溶液與100μL濃度為0.5%的聚酰胺胺溶液相混合，超聲3個(gè)小時(shí)。在3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下將該溶液離心，去除上清液，隨后加入200μL超純水，搖勻，獲得均一的修飾溶液。分別滴加4μL該修飾溶液于雙圓盤(pán)玻碳電極上，紅外燈下烘干，冷卻至室溫，即得到PAAD@CAM/DDCE修飾電極；通過(guò)將該雙圓盤(pán)玻碳電極浸泡于濃度為5.0wt.%的戊二醛溶液中50分鐘，然后分別在兩個(gè)圓盤(pán)電極分別滴涂上20μL濃度為1ngmL-1前列腺特異抗原和20μLof1ngmL-1白細(xì)胞介素-6，作用45分鐘后，依次用清水清洗。隨后，將該修飾電極浸入濃度為1.0wt.%的牛血清白蛋白1h，封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)；用pH7.4的磷酸緩沖溶液沖洗電極表面并在室溫條件下自然晾干，制得修飾電極；(3)前列腺特異抗原的抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab1@g-C3N4）：混合100μL濃度為0.5%的殼聚糖溶液與1mL濃度為3mgmL-1的石墨相氮化碳（g-C3N4）溶液，超聲48小時(shí)。將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀，烘干。將3mg該沉淀物分散于1mL二次水溶液，即得到濃度為3mgmL-1的殼聚糖-石墨相氮化碳光電化學(xué)探針。移取120μL濃度為0.3mgmL-1的殼聚糖-石墨相氮化碳溶液與20μL前列腺特異抗原的抗體相混合，然后滴加30μL濃度為0.5%的戊二醛溶液，室溫下反應(yīng)3小時(shí)。隨后將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀。然后再加入1mL磷酸鹽緩沖溶液，超聲分散，即獲得前列腺特異抗原的抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab1@g-C3N4）。(4)白細(xì)胞介素-6抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab2@CS-AgI）：混合100μL濃度為0.5%的殼聚糖溶液與1mL濃度為3mgmL-1的納米碘化銀（AgI）溶液，超聲48小時(shí)。將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀，烘干。將3mg該沉淀物分散于1mL二次水溶液，即得到濃度為3mgmL-1的殼聚糖-納米碘化銀光電化學(xué)探針。移取120μL濃度為0.3mgmL-1的殼聚糖-納米碘化銀溶液與20μL白細(xì)胞介素-6抗體相混合，然后滴加30μL濃度為0.5%的戊二醛溶液，室溫下反應(yīng)3小時(shí)。隨后將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀。然后再加入1mL磷酸鹽緩沖溶液，超聲分散，即獲得前列腺特異抗原的抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab2@CS-AgI）。上述二氧化鈦介觀晶體、石墨相氮化碳、殼聚糖-碘化銀購(gòu)自宏泰納米材料有限公司。(5)白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原的檢測(cè)：采用三電極體系進(jìn)行測(cè)定，以所構(gòu)建的白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原的PAAD@CAM/DDCE修飾電極為工作電極，Ag/AgCl為參比電極，鉑絲電極為對(duì)電極，利用光電化學(xué)工作站進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)免疫分析策略，固載于的PAAD@CAM/DDCE修飾電極上的白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原，分別與待測(cè)溶液中的白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。分別設(shè)置電壓為+0.12V和-0.135V，每隔10s進(jìn)行開(kāi)關(guān)燈，氙燈發(fā)射的單色光激發(fā)光源使用前由單色儀過(guò)濾；在pH7.4的PBS緩沖溶液中，通過(guò)記錄開(kāi)關(guān)燈前后產(chǎn)生的不同電流信號(hào)，在+0.12V電壓下，可繪制針對(duì)前列腺特異抗原的工作曲線；在-0.135V電壓下，可繪制針對(duì)白細(xì)胞介素-6的工作曲線。檢測(cè)的結(jié)果可通過(guò)工作曲線查得。本發(fā)明所述的一種基于電位尋址模式的雙腫瘤標(biāo)志物的光電檢測(cè)方法，其特征在于，所使用的檢測(cè)系統(tǒng)包括雙圓盤(pán)玻碳電極為工作電極、鉑絲電極為對(duì)電極和Ag/AgCl為參比電極，其特征在于，所述的工作電極采用同時(shí)修飾前列腺特異抗原和白細(xì)胞介素-6的雙圓盤(pán)玻碳電極，其由下述步驟的方法制備而成：1）雙圓盤(pán)玻碳電極的拋光：電極首先在鋪有氧化鋁粉末的麂皮上機(jī)械打磨拋光，用二次水洗去表面殘留粉末，再移入超聲水浴中清洗，直至清洗干凈，最后依序用乙醇，稀酸和水徹底洗滌；2）PAAD@CAM/DDCE修飾電極的制備：將100μL濃度為3mg/ml的二氧化鈦介觀晶體（CAM）溶液與100μL濃度為0.5%的聚酰胺胺（PAAD）溶液相混合，超聲3個(gè)小時(shí)。在3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下將該溶液離心，去除上清液，隨后加入200μL超純水，搖勻，獲得均一的修飾溶液。分別滴加4μL該修飾溶液于雙圓盤(pán)玻碳電極上，紅外燈下烘干，冷卻至室溫，即得到PAAD@CAM/DDCE修飾電極；通過(guò)將該雙圓盤(pán)玻碳電極浸泡于濃度為5.0wt.%的戊二醛溶液中50分鐘，然后分別在兩個(gè)圓盤(pán)電極分別滴涂上20μL濃度為1ngmL-1前列腺特異抗原和20μLof1ngmL-1白細(xì)胞介素-6，作用45分鐘后，依次用清水清洗。隨后，將該修飾電極浸入濃度為1.0wt.%的牛血清白蛋白1h，封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)；用pH7.4的磷酸緩沖溶液沖洗電極表面并在室溫條件下自然晾干，制得同時(shí)修飾前列腺特異抗原和白細(xì)胞介素-6的雙圓盤(pán)玻碳修飾電極；本發(fā)明所述的前列腺特異抗原的抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab1@g-C3N4）的制備，其特征在于，混合100μL濃度為0.5%的殼聚糖溶液與1mL濃度為3mgmL-1的石墨相氮化碳（g-C3N4）溶液，超聲48小時(shí)。將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀，烘干。將3mg該沉淀物分散于1mL二次水溶液，即得到濃度為3mgmL-1的殼聚糖-石墨相氮化碳光電化學(xué)探針。移取120μL濃度為0.3mgmL-1的殼聚糖-石墨相氮化碳溶液與20μL前列腺特異抗原的抗體相混合，然后滴加30μL濃度為0.5%的戊二醛溶液，室溫下反應(yīng)3小時(shí)。隨后將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀。然后再加入1mL磷酸鹽緩沖溶液，超聲分散，即獲得前列腺特異抗原的抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab1@g-C3N4）。該探針用于結(jié)合固載的前列腺特異抗原和溶液中游離的前列腺特異抗原。本發(fā)明所述的白細(xì)胞介素-6抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab2@CS-AgI）的制備，其特征在于，混合100μL濃度為0.5%的殼聚糖溶液與1mL濃度為3mgmL-1的納米碘化銀（AgI）溶液，超聲48小時(shí)。將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀，烘干。將3mg該沉淀物分散于1mL二次水溶液，即得到濃度為3mgmL-1的殼聚糖-納米碘化銀光電化學(xué)探針。移取120μL濃度為0.3mgmL-1的殼聚糖-納米碘化銀溶液與20μL白細(xì)胞介素-6抗體相混合，然后滴加30μL濃度為0.5%的戊二醛溶液，室溫下反應(yīng)3小時(shí)。隨后將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀。然后再加入1mL磷酸鹽緩沖溶液，超聲分散，即獲得前列腺特異抗原的抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab2@CS-AgI）。該探針用于結(jié)合固載的白細(xì)胞介素-6和溶液中游離的白細(xì)胞介素-6。本發(fā)明所述的一種基于電位尋址模式的雙腫瘤標(biāo)志物的光電檢測(cè)方法，其特征在于，白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原的檢測(cè)：采用三電極體系進(jìn)行測(cè)定，以所構(gòu)建的白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原的PAAD@CAM/DDCE修飾電極為工作電極，Ag/AgCl為參比電極，鉑絲電極為對(duì)電極，利用光電化學(xué)工作站進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)免疫分析策略，固載于的PAAD@CAM/DDCE修飾電極上的白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原，分別與待測(cè)溶液中的白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。分別設(shè)置電壓為+0.12V和-0.135V，每隔10s進(jìn)行開(kāi)關(guān)燈，氙燈發(fā)射的單色光激發(fā)光源使用前由單色儀過(guò)濾；在pH7.4的PBS緩沖溶液中，通過(guò)記錄開(kāi)關(guān)燈前后產(chǎn)生的不同電流信號(hào)，在+0.12V電壓下，可繪制針對(duì)前列腺特異抗原的工作曲線；在-0.135V電壓下，可繪制針對(duì)白細(xì)胞介素-6的工作曲線。檢測(cè)的結(jié)果可通過(guò)工作曲線查得。在pH7.4的PBS緩沖溶液中，通過(guò)記錄開(kāi)關(guān)燈前后產(chǎn)生的不同電流信號(hào)，在+0.12V電壓下，可在10-6到90ngmL-1濃度范圍內(nèi)，實(shí)現(xiàn)對(duì)前列腺特異抗原的定量檢測(cè)；在-0.135V電壓下，可在10-5to90pgmL-1濃度范圍內(nèi)，實(shí)現(xiàn)對(duì)白細(xì)胞介素-6的定量檢測(cè)。本發(fā)明涉及的一種針對(duì)白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原為代表的腫瘤標(biāo)志物的電位尋址型光電傳感方法。該方法利用在光電檢測(cè)過(guò)程中，調(diào)制傳感界面上的應(yīng)用電位，即可實(shí)現(xiàn)對(duì)白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原等兩種腫瘤標(biāo)志物的高靈敏檢測(cè)。通過(guò)將聚酰胺胺和TiO2介觀晶體相復(fù)合，分別修飾于雙圓盤(pán)電極界面上，形成基質(zhì)層，然后分別修飾上白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原。分別在納米石墨相氮化碳及殼聚糖-碘化銀納米粒子上功能化白細(xì)胞介素-6抗體和前列腺特異抗原抗體，進(jìn)而制備了針對(duì)白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原的納米光電化學(xué)探針。結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)免疫分析策略，所制備的光電化學(xué)探針能與目標(biāo)物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于電極基質(zhì)上。在光照情況下，通過(guò)調(diào)制雙圓盤(pán)電極上的應(yīng)用電壓，可以使雙圓盤(pán)電極中的其中一個(gè)界面達(dá)到臨界狀態(tài)，此時(shí)該界面上電流為零，而另一個(gè)電極界面上的依然有電流，進(jìn)而可實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)的選擇性檢測(cè)。通過(guò)該發(fā)現(xiàn)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)于同種測(cè)試樣品中的兩種腫瘤標(biāo)志物的電位尋址型光電化學(xué)檢測(cè)。本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)為：(1)以納米光電材料的臨界電壓為依據(jù)，通過(guò)調(diào)制應(yīng)用電位，實(shí)現(xiàn)了對(duì)于兩種腫瘤標(biāo)志物的同時(shí)檢測(cè)。與傳統(tǒng)方法相比，該方法具有快速、靈敏、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。(2)通過(guò)在傳感界面引入聚酰胺胺-TiO2介觀晶體材料的復(fù)合物，能有效提高生物分子的負(fù)載量，從而提高所制備的傳感器的分析測(cè)試性能。(3)通過(guò)利用石墨相氮化碳和殼聚糖-碘化銀的光生臨界電壓的不同，為構(gòu)建該型傳感器提供了必要的檢測(cè)基礎(chǔ)。附圖說(shuō)明圖1為本發(fā)明所述的一種基于電位尋址模式的雙腫瘤標(biāo)志物的光電檢測(cè)方法過(guò)程示意圖。圖2A為二氧化鈦介觀晶體的SEM圖。圖2B為二氧化鈦介觀晶體的SEM圖。圖3A為不同濃度10-5to90pgmL-1白細(xì)胞介素-6標(biāo)準(zhǔn)溶液，傳感電極的光電流響應(yīng)圖。圖3B為傳感電極的光電流響應(yīng)與白細(xì)胞介素-6標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的線性關(guān)系圖。圖3C為不同濃度10-6到90ngmL-1前列腺特異抗原標(biāo)準(zhǔn)溶液，傳感電極的光電流響應(yīng)圖。圖3D為傳感電極的光電流響應(yīng)前列腺特異抗原標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的線性關(guān)系圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明用下列實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于下列實(shí)施例。實(shí)施例1一種基于電位尋址模式的雙腫瘤標(biāo)志物的光電化學(xué)傳感器的制備方法(如圖1所示)：(1)雙圓盤(pán)玻碳電極（DDCE）的預(yù)處理：DDCE首先在鋪有氧化鋁粉末的麂皮上機(jī)械打磨拋光，用二次水洗去表面殘留粉末，再移入超聲水浴中清洗，直至清洗干凈，最后依序用乙醇，稀酸和水徹底洗滌；(2)將100μL濃度為3mg/ml的二氧化鈦介觀晶體（CAM）溶液與100μL濃度為0.5%的聚酰胺胺溶液相混合，超聲3個(gè)小時(shí)。在3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下將該溶液離心，去除上清液，隨后加入200μL超純水，搖勻，獲得均一的修飾溶液。(3)分別滴加4μL該修飾溶液于雙圓盤(pán)玻碳電極上，紅外燈下烘干，冷卻至室溫，即得到PAAD@CAM/DDCE修飾電極；通過(guò)將該雙圓盤(pán)玻碳電極浸泡于濃度為5.0wt.%的戊二醛溶液中50分鐘，然后分別在兩個(gè)圓盤(pán)電極分別滴涂上20μL濃度為1ngmL-1前列腺特異抗原和20μLof1ngmL-1白細(xì)胞介素-6，作用45分鐘后，依次用清水清洗。(4)將該修飾電極浸入濃度為1.0wt.%的牛血清白蛋白1h，封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)；用pH7.4的磷酸緩沖溶液沖洗電極表面并在室溫條件下自然晾干，制得修飾電極。實(shí)施例2前列腺特異抗原的抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab1@g-C3N4）的制備（1）混合100μL濃度為0.5%的殼聚糖溶液與1mL濃度為3mgmL-1的石墨相氮化碳（g-C3N4）溶液，超聲48小時(shí)。將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀，烘干。（2）將3mg該沉淀物分散于1mL二次水溶液，即得到濃度為3mgmL-1的殼聚糖-石墨相氮化碳光電化學(xué)探針。移取120μL濃度為0.3mgmL-1的殼聚糖-石墨相氮化碳溶液與20μL前列腺特異抗原的抗體相混合，然后滴加30μL濃度為0.5%的戊二醛溶液，室溫下反應(yīng)3小時(shí)。（3）隨后將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀。然后再加入1mL磷酸鹽緩沖溶液，超聲分散，即獲得前列腺特異抗原的抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab1@g-C3N4）。實(shí)施例3白細(xì)胞介素-6抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab2@CS-AgI）的制備（1）混合100μL濃度為0.5%的殼聚糖溶液與1mL濃度為3mgmL-1的納米碘化銀（AgI）溶液，超聲48小時(shí)。（2）將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀，烘干。將3mg該沉淀物分散于1mL二次水溶液，即得到濃度為3mgmL-1的殼聚糖-納米碘化銀光電化學(xué)探針。（3）移取120μL濃度為0.3mgmL-1的殼聚糖-納米碘化銀溶液與20μL白細(xì)胞介素-6抗體相混合，然后滴加30μL濃度為0.5%的戊二醛溶液，室溫下反應(yīng)3小時(shí)。隨后將該溶液在6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，移除上清液，獲得沉淀。然后再加入1mL磷酸鹽緩沖溶液，超聲分散，即獲得前列腺特異抗原的抗體功能化的光電化學(xué)探針（Ab2@CS-AgI）。實(shí)施例4針對(duì)前列腺特異抗原和白細(xì)胞介素-6的基于電位尋址模式的雙腫瘤標(biāo)志物的光電檢測(cè)方法，步驟如下：(1)采用三電極體系進(jìn)行測(cè)定，以所構(gòu)建實(shí)施例1制得的白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原的PAAD@CAM/DDCE修飾電極為工作電極，Ag/AgCl為參比電極，鉑絲電極為對(duì)電極，利用光電化學(xué)工作站進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)免疫分析策略，固載于的修飾電極上的白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原，分別與待測(cè)溶液中的白細(xì)胞介素-6和前列腺特異抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，實(shí)施例2和實(shí)施例3所制備的光電化學(xué)探針。分別設(shè)置電壓為+0.12V和-0.135V，每隔10s進(jìn)行開(kāi)關(guān)燈，氙燈發(fā)射的單色光激發(fā)光源使用前由單色儀過(guò)濾；(2)在pH7.4的PBS緩沖溶液中，通過(guò)記錄開(kāi)關(guān)燈前后產(chǎn)生的不同電流信號(hào)，在-0.135V電壓下，檢測(cè)10-5to90pgmL-1濃度范圍內(nèi)，一系列不同溶度的白細(xì)胞介素-6標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過(guò)記錄開(kāi)關(guān)燈前后產(chǎn)生的不同電流信號(hào)，繪制工作曲線。圖3C為不同濃度1×10-7mg/mL–1.0mg/mL（a-h）白細(xì)胞介素-6標(biāo)準(zhǔn)溶液，傳感電極的光電流響應(yīng)。圖3D為傳感電極的光電流響應(yīng)與白細(xì)胞介素-6標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的線性關(guān)系圖。在+0.12V電壓下，檢測(cè)10-6到90ngmL-1濃度范圍內(nèi)，一系列不同溶度的前列腺特異抗原標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過(guò)記錄開(kāi)關(guān)燈前后產(chǎn)生的不同電流信號(hào)，繪制工作曲線。圖3C為不同濃度1×10-7mg/mL–1.0mg/mL（a-h）前列腺特異抗原標(biāo)準(zhǔn)溶液，傳感電極的光電流響應(yīng)。圖3D為傳感電極的光電流響應(yīng)與前列腺特異抗原標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的線性關(guān)系圖。將待測(cè)樣品溶液代替所測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)調(diào)制檢測(cè)電壓，可實(shí)現(xiàn)對(duì)特定目標(biāo)物的檢測(cè)，其結(jié)果可通過(guò)工作曲線查得。