本發(fā)明涉及利用生物敏感標志物檢測水體污染，更具體地說，本發(fā)明涉及一種利用魚的T-AOC檢測水體污染的方法。
背景技術：
隨著城鎮(zhèn)化和工農業(yè)的迅猛發(fā)展，水體污染日益加劇。水域中的水體污染物也各有不同，有的為單一污染物，也有多種污染物混合污染。對于未知水域中，不管是單一污染物的污染，還是多種污染物的污染，怎樣獲悉水體是否被污染，甚至知道其污染程度，并能直觀判斷該水域的污染對生物的危害已達到何種程度。對于水體中受到多氯聯(lián)苯污染時，用化學方法可以定性、定量檢測到污染，但是無法檢測其危害性和危害程度以及污染程度的準確性。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優(yōu)點。
本發(fā)明還有一個目的就是提供一種利用魚的T-AOC檢測水體污染的方法，本方法利用魚的T-AOC作為敏感生物標記物，可敏感地監(jiān)測多氯聯(lián)苯(PCB)污染的污染程度和危害程度，為水體生態(tài)環(huán)境監(jiān)測、毒理診斷、調控和防治提供準確、快速的科學方法。
為了實現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其他優(yōu)點，提供了一種利用魚的T-AOC檢測水體污染的方法。本檢測方法為獲取需要檢測的水域中的魚，并采用所述魚的T-AOC作為敏感生物標記物。其中，T-AOC為總抗氧化能力的簡寫。
優(yōu)選的是，所述魚的T-AOC活性與水體中多氯聯(lián)苯的濃度呈負相關。
優(yōu)選的是，建立魚的T-AOC活性與污染物濃度關系的標準曲線，然后將待檢測水域中的同種同大小的魚的T-AOC活性與所述標準曲線比對，得到待檢測水域中水體污染物濃度。
優(yōu)選的是，所述標準曲線為魚的T-AOC活性與多氯聯(lián)苯濃度關系的曲線。
優(yōu)選的是，所述魚的T-AOC活性通過T-AOC測定試劑盒進行測定。
優(yōu)選的是，所述魚的T-AOC活性測定包括如下步驟：
步驟一、待測樣本處理：制備全魚勻漿，然后離心分層，取上清液為待測樣本；
步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定：分別將等量的雙蒸水、蛋白標準品和待測樣本加入1、2、3號管中，并分別向各管加入等量的考馬斯亮藍顯色劑，分別混勻，靜置，預熱分光光度計并用雙蒸水調零后，于1cm光徑，在波長595nm處，測定1、2、3號管中物質的光密度，分別記為1號OD值，2號OD值，3號OD值，然后代入如下公式計算得待測樣本蛋白濃度:
步驟三、使用T-AOC測定試劑盒進行測定，分別在對照管和測定管中加入試劑一1mL，只在測定管中加入取樣量為a mL的待測樣本，再分別在對照管和測定管中各加入試劑二2mL和試劑三應用液0.5mL，然后將所述對照管和測定管混勻后，置于37℃水??；然后分別各加入試劑四0.2mL終止反應，只在對照管中加入待測樣本a mL，再分別在對照管和測定管中各加入試劑五0.2mL，然后分別混勻，靜置10分鐘，于520nm處，用1cm光環(huán)比色杯和雙蒸水調零后，測各管OD值，分別記為對照OD值和測定OD值，然后代入如下公式計算得魚的總抗氧化能力活性：
優(yōu)選的是，所述步驟一中全魚勻漿為全魚與濃度0.65％的魚用生理鹽水按質量比為1:9配置，且所述離心分層用冷凍離心機，相對離心力為11028g，，4℃，離心10分鐘。
優(yōu)選的是，所述步驟二中等量的雙蒸水、蛋白標準品和待測樣本均為0.05ml，蛋白標準品的濃度為0.563g/L，分別加入考馬斯亮藍顯色劑的量均為3ml，靜置10分鐘。
優(yōu)選的是，所述步驟三中水浴30分鐘，取樣量a＝0.1，所述魚為海水青鳉。
本發(fā)明至少包括以下有益效果：本發(fā)明以水域中魚的T-AOC作為敏感生物標記物，通過對比T-AOC活性就可以檢測出水體是否受到污染，不但檢測準確和敏感，而且直觀反映該水域的污染對生物的危害程度。特別是魚的T-AOC活性與水體中多氯聯(lián)苯的濃度均呈負相關，所以檢測到魚的T-AOC活性越低，其的水域受污染的程度越大，并且明示受到多氯聯(lián)苯的污染。通過建立魚的T-AOC活性與多氯聯(lián)苯濃度關系的曲線，可以將待檢測水域中與建立標準曲線同種同大小的魚的T-AOC活性比對，獲得水域中多氯聯(lián)苯污染濃度值，并且能反映出目前的污染程度對生物是否在安全范圍或受到危害。
具體實施方式
下面結合實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，以令本領域技術人員參照說明書能夠據(jù)以實施。
實施例1
本方案利用魚的T-AOC檢測水體污染的方法，獲取需要檢測的水域中的魚，并采用所述魚的T-AOC作為敏感生物標記物，通過檢測魚的T-AOC活性，然后比對同類同大小的魚的T-AOC活性與某污染物濃度關系的標準曲線，就可以檢測出水體是否受到某污染物的污染，不但檢測準確，且敏感度高，而且能直觀反映該水域的某污染物的污染程度及其對生物的危害程度。
實施例2
本方案利用魚的T-AOC檢測水體污染的方法，獲取需要檢測的水域中的魚，并采用所述魚的T-AOC作為敏感生物標記物，根據(jù)魚的T-AOC活性與水體中多氯聯(lián)苯(PCB)等多環(huán)芳烴的濃度呈負相關，通過測定魚的T-AOC活性，然后比對同類同大小的魚的T-AOC活性與多氯聯(lián)苯濃度關系的標準曲線，如果檢測樣本魚的T-AOC活性比正常情況下的同類同大小的魚的T-AOC活性低，則判斷水域受到多氯聯(lián)苯的污染；如果比正常情況下的同類同大小的魚的T-AOC活性越低，則判斷水域的多氯聯(lián)苯污染越嚴重，甚至可判斷是否達到危害水體生物的程度。
實施例3
本方案利用魚的T-AOC檢測水體污染的方法，獲取需要檢測的水域中的魚，并采用所述魚的T-AOC作為敏感生物標記物。首先通過實驗建立魚的T-AOC活性與某污染物濃度關系的標準曲線，然后將待檢測水域中的同種同大小的魚的T-AOC活性與所述標準曲線比對，得到待檢測水域中某污染物的濃度。
通過實驗建立魚的T-AOC活性與多氯聯(lián)苯(PCB)濃度關系的標準曲線如下：
本實驗的檢測樣本以海水青鳉為例，分6組，每組3個平行進行，實驗結束每個平行取3個樣品測定，每組測定3x3＝9個數(shù)據(jù)，將每組9個數(shù)據(jù)數(shù)理統(tǒng)計后得到每組魚的T-AOC活性大小。各組多氯聯(lián)苯濃度分別為0、50、100、150、200、250μg/L，養(yǎng)殖條件是鹽度30±2，水溫為28±2℃，pH為8.10，溶氧量≥6.10mg/L，光暗比為14h:10h，各組實驗操作均相同。每天三次投喂飼料，總投喂量為投喂時魚體濕重的5％。每天仔細觀察和記錄仔稚魚活動、攝食、畸形、死亡等，并跟蹤檢測水體和魚體多氯聯(lián)苯的變化，7天后隨機采集魚樣品，分別稱重，存于-80℃冰箱中(暫存待測)用于分子、基因、生理、毒理和生化測定。測定并經數(shù)理統(tǒng)計的各組T-AOC活性分別是：0.741、0.606、0.513、0.499、0.439、0.426U/mgprot。海水青鳉的T-AOC活性與水體中多氯聯(lián)苯(PCB)的濃度呈負相關，然后根據(jù)實驗結果繪制標準曲線。
測定待測水域中的海水青鳉的T-AOC活性的具體步驟如下：
步驟一、待測樣本處理：制備全魚勻漿，然后離心分層，取上層清液為待測樣本；
步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定：分別將等量的雙蒸水、蛋白標準品和待測樣本加入1、2、3號管中，并分別向各管加入等量的考馬斯亮藍顯色劑，分別混勻，靜置，預熱分光光度計并用雙蒸水調零后，于1cm光徑，在波長595nm處，測定1、2、3號管中物質的光密度，分別記為1號OD值，2號OD值，3號OD值，然后代入如下公式計算得待測樣本蛋白濃度:
步驟三、使用總抗氧化能力測定試劑盒進行測定，分別在對照管和測定管中加入試劑一1mL，只在測定管中加入取樣量為0.1mL的待測樣本，再分別在對照管和測定管中各加入試劑二2mL和試劑三應用液0.5mL，然后將所述對照管和測定管混勻后，置于37℃水浴30分鐘；然后分別各加入試劑四0.2mL終止反應后，只在對照管中加入待測樣本0.1mL，再分別在對照管和測定管中各加入試劑五0.2mL，然后分別混勻，靜置10分鐘，于520nm處，用1cm光環(huán)比色杯和雙蒸水調零后，測各管OD值，分別記為對照OD值和測定OD值，然后代入如下公式計算得魚的總抗氧化能力活性：
然后將計算得海水青鳉的T-AOC活性大小與標準曲線比對，不但可以知道水體是否受到污染，而且從標準曲線中可以知道水體中多氯聯(lián)苯濃度的大小，更能知道水體對生物體危害程度。
實施例4
利用實驗可以建立任何水體任何魚種的魚的T-AOC活性與多氯聯(lián)苯濃度關系的標準曲線，然后取待測水域中的魚做樣本，只要做樣本的魚與建立標準曲線的魚是同類同大小的即可進行比對。
測定待測水域中的魚的T-AOC活性具體步驟如下：
步驟一、待測樣本處理：取與建立標準曲線用魚一樣和大小相當?shù)聂~制備全魚勻漿，全魚勻漿為全魚與0.65％濃度的魚用生理鹽水按質量比為1:9配置，然后用冷凍離心機，相對離心力為11028g，，4℃，離心10分鐘分層，取上層清液為待測樣本；
步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定：分別將等量的雙蒸水、蛋白標準品和待測樣本加入1、2、3號管中，并分別向各管加入等量的考馬斯亮藍顯色劑，分別混勻，靜置，預熱分光光度計并用雙蒸水調零后，于1cm光徑，在波長595nm處，測定1、2、3號管中物質的光密度(OD)，分別記為1號OD值，2號OD值，3號OD值，然后代入如下公式計算得待測樣本蛋白濃度：
步驟三、使用總抗氧化能力測定試劑盒進行測定，分別在對照管和測定管中加入試劑一1mL，只在測定管中加入取樣量為0.1mL的待測樣本，待測樣本的稀釋倍數(shù)為6倍，再分別在對照管和測定管中各加入試劑二2mL和試劑三應用液0.5mL，然后將所述對照管和測定管混勻后，置于37℃水浴30分鐘；然后分別各加入試劑四0.2mL終止反應后，只在對照管中加入待測樣本0.1mL，再分別在對照管和測定管中各加入試劑五0.2mL，然后分別混勻，靜置10分鐘，于520nm處，用1cm光環(huán)比色杯和雙蒸水調零后，測各管OD值，分別記為對照OD值和測定OD值，然后代入如下公式計算得魚的總抗氧化能力活性：
將計算得魚的T-AOC活性大小與標準曲線比對，不但可以知道水體是否受污染，而且從標準曲線中可以知道水體中多氯聯(lián)苯濃度的大小，更能知道水體對生物體危害程度。
實施例6
利用實驗建立20日齡的淡水青鳉的T-AOC活性與多氯聯(lián)苯濃度關系的標準曲線，然后取待測水域中的魚做樣本，只要取得樣本的魚與建立標準曲線的魚是同類同大小的即可進行比對。
取得待測水域中20日齡的淡水青鳉做樣本，然后測定待測水域中的該魚的T-AOC活性具體步驟如下：
步驟一、待測樣本處理：取與建立標準曲線用魚一樣和大小相當?shù)聂~制備全魚勻漿，全魚勻漿為全魚與0.65％濃度的魚用生理鹽水按質量比為1:9配置，然后用冷凍離心機，相對離心力為11028g，，4℃，離心10分鐘分層，取上層清液為待測樣本；
步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定：分別將雙蒸水、濃度為0.563g/L的蛋白標準品和待測樣本各0.05ml加入1、2、3號管中，并分別向各管加入考馬斯亮藍顯色劑3ml，分別混勻，靜置10分，預熱到35℃，預熱待用分光光度計并用雙蒸水調零后，于1cm光徑，波長595nm處，測定1、2、3號管中溶液的光密度，分別記為1號OD值，2號OD值，3號OD值，然后代入如下公式計算得待測樣本蛋白濃度：
步驟三、使用T-AOC測定試劑盒進行測定，分別在對照管和測定管中加入試劑一1mL，只在測定管中加入取樣量為0.1mL的待測樣本，待測樣本可以稀釋5倍，再分別在對照管和測定管中各加入試劑二2mL和試劑三應用液0.5mL，然后將所述對照管和測定管混勻后，置于37℃水浴30分鐘；然后分別各加入試劑四0.2mL終止反應后，只在對照管中加入待測樣本0.1mL，再分別在對照管和測定管中各加入試劑五0.2mL，然后分別混勻，靜置10分鐘，于520nm處，用1cm光環(huán)比色杯和雙蒸水調零后，測各管OD值，分別記為對照OD值和測定OD值，然后代入如下公式計算得魚的T-AOC活性為0.601U/mgprot：：
將計算得魚的T-AOC活性大小與T-AOC活性與多氯聯(lián)苯濃度關系的標準曲線比對，得到待測水域的多氯聯(lián)苯濃度為54μg/L，這樣既可以知道水體已受到污染，而且從標準曲線中可以知道水體中多氯聯(lián)苯濃度的大小，更能知道水體對生物體危害程度。
盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列應用范例，它完全適用于各種適合本發(fā)明的領域，對于熟悉本領域的人員而言，可容易地改作他用，因此在不背離權利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細節(jié)和這里示出與描述的實施例。