1.一種利用核磁共振技術(shù)測定甾醇和/或其衍生物含量的方法,所述方法包括以下步驟:將含甾醇和/或其衍生物的樣品溶于內(nèi)標(biāo)溶液,配制供試液,測定供試品的核磁共振氫譜,選擇甾醇和/或其衍生物的定量峰和內(nèi)標(biāo)定量峰進行積分,分別得到甾醇和/或其衍生物的定量峰積分面積Af及內(nèi)標(biāo)定量峰積分面積As,由面積Af及面積As得到甾醇和/或其衍生物的含量,其中,甾醇和/或其衍生物包括選自甾醇、甾醇酯、甾醇糖苷和甾醇醚中的一種或兩種以上化合物,其特征在于所述甾醇和/或其衍生物的定量峰為3位的H峰。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中甾醇和/或其衍生物的含量根據(jù)以下公式(1)進行計算:
其中:Wf為甾醇和/或其衍生物的質(zhì)量;Ws為內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量;Af為甾醇和/或其衍生物定量峰的積分面積;As為內(nèi)標(biāo)物定量峰的積分面積;Nf為甾醇和/或其衍生物定量峰所包含的氫個數(shù);Ns為內(nèi)標(biāo)物定量峰所包含的氫個數(shù);Mf為甾醇和/或其衍生物的分子量;Ms為內(nèi)標(biāo)物的分子量;Ps為內(nèi)標(biāo)物的純度校正因子。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其中,所述的甾醇和/或其衍生物為天然的甾醇和/或其衍生物、或者合成的甾醇和/或其衍生物,所述的天然的甾醇和/或其衍生物為植物的甾醇和/或其衍生物、動物甾醇和/或其衍生物、或者微生物甾醇和/或其衍生物;優(yōu)選所述甾醇和/或其衍生物為植物的甾醇和/或其衍生物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的方法,其中,所述的甾醇和/或其衍生物包括選自β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、蕓苔甾醇、Δ5-燕麥甾醇、Δ7-燕麥甾醇、麥角甾醇、巖藻甾醇、馬尾藻甾醇、24-氫過氧基-24-乙烯基膽甾醇、24R,28R-環(huán)氧-24-乙基膽甾醇、24S,28S-環(huán)氧-24-乙基膽甾醇、24-氫過氧基豆甾-5,24(28)-二烯-3β-醇、24-乙烯氧基膽甾-5,23-二烯-3β-醇、豆甾-3β-羥基-5,23,25-三烯、膽甾-5,22-二烯-3β-羥基-24-酮、24-羰基-膽甾醇、24-亞甲基-膽甾醇、3β,28ξ-二羥基-24-乙基-5,23(Z)膽甾二烯;它們與棕櫚酸、亞油酸、亞麻酸、EPA、DHA、琥珀酸、煙酸、阿魏酸、綠原酸、磷脂等形成的酯;以及它們與葡萄糖、半乳糖、巖藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、甘露糖醛酸、古洛糖醛酸等形成的糖苷中的一種或兩種以上化合物。
5.權(quán)利要求1-4任一項所述的方法,其中,所述含甾醇和/或其衍生物的樣品為含有選自甾醇、甾醇酯、甾醇糖苷和甾醇醚中的兩種以上化合物的樣品,所述甾醇和/或其衍生物含量為甾醇和/或其衍生物的總含量;優(yōu)選地,以巖藻甾醇或其相應(yīng)衍生物、或者β-谷甾醇或其相應(yīng)衍生物的分子量作為Mf代表總甾醇和/或其衍生物的分子量,根據(jù)所述公式(1)進行計算。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的方法,其中所述內(nèi)標(biāo)物為選自1,3,5-三甲基苯、對苯二酚、1,3,5-三氧六環(huán)、1,2,4,5-四氯苯,2,3,4,5-四氯硝基苯,1,4-二硝基苯,對苯二酸,對苯二甲酸二甲酯,對苯二甲酸單甲酯,苯甲酸芐酯和順丁烯二酸酐中的一種或兩種以上。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的方法,其中配制內(nèi)標(biāo)溶液使用氘代溶劑配制;優(yōu)選所述氘代溶劑為選自氘代氯仿、氘代二甲基亞砜、氘代甲醇、氘代丙酮、氘代水、氘代二氯甲烷、氘代乙腈、氘代吡啶和氘代乙酸中的一種或兩種以上的混合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的方法,其中所述供試品溶液的濃度為使甾醇和/或其衍生物在核磁共振氫譜中的定量峰面積為內(nèi)標(biāo)物定量峰面積的0.05至15倍范圍的濃度;優(yōu)選地,所述供試品溶液濃度為0.1-25mg/ml。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項所述的方法,其中核磁共振氫譜測試的脈沖角為30-90度,弛豫時間大于或等于10s,測試溫度為20-45℃。
10.權(quán)利要求1-9任一項所述的方法用于測定動物、植物和/或微生物的提取物;食品;藥品;或者化妝品中的甾醇和/或其衍生物含量的用途。