本發(fā)明涉及藥物質(zhì)量控制
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種參蘇制劑的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：參蘇制劑由黨參、紫蘇葉、葛根、前胡、茯苓、半夏(制)、陳皮、枳殼(炒)、桔梗、甘草、木香、生姜、大棗十三味藥材組成。該方具有益氣解表、祛痰止咳的功效，主要用于治療體虛感冒、風(fēng)寒感冒、惡寒發(fā)熱、頭痛鼻塞、咳嗽多痰。參蘇飲出自宋代的《太平惠民和劑局方》，臨床應(yīng)用較為廣泛?，F(xiàn)有技術(shù)中，根據(jù)參蘇中藥方，已制得多種劑型的參蘇制劑，市場(chǎng)上參蘇制劑主要有口服液、丸劑、片劑、膠囊劑等。通常的制備工藝為：將原料藥材碎斷后，按現(xiàn)有常規(guī)方法制成口服液、丸劑、片劑或膠囊劑。參蘇制劑作為中成藥，其藥效是多種活性成分共同作用的結(jié)果。但目前參蘇制劑現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅測(cè)定單一指標(biāo)成分葛根素的含量，未對(duì)其他有效成分進(jìn)行監(jiān)測(cè)，存在一定局限性，不能全面反映參蘇制劑的質(zhì)量水平。針對(duì)參蘇制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法的公開(kāi)專(zhuān)利只有一個(gè)，中國(guó)專(zhuān)利200810069061.8(公開(kāi)號(hào)CN101474274A)，僅采用HPLC法控制其葛根素與橙皮苷的含量。針對(duì)參蘇制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法如下，《湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)》2003年4月第9卷第4期《參蘇口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究》、《中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊》2009年第11卷第9期《參蘇感冒片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究》、《中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志》2008年3月第14卷第3期《參蘇感冒片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究》等文章中記載了一種測(cè)定參蘇制劑中葛根素的含量的HPLC方法；《西北藥學(xué)雜志》2014年5月第29卷第3期《提高參蘇丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究》記載了一種測(cè)定參蘇丸中白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量的HPLC方法；《中國(guó)藥房》2007年第18卷第18期《HPLC法測(cè)定參蘇丸中橙皮苷的含量》記載了一種測(cè)定參蘇丸中橙皮苷的含量的HPLC方法?，F(xiàn)有技術(shù)中，尚無(wú)較全面的質(zhì)量控制方法反映現(xiàn)有中藥材、中間體及成 品的質(zhì)量狀況，也無(wú)法對(duì)生產(chǎn)過(guò)程及產(chǎn)品質(zhì)量有效控制，不能較好地保證其臨床療效。因此，建立參蘇制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法具有非常重要的意義。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明提供了一種參蘇制劑的檢測(cè)方法。該參蘇制劑質(zhì)量檢測(cè)方法的建立有利于對(duì)其原料藥材、中間體及其終產(chǎn)品有效成分質(zhì)量的有效控制及保證其臨床療效。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種參蘇制劑的檢測(cè)方法，包括如下步驟：將參蘇制劑制成供試品溶液，葛根素作為參照物，采用高效液相色譜法檢測(cè)獲到參蘇制劑的檢測(cè)結(jié)果，色譜條件為：色譜柱為C18反相色譜柱，流動(dòng)相為流動(dòng)相A與流動(dòng)相B組成的梯度洗脫液，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為磷酸溶液，采用梯度洗脫，梯度洗脫程序如下：作為優(yōu)選，高效液相色譜的檢測(cè)波長(zhǎng)為260～300nm。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，高效液相色譜的檢測(cè)波長(zhǎng)為283nm。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，高效液相色譜的檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，高效液相色譜的檢測(cè)波長(zhǎng)為300nm。作為優(yōu)選，磷酸溶液中磷酸的體積百分含量為0.05％～0.1％。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，磷酸溶液中磷酸的體積百分含量為0.05％。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，磷酸溶液中磷酸的體積百分含量為0.1％。作為優(yōu)選，高效液相色譜的柱溫為25℃～40℃。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，高效液相色譜的柱溫為30℃。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，高效液相色譜的柱溫為25℃。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，高效液相色譜的柱溫為40℃。作為優(yōu)選，流動(dòng)相的流速0.8～1.2mL/min。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，流動(dòng)相的流速1.0mL/min。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，流動(dòng)相的流速0.8mL/min。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，流動(dòng)相的流速1.2mL/min。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，供試品溶液的進(jìn)樣量為10μL。作為優(yōu)選，色譜柱為UnitaryC18(5μm，4.6×250mm)，ThermoSyncronis-C18(5μm，4.6×250mm)，島津InertsilODS-2(5μm，4.6×250mm)。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，參蘇制劑為口服液，供試品溶液的制備方法采用直接稀釋的方法；參蘇制劑為丸劑、片劑或膠囊劑，供試品溶液的制備方法采用回流提取的方法。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，供試品溶液的制備方法為：取參蘇制劑，加甲醇或乙醇，采用加熱回流方法提取，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。作為優(yōu)選，回流提取的溶劑為0％～50％甲醇或0％～50％乙醇。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，參照物的制備方法為：將葛根素溶解于50％～100％甲醇，制成參照物。作為優(yōu)選，高效液相色譜的分析時(shí)間不低于60min。本發(fā)明還提供了一種參蘇制劑的特征圖譜檢測(cè)方法，其檢測(cè)方法包括如下步驟：將參蘇制劑制成供試品溶液，葛根素作為參照物，采用高效液相色譜法檢測(cè)獲到參蘇制劑的特征圖譜，色譜條件為：色譜柱為C18反相色譜柱，流動(dòng)相為流動(dòng)相A與流動(dòng)相B組成的梯度洗脫液，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為磷酸溶液，采用梯度洗脫，梯度洗脫程序如下：作為優(yōu)選，特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中2號(hào)峰為葛根素作為參照峰，6號(hào)峰為柚皮苷，7號(hào)峰為橙皮苷，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：1號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間0.529±0.026；2號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000；3號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.322±0.066；4號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.784±0.089；5號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.830±0.091；6號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.910±0.095；7號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.962±0.098。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中2號(hào)峰為葛根素作為參照峰，6號(hào)峰為柚皮苷，7號(hào)峰為橙皮苷，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：1號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間0.529±0.026，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.20％；2號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00％；3號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.322±0.066，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.13％；4號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.784±0.089，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.18％；5號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.830±0.091，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.18％；6號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.910±0.095，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.19％；7號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.962±0.098，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.19％。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中2號(hào)峰為葛根素作為參照峰，6號(hào)峰為柚皮苷，7號(hào)峰為橙皮苷，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：1號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間0.529±0.026，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.12％；2號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00％；3號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.322±0.066，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.15％；4號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.784±0.089，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.10％；5號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.830±0.091，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.16％；6號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.910±0.095，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14％；7號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.962±0.098，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14％。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中2號(hào)峰為葛根素作為參照峰，6號(hào)峰為柚皮苷，7號(hào)峰為橙皮苷，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：1號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間0.529±0.026，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.15％；2號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00％；3號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.322±0.066，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.18％；4號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.784±0.089，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.08％；5號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.830±0.091，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.21％；6號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.910±0.095，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.17％；7號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.962±0.098，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.19％。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中2號(hào)峰為葛根素作為參照峰，6號(hào)峰為柚皮苷，7號(hào)峰為橙皮苷，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：1號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間0.529±0.026，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.16％；2號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00％；3號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.322±0.066，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.10％；4號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.784±0.089，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.02％；5號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.830±0.091，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14％；6號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.910±0.095，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.10％；7號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.962±0.098，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.09％。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中2號(hào)峰為葛根素作為參照峰，6號(hào)峰為柚皮苷，7號(hào)峰為橙皮苷，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：1號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間0.529±0.026，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.21％；2號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00％；3號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.322±0.066，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.08％；4號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.784±0.089，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.06％；5號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.830±0.091，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.13％；6號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.910±0.095，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14％；7號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.962±0.098，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14％。作為優(yōu)選，高效液相色譜的檢測(cè)波長(zhǎng)為260～300nm。作為優(yōu)選，磷酸溶液中磷酸的體積百分含量為0.05％～0.1％。優(yōu)選地，磷酸溶液中磷酸的體積百分含量為0.05％。作為優(yōu)選，高效液相色譜的柱溫為25℃～40℃。作為優(yōu)選，流動(dòng)相的流速0.8～1.2mL/min。優(yōu)選地，流動(dòng)相的流速1.0mL/min。作為優(yōu)選，供試品溶液的進(jìn)樣量為10μL。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，參蘇制劑為口服液，供試品溶液的制備方法采用直接稀釋的方法；參蘇制劑為丸劑、片劑或膠囊劑，供試品溶液的制備方法采用回流提取的方法。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，回流提取的溶劑為0％～50％甲醇或0％～50％乙醇。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，參照物的制備方法為：將葛根素溶解于50％～100％甲醇，制成參照物。作為優(yōu)選，高效液相色譜的分析時(shí)間不低于60min。本發(fā)明提供了一種參蘇制劑的檢測(cè)方法。該參蘇制劑的檢測(cè)方法包括：將參蘇制劑制成供試品溶液，葛根素作為參照物，采用高效液相色譜法檢測(cè)獲到參蘇制劑的檢測(cè)結(jié)果，色譜條件為：色譜柱為C18反相色譜柱，流動(dòng)相為流動(dòng)相A與流動(dòng)相B組成的梯度洗脫液，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為磷酸溶液，采用梯度洗脫。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：(1)本發(fā)明參蘇制劑的特征圖譜檢測(cè)方法對(duì)各供試品的前處理方法簡(jiǎn)單，特征性成分保留完整，且供試品溶液穩(wěn)定性良好；(2)該高效液相色譜方法的精密度較高、重現(xiàn)性良好，分析時(shí)間較短，具有一定的專(zhuān)屬性；所得特征圖譜中各特征峰分離效果較好，且參蘇制劑特征圖譜和中間體特征圖譜具有較好的相關(guān)性；(3)本發(fā)明所建立的特征圖譜有7個(gè)特征峰，信息量較大，較完整的保 留了供試液中的有效成分，明確了3個(gè)特征峰，經(jīng)比較采用保留時(shí)間適中，分離度較好，峰面積較大的葛根素參照物作為參照峰；(4)參蘇制劑中間體特征圖譜的應(yīng)用可增加參蘇制劑生產(chǎn)過(guò)程的可控性，參蘇制劑特征圖譜的應(yīng)用則有利于保證參蘇制劑的有效成分質(zhì)量穩(wěn)定和臨床療效，本發(fā)明提供的方法有利地保障了從原料到終端制劑的全程質(zhì)量控制。附圖說(shuō)明圖1為檢測(cè)波長(zhǎng)3D圖；圖2為參照物疊加色譜圖；S1示5-乙氧基家基糠醛對(duì)照品；S2示橙皮苷對(duì)照品；S3示葛根素對(duì)照品；S4示柚皮苷對(duì)照品；圖3為參蘇制劑特征圖譜；1～7號(hào)峰為特征峰，其中2號(hào)峰為參照峰；圖4為10批參蘇制劑特征圖譜；圖5為參蘇制劑中間體特征圖譜；圖6為10批參蘇制劑中間體特征圖譜；圖7為參蘇膠囊特征圖譜；圖8為10批參蘇膠囊特征圖譜；圖9為參蘇片特征圖譜；圖10為10批參蘇片特征圖譜；圖11為參蘇丸特征圖譜；圖12為10批參蘇丸特征圖譜；圖13為參蘇制劑特征圖譜各特征峰歸屬圖譜；圖14為參蘇制劑共有峰圖譜。具體實(shí)施方式本發(fā)明公開(kāi)了一種參蘇制劑特征圖譜及其檢測(cè)方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類(lèi)似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能 在不脫離本
發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。本發(fā)明提供的參蘇制劑特征圖譜及其檢測(cè)方法中所用藥物、試劑、儀器均可由市場(chǎng)購(gòu)得。本發(fā)明藥材、藥品的來(lái)源及對(duì)照品來(lái)源如下：黨參藥材(廠(chǎng)家：湖南天宏藥業(yè)有限公司、批號(hào)：YP1505016)；紫蘇葉藥材(廠(chǎng)家：湖南天宏藥業(yè)有限公司、批號(hào)：YP1505006)；葛根藥材(廠(chǎng)家：湖南天宏藥業(yè)有限公司、批號(hào)：YP1505007)；前胡藥材(廠(chǎng)家：湖南天宏藥業(yè)有限公司、批號(hào)：YP1505008)；茯苓藥材(廠(chǎng)家：湖南天宏藥業(yè)有限公司、批號(hào)：YP1505014)；半夏(制)藥材(廠(chǎng)家：湖南天宏藥業(yè)有限公司、批號(hào)：YP1505009)；陳皮藥材(廠(chǎng)家：湖南天宏藥業(yè)有限公司、批號(hào)：ZY1406025)；枳殼(炒)藥材(廠(chǎng)家：湖南天宏藥業(yè)有限公司、批號(hào)：YP1505010)；桔梗藥材(廠(chǎng)家：湖南柳紅藥業(yè)有限公司、批號(hào)：YP1505006)；甘草藥材(廠(chǎng)家：湖南柳紅藥業(yè)有限公司、批號(hào)：ZY1401003)；木香藥材(廠(chǎng)家：湖南天宏藥業(yè)有限公司、批號(hào)：YP1505012)；生姜藥材(廠(chǎng)家：湖南天宏藥業(yè)有限公司、批號(hào)：ZY1505013)；大棗藥材(廠(chǎng)家：湖南天宏藥業(yè)有限公司、批號(hào)：YP1505011)；天然澄清劑A組份(廠(chǎng)家：天津天成科技有限公司、批號(hào)：20150428)；天然澄清劑B組份(廠(chǎng)家：天津天成科技有限公司、批號(hào)：20150428)；山梨酸鉀(廠(chǎng)家：湖南爾康制藥、批號(hào)：1054-20150201)；山梨酸鉀對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定研究所、批號(hào)：101075-200901)；葛根素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院、)；5-乙氧基家基糠醛對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院、)；橙皮苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院、)；柚皮苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院、)；新橙皮苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院、)；參蘇口服液(湖南康壽制藥有限公司，批號(hào)為20130406、20131101、20141205、20141011、20140101、20140709、20140606、150601、150301、150108)；參蘇丸劑(湖南時(shí)代陽(yáng)光藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為20120111、20141214，其余8批為實(shí)驗(yàn)室自制)、參蘇片劑、膠囊劑(實(shí)驗(yàn)室自制)；參蘇中間體(湖南康壽制藥有限公司，150601)。本發(fā)明自制的參蘇制劑主要由下述重量份數(shù)的原藥材制得：90份黨參、90份紫蘇葉、90份葛根、90份前胡、90份茯苓、90份半夏(制)、60份陳皮、 60份枳殼(炒)、60份桔梗、60份甘草、60份木香、36份生姜、36份大棗。參蘇制劑為由下述方法制得的參蘇制劑：1、參蘇制劑為口服液時(shí)，半夏用70％乙醇滲漉提取。紫蘇葉、陳皮、枳殼、木香、生姜提取揮發(fā)油3小時(shí)，備用；藥渣再加水煎煮0.5小時(shí)，合并所得濾液，備用。黨參、葛根、前胡、茯苓、桔梗、甘草、大棗加水80～90℃動(dòng)態(tài)提取2小時(shí)，濾液備用。將以上水煎液合并，濃縮，加入ZTC1+1天然澄清劑，加入乙醇至含醇量為30％，冷藏過(guò)夜，醇沉濾液與半夏滲漉液合并，回收乙醇，所得藥液與揮發(fā)油，混勻，加水至1000ml即得。2、參蘇制劑為丸劑、片劑、膠囊劑時(shí)，將原藥材碎斷后，按現(xiàn)有常規(guī)方法制成丸劑、片劑、膠囊劑。參蘇制劑為口服液時(shí)，混勻，量取1.0～5.0ml；所述的制劑為丸劑、片劑、膠囊劑時(shí)，稱(chēng)取粉末7～9g。下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：實(shí)施例1參蘇制劑的檢測(cè)方法參蘇制劑的檢測(cè)方法，包括如下步驟：(a)參照物溶液的制備：稱(chēng)取葛根素參照物，置于容量瓶中，加50％～100％甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成參照物溶液；(b)供試品溶液的制備：取參蘇制劑，加0％～50％甲醇或0％～50％乙醇25～125mL，采用常規(guī)方法提取，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；(c)色譜條件：色譜柱為C18反相色譜柱；采用梯度洗脫，流動(dòng)相為流動(dòng)相A與流動(dòng)相B組成的梯度洗脫液，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.05～0.1％磷酸溶液；檢測(cè)波長(zhǎng)為260～300nm，見(jiàn)圖1；柱溫25℃～40℃；流速0.8mL/min～1.2mL/min；分析時(shí)間60min。洗脫梯度如表1所示。表1梯度運(yùn)行表時(shí)間(min)乙腈(％)0.05～0.1％磷酸溶液(％)0～51995～131～899～9213～158～1292～8815～3612～1488～8636～3814～1786～8338～6017～2683～74(d)測(cè)定：精密吸取參照物溶液與供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到特征圖譜。實(shí)施例2參蘇制劑口服液特征圖譜的建立(1)儀器與試藥安捷倫1260高效液相色譜儀，含在線(xiàn)真空脫氣機(jī)器(G-1311C)、二元泵(G-1311C)、標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器(G-1329B)、智能化柱溫箱(G-1316A)、DAD檢測(cè)器(G-1314B)、Agilent1260Infinity色譜工作站(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；SB-5200D超聲波清洗儀(寧波新芝生物科技股份有限公司)；FAZ004B分析天平(上海佑科)；BT125D電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)。(2)色譜條件色譜柱為T(mén)hermoSyncronis-C18(5μm，4.6×250mm)反相色譜柱；柱溫為25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為285nm；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.08％磷酸溶液，總流速為1.0mL/min；分析時(shí)間60分鐘；洗脫梯度如表2所示。表2梯度運(yùn)行表時(shí)間(min)乙腈(％)0.05％磷酸溶液(％)0～51995～131～899～9213～158～1292～8815～3612～1488～8636～3814～1786～8338～6017～2683～74(3)參照物溶液的制備稱(chēng)取葛根素參照物，置于容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋制成每1mL含0.08mg的溶液，搖勻，即得參照物溶液。見(jiàn)圖2。(4)供試品溶液的制備取參蘇口服液5支，混勻，精密量取5mL于50mL量瓶中，用水稀釋至刻度， 搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得參蘇口服液供試品溶液。(5)分析時(shí)間在上述色譜條件下進(jìn)樣考察120分鐘，結(jié)果表明，在60分鐘內(nèi)，樣品中所有峰均可被完全洗脫出，故分析時(shí)間確定為60分鐘。(6)方法學(xué)考察①穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，在上述液相色譜條件下，分別在0、2、4、6、12、24小時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，每次進(jìn)樣10μL，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明供試品溶液24小時(shí)內(nèi)較穩(wěn)定。②精密度試驗(yàn)取同一份供試品溶液，在上述液相色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明儀器精密度良好。③重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品，按供試品制備方法制備6份供試品溶液，在上述液相色譜條件下，進(jìn)樣分析，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明該方法重復(fù)性好。(7)參蘇口服液標(biāo)準(zhǔn)特征圖譜的制定精密吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀中，照高效液相色譜法測(cè)定，記錄色譜圖；依據(jù)所得的10批參蘇口服液的特征圖譜，制定特征圖譜。見(jiàn)圖3、4。比較參蘇制劑色譜圖，其特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中2號(hào)峰為葛根素峰為參照峰，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：1號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間0.529±0.026，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.20％；2號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00％；3號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.322±0.066，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.13％；4號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.784±0.089，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.18％；5號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.830±0.091，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.18％；6號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.910±0.095，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.19％；7號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.962±0.098，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.19％；(8)特征圖譜各特征峰的評(píng)價(jià)。參蘇制劑特征圖譜具有均具有7個(gè)特征峰，將參蘇制劑特征圖譜各特征相對(duì)保留時(shí)間與制定的各特征峰上述標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)保留時(shí)間進(jìn)行比較，其相對(duì)保留時(shí)間相對(duì)偏差應(yīng)在規(guī)定值的±5％以?xún)?nèi)。具體結(jié)果見(jiàn)下表。表310批參蘇制劑HPLC特征圖譜相對(duì)偏差結(jié)果表實(shí)施例3參蘇制劑中間體特征圖譜的建立(1)儀器與試藥安捷倫1260高效液相色譜儀，含在線(xiàn)真空脫氣機(jī)器(G-1311C)、二元泵(G-1311C)、標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器(G-1329B)、智能化柱溫箱(G-1316A)、DAD檢測(cè)器(G-1314B)、Agilent1260Infinity色譜工作站(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；SB-5200D超聲波清洗儀(寧波新芝生物科技股份有限公司)；FAZ004B分析天平(上海佑科)；BT125D電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)。(2)色譜條件色譜柱為T(mén)hermoSyncronis-C18(5μm，4.6×250mm)反相色譜柱；柱溫為30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為283nm；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.05％磷酸溶液，總流速為1.0mL/min；分析時(shí)間60分鐘；洗脫梯度如表4所示。表4梯度運(yùn)行表時(shí)間(min)乙腈(％)0.05％磷酸溶液(％)0～51995～131～899～9213～158～1292～8815～3612～1488～8636～3814～1786～8338～6017～2683～74(3)參照物溶液的制備稱(chēng)取葛根素參照物，置于容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋制成每1mL含0.08mg的溶液，搖勻，即得參照物溶液。(4)供試品溶液的制備精密量取參蘇制劑中間體1mL于10mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得參蘇制劑中間體供試品溶液。(5)方法學(xué)考察①穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，在上述液相色譜條件下，分別在0、2、4、6、12、24小時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，每次進(jìn)樣10μL，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明供試品溶液24小時(shí)內(nèi)較穩(wěn)定。②精密度試驗(yàn)取同一份供試品溶液，在上述液相色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明儀器精密度良好。③重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品，按供試品制備方法制備6份供試品溶液，在上述液相色譜條件下，進(jìn)樣分析，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明該方法重復(fù)性好。(6)參蘇制劑中間體以葛根素為參照峰的特征圖譜制定。精密吸取上述參照物溶液和供試品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀中，照高效液相色譜法測(cè)定，記錄色譜圖；依據(jù)所得的10批參蘇制劑中間體的特征圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)特征圖譜。見(jiàn)圖5、6。比較參蘇制劑中間體色譜圖，其特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中2號(hào)峰為葛根素峰為參照峰，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：1號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間0.529±0.026，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.12％；2號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00％；3號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.322±0.066，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.15％；4號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.784±0.089，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.10％；5號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.830±0.091，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.16％；6號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.910±0.095，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14％；7號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.962±0.098，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14％；(7)特征圖譜各特征峰的評(píng)價(jià)。參蘇制劑特征圖譜具有均具有7個(gè)特征峰，將參蘇制劑特征圖譜各特征相對(duì)保留時(shí)間與制定的各特征峰標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)保留時(shí)間進(jìn)行比較，其相對(duì)保留時(shí)間相對(duì)偏差應(yīng)在規(guī)定值的±5％以?xún)?nèi)。具體結(jié)果見(jiàn)下表。表510批參蘇制劑中間體HPLC特征圖譜相對(duì)偏差結(jié)果表實(shí)施例4參蘇制劑特征圖譜的建立(以參蘇制劑膠囊劑為例)(1)儀器與試藥安捷倫1260高效液相色譜儀，含在線(xiàn)真空脫氣機(jī)器(G-1311C)、二元泵 (G-1311C)、標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器(G-1329B)、智能化柱溫箱(G-1316A)、DAD檢測(cè)器(G-1314B)、Agilent1260Infinity色譜工作站(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；SB-5200D超聲波清洗儀(寧波新芝生物科技股份有限公司)；FAZ004B分析天平(上海佑科)；BT125D電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)。(2)色譜條件色譜柱為T(mén)hermoSyncronis-C18(5μm，4.6×250mm)反相色譜柱；柱溫為25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為300nm；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.1％磷酸溶液，總流速為0.8mL/min；分析時(shí)間60分鐘；洗脫梯度如表6所示。表6梯度運(yùn)行表時(shí)間(min)乙腈(％)0.10磷酸溶液(％)0～51995～131～899～9213～158～1292～8815～3612～1488～8636～3814～1786～8338～6017～2683～74(3)參照物溶液的制備稱(chēng)取葛根素參照物，置于容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋制成每1mL含0.08mg的溶液，搖勻，即得參照物溶液。(4)供試品溶液的制備取參蘇膠囊粉末7g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入水100mL，密塞，稱(chēng)定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得參蘇膠囊供試品溶液。(5)方法學(xué)考察①穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，在上述液相色譜條件下，分別在0、2、4、6、12、24小時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，每次進(jìn)樣10μL，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明供試品溶液24小時(shí)內(nèi)較穩(wěn)定。②精密度試驗(yàn)取同一份供試品溶液，在上述液相色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明儀器精密度良好。③重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品，按供試品制備方法制備6份供試品溶液，在上述液相色譜條件下，進(jìn)樣分析，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明該方法重復(fù)性好。(6)參蘇制劑特征圖譜的制定。精密吸取上述參照物溶液和供試品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀中，照高效液相色譜法測(cè)定，記錄色譜圖；依據(jù)所得的10批參蘇制劑的特征圖譜，制定特征圖譜。見(jiàn)圖7、8。比較參蘇制劑色譜圖，其特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中2號(hào)峰為葛根素峰為參照峰，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：1號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間0.529±0.026，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.15％；2號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00％；3號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.322±0.066，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.18％；4號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.784±0.089，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.08％；5號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.830±0.091，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.21％；6號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.910±0.095，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.17％；7號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.962±0.098，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.19％；(7)特征圖譜各特征峰的評(píng)價(jià)。參蘇制劑特征圖譜具有均具有7個(gè)特征峰，將參蘇制劑特征圖譜各特征相對(duì)保留時(shí)間與制定的各特征峰標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)保留時(shí)間進(jìn)行比較，其相對(duì)保留時(shí)間相對(duì)偏差應(yīng)在規(guī)定值的±5％以?xún)?nèi)。具體結(jié)果見(jiàn)下表。表710批參蘇膠囊劑HPLC特征圖譜相對(duì)偏差結(jié)果表實(shí)施例5參蘇制劑特征圖譜的建立(以參蘇片劑為例)(1)儀器與試藥安捷倫1260高效液相色譜儀，含在線(xiàn)真空脫氣機(jī)器(G-1311C)、二元泵(G-1311C)、標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器(G-1329B)、智能化柱溫箱(G-1316A)、DAD檢測(cè)器(G-1314B)、Agilent1260Infinity色譜工作站(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；SB-5200D超聲波清洗儀(寧波新芝生物科技股份有限公司)；FAZ004B分析天平(上海佑科)；BT125D電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)。(2)色譜條件色譜柱為島津InertsilODS-2(5μm，4.6×250mm)反相色譜柱；柱溫為40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.05％磷酸溶液，總流速為1.2mL/min；分析時(shí)間60分鐘；洗脫梯度如表8所示。表8梯度運(yùn)行表時(shí)間(min)乙腈(％)0.05％磷酸溶液(％)0～51995～131～899～9213～158～1292～8815～3612～1488～8636～3814～1786～8338～6017～2683～74(3)對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取葛根素對(duì)照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋制成每1mL含0.08mg的溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液。(4)供試品溶液的制備取參蘇片劑粉末9g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇25mL，密塞，稱(chēng)定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得參蘇片劑供試品溶液。(5)方法學(xué)考察①穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，在上述液相色譜條件下，分別在0、2、4、6、12、24小時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，每次進(jìn)樣10μL，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明供試品溶液24小時(shí)內(nèi)較穩(wěn)定。②精密度試驗(yàn)取同一份供試品溶液，在上述液相色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明儀器精密度良好。③重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品，按供試品制備方法制備6份供試品溶液，在上述液相色譜條件下，進(jìn)樣分析，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明該方法重復(fù)性好。(6)參蘇制劑顆粒特征圖譜的制定。精密吸取上述參照物溶液和供試品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀中，照高效液相色譜法測(cè)定，記錄色譜圖；依據(jù)所得的10批參蘇制劑的特征圖譜，制定特征圖譜。見(jiàn)圖9、10。比較參蘇制劑顆粒色譜圖，其特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中2號(hào)峰為葛根素峰為參照峰，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：1號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間0.529±0.026，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.16％；2號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00％；3號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.322±0.066，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.10％；4號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.784±0.089，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.02％；5號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.830±0.091，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14％；6號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.910±0.095，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.10％；7號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.962±0.098，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.09％；(7)特征圖譜各特征峰的評(píng)價(jià)。參蘇制劑特征圖譜具有均具有7個(gè)特征峰，將參蘇制劑特征圖譜各特征相對(duì)保留時(shí)間與制定的各特征峰標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)保留時(shí)間進(jìn)行比較，其相對(duì)保留時(shí)間相對(duì)偏差應(yīng)在規(guī)定值的±5％以?xún)?nèi)。具體結(jié)果見(jiàn)下表。表910批參蘇片劑HPLC特征圖譜相對(duì)偏差結(jié)果表實(shí)施例6參蘇制劑特征圖譜的建立(以參蘇丸劑為例)(1)儀器與試藥安捷倫1260高效液相色譜儀，含在線(xiàn)真空脫氣機(jī)器(G-1311C)、二元泵(G-1311C)、標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器(G-1329B)、智能化柱溫箱(G-1316A)、DAD檢測(cè)器(G-1314B)、Agilent1260Infinity色譜工作站(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；SB-5200D超聲波清洗儀(寧波新芝生物科技股份有限公司)；FAZ004B分析天平(上海佑科)；BT125D電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)。(2)色譜條件色譜柱為UnitaryC18(5μm，4.6×250mm)反相色譜柱；柱溫為35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.05％磷酸溶液，總流速為1.0mL/min；分析時(shí)間60分鐘；洗脫梯度如表10所示。表10梯度運(yùn)行表時(shí)間(min)乙腈(％)0.05％磷酸溶液(％)0～51995～131～899～9213～158～1292～8815～3612～1488～8636～3814～1786～8338～6017～2683～74(3)對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取葛根素對(duì)照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋制成每1mL含0.08mg的溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液。(4)供試品溶液的制備取參蘇丸，粉碎，取8g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％乙醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，回流處理2小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得參蘇口服液供試品溶液。(5)方法學(xué)考察①穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，在上述液相色譜條件下，分別在0、2、4、6、12、24小時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，每次進(jìn)樣10μL，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明供試品溶液24小時(shí)內(nèi)較穩(wěn)定。②精密度試驗(yàn)取同一份供試品溶液，在上述液相色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明儀器精密度良好。③重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品，按供試品制備方法制備6份供試品溶液，在上述液相色譜條件下，進(jìn)樣分析，考察主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的一致性。結(jié)果主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD＜3％，表明該方法重復(fù)性好。(6)參蘇制劑口服液特征圖譜的制定。精密吸取上述參照物溶液和供試品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀中，照高效液相色譜法測(cè)定，記錄色譜圖；依據(jù)所得的10批參蘇制劑的特征圖譜，制定特征圖譜。見(jiàn)圖11、12。比較參蘇制劑口服液色譜圖，其特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中2號(hào)峰為葛根素峰為參照峰，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：1號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間0.529±0.026，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.21％；2號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00％；3號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.322±0.066，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.08％；4號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.784±0.089，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.06％；5號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.830±0.091，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.13％；6號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.910±0.095，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14％；7號(hào)峰：相對(duì)保留時(shí)間1.962±0.098，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14％；(7)特征圖譜各特征峰的評(píng)價(jià)。參蘇制劑特征圖譜具有均具有7個(gè)特征峰，將參蘇制劑特征圖譜各特征相對(duì)保留時(shí)間與制定的各特征峰標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)保留時(shí)間進(jìn)行比較，其相對(duì)保留時(shí)間相對(duì)偏差應(yīng)在規(guī)定值的±5％以?xún)?nèi)。具體結(jié)果見(jiàn)下表。表1110批參蘇片劑HPLC特征圖譜相對(duì)偏差結(jié)果表實(shí)施例7成品與各原料藥材的相關(guān)性及特征峰歸屬(1)儀器與試藥安捷倫1260高效液相色譜儀，含在線(xiàn)真空脫氣機(jī)器(G-1311C)、二元泵(G-1311C)、標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器(G-1329B)、智能化柱溫箱(G-1316A)、DAD檢測(cè)器(G-1314B)、Agilent1260Infinity色譜工作站(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；SB-5200D超聲波清洗儀(寧波新芝生物科技股份有限公司)；FAZ004B分析天平(上海佑科)；BT125D電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)。(2)色譜條件色譜柱為T(mén)hermoSyncronis-C18(5μm，4.6×250mm)反相色譜柱；柱溫為30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.05％磷酸溶液，總流速為1.0mL/min；分析時(shí)間60分鐘；洗脫梯度如表12所示。表12梯度運(yùn)行表時(shí)間(min)乙腈(％)0.05％磷酸溶液(％)0～51995～131～899～9213～158～1292～8815～3612～1488～8636～3814～1786～8338～6017～2683～74(3)參照物溶液的制備稱(chēng)取葛根素對(duì)照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋制成每1mL含0.08mg的溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液。(4)供試品溶液的制備取參蘇口服液5支，混勻，精密量取5mL于50mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得參蘇口服液供試品溶液。藥材溶液的制備方法：分別取各單味藥材，按處方制備成溶液，按參蘇制劑中間體供試品溶液制備方法制備對(duì)應(yīng)的單味藥材溶液，共13味藥材溶液。陰性藥材溶液的制備方法：分別取除其中某味藥材的其他藥材，按處方制備成溶液，按參蘇制劑中間體供試品溶液制備方法制備對(duì)應(yīng)的陰性藥材溶液，共13味陰性藥材溶液。(5)單味藥材、陰性、成品各特征峰圖譜歸屬的制定。精密吸取上述參照物溶液和供試品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀中，照高效液相色譜法測(cè)定，記錄色譜圖；依據(jù)所得的圖譜，制定各特征峰的歸屬。見(jiàn)表13，附圖13。表13各特征峰圖譜歸屬所述參蘇制劑的HPLC在283nm的特征圖譜有13個(gè)共有峰(見(jiàn)圖14)，其中歸屬于枳殼的共有峰為：峰1、峰2、峰10、峰11、峰12、峰13；歸屬于陳皮的共有峰為：峰2、峰10、峰12；歸屬于葛根的共有峰為：峰3、峰4、峰5、峰6、峰7；歸屬于紫蘇葉的共有峰為：峰9。其中選取保留時(shí)間及峰面積適宜的共有峰為特征峰建立特征圖譜，其中有：峰2、峰4(S)、峰7、峰9、峰10、峰11、峰12。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3