本發(fā)明涉及康婦靈膠囊中雞血藤的含量測定方法，屬于中藥檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

康婦靈膠囊是由杠板歸、苦參、黃柏、雞血藤、益母草、紅花龍膽、土茯苓和當歸八味制成的，其功能主治為：苗醫(yī)：蒙凱，布發(fā)講港，嘎幾昂代。嘎溜納洛，巢窩蒙秋，巢窩即得。中醫(yī)：清熱燥濕，活血化瘀，調(diào)經(jīng)止帶。用于宮頸炎、陰道炎，月經(jīng)不調(diào)，赤白帶下，痛經(jīng)，附件炎等。

康婦靈膠囊是貴州百靈企業(yè)集團和仁堂藥業(yè)有限公司的獨家品種，批準文號為：國藥準字Z20025767。目前該藥的執(zhí)行標準編號為(WS-10558(ZD-0558)-2002-2012Z)，在原標準中，該藥的鑒別僅有當歸、黃柏和苦參三項薄層鑒別，含量測定項目也僅有黃柏中鹽酸小檗堿的含量測定。

康婦靈膠囊在市場上有較高的占有率，為了保證該藥的質(zhì)量和療效，就該藥品目前的執(zhí)行標準來看，并未對臣藥雞血藤等藥材進行質(zhì)量檢測，現(xiàn)有的檢測項目已經(jīng)不能確保康婦靈膠囊的質(zhì)量得到良好控制。

現(xiàn)有技術(shù)中，關(guān)于康婦靈膠囊中雞血藤的含量測定方法，尚未見到相關(guān)科技報道。因此，為進一步完善康婦靈膠囊的質(zhì)量檢測標準，在技術(shù)上進行一些突破，保證藥品質(zhì)量的可控性以及用藥的安全性，有必要建立康婦靈膠囊中雞血藤的含量測定方法，以對康婦靈膠囊產(chǎn)品的質(zhì)量進行有效監(jiān)測。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種康婦靈膠囊中雞血藤的含量測定方法，其分離度高，陰性對照無干擾，能夠?qū)崿F(xiàn)對雞血藤含量進行快速、準確的測定。

本發(fā)明的康婦靈膠囊，按照重量份數(shù)計，是由杠板歸600份、苦參300份、 黃柏150份、雞血藤300份、益母草300份、紅花龍膽200份、土茯苓150份和當歸180份制得。前述八味，當歸粉碎成細粉，備用；其余杠板歸等七味加水浸泡30分鐘后，煎煮二次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.25～1.30(40℃)的清膏，加入上述當歸細粉，混勻，80℃以下干燥，粉碎，制成顆粒，干燥，裝入膠囊，即得。

為了實現(xiàn)上述目標，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

康婦靈膠囊中雞血藤的含量測定方法，是以芒柄花素對照品為對照，以乙腈-水＝35～40∶65～80為流動相的高效液相色譜法。

進一步地，具體的含量測定方法為：照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥD高效液相色譜法測定：

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝35～40∶65～80為流動相，檢測波長為240～260nm；

對照品溶液的制備：取芒柄花素對照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素對照品的溶液，作為對照品溶液；

供試品溶液的制備：取本制劑裝量差異項下的內(nèi)容物3～5g，加80％甲醇40～50mL，水浴回流提取30～70分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加80％甲醇10mL使其溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；

測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10～20μL，注入高效液相色譜儀，測定，即得。

優(yōu)選的含量測定方法為：照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥD高效液相色譜法測定：

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝35∶65為流動相，檢測波長為254nm；

對照品溶液的制備：取芒柄花素對照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素對照品的溶液，作為對照品溶液；

供試品溶液的制備：取本制劑裝量差異項下的內(nèi)容物5g，加80％甲醇50mL，水浴回流提取30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加80％甲醇10mL使其溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；

測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測定，即得。

按照前述含量測定方法，本制劑含雞血藤以芒柄花素計,每1g不少于3.5mg。

為了確保本發(fā)明含量測定方法科學(xué)、合理、可行，對本發(fā)明的含量測定方法進行了研究和考察。

下面是雞血藤含量測定的方法學(xué)考察：

雞血藤為康婦靈方中的臣藥，芒柄花素是其主要有效成分，故選擇以芒柄花素作為本制劑內(nèi)在質(zhì)量的指標成分，經(jīng)試驗，該方法具有分離效果好、靈敏、準確等優(yōu)點。

1、儀器、試劑和樣品

Agilent Technologies 1200series高效液相色譜儀，KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，十萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)，甲醇(分析純20130411，上海申博化工有限公司)，乙酸乙酯(分析純20140328，上海申博化工有限公司)，乙腈(色譜純20140721，上海申博化工有限公司)，芒柄花素對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，編號為112542-201405)，康婦靈膠囊(20130811、20130905、20131001、20131107、20140301、20140303、20140305、20140306、20140307、20140309、20140310、20140312、20140401、20140402、20140403貴州百靈企業(yè)集團和仁堂藥業(yè)有限公司提供)，其他均為分析純。

2、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝35∶65為流動相，檢測波長為254nm；分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10～20μL注入高效液相色譜儀，測定。

3、對照品溶液的制備

取芒柄花素對照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素對照品的溶液，作為對照品溶液。

4、陰性對照溶液的制備

按處方比例及制備工藝，制備不含雞血藤藥材的陰性樣品，同供試品制備方法制備陰性樣品溶液。

5、供試品溶液的制備

取本制劑內(nèi)容物5g，加80％甲醇50mL，水浴回流提取30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加80％甲醇10mL使其溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

6、方法學(xué)驗證

6.1系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

按照上述色譜條件及樣品處理方法，進行系統(tǒng)適應(yīng)性試驗，芒柄花素峰與其他成分達到基線分離，且峰形良好；陰性樣品試驗結(jié)果表明其它成分對芒柄花素的測定無干擾。結(jié)果見圖1、圖2、圖3。

6.2線性關(guān)系的考察

取3項下的對照品溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μL分別進樣，按上述色譜條件記錄色譜圖，測定峰面積，以峰面積的對數(shù)值為縱坐標，芒柄花素對照品進樣量的對數(shù)值為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程：Y＝1.1465X+4.5823(Y為峰面積，X為濃度)，r＝0.9999。結(jié)果表明，芒柄花素在5.5850～27.9250μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

6.3精密度試驗

取3項下的對照品溶液，按2項色譜條件進行實驗，進樣量均為10μL，連續(xù)進樣5次，測得其峰面積積分值，RSD為0.72％，儀器精密度良好。

6.4重復(fù)性試驗

取同一個批號的康婦靈膠囊(批號：20140304)，平行取樣6份，按5項方法操作并檢測。芒柄花素平均質(zhì)量分數(shù)為5.37mg/g，RSD為0.10％，表明方法重復(fù)性好。

6.5穩(wěn)定性試驗

取同一批號的供試品溶液(批號：20140304)，按2項色譜條件進行試驗，于0、4、8、12、16、20、24h各進樣一次，進樣量均為10μL，按峰面積積分值計算，芒柄花素的RSD值為0.14％，表明供試品溶液中芒柄花素在24h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

6.6加樣回收率試驗

稱取已知芒柄花素含量的樣品(質(zhì)量分數(shù)為5.28mg/g)9份，分成3組(每組3份)，置50mL量瓶中，每組分別精密加入2.5204mg/mL的芒柄花素對照品溶液4、5、6mL，加乙醇約40mL，超聲處理30分鐘(功率250W，頻率100Hz)，放冷，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，按5項下，自“加80％甲醇50mL”起，同法操作，并按2項下色譜條件進樣，進樣量均為20μL，測定峰面積，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 芒柄花素加樣回收率試驗結(jié)果(n＝9)

由表1結(jié)果可見，加樣回收率均值為99.90％，RSD為1.57％，該方法的準確度高。

6.7樣品含量測試結(jié)果

取11批樣品，同5項方法處理樣品，作為供試品溶液。用0.45μm微孔濾膜過濾，各取續(xù)濾液10μL，注入高效液相色譜儀，按2項色譜條件測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算樣品中芒柄花素的含量，結(jié)果見表2。

表2 11批康婦靈膠囊芒柄花素含量測試結(jié)果(n＝3)

由表2結(jié)果分析，可將含量限度定為：康婦靈膠囊含雞血藤以芒柄花素計,每1g不少于3.5mg。

本發(fā)明的有益之處在于：本發(fā)明提供的康婦靈膠囊中雞血藤的含量測定方法，高效液相色譜圖峰形好、分離度高，陰性對照無干擾，能夠?qū)崿F(xiàn)對雞血藤含量進行快速、準確的測定；而且該方法的專屬性強、精密度高、重復(fù)性好、回收率高、穩(wěn)定性高、測量結(jié)果準確，提升了康婦靈膠囊的質(zhì)量檢測標準，進一步確保了產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定以及臨床用藥的安全、有效。

附圖說明

圖1是芒柄花素對照品HPLC色譜圖；

圖2是康婦靈膠囊樣品HPLC色譜圖；

圖3是康婦靈膠囊陰性樣品HPLC色譜圖。

具體實施方式

以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的介紹。

實施例1康婦靈膠囊中雞血藤的含量測定方法：照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥD高效液相色譜法測定：

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝35∶65為流動相，檢測波長為254nm；

對照品溶液的制備：取芒柄花素對照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素對照品的溶液，作為對照品溶液；

供試品溶液的制備：取本制劑裝量差異項下的內(nèi)容物5g，加80％甲醇50mL，水浴回流提取30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加80％甲醇10mL使其溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；

測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測定，即得。

實施例2康婦靈膠囊中雞血藤的含量測定方法：照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥD高效液相色譜法測定：

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝40∶70為流動相，檢測波長為250nm；

對照品溶液的制備：取芒柄花素對照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素對照品的溶液，作為對照品溶液；

供試品溶液的制備：取本制劑裝量差異項下的內(nèi)容物4g，加80％甲醇45mL，水浴回流提取50分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加80％甲醇10mL使其溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；

測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各15μL，注入高效液相色譜儀，測定，即得。

實施例3康婦靈膠囊中雞血藤的含量測定方法：照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥD高效液相色譜法測定：

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝40∶80為流動相，檢測波長為260nm；

對照品溶液的制備：取芒柄花素對照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素對照品的溶液，作為對照品溶液；

供試品溶液的制備：取本制劑裝量差異項下的內(nèi)容物3g，加80％甲醇40mL，水浴回流提取70分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加80％甲醇10mL使其溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；

測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL，注入高效液相色譜儀，測定，即得。

康婦靈膠囊含雞血藤以芒柄花素計,每1g不少于3.5mg。