一種中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒，包括試劑盒盒體，試劑盒盒體中裝有提取劑離心管、分散助提劑離心管、淋洗劑離心管和兩支一次性針管式過濾器；提取劑離心管和淋洗劑離心管為具塞螺旋蓋聚丙烯錐形底離心管，分散助提劑離心管為具塞螺旋蓋聚丙烯平底離心管；第一支一次性針管式過濾器由柱體塞、聚乙烯柱體和針頭塞構成，聚乙烯柱體內由上至下裝有上擋篩板、雙層填料、下?lián)鹾Y板；第二支一次性針管式過濾器由柱活塞、聚乙烯柱體和針頭式過濾器構成，針頭式過濾器內有濾膜。本實用新型具有構成合理、制作成本低、操作簡單、環(huán)境污染小、穩(wěn)定性好、抗干擾能力強等優(yōu)點，并能滿足減少溶劑使用量和提高提取效率的需求，便于推廣。
【專利說明】一種中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及食品安全【技術領域】，特別是涉及一種中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒。
【背景技術】
[0002]苯并(a)花(Benzo (a) Pyrene, B (a) P)是多環(huán)芳香族碳氫化合物中具有代表性的、國際公認的強致癌物質之一，通過呼吸道、消化道、皮膚等均可被人體或動物吸收，能夠導致人和動物的腫瘤和癌變，高劑量時甚至能夠引起免疫抑制，對健康造成潛在的威脅。常溫下呈淺黃色晶狀固體，分子式為C20H12，相對分子質量為252，沸點310_320°C，熔點179-180°C，易溶于環(huán)己烷、己烷、苯等有機溶劑，微溶于乙醇、甲醇，苯并(a)芘用360nm紫外光照射時，可產生典型的紫色熒光。
[0003]在中藥材中，其殘留主要是由于在加工過程中對原料反復烘烤、蒸炒，而溫度控制不當導致燒焦現(xiàn)象，生成苯并(a)芘，殘留在原料的外殼上。近年來，我國、歐盟和韓國等多國對食品中苯并(a)芘含量有嚴格的限量標準:中藥和糧食一般不超過5 μ g/kg。我國GB2762-2005《食品污染物限量》規(guī)定限量為10 μ g/kg。因此開展苯并(a)芘殘留量的檢測技術研究，對中藥材進行科學的風險評估與監(jiān)測十分重要。
[0004]苯并(a)芘檢測的難點在于有效的排除干擾，干擾包括使用試劑帶入和樣品基質中固有兩部分，試劑處理是苯并(a)芘檢測排除假陽性的一個關鍵性步驟，在一些試劑中曾發(fā)現(xiàn)苯并(a)芘含量甚至超過食品標準限量的現(xiàn)象，同時樣品前處理的結果將直接影響檢測結果的準確性和可靠性。
[0005]樣品前處理主要包括提取和凈化。已報道的關于苯并(a)芘的測定中，大多采用傳統(tǒng)的超聲輔助提取，以及液-液萃取法和固相萃取法提取樣品中目標物。這種方法消耗大量有毒有害的有機試劑，繁瑣費時，在萃取過程中容易產生大量乳化劑，影響萃取效率，并且需要專業(yè)的提取設備、成本高，難以在普通小型實驗室推廣，其應用范圍受到限制。
[0006]另夕卜，現(xiàn)行的國標GB/T5009.27-2003《食品中苯并(a)芘的測定》、GB/T22509-2008《動植物油脂苯并(a)芘的測定反相高效液相色譜法》和行業(yè)標準NY/T919-2004《飼料中苯并(a)芘的測定高效液相色譜法》、NY/T1666-2008《肉制品中苯并(a)芘的測定高效液相色譜法》等標準的檢測前處理方法均不適用于中藥材。因此，建立一種效果好、實際用量少、便捷快速且針對中藥材這一基質的前處理裝置迫在眉睫。
實用新型內容
[0007]本實用新型所要解決的技術問題是，提供一種提取效率高且可以有效去除雜質的中藥材中苯并(a)花檢測前處理試劑盒。
[0008]為了解決上述技術問題，本實用新型采用的技術方案是:一種中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒，包括試劑盒盒體，試劑盒盒體中裝有提取劑離心管、分散助提劑離心管、淋洗劑離心管和兩支一次性針管式過濾器，提取劑離心管和淋洗劑離心管為具塞螺旋蓋錐形底離心管，分散助提劑離心管為具塞螺旋蓋平底離心管，第一支一次性針管式過濾器由柱體塞、柱體和針頭塞構成，柱體內由上至下裝有上擋篩板、雙層填料、下?lián)鹾Y板；第二支一次性針管式過濾器由柱活塞、柱體和針頭式過濾器構成,針頭式過濾器內有濾膜；所述提取劑離心管中的提取劑和淋洗劑離心管中的淋洗劑為經活性炭重蒸的色譜純的環(huán)己烷，分散助提劑離心管中的分散助提劑為氯化鈉和無水硫酸鎂的白色粉末混合物，第一支一次性針管式過濾器中的填料為上層無水硫酸鈉、下層中性氧化鋁，并注入環(huán)己烷浸過填料的表面。
[0009]所述提取劑離心管、分散助提劑離心管和淋洗劑離心管為聚丙烯管，所述第一支一次性針管式過濾器和第二支一次性針管式過濾器為聚乙烯管。
[0010]所述提取劑離心管和淋洗劑離心管容量分別為20-50mL。
[0011]所述分散助提劑尚心管的容量為15_20mL。
[0012]所述第一支一次性針管式過濾器的柱體容量為50_70mL，第二支一次性針管式過濾器的柱體容量為10-30mL。
[0013]所述上擋篩板和下?lián)鹾Y板的篩孔大小為0.15-0.30 μ m。
[0014]所述針頭過濾器內有0.3-0.8 μ m的濾膜。
[0015]所述第一支一次性針管式過濾器中的環(huán)己烷液面高于上擋篩板5mm。
[0016]本實用新型的有益效果是:
[0017](I)制作過程簡單、無污染、室溫保存；
[0018](2)前處理過程僅需20分鐘左右，快速簡易，單份測定，所耗費用低；
[0019](3)提取劑為環(huán)己烷溶液，降低了提取溶劑的極性，對中藥材中苯并(a)芘具有高選擇性提取性，減少了含水類基質提取液中的水含量，減輕了后續(xù)的除水壓力；
[0020](4)分散助提劑中無水硫酸鎂在吸水的同時產熱，促進了目標化合物的萃??；，
[0021](5) —次性針管式過濾器中填料對中藥材中雜質具有有效的清除能力；
[0022]( 6 )本試劑盒構成簡單、合理，經濟實惠，有利于推廣使用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1是本實用新型中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒結構示意圖；
[0024]圖2是中藥材基質樣品用本實用新型提供的中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒處理后的空白譜圖；
[0025]圖3是中藥材基質樣品用本實用新型提供的苯并(a)芘檢測前處理試劑盒處理后的進樣分析的2.5 μ g/kg加標HPLC譜圖；
[0026]圖4是中藥材基質樣品用本實用新型提供的苯并(a)芘檢測前處理試劑盒處理后的進樣分析的5.0 μ g/kg加標HPLC譜圖；
[0027]圖5是苯并(a)芘標準曲線。
【具體實施方式】
[0028]下面結合附圖和【具體實施方式】對本實用新型作進一步詳細說明:
[0029]如圖1所示，本實用新型的中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒，試劑盒盒體，試劑盒盒體中裝有提取劑離心管1、分散助提劑離心管2、淋洗劑離心管3和兩支一次性針管式過濾器，提取劑離心管I和淋洗劑離心管3為具塞螺旋蓋錐形底離心管，分散助提劑離心管2為具塞螺旋蓋平底離心管,第一支一次性針管式過濾器4由柱體塞、柱體和針頭塞構成，柱體內由上至下裝有上擋篩板、雙層填料、下?lián)鹾Y板；第二支一次性針管式過濾器5由柱活塞、柱體和針頭式過濾器構成，針頭式過濾器內有濾膜；所述提取劑離心管I中的提取劑和淋洗劑離心管3中的淋洗劑為經活性炭重蒸的色譜純的環(huán)己烷，分散助提劑離心管2中的分散助提劑為氯化鈉和無水硫酸鎂的白色粉末混合物，第一支一次性針管式過濾器4中的填料為上層無水硫酸鈉、下層中性氧化鋁，并注入環(huán)己烷浸過填料的表面。
[0030]所述提取劑離心管1、分散助提劑離心管2和淋洗劑離心管3為聚丙烯管，所述第一支一次性針管式過濾器4和第二支一次性針管式過濾器5為聚乙烯管。
[0031]所述提取劑離心管I和淋洗劑離心管3容量分別為20_50mL。
[0032]所述分散助提劑尚心管2的容量為15_20mL。
[0033]所述第一支一次性針管式過濾器4的柱體容量為50_70mL，第二支一次性針管式過濾器5的柱體容量為10-30mL。
[0034]所述上擋篩板和下?lián)鹾Y板的篩孔大小為0.15-0.30 μ m。
[0035]所述針頭過濾器內有0.3-0.8 μ m的濾膜。
[0036]所述第一支一次性針管式過濾器4中的環(huán)己烷液面高于上擋篩板5mm。
[0037]為進一步了解本實用新型的技術內容、特征和作用，茲例舉以下實施例，并配合附圖詳細說明如下:
[0038]中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒，包括提取劑離心管1、分散助提劑離心管
2、淋洗劑離心管3、裝有填料的第一支一次性針管式過濾器4、含濾膜的第二支一次性針管式過濾器5。
[0039]優(yōu)選的，提取劑和淋洗劑裝在50mL具塞螺旋蓋聚丙烯錐形底離心管中，分散助提劑裝在20mL具塞螺旋蓋聚丙烯平底離心管中。
[0040]優(yōu)選的，提取劑為色譜純化學試劑，即經活性炭重蒸的環(huán)己烷。環(huán)己烷在色譜圖上出現(xiàn)了大量雜峰且有少量苯并(a)芘，故利用苯并(a)芘能被帶正電荷的吸附劑——活性炭吸附的特性，將環(huán)己烷中加入活性炭重蒸餾后再使用，試驗結果表明效果很好。
[0041]優(yōu)選的，分散助提劑為氯化鈉和無水硫酸鎂的白色粉末混合物。
[0042]優(yōu)選的，第一支一次性針管式過濾器4的柱體容量為70mL。
[0043]進一步地，第一支一次性針管式過濾器4由聚乙烯柱體塞、透明聚乙烯柱體和聚乙烯針頭塞構成，聚乙烯柱體內由上至下裝有0.22 μ m上擋篩板、雙層填料、0.22 μ m下?lián)鹾Y板。
[0044]進一步地，雙層填料上層是氯化鈉，下層是IV級中性氧化鋁粉末，其活度測定方法參照國家標準GB/T22509-2008《動植物油脂苯并(a)芘的測定反相高效液相色譜法》中附錄A0
[0045]優(yōu)選的，第二支一次性針管式過濾器5的柱體容量為10mL。
[0046]進一步地，針頭過濾器內有0.45 μ m的濾膜。
[0047]所述的試劑盒的制備:
[0048]所述的提取劑的制備:配制經活性炭重蒸的環(huán)己烷溶液25mL，轉移至50mL具塞螺旋蓋聚丙烯錐形底離心管中。[0049]所述的分散助提劑的制備:稱取2g氯化鈉和2g無水硫酸鎂充分混合，轉移至20mL具塞螺旋蓋聚丙烯平底離心管中。
[0050]所述的淋洗劑的制備:配制經活性炭重蒸的環(huán)己烷溶液50mL，轉移至50mL具塞螺
旋蓋聚丙烯錐形底離心管中。
[0051]所述的第一支一次性針管式過濾器制備:一次性針管式過濾器內裝有凈化填料，凈化填料為雙層，上層是5g氯化鈉，下層是30g IV級中性氧化鋁粉末。
[0052]所述的第一支一次性針管式過濾器填裝過程:現(xiàn)在柱體底部墊上一層0.22 μ m下?lián)鹾Y板，加入下層填料和上層填料，在填料上部再蓋上一層0.22 μ m上擋篩板，放入環(huán)己燒，液面聞于上擋篩板5mm左右。
[0053]所述的第二支一次性針管式過濾器可以把中藥材樣品溶液過濾后進入分析儀器如液相色譜儀進行測定。
[0054]本實用新型的具體應用實施:
[0055]1、取中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒，包括提取劑離心管、分散助提劑離心管、淋洗劑離心管和兩支一次性針管式過濾器。
[0056]2、將含苯并(a)芘的中藥材粉碎樣品和分散助提劑放入提取劑離心管中進行混合，充分振搖獲得混合溶液，14000r/min離心3min。取下第一支一次性針管式過濾器的柱體塞和柱頭塞，將上清液經過第一支一次性針管式過濾器，淋洗液也經過第一支一次性針管式過濾器自然滴出至錐形瓶中。將混合濾液在45°C水浴中旋轉蒸發(fā)至干，準確添加ImL乙腈溶解定容，充分混合后經過第二支一次性針管式過濾器過濾后存入進樣瓶中，供液相色譜儀進行測定，結果提取回收率達到75.2%-109.1%，符合測定要求。
[0057]3、以空白的中藥材基質樣品中，添加2.5 μ g/kg和5.0 μ g/kg的苯并(a)花標準溶液，同2項操作，樣品溶液注入液相色譜儀進行測定。
[0058]結果見圖2至圖5，圖2是中藥材基質樣品用本實用新型提供的中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒處理后的空白譜圖，圖3是中藥材基質樣品用本實用新型提供的苯并(a)芘檢測前處理試劑盒處理后的進樣分析的2.5 μ g/kg加標HPLC譜圖，圖4是中藥材基質樣品用本實用新型提供的苯并(a)芘檢測前處理試劑盒處理后的進樣分析的5.0 μ g/kg加標HPLC譜圖，圖5是苯并(a)芘標準曲線。
[0059]本實用新型提取效率高且可以有效去除雜質，用于快速前處理中藥材中苯并(a)芘，經該試劑盒處理后的樣品可以直接進行液相色譜儀檢測。中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒具有構成合理、制作成本低、操作簡單、環(huán)境污染小、穩(wěn)定性好、抗干擾能力強等優(yōu)點，并能滿足減少溶劑使用量和提高提取效率的需求，便于推廣。并為進一步整合并最終建立系統(tǒng)的苯并(a)芘測定的儀器分析前處理方法，提供參考和數(shù)據(jù)積累。
[0060]以上所述的實施例僅用于說明本實用新型的技術思想及特點，其目的在于使本領域內的技術人員能夠理解本實用新型的內容并據(jù)以實施，不能僅以本實施例來限定本實用新型的專利范圍，即凡本實用新型所揭示的精神所作的同等變化或修飾，仍落在本實用新型的專利范圍內。
【權利要求】
1.一種中藥材中苯并(a)花檢測前處理試劑盒，包括試劑盒盒體，其特征在于，試劑盒盒體中裝有提取劑離心管(I)、分散助提劑離心管(2)、淋洗劑離心管(3)和兩支一次性針管式過濾器，提取劑離心管(I)和淋洗劑離心管(3)為具塞螺旋蓋錐形底離心管，分散助提劑離心管(2)為具塞螺旋蓋平底離心管，第一支一次性針管式過濾器(4)由柱體塞、柱體和針頭塞構成，柱體內由上至下裝有上擋篩板、雙層填料、下?lián)鹾Y板；第二支一次性針管式過濾器(5)由柱活塞、柱體和針頭式過濾器構成，針頭式過濾器內有濾膜；所述提取劑離心管(I)中的提取劑和淋洗劑離心管(3)中的淋洗劑為經活性炭重蒸的色譜純的環(huán)己烷，分散助提劑離心管(2)中的分散助提劑為氯化鈉和無水硫酸鎂的白色粉末混合物，第一支一次性針管式過濾器(4)中的填料為上層無水硫酸鈉、下層中性氧化鋁，并注入環(huán)己烷浸過填料的表面。
2.根據(jù)權利要求1所述的中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒，其特征在于，所述提取劑離心管(I)、分散助提劑離心管(2)和淋洗劑離心管(3)為聚丙烯管，所述第一支一次性針管式過濾器(4)和第二支一次性針管式過濾器(5)為聚乙烯管。
3.根據(jù)權利要求1所述的中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒，其特征在于，所述提取劑離心管(I)和淋洗劑離心管(3)容量分別為20-50mL。
4.根據(jù)權利要求3所述的中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒，其特征在于，所述分散助提劑離心管(2)的容量為15-20mL。
5.根據(jù)權利要求4所述的中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒，其特征在于，所述第一支一次性針管式過濾器(4)的柱體容量為50-70mL，第二支一次性針管式過濾器(5)的柱體容量為10-30mL。
6.根據(jù)權利要求1或5所述的中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒，其特征在于，所述上擋篩板和下?lián)鹾Y板的篩孔大小為0.15-0.30 μ m。
7.根據(jù)權利要求1或5所述的中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒，其特征在于，所述一次性針管式過濾器內有0.3-0.8 μ m的濾膜。
8.根據(jù)權利要求1所述的中藥材中苯并(a)芘檢測前處理試劑盒，其特征在于，所述第一支一次性針管式過濾器(4)中的環(huán)己烷液面高于上擋篩板5mm。
【文檔編號】G01N1/34GK203732332SQ201420040528
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年1月22日 優(yōu)先權日:2014年1月22日
【發(fā)明者】崔穎, 章驊, 肖亞兵, 王偉, 陳文碩 申請人:天津出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心