Scn3a作為診斷動(dòng)脈導(dǎo)管閉合或開放的標(biāo)志物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及SCN3A作為診斷動(dòng)脈導(dǎo)管閉合或開放的標(biāo)志物。本發(fā)明用ITRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)的方法對(duì)開放和閉合的人動(dòng)脈導(dǎo)管組織進(jìn)行鑒定分析，篩選出132個(gè)有差異的蛋白，進(jìn)行信號(hào)通路分析后，挑選SCN3A蛋白，用Western Blot、Qrt-PCR和免疫組化三種方法進(jìn)行了鑒定，首次證明該蛋白在人動(dòng)脈導(dǎo)管組織中表達(dá)，并且該蛋白在閉合和開放的兩組動(dòng)脈導(dǎo)管組織具有明顯的差異，可能是調(diào)控動(dòng)脈導(dǎo)管閉合或開放的關(guān)鍵因子，可用于動(dòng)脈導(dǎo)管未閉的臨床診斷，且診斷的準(zhǔn)確度高。
【專利說明】SCN3A作為診斷動(dòng)脈導(dǎo)管閉合或開放的標(biāo)志物 【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及分子生物學(xué)及醫(yī)學(xué)的臨床診斷【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說，設(shè)及SCN3A作為 診斷動(dòng)脈導(dǎo)管閉合或開放的標(biāo)志物。 【【背景技術(shù)】】
[0002] 動(dòng)脈導(dǎo)管（化ctus arteriosus, DA)為胎兒時(shí)期降主動(dòng)脈和肺動(dòng)脈之間的正常通 道，正常新生兒生后10-1化可達(dá)到功能性關(guān)閉，3個(gè)月達(dá)解剖學(xué)上的關(guān)閉。如果DA關(guān)閉機(jī) 制異常，即為動(dòng)脈導(dǎo)管未閉（patent ductus arteriosus, PDA)。PDA是常見的先天性屯、臟 病，發(fā)病率在先天性屯、臟崎形中占第2位。早產(chǎn)兒因?yàn)樯笱跽T導(dǎo)DA收縮機(jī)制不成熟，且 DA對(duì)血管活性物質(zhì)的反應(yīng)敏感性下降，PDA的發(fā)病率較高，體重低于1750g的早產(chǎn)兒中45% 有PDA。及時(shí)關(guān)閉動(dòng)脈導(dǎo)管有助于改善缺氧，控制屯、臟衰竭，降低早產(chǎn)兒死亡率。
[0003] 動(dòng)脈導(dǎo)管未閉的臨床表現(xiàn)取決于主動(dòng)脈至肺動(dòng)脈分流血量的多少W及是否產(chǎn)生 繼發(fā)肺動(dòng)脈高壓和其程度。輕者可無明顯癥狀，重者可發(fā)生屯、力衰竭。常見的癥狀有勞累 后屯、惇、氣急、乏力，易患呼吸道感染和生長(zhǎng)發(fā)育遲緩。晚期肺動(dòng)脈高壓嚴(yán)重，產(chǎn)生逆向分流 時(shí)可出現(xiàn)下半身發(fā)組。動(dòng)脈導(dǎo)管未閉體檢時(shí)，典型的體征是胸骨左緣第2肋間聽到響亮的 連續(xù)性機(jī)器樣雜音，伴有震顫，肺動(dòng)脈第2音亢進(jìn)，但常被響亮的雜音所掩蓋。對(duì)于嬰幼兒 動(dòng)脈導(dǎo)管未閉合患者，僅可聽到收縮期雜音，或收縮期雜音亦消失而代之W肺動(dòng)脈瓣關(guān)閉 不全的舒張期雜音，診斷難度較大。因此提供診斷動(dòng)脈導(dǎo)管閉合或開放的標(biāo)志物是十分必 要的。
[0004] 電壓口控型鋼通道（voltage-gated sodium channels VGSC巧在腦興奮過程中發(fā) 揮重要角色，主要負(fù)責(zé)神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢坏漠a(chǎn)生與傳導(dǎo)，VGSCs是一個(gè)蛋白質(zhì)復(fù)合物，是由一 個(gè)a亞基和1個(gè)或多個(gè)P亞基（P 1?64)組成。目前已從哺乳動(dòng)物中鑒定出9個(gè)鋼通 道a亞基（Nayl. 1?化、1.9)，其中Nayl. 1、化、1.2、化、1.3、化、1.6主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中 表達(dá)，編碼該4種亞型的基因分別是SCN1A、SCN2A、SCN3A、SCN8A，該些基因在中樞神經(jīng)系統(tǒng) 中的表達(dá)及VGSCs的定位受到嚴(yán)格的調(diào)控。關(guān)于SCN3A作為診斷動(dòng)脈導(dǎo)管閉合或開放的標(biāo) 志物還未見報(bào)道。 【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0005] 本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供了 SCN3A蛋白或其特異性抗體的用 途。
[0006] 本發(fā)明的再一的目的是，提供一種用于診斷動(dòng)脈導(dǎo)管未閉合的試劑盒。
[0007] 本發(fā)明的另一的目的是，提供一種巧片或陣列。
[000引為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：
[0009] SCN3A蛋白在作為診斷動(dòng)脈導(dǎo)管開放或閉合的標(biāo)志物中的應(yīng)用。
[0010] SCN3A蛋白或其特異性抗體的用途，用于制備診斷動(dòng)脈導(dǎo)管未閉合的試劑或試劑 盒。
[0011] 為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：
[0012] 一種用于診斷動(dòng)脈導(dǎo)管未閉合的試劑盒，所述的試劑盒包含檢測(cè)SCN3A蛋白含量 的試劑和檢測(cè)e-actin蛋白含量的試劑。
[0013] 所述的檢測(cè)SCN3A蛋白含量的試劑為SCN3A蛋白的特異性抗體，所述的檢測(cè) 0 -actin蛋白含量的試劑為0 -actin蛋白的特異性抗體。
[0014] 為實(shí)現(xiàn)上述第S個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：
[0015] 一種巧片或陣列，所述的巧片或陣列上具有檢測(cè)SCN3A蛋白含量的試劑和檢測(cè) 0 -actin蛋白含量的試劑。
[0016] 所述的檢測(cè)SCN3A蛋白含量的試劑為SCN3A蛋白的特異性抗體，所述的檢測(cè) 0 -actin蛋白含量的試劑為0 -actin蛋白的特異性抗體。
[0017] 本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：
[001引本發(fā)明使用口RAQ蛋白質(zhì)組學(xué)的方法對(duì)開放和閉合的人動(dòng)脈導(dǎo)管組織進(jìn)行鑒 定分析，篩選出132個(gè)有差異的蛋白，通過信號(hào)通路分析，挑選出SCN3A蛋白，用Western Blot,化t-PCR和免疫組化S種方法進(jìn)行了鑒定，首次證明該蛋白在人動(dòng)脈導(dǎo)管組織中表， 并且該些蛋白在閉合和開放的兩組動(dòng)脈導(dǎo)管組織具有明顯的差異，可能是調(diào)控動(dòng)脈導(dǎo)管閉 合或開放的關(guān)鍵因子。本發(fā)明提供了一個(gè)用于區(qū)分閉合動(dòng)脈導(dǎo)管和未閉合動(dòng)脈導(dǎo)管的蛋白 標(biāo)志物SCN3A，利用該標(biāo)志物制備診斷動(dòng)脈導(dǎo)管未閉合的試劑、試劑盒、巧片和陣列。本發(fā)明 為有效判斷動(dòng)脈導(dǎo)管開放或閉合提供可靠的檢測(cè)手段。 【【專利附圖】

【附圖說明】】
[0019] 附圖1是閉合（Constricted)和開放（Patent)動(dòng)脈導(dǎo)管組織形態(tài)學(xué)的比較。
[0020] 附圖 2 是 SCN3A 蛋白的 western-blot 結(jié)果。
[002U 附圖3是SCN3A蛋白的RT-PCR結(jié)果。
[002引附圖4是SCN3A蛋白的免疫組化結(jié)果。 【【具體實(shí)施方式】】
[0023] 下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說明。下列實(shí)施例中未注 明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆；實(shí)驗(yàn)手冊(cè)（New York:Cold Spring Harbor L油oratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建 議的條件。
[0024] 實(shí)施例1 [002引一、材料和方法
[0026] 1. 1分離人動(dòng)脈導(dǎo)管組織
[0027] 根據(jù)國(guó)家衛(wèi)生部有關(guān)醫(yī)學(xué)倫理審查方法，本實(shí)驗(yàn)所有步驟和過程均獲得上海交通 大學(xué)醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)并與患者簽訂知情同意書。
[002引 開放（n = 10,年齡=30. 2 + 6. 3days)或閉合（n = 10,年齡=25. 3 + 7. 9days) 的動(dòng)脈導(dǎo)管組織取自于上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海兒童醫(yī)學(xué)中屯、手術(shù)過程中的動(dòng)脈導(dǎo) 管依賴的先天性屯、臟病患兒（患兒詳細(xì)信息見表1)。所有病人在手術(shù)前均使用前列腺素 E1，但閉合組的動(dòng)脈導(dǎo)管在手術(shù)前依然閉合了。所有樣本離體后，用生理鹽水沖洗數(shù)遍，分 成四部分，然后迅速凍存于液氮中。所有樣品的狀態(tài)（開放或閉合）均經(jīng)過屯、臟超聲和CT 確認(rèn)，并在手術(shù)過程加W確認(rèn)。
[0029] 表 1
[0030]
【權(quán)利要求】
1. SCN3A蛋白在作為診斷動(dòng)脈導(dǎo)管開放或閉合的標(biāo)志物中的應(yīng)用。 2. SCN3A蛋白或其特異性抗體的用途，其特征在于，用于制備診斷動(dòng)脈導(dǎo)管未閉合的試 劑或試劑盒。
3. -種用于診斷動(dòng)脈導(dǎo)管未閉合的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包含檢測(cè) SCN3A蛋白含量的試劑和檢測(cè)0 -actin蛋白含量的試劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的檢測(cè)SCN3A蛋白含量的試劑為 SCN3A蛋白的特異性抗體，所述的檢測(cè)0-actin蛋白含量的試劑為0-actin蛋白的特異性 抗體。
5. -種芯片或陣列，其特征在于，所述的芯片或陣列上具有檢測(cè)SCN3A蛋白含量的試 劑和檢測(cè)0 -actin蛋白含量的試劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的芯片或陣列，其特征在于，所述的檢測(cè)SCN3A蛋白含量的試劑 為SCN3A蛋白的特異性抗體，所述的檢測(cè)0-actin蛋白含量的試劑為0-actin蛋白的特 異性抗體。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104502601SQ201410723475
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年12月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月3日
【發(fā)明者】洪海筏, 劉錦紛, 葉霖財(cái) 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海兒童醫(yī)學(xué)中心