一種天麻靈芝顆粒的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種天麻靈芝顆粒的檢測方法，所述藥物主要由天麻、靈芝、制黃精、淫羊藿和制何首烏制備而成，所述檢測方法包括對顆粒中天麻、淫羊藿和/或靈芝的薄層色譜鑒別以及對天麻素和/或淫羊藿苷的含量測定。所述檢測方法準確，靈敏度高，重復(fù)性好，檢測結(jié)果穩(wěn)定，可有效檢測天麻靈芝顆粒的質(zhì)量，各檢測項標(biāo)準能保證藥物療效。
【專利說明】一種天麻靈芝顆粒的檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種天麻靈芝顆粒的檢測方法，屬于藥品技術(shù)的領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 肝腎功能不足，主要指肝腎陰虛。就是說精血虛少。這樣會出現(xiàn)頭暈，因腦藏髓， 為腎精所化，而血是神志活動的物質(zhì)基礎(chǔ)，故肝腎虛會大腦失養(yǎng)而頭暈。目干澀，因肝血和 腎精有養(yǎng)眼功能，所畏目得血而能視就是指有肝血和腎精的濡養(yǎng)，才能看到世上的一切。也 可能出現(xiàn)雙手振顫現(xiàn)象，因肝血和腎精對關(guān)節(jié)有營養(yǎng)和濡潤作用。也有可能會中風(fēng)，因肝腎 陰虛，則無力制陽，陽盛則易出現(xiàn)現(xiàn)在所說的腦血管意外現(xiàn)象。
[0003] 隨著高新技術(shù)的不斷發(fā)展以及我國人口的不斷增長，人們的生活節(jié)奏越來越快。 許多人將不可避免的出現(xiàn)肝腎不足引起的失眠，心悸，腰膝酸軟等癥狀，目前在遇到心慌心 悸、失眠多夢等神志不安的病癥時，發(fā)病機制尚不清楚，由于發(fā)病機制復(fù)雜，西醫(yī)多以鎮(zhèn)靜 劑和安眠藥等來治療；但這些藥物的不良反應(yīng)往往比較大，并且可能產(chǎn)生依賴作用。而中醫(yī) 應(yīng)對此類疾病時，往往可采用效果明顯且不良反應(yīng)較小的藥物。以天麻、靈芝、制黃精、淫羊 藿和制何首烏制成的天麻靈芝顆粒的藥物具有補益肝腎，養(yǎng)心安神的功效，本品還可用于 肝腎不足引起的失眠，頭暈，目眩，心悸，腰膝酸軟，體虛乏力。為了更好地控制該產(chǎn)品的質(zhì) 量，確保臨床藥效，本發(fā)明提供了這種藥物的檢測方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于，提供一種天麻靈芝顆粒的檢測方法；所述檢測方法準確，靈敏 度高，重復(fù)性好，結(jié)果可靠，能有效控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，確保藥物的臨床藥效。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案實現(xiàn)： 一種天麻靈芝顆粒的檢測方法，所述藥物由天麻50-150份、靈芝300-400份、制黃精300-400份、淫羊藿50-150份和制何首烏100-210份按照下述方法制備而成。
[0006] 具體地說，所述天麻靈芝顆粒的藥物，按照重量組份計算，由天麻100份、靈芝333 份、制黃精333份、淫羊藿100份和制何首烏167份制備而成。
[0007] 其制備方法為：根據(jù)配方稱取各藥物，用水煎煮提取，濾過，濾液濃縮至稠膏，干 燥，粉碎，制成顆粒； 具體地說，其制備方法為：顆粒劑這樣制備：按比例稱取天麻和靈芝加10倍的水煮2 小時,濾過,取黃精、淫羊藿、制首烏加入合煎,加水煎煮兩次,第一次2小時，加8倍量水，第 二次1小時，加6倍量水。濾過，合并三次濾液，濃縮至60°C相對密度為1. 30?1. 31的稠 膏，備用；加入糊精：蔗糖粉=5 :14混合均勻制軟材，迅速過14目篩進行制粒，于60°C干燥 箱內(nèi)干燥，16目篩整粒，制成lOOOg，即得。
[0008] 所述檢測方法包括鑒別方法和含量測定方法；所述鑒別方法包括對天麻、淫羊藿 和/或靈芝的薄層鑒別檢測；所述含量測定方法包括對天麻素和/或淫羊藿苷的含量測定。
[0009] 前述天麻靈芝顆粒的檢測方法中，所述天麻的鑒別方法為：取藥物顆粒Ig加15ml 水飽和的正丁醇超聲30min，濾過，濾液揮干，殘漁加水20ml溶解，加在已處理好的內(nèi)徑I. 5cm柱高16cm的DlOl型大孔樹脂柱上用水20ml洗脫，棄去洗脫液，再加20%乙醇25ml 洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加Iml甲醇作為供試品溶液；取天麻素對照品加甲醇制成Iml 含Img的溶液作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取上述三種溶液各10μ1， 分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯：甲醇：水=9 :1:0. 2為展開劑，展開取出晾干， 噴10%磷鑰酸乙醇溶液在105°C下加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位 置上，顯相同顏色斑點。
[0010] 前述天麻靈芝顆粒的檢測方法中，所述淫羊藿的鑒別方法為：取藥物顆粒2g加乙 醇30ml，回流30min，濾過，濾液揮干殘渣加水30ml溶解，乙醚振搖提取兩次每次20ml，棄去 乙醚液，再用乙酸乙酯20ml提取，取乙酸乙酯液蒸干，殘渣加無水乙醇Iml使溶解作為供試 品溶液；取淫羊藿對照藥材〇. 5g加乙醇20ml回流30min，濾過，濾液蒸干加無水乙醇lml， 作為對照藥材溶液；另取淫羊藿苷對照品加無水乙醇制成Iml含Img的對照品溶液；照中 國藥典薄層色譜法實驗，吸取上述三種溶液各5μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸 乙酯：丁酮：甲酸：水=10 :1 :1 :1為展開劑，展開取出晾干，噴三氯化鋁溶液在l〇5°C下加 熱5min，在紫外燈365nm下檢測；供試品色譜中，在與對照藥材色譜與對照品色譜相應(yīng)位置 上，顯相同顏色斑點。
[0011] 前述天麻靈芝顆粒的檢測方法中，所述靈芝的鑒別方法為：取藥物顆粒8g加60ml 乙醇回流30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇Iml溶解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥 材lg，加20ml乙醇，同法制得對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶 液各5μ1，分別點于同一娃膠G薄層板上，以石油醚60?90°C:甲酸乙酯：甲酸=10 :5 :1 上層液為展開劑，展開取出晾干，在紫外燈365nm下檢測；供試品色譜中，在與對照藥材色 譜色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點。
[0012] 前述天麻靈芝顆粒的檢測方法中，所述天麻素的含量檢測方法為：照中國藥典附 錄高效液相色譜法試驗： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以碳十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：0. 2%磷 酸=7 :93為流動相，檢測波長為220nm;理論板數(shù)按天麻素峰計算應(yīng)不低于7000 ; 對照品溶液的制備：精密稱取天麻素對照品2. 51mg，置10ml棕色量瓶中，加甲醇溶 解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取lml，置10ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖 勻，即得含天麻素〇. 025lmg/ml的對照品溶液； 供試品溶液的制備：取顆粒劑〇. 3g研細，精密稱定，置25ml量瓶中，加40%甲醇約 20ml，用功率150W，頻率50kHz的超聲處理30min，取出，放冷，用40%甲醇稀釋至刻度，搖 勻，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法：分別吸取對照品溶液和供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0013] 前述天麻靈芝顆粒的檢測方法中，所述淫羊藿苷的含量檢測方法為：照中國藥典 附錄高效液相色譜法試驗： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以以乙腈：水 =30 : 70為流動相，檢測波長為270nm;理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于1500 ; 對照品溶液的制備：精密稱取淫羊藿苷對照品5. 13mg置IOml容量瓶中，加甲醇至刻 度，制成每Iml含0.513mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備：取顆粒劑0.6g研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 25ml，超聲處理40min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0. 45μm微孔濾膜濾過，取續(xù) 濾液，即得； 測定法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定，即 得。
[0014] 前述天麻靈芝顆粒的檢測方法中，所述藥物這樣檢測： 性狀：棕色至棕褐色的顆粒，味先甜后苦； 鑒別：（1)取藥物顆粒Ig加15ml水飽和的正丁醇超聲30min，濾過，濾液揮干，殘渣加 水20ml溶解，加在已處理好的內(nèi)徑I. 5cm柱高16cm的DlOl型大孔樹脂柱上用水20ml洗 脫，棄去洗脫液，再加20%乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加Iml甲醇作為供試品溶 液；取天麻素對照品加甲醇制成Iml含Img的溶液作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜 法實驗，吸取上述三種溶液各10μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯：甲醇：水 =9 :1:0. 2為展開劑，展開取出晾干，噴10%磷鑰酸乙醇溶液在105°C下加熱至斑點清晰；供 試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點。
[0015] (2)取藥物顆粒2g加乙醇30ml，回流30min，濾過，濾液揮干殘漁加水30ml溶解， 乙醚振搖提取兩次每次20ml，棄去乙醚液，再用乙酸乙酯20ml提取，取乙酸乙酯液蒸干， 殘渣加無水乙醇Iml使溶解作為供試品溶液；取淫羊藿對照藥材0. 5g加乙醇20ml回流 30min，濾過，濾液蒸干加無水乙醇lml，作為對照藥材溶液；另取淫羊藿苷對照品加無水乙 醇制成Iml含Img的對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取上述三種溶液各5μ1， 分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水=10 :1 :1 :1為展開劑，展開取 出晾干，噴三氯化鋁溶液在l〇5°C下加熱5min，在紫外燈365nm下檢測；供試品色譜中，在與 對照藥材色譜與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點。
[0016] (3)取藥物顆粒8g加60ml乙醇回流30min，濾過，濾液蒸干，殘漁加甲醇Iml溶 解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥材lg，加20ml乙醇，同法制得對照藥材溶液；照中國 藥典薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各5μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚 60?90°C:甲酸乙酯：甲酸=10 :5 :1上層液為展開劑，展開取出晾干，在紫外燈365nm下檢 測；供試品色譜中，在與對照藥材色譜色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點。
[0017] 檢查：應(yīng)符合《中國藥典》顆粒劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定：（1)天麻素：照中國藥典附錄高效液相色譜法試驗： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以碳十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：〇. 2%磷 酸=7 :93為流動相，檢測波長為220nm;理論板數(shù)按天麻素峰計算應(yīng)不低于7000 ; 對照品溶液的制備：精密稱取天麻素對照品2. 51mg，置10ml棕色量瓶中，加甲醇溶 解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取lml，置10ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖 勻，即得含天麻素〇. 〇251mg/ml的對照品溶液，即得； 供試品溶液的制備：取顆粒劑〇. 3g研細，精密稱定，置25ml量瓶中，加40%甲醇約 20ml，用功率150W，頻率50kHz的超聲處理30min，取出，放冷，用40%甲醇稀釋至刻度，搖 勻，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法：分別吸取對照品溶液和供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定，即得； (2)淫羊藿苷：照中國藥典附錄高效液相色譜法試驗： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以以乙腈：水 =30 : 70為流動相，檢測波長為270nm;理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于1500 ; 對照品溶液的制備：精密稱取淫羊藿苷對照品5. 13mg置IOml容量瓶中，加甲醇至刻 度，制成每Iml含0. 513mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備：取顆粒劑0.6g研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 25ml，超聲處理40min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0. 45μm微孔濾膜濾過，取續(xù) 濾液，即得； 測定法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定，即 得。
[0018] 發(fā)明人進行了大量的實驗，以下是本發(fā)明所述檢測方法的研究 實驗例：檢測方法研究 (一） 樣品及對照品來源 1、樣品：天麻，靈芝，制黃精，淫羊霍和制何首烏。
[0019] 顆粒劑：按照本發(fā)明所述顆粒劑制備方法進行制備，天麻素(批號 ： 110807-200205);淫羊藿苷（批號：110737-200415)。
[0020]2、對照品：天麻對照藥材(批號：120944-200608);淫羊藿對照藥材(批號： 110737-200912));靈芝對照藥材（批號：120968-200906) (二） 鑒別。
[0021] 1、天麻的薄層鑒別： (1)供試品溶液的制備：取天麻靈芝顆粒Ig加15ml水飽和的正丁醇超聲30min，濾過， 濾液揮干，殘渣加水20ml溶解，加在已處理好的DlOl型大孔樹脂柱上（內(nèi)徑I. 5cm柱高 16cm)用水20ml洗脫，棄去洗脫液，再加20%乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇 Iml作為供試品溶液。
[0022] 對照品溶液的制備：取天麻素對照品加甲醇制成Iml含Img的溶液作為對照品溶 液。
[0023] 對照藥材溶液的制備：取天麻對照藥材Ig加20ml水水浴回流30min，濾過，濾液 蒸干，殘渣加乙醚25ml振搖提取，棄去乙醚液，水層用正丁醇振搖提取，取正丁醇液蒸干， 殘渣加甲醇lml，作為對照藥材溶液。
[0024] 陰性對照溶液的制備：按照處方制作缺乏天麻藥材的顆粒，再按照供試品的制作 方法制成陰性對照溶液。
[0025] 薄層色譜層析條件：吸取上述四種溶液各10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以 乙酸乙酯-甲醇-水（9 :1:0. 2)為展開劑，展開取出晾干，噴10%磷鑰酸乙醇溶液在105°C 下加熱至斑點清晰，供試品，對照藥材與對照品在相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點。結(jié)果見圖1。 結(jié)果表明，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上均顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，與原劑 型的鑒別結(jié)果一致，故列入質(zhì)量標(biāo)準正文。由于對照藥材的提取方法與供試品溶液的制備 方法不一致，故不列入標(biāo)準中。見圖1。
[0026] 2、淫羊藿的薄層鑒別： (1)供試品溶液的制備：取天麻靈芝顆粒2g加乙醇30ml，回流30min，濾過，濾液揮干 殘渣加水30ml溶解，乙醚振搖提取兩次每次20ml，棄去乙醚液，再用乙酸乙酯20ml提取，取 乙酸乙酯液蒸干，殘渣加無水乙醇Iml使溶解作為供試品溶液。
[0027] 對照品溶液的制備：取淫羊藿苷對照品加無水乙醇制成Iml含Img的溶液，作為對 照品溶液。
[0028] 對照藥材溶液的制備：對照藥材0. 5g加乙醇20ml回流30min，濾過，濾液蒸干加 無水乙醇lml，作為對照藥材溶液。
[0029] 陰性對照溶液的制備：按照處方制作缺乏淫羊藿藥材的顆粒，再按照供試品的制 作方法制成陰性對照溶液。
[0030] 薄層色譜層析條件：照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄VIB)實驗，吸取 上述四種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10 :1 : I: 1)為展開劑，展開取出晾干，噴三氯化鋁溶液在l〇5°C下加熱5min，在紫外燈365nm下檢 測，供試品，對照藥材與對照品在相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點。結(jié)果見圖2。結(jié)果表明，在與 對照藥材色譜、對照品色譜相應(yīng)的位置上均顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，故列入質(zhì) 量標(biāo)準正文。見圖2。
[0031] 3、靈芝的薄層鑒別： 供試品溶液的制備：取天麻靈芝顆粒8g加60ml乙醇回流30min，濾過，濾液蒸干，殘漁 加甲醇Iml溶解，作為供試品溶液。
[0032] 對照藥材溶液的制備：取天麻對照藥材lg，加20ml乙醇回流30min，濾過，濾液蒸 干，殘渣加甲醇Iml溶解，作為供試品溶液。
[0033] 陰性對照溶液的制備：取天麻藥材的陰性樣品8g，同法制成陰性對照溶液。
[0034] 薄層色譜層析條件：照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄VIB)實驗，吸取 上述三種溶液各5μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60~90°C)_甲酸乙酯-甲 酸（10 :5 :1)上層液為展開劑，展開取出晾干，在紫外燈365nm下檢測，供試品，對照藥材在 相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點，陰性對照無干擾，故列入質(zhì)量標(biāo)準正文。結(jié)果見圖3。
[0035](三）含量測定： 天麻素 1方法：（1)儀器與試藥：WAT-GZ050926CWJ型WATERS高效液相色譜儀(美國WATERS公 司）；SPD-20A紫外-可見檢測器，waters2487 ;515HPLC pumpJJW-3KV精密凈化穩(wěn)壓電源 (東方集團易事務(wù)公司）；7725型手動進樣；HT-200A型柱溫箱；AE240型電子天平（上海梅 特勒儀器有限公司）；SK8210HP型超聲波清洗機(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司，功率250W， 頻率33kHz);乙腈(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號：20130416);甲醇(天津市科密 歐化學(xué)試劑有限公司，批號：20130417)均為色譜純；水為娃哈哈純凈水(批號：20130316); 磷酸(重慶川江化學(xué)試劑廠，批號=20130725)。天麻素（中國藥品生物制品檢定所，批號： 110807-200205)。
[0036](2)色譜條件：色譜柱：Kromasil C18柱（4.6 mm x250 mm)，流動相：乙腈-〇· 2% 磷酸（7 :93)，流速：I. 0 mL/min;柱溫：28?;檢測波長：220nm ;理論塔板數(shù)：以天麻素 計不低于5000。
[0037] (3)檢測波長的選擇 參考《中國藥典》2010年版天麻藥材含量測定項下天麻素測定方法，檢測波長為 220nm，故按法定標(biāo)準選擇220nm為檢測波長。
[0038] (4)系統(tǒng)適用性試驗 取供試品溶液，天麻素對照品溶液及缺天麻陰性對照溶液，照色譜條件項下色譜條 件，各進樣10μL，測得HPLC圖譜，見圖4。圖譜表明陰性對照溶液色譜峰不干擾供試 品溶液色譜峰中的天麻素峰，即本試驗條件下天麻素與其他組分分離完全，分離度遠大于 1. 5,根據(jù)不同色譜柱比較結(jié)果，理論塔板數(shù)以野黃芩苷峰計，應(yīng)不低于5000。見圖4-圖6。
[0039] 2線性關(guān)系考察： (1)對照品儲備液的制備 精密稱取天麻素對照品2. 51mg，置IOml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度， 搖勻，精密量取lml，置IOml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每Iml中含天麻素 0·0251mg)。
[0040] (2)標(biāo)準曲線的繪制 分別精密吸取2，4,6,8，10，12 PL對照品溶液注入液相色譜儀中，記錄色譜，以峰面 積A對進樣量C (Pg)進行線性回歸，得線性回歸方程：y=l. 6Ε+6x-16711(r=0. 9996)。線 性范圍：0. 0502?0. 3012Pg。結(jié)果見表1、圖7。

【權(quán)利要求】
1. 一種天麻靈芝顆粒的檢測方法，其特征在于：所述藥物由天麻50-150份、靈芝 300-400份、制黃精300-400份、淫羊藿50-150份和制何首烏100-210份按照下述方法制備 而成：根據(jù)配方稱取各藥物，用水煎煮提取，濾過，濾液濃縮至稠膏，干燥，粉碎，制成顆粒； 所述檢測方法包括鑒別方法和含量測定方法；所述鑒別方法包括對天麻、淫羊藿和/或靈 芝的薄層鑒別檢測；所述含量測定方法包括對天麻素和/或淫羊藿苷的含量測定。
2. 如權(quán)利要求1所述天麻靈芝顆粒的檢測方法，其特征在于：所述天麻的鑒別方法為： 取藥物顆粒lg加15ml水飽和的正丁醇超聲30min，濾過，濾液揮干，殘漁加水20ml溶解，力口 在已處理好的內(nèi)徑1. 5cm柱高16cm的D101型大孔樹脂柱上用水20ml洗脫，棄去洗脫液， 再加20%乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加 lml甲醇作為供試品溶液；取天麻素對 照品加甲醇制成lml含lmg的溶液作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取上述 三種溶液各10 U 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯：甲醇：水=9 :1:0. 2為展開 齊U，展開取出晾干，噴10%磷鑰酸乙醇溶液在l〇5°C下加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與 對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點。
3. 如權(quán)利要求1所述天麻靈芝顆粒的檢測方法，其特征在于：所述淫羊藿的鑒別方法 為：取藥物顆粒2g加乙醇30ml，回流30min，濾過，濾液揮干殘渣加水30ml溶解，乙醚振搖 提取兩次每次20ml，棄去乙醚液，再用乙酸乙酯20ml提取，取乙酸乙酯液蒸干，殘渣加無水 乙醇lml使溶解作為供試品溶液；取淫羊藿對照藥材0. 5g加乙醇20ml回流30min，濾過， 濾液蒸干加無水乙醇lml，作為對照藥材溶液；另取淫羊藿苷對照品加無水乙醇制成lml含 lmg的對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取上述三種溶液各5 yl，分別點于同一 硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水=10 :1 :1 :1為展開劑，展開取出晾干，噴三氯 化鋁溶液在l〇5°C下加熱5min，在紫外燈365nm下檢測；供試品色譜中，在與對照藥材色譜 與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點。
4. 如權(quán)利要求1所述天麻靈芝顆粒的檢測方法，其特征在于：所述靈芝的鑒別方法為： 取藥物顆粒8g加60ml乙醇回流30min，濾過，濾液蒸干，殘漁加甲醇lml溶解，作為供試品 溶液；另取靈芝對照藥材lg，加20ml乙醇，同法制得對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法 實驗，吸取上述兩種溶液各5 y 1，分別點于同一娃膠G薄層板上，以石油醚60?90°C:甲酸 乙酯：甲酸=10 :5 :1上層液為展開劑，展開取出晾干，在紫外燈365nm下檢測；供試品色譜 中，在與對照藥材色譜色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點。
5. 如權(quán)利要求1所述天麻靈芝顆粒的檢測方法，其特征在于：所述天麻素的含量檢測 方法為：照中國藥典附錄高效液相色譜法試驗： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以碳十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：0. 2%磷 酸=7 :93為流動相，檢測波長為220nm ;理論板數(shù)按天麻素峰計算應(yīng)不低于7000 ; 對照品溶液的制備：精密稱取天麻素對照品2. 51 mg，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇溶 解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取lml，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖 勻，即得含天麻素〇. 025 lmg/ml的對照品溶液； 供試品溶液的制備：取顆粒劑〇. 3g研細，精密稱定，置25ml量瓶中，加40%甲醇約 20ml，用功率150W，頻率50kHz的超聲處理30min，取出，放冷，用40%甲醇稀釋至刻度，搖 勻，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法：分別吸取對照品溶液和供試品溶液各10 U 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
6. 如權(quán)利要求1所述天麻靈芝顆粒的檢測方法，其特征在于：所述淫羊藿苷的含量檢 測方法為：照中國藥典附錄高效液相色譜法試驗： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以以乙腈：水 =30 : 70為流動相，檢測波長為270nm ;理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于1500 ; 對照品溶液的制備：精密稱取淫羊藿苷對照品5. 13mg置10ml容量瓶中，加甲醇至刻 度，制成每lml含0. 513mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備：取顆粒劑0.6 g研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 25ml，超聲處理40min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0. 45 ii m微孔濾膜濾過，取續(xù) 濾液，即得； 測定法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 U 1，注入液相色譜儀，測定，即 得。
7. 如權(quán)利要求1所述天麻靈芝顆粒的檢測方法，其特征在于：所述藥物這樣檢測： 性狀：棕色至棕褐色的顆粒，味先甜后苦； 鑒別：（1)取藥物顆粒lg加15ml水飽和的正丁醇超聲30min，濾過，濾液揮干，殘渣加 水20ml溶解，加在已處理好的內(nèi)徑1. 5cm柱高16cm的D101型大孔樹脂柱上用水20ml洗 脫，棄去洗脫液，再加20%乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加 lml甲醇作為供試品溶 液；取天麻素對照品加甲醇制成lml含lmg的溶液作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜 法實驗，吸取上述三種溶液各10 Ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯：甲醇：水 =9 :1:0. 2為展開劑，展開取出晾干，噴10%磷鑰酸乙醇溶液在105°C下加熱至斑點清晰；供 試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點； (2) 取藥物顆粒2g加乙醇30ml，回流30min，濾過，濾液揮干殘漁加水30ml溶解，乙醚 振搖提取兩次每次20ml，棄去乙醚液，再用乙酸乙酯20ml提取，取乙酸乙酯液蒸干，殘渣加 無水乙醇lml使溶解作為供試品溶液；取淫羊藿對照藥材0. 5g加乙醇20ml回流30min， 濾過，濾液蒸干加無水乙醇lml，作為對照藥材溶液；另取淫羊藿苷對照品加無水乙醇制成 lml含lmg的對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法實驗，吸取上述三種溶液各5 yl，分別點 于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水=10 :1 :1 :1為展開劑，展開取出晾干， 噴三氯化鋁溶液在105°C下加熱5min，在紫外燈365nm下檢測；供試品色譜中，在與對照藥 材色譜與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點； (3) 取藥物顆粒8g加60ml乙醇回流30min，濾過，濾液蒸干，殘漁加甲醇lml溶解，作 為供試品溶液；另取靈芝對照藥材lg，加20ml乙醇，同法制得對照藥材溶液；照中國藥典薄 層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各5 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚60? 90°C:甲酸乙酯：甲酸=10 :5 :1上層液為展開劑，展開取出晾干，在紫外燈365nm下檢測；供 試品色譜中，在與對照藥材色譜色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點； 檢查：應(yīng)符合《中國藥典》顆粒劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定：（1)天麻素：照中國藥典附錄高效液相色譜法試驗： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以碳十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：0. 2%磷 酸=7 :93為流動相，檢測波長為220nm ;理論板數(shù)按天麻素峰計算應(yīng)不低于7000 ; 對照品溶液的制備：精密稱取天麻素對照品2. 51 mg，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇溶 解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取lml，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖 勻，即得含天麻素〇. 〇251mg/ml的對照品溶液，即得； 供試品溶液的制備：取顆粒劑〇. 3g研細，精密稱定，置25ml量瓶中，加40%甲醇約 20ml，用功率150W，頻率50kHz的超聲處理30min，取出，放冷，用40%甲醇稀釋至刻度，搖 勻，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法：分別吸取對照品溶液和供試品溶液各10 U 1，注入液相色譜儀，測定，即得； (2)淫羊藿苷：照中國藥典附錄高效液相色譜法試驗： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以以乙腈：水 =30 : 70為流動相，檢測波長為270nm ;理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于1500 ; 對照品溶液的制備：精密稱取淫羊藿苷對照品5. 13mg置10ml容量瓶中，加甲醇至刻 度，制成每lml含0. 513mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備：取顆粒劑0.6 g研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 25ml，超聲處理40min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0. 45 ii m微孔濾膜濾過，取續(xù) 濾液，即得； 測定法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 U 1，注入液相色譜儀，測定，即 得。
【文檔編號】G01N30/02GK104483435SQ201410722096
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月3日
【發(fā)明者】張永萍, 徐劍, 吳靜瀾, 劉莉, 王海洋, 劉耀 申請人:貴陽德昌祥藥業(yè)有限公司