一種蜂蜜中揮發(fā)性成分的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于測試領(lǐng)域，提出了一種蜂蜜中揮發(fā)性成分的檢測方法，包括以下步驟：(1)稱取蜂蜜樣品置于的頂空瓶內(nèi)，將固相微萃取裝置的萃取頭插入頂空瓶中；(2)自動熱脫附系統(tǒng)的控制條件為：起始溫度為35℃，保持1min，延遲3min；(3)氣相色譜條件：毛細(xì)管色譜柱初始溫度40℃，保持2min，進(jìn)樣口溫度250℃；(4)質(zhì)譜檢測，進(jìn)行揮發(fā)性成分的定性與定量檢測。本發(fā)明采用頂空固相微萃取技術(shù)和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對其揮發(fā)性成分進(jìn)行分析。本發(fā)明提出的方法，使蜂蜜揮發(fā)性成分的萃取效率和分析結(jié)果的準(zhǔn)確性大為提高，可為揭示不同蜂蜜樣品揮發(fā)性成分的整體信息，為蜂蜜的真實(shí)性評價提供一定理論基礎(chǔ)。
【專利說明】一種蜂蜜中揮發(fā)性成分的檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于測試領(lǐng)域，具體涉及一種利用色譜法將蜂蜜分離成各個組分后進(jìn)行定 性和定量分析的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 蜂蜜是由蜜蜂(Apis mellifera)采集蜜源植物的花蜜或蜜露后，將其貯存于蜂巢 內(nèi)的巢脾中，并經(jīng)充分釀造而成的。成熟蜂蜜是一種具有濃郁花香味的天然甜物質(zhì)，自古至 今，因其具有較高的營養(yǎng)價值而被人們廣泛食用。一般情況下，蜂蜜的風(fēng)味決定于其中的揮 發(fā)性成分，其主要源自蜜蜂所采集的花蜜或蜜露，故不同蜜源蜂蜜的揮發(fā)性成分組成差異 很大。另外，蜂蜜中的揮發(fā)性成分還可能受到了蜜蜂自身、熱加工或儲存方式的影響。
[0003] 目前為止，已有超過400種物質(zhì)從不同蜂蜜的揮發(fā)性組分中鑒別出來，另因蜂蜜 品種繁多，新發(fā)現(xiàn)的揮發(fā)性成分依然在持續(xù)增加。某些特定蜜源蜂蜜中的典型揮發(fā)性成分， 即特征標(biāo)記物質(zhì)已被廣泛鑒別出。并且，這種研究模式也應(yīng)用到了鑒別特定地區(qū)蜂蜜的標(biāo) 記物質(zhì)，如1-戊烯-3-醇可作為英國地區(qū)蜂蜜的特征揮發(fā)性成分。但是，利用單一揮發(fā)性組 分區(qū)別不同來源的蜂蜜顯然比較困難，大多數(shù)蜂蜜的風(fēng)味形成依賴于其中的一組揮發(fā)性物 質(zhì)。例如，糠硫醇、苯甲醇、-辛醇內(nèi)酯、-癸內(nèi)酯、丁香油酚、苯甲酸、異戊酸、苯乙醇和4-甲 氧基苯酚均對巴西的腰果（Anacardiumoccidentale)蜂蜜風(fēng)味具有重要影響。值得注意的 是，苯乙醇是香料工業(yè)中的一種重要增香物質(zhì)，其可用以產(chǎn)生花香、辛香和藥香等。有報道 稱，苯乙醇是鍛樹（Tiliatuan)蜂蜜的重要風(fēng)味物質(zhì)，然而，Radovic等僅在4個鍛樹蜂蜜 樣品中的2個檢測到了苯乙醇，其最終研究結(jié)論認(rèn)為該椴樹蜂蜜樣品的特征揮發(fā)性組分應(yīng) 為2-甲基呋喃、-松油烯、-環(huán)氧菔烷、甲基異丙基苯、芳香烴和4-甲基苯乙酮等物質(zhì)。
[0004] 雖然蜂蜜的揮發(fā)性成分主要決定于其蜜源種類，但是揮發(fā)性成分的萃取和鑒定技 術(shù)對研究結(jié)果也會產(chǎn)生較大影響。目前，揮發(fā)性成分的萃取技術(shù)主要有同時蒸餾萃取法、動 態(tài)頂空萃取法、靜態(tài)頂空萃取法、超聲波輔助萃取法、水蒸餾法、溶劑萃取法和固相微萃取 法等，其中的部分技術(shù)可適用于蜂蜜中揮發(fā)性成分的萃取。以上方法各有利弊，如水蒸餾法 比較耗時，尤其是當(dāng)研究樣品量較大時更為明顯；溶劑萃取法中去除溶劑的過程易造成揮 發(fā)性成分的損失；同時蒸餾萃取法中的加熱程序會導(dǎo)致人工副產(chǎn)物的形成，如加熱會造成 蜂蜜中糖分的降解。利用以上技術(shù)萃取蜂蜜中的揮發(fā)性成分，除上述弊端外，還應(yīng)考慮其揮 發(fā)性成分的濃度非常低，萃取前應(yīng)盡可能去除蜂蜜中的主要成分一糖的影響。因此，頂空 萃取法顯然比較合適，經(jīng)前人對其進(jìn)行大量的技術(shù)改進(jìn)，降低了不利狀況的影響，使其萃取 物更加接近于蜂蜜揮發(fā)性組分的真實(shí)情況。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對本領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處，本發(fā)明的目的是提出一種纖維素接枝環(huán)糊 精高分子吸水樹脂的合成方法。
[0006] 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案為：
[0007] -種蜂蜜中揮發(fā)性成分的檢測方法，包括以下步驟：
[0008] (1)稱取蜂蜜樣品置于頂空瓶內(nèi)，加入內(nèi)標(biāo)物2-甲基-3-庚酮，并加入飽和NaCl 溶液；45_55°C下將頂空瓶于磁力攪拌器上混勻；將固相微萃取裝置的萃取頭插入頂空瓶 中，推出萃取頭的石英纖維后50°C吸附30-45min。
[0009] (2)將固相微萃取裝置的萃取頭插入氣相色譜儀的進(jìn)樣孔，推出萃取頭的石英纖 維；自動熱脫附系統(tǒng)條件：起始溫度為35°C，保持lmin，延遲3min ;以60°C /min的速度升 溫至220°C，保持lmin，熱脫附系統(tǒng)與進(jìn)樣口之間傳輸線溫度為300°C。
[0010] ⑶氣相色譜條件：毛細(xì)管色譜柱初始溫度40°c，保持2min，以4°C /min升溫到 160°C，保持 2min，再以 KTC /min 升至 250°C，保持 5min。進(jìn)樣 口溫度 250°C;對 5-27min 之 間出現(xiàn)的色譜峰進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。
[0011] 使用本發(fā)明的方法，各組分色譜峰分離完全，較少出現(xiàn)粘連現(xiàn)象。色譜分析過程 中，蜂蜜樣品揮發(fā)性成分的色譜峰最早出現(xiàn)于5min，最遲出現(xiàn)于27min，整個分析過程持續(xù) 22min左右。
[0012] (4)質(zhì)譜條件電子轟擊（EI)離子源，離子源溫度為200°C，電子能量為70eV，傳輸 線溫度為280°C，四級桿溫度為150°C，溶劑延遲5min，質(zhì)量掃描范圍為m/z 30-500,進(jìn)行揮 發(fā)性成分的定性與定量檢測。
[0013] 優(yōu)選地，步驟（1)中，所述頂空固相微萃取條件蜂蜜揮發(fā)性成分萃取前，先將固相 微萃取裝置的萃取頭插入氣相色譜注射孔中，270°c下老化處理50-80min。
[0014] 步驟（1)中，稱取蜂蜜樣品7_9g置于IOOmL的頂空瓶內(nèi)。
[0015] 固相微萃?。⊿PME)裝置由手柄（Holder)和萃取頭兩部分構(gòu)成。萃取頭是一根外 套不銹鋼細(xì)管的Icm長、涂有不同色譜固定相或吸附劑的熔融石英纖維，石英纖維在不銹 鋼管內(nèi)可自由伸縮，用于萃取、吸附樣品；手柄用于安裝或固定萃取頭。
[0016] 其中，步驟（1)中，內(nèi)標(biāo)物2-甲基-3-庚酮用正丁烷溶解，濃度為1. 5-1. 8 μ g/mL， 加入1 μ L的該內(nèi)標(biāo)物溶液，并加入IOmL的飽和NaCl溶液。
[0017] 其中，步驟（2)中，氣相色譜儀內(nèi)附的冷進(jìn)樣系統(tǒng)條件為：初始溫度-KKTC，平衡 0. 5min，以 10°C /min 的速度升溫至 280°C，保持 0. 5min。
[0018] 其中，步驟（3)中，載氣為氦氣，流速I. 5mL/min，不分流。載氣的壓力可控制為 10-15psi,
[0019] 本發(fā)明中，揮發(fā)性成分的定性主要通過2種途徑，二者相互印證提高了目標(biāo)化合 物定性的準(zhǔn)確性。
[0020] 步驟（4)中，利用數(shù)據(jù)庫檢索目標(biāo)化合物，進(jìn)行定性分析；所述數(shù)據(jù)庫為本領(lǐng)域可 獲得的資源，例如NIST2.0。
[0021] 或者，步驟（4)中，采用相同條件對正構(gòu)系列烷烴C8-C27進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián) 用儀分析，利用色譜峰的保留時間計算目標(biāo)相應(yīng)化合物的保留指數(shù)LRI值，并與已知的LRI 值比對認(rèn)定范圍為相差0-100內(nèi)，實(shí)現(xiàn)化合物的輔助定性。色譜峰LRI值計算公式：

【權(quán)利要求】
1. 一種蜂蜜中揮發(fā)性成分的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟： ⑴稱取蜂蜜樣品置于的頂空瓶內(nèi)，加入內(nèi)標(biāo)物2-甲基-3-庚酮，并加入飽和NaCl溶 液；45-55°C下將頂空瓶于磁力攪拌器上混勻，將固相微萃取裝置的萃取頭插入頂空瓶中， 推出萃取頭的石英纖維后50°C吸附30-45min ; (2) 將固相微萃取裝置的萃取頭插入氣相色譜儀的進(jìn)樣孔，推出萃取頭的石英纖維； 自動熱脫附系統(tǒng)的控制條件為：起始溫度為35°C，保持lmin，延遲3min ;以60°C /min的速 度升溫至220°C，保持lmin，熱脫附系統(tǒng)與進(jìn)樣口之間傳輸線溫度為300°C ; (3) 氣相色譜條件：毛細(xì)管色譜柱初始溫度40°C，保持2min，以4°C /min升溫到160°C， 保持2min，再以KTC /min升至250°C，保持5min ;進(jìn)樣口溫度250°C ; 對5-27min之間出現(xiàn)的色譜峰進(jìn)行質(zhì)譜鑒定； (4) 質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源，離子源溫度為200°C，電子能量為70eV，傳輸線溫度為 280°C，四級桿溫度為150°C，溶劑延遲5min，質(zhì)量掃描范圍為m/z 30-500,進(jìn)行揮發(fā)性成分 的定性與定量檢測。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟（1)中，所述頂空固相微萃取條 件蜂蜜揮發(fā)性成分萃取前，先將固相微萃取裝置的萃取頭插入氣相色譜注射孔中，在270°C 下老化處理50_80min。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟（1)中，內(nèi)標(biāo)物2-甲基-3-庚 酮用正丁烷溶解，濃度為1.5-1. 8 iig/mL，加入Iii L的該內(nèi)標(biāo)物溶液，并加入IOmL的飽和 NaCl溶液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟（2)中，氣相色譜儀內(nèi)附的冷 進(jìn)樣系統(tǒng)條件為：初始溫度-KKTC，平衡0. 5min，以KTC /min的速度升溫至280°C，保持 0? 5min。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟（3)中，載氣為氦氣，流速 1. 4-1. 8mT,/min,不分流。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟（4)中，蜂蜜樣品中揮發(fā)性成分 的定性分析方法為：利用數(shù)據(jù)庫檢索目標(biāo)化合物，進(jìn)行定性分析。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟（4)中，揮發(fā)性成分的定性分 析方法為：采用相同條件對正構(gòu)系列烷烴C8-C27進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析，利用色 譜峰的保留時間計算目標(biāo)相應(yīng)化合物的保留指數(shù)LRI值，已知LRI值比對認(rèn)定范圍為相差 0-100內(nèi)，實(shí)現(xiàn)化合物的定性分析；色譜峰LRI值計算公式：
式中：ta為色譜峰a的保留時間；tn為正構(gòu)烷烴Cn的保留時間。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟（4)中，蜂蜜樣品中揮發(fā)性成分 的定量分析方法為： 根據(jù)蜂蜜樣品中添加的內(nèi)標(biāo)化合物含量、內(nèi)標(biāo)化合物色譜峰面積及目標(biāo)化合物色譜峰 面積，計算目標(biāo)化合物的含量，計算公式為：
式中：CX為目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度；SX為目標(biāo)化合物的色譜峰面積；CA為內(nèi)標(biāo)化合物 的質(zhì)量濃度；SA為內(nèi)標(biāo)化合物的色譜峰面積。
【文檔編號】G01N30/06GK104316633SQ201410572994
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月23日
【發(fā)明者】趙亞周, 彭文君, 田文禮, 方小明, 國占寶, 任佳淼 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所