液相色譜搭載vwd檢測器測定水果中糖組分的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種液相色譜搭載VWD檢測器測定水果中糖組分的方法，色譜條件為：檢測器：VWD檢測器；色譜柱：CARBOSepCHO-620，Ca型，6.5mm×300mm×10um；流動相：超純水；流速：0.5ml/min；波長：190nm；柱溫：80℃；時間：30min。本發(fā)明的液相色譜搭載VWD檢測器測定水果中糖組分的方法，采用VWD檢測器檢測，并采用截止波長只有190nm的超純水作為樣品溶劑和流動相，而同時波長采用190nm，能有效的分離水果果肉中的多種糖，克服了傳統(tǒng)的認(rèn)為液相色譜搭載VWD檢測器不適用于直接進(jìn)行糖類物質(zhì)檢測的技術(shù)偏見，成本低廉，操作簡單，靈敏度高，測定結(jié)果重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高。本發(fā)明確定的色譜條件可用于直接分離測定各種水果中的糖組分。
【專利說明】液相色譜搭載VWD檢測器測定水果中糖組分的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及液相色譜搭載VWD檢測器測定水果中糖組分的方法，屬于化學(xué)工業(yè)中 的化學(xué)分析及儀器分析【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 水果中含多種糖分，結(jié)構(gòu)復(fù)雜且多為異構(gòu)體，結(jié)構(gòu)差異性小，采用常規(guī)方法對其分 離鑒定比較困難。加之單糖沒有發(fā)色基團(tuán)，紫外吸收微弱甚至無，而且在通常情況下為電 中性。因此植物組織中糖檢測廣泛應(yīng)用的高效液相色譜法（HPLC)，通常需要先進(jìn)行衍生 化，使糖類組分具有UV吸收、熒光特性或其它一些可測定的物理化學(xué)性質(zhì)，再使用選擇性 檢測器如紫外檢測器、熒光檢測器等進(jìn)行檢測，但這樣處理步驟復(fù)雜，且會導(dǎo)致不穩(wěn)定基 團(tuán)的分解，造成結(jié)果的偏差。目前常采用液相色譜搭載通用型檢測器，如示差折光檢測器 (HPLC-RID)測定水果中糖組分，這樣樣品不需衍生化處理，可以直接測得糖分。但是相較紫 外檢測器而言，示差折光檢測器（RID)易受外界環(huán)境干擾，對溫度變化非常敏感，難以平衡， 流動相的波動、洗脫液比的變化等都會明顯影響折射率，靈敏度也不高。
[0003] 可變波長檢測器（VWD)是紫外檢測器的一種，幾乎所有的HPLC都配有這種檢測 器。VWD靈敏度和選擇性高，對溫度、流動相的波動和組成的變化不甚敏感；檢測限可達(dá) l〇ng。液相色譜搭載可變波長檢測器（HPLC-VWD)具有良好的光學(xué)性能，在預(yù)設(shè)的波長范 圍內(nèi)檢測結(jié)果靈敏、準(zhǔn)確，廣泛用于對大多數(shù)有紫外吸收的化合物的檢測。然而本領(lǐng)域技 術(shù)人員普遍認(rèn)為VWD不適用于糖類物質(zhì)的檢測，這是因為糖類特別是葡萄糖等物質(zhì)吸光度 極其微弱，需要選很低的波長區(qū)間進(jìn)行檢測，而常用測定糖類的色譜條件如選擇的流動相 的截止波長都較高，會產(chǎn)生背景吸收；進(jìn)一步地，有文獻(xiàn)總結(jié)稱選擇性檢測器無法對糖類組 分進(jìn)行檢測（呂良，陳霈.淺談高效液相色譜儀檢測器的發(fā)展與展望.計量與測試技術(shù)， 2008，35 (9):76-77 ;武開業(yè)，雷林，呂慶華.高效液相色譜儀檢測器分類及應(yīng)用.科技信 息，2010，13:789-791)，而VWD就是典型的選擇性檢測器。也就是說，一直存在VWD不適用 于檢測糖類物質(zhì)的技術(shù)偏見。僅見謝志剛等(謝志剛，李博，陳書軍，彭秀蘭，王瑩，尹鴻萍， 奚濤.高效液相色譜法快速檢測氨基葡萄糖含量.分析測試學(xué)報，2012, 31 (5):575-579) 利用HPLC-VWD直接測定硫酸氨基葡萄糖氯化鉀膠囊中氨基葡萄糖的含量，氨基葡萄糖是 一種天然的氨基單糖，是葡萄糖中的一個羥基被氨基取代，多了一個N這樣的元素，是直鏈 伯胺，具有胺的性質(zhì)，因此該文獻(xiàn)報道的采用氨基柱，但是，無需衍生化直接對氨基葡萄糖 進(jìn)行測定的HPLC-VWD法對植物組織中廣泛存在的、由C、H、0三元素構(gòu)成的糖類物質(zhì)，如蔗 糖、葡萄糖、果糖等的檢測不具有通用性。總之，目前為止，尚無 HPLC-VWD用于直接檢測水 果以及其它植物組織中各種糖類的記載。本發(fā)明擬建立一種HPLC-VWD法直接測定水果中 糖組分的方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種液相色譜搭載VWD檢測器測定水果中糖組分的方法，該 方法能有效分離測定水果果肉中的多種糖類物質(zhì)。
[0005] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種液相色譜搭載VWD檢測器測定 水果中糖組分的方法，其步驟包括： a、 配制4種糖的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線； b、 從水果果肉中提取糖配制樣品溶液； c、 在色譜條件下對樣品溶液進(jìn)行高效液相色譜分析，并用VWD檢測器進(jìn)行檢測； d、 將樣品溶液的分析結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線做比對，得出樣品溶液中的糖含量； 其中高效液相色譜分析的色譜條件為： 檢測器：VWD檢測器； 色譜柱：CARB0S印 CH0-620，Ca 型，6.5 mmX300 mmXlO um; 流動相：超純水； 流速：〇· 5 ml/min ; 波長：190 nm ; 柱溫：80°C ; 時間：30min。
[0006] 進(jìn)一步的，步驟b中從果肉中提取糖配制樣品溶液的步驟為：稱取lg果肉，加入7 ml 80%乙醇，避光超聲波提取10 min, 4°C下10000 rpm離心10 min,取上清液定容到10ml ; 再吸取2ml到真空濃縮儀濃縮至干燥，用0. 5ml超純水溶解制得樣品溶液，經(jīng)0. 22 mm有機(jī) 濾頭過濾。
[0007] 進(jìn)一步的，步驟a中配制4種糖的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的步驟為：分別準(zhǔn)確稱取1. 6g各 種糖的標(biāo)準(zhǔn)品，用超純水溶解定容，制得濃度為160 g/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液；分別移取1.00 ml各 標(biāo)準(zhǔn)溶液，混合并用超純水逐級稀釋，制得混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0008] 進(jìn)一步的，所述糖包括蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨醇。
[0009] 本發(fā)明的液相色譜搭載VWD檢測器測定水果中糖組分的方法，采用VWD檢測器檢 測，并采用截止波長只有190nm的超純水作為樣品溶劑和流動相，而同時波長采用190nm， 能有效的分離檢測水果果肉中的多種糖，而不需要將糖類物質(zhì)先進(jìn)行衍生化，克服了傳統(tǒng) 的認(rèn)為液相色譜搭載VWD檢測器不適用于直接進(jìn)行糖類物質(zhì)檢測的技術(shù)偏見，成本低廉， 操作簡單，靈敏度高，測定結(jié)果重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高。本發(fā)明確定的色譜條件可用于直接分 離測定各種水果中的糖組分。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0010] 圖1為4種糖混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的HPLC圖，其中1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果糖；4.山 梨醇。
[0011] 圖2為桃'Big top'品種果肉樣品中糖的HPLC圖，其中1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果 糖；4.山梨醇。
[0012] 圖3為葡萄'巨玫瑰'品種果肉樣品中酚類化合物的HPLC圖，其中1.蔗糖；2.葡 萄糖；3.果糖。
[0013] 圖4為蘋果'紅富士'品種1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果糖；4.山梨醇。
[0014] 圖5為香蕉'開策'品種1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果糖；4.山梨醇。
[0015] 圖6為梨'豐水'品種1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果糖；4.山梨醇。
[0016] 下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的實施方式做進(jìn)一步說明。

【具體實施方式】
[0017] 試劑與設(shè)備： 4種糖標(biāo)準(zhǔn)品包括蔗糖、葡萄糖、果糖、山梨醇，均購自Sigma公司，純度彡98%。
[0018] 超聲波清洗器，離心機(jī)，真空濃縮儀，Agilent高效液相色譜系統(tǒng)：1100系列，VWD (可變波長）檢測器，CARB0S 印 CH0-620 (Ca 型，6.5 mmX300 mmXlO um)。
[0019] 實施例1 a、配制4種糖的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的步驟為：分別準(zhǔn)確稱取1. 6g各糖標(biāo)準(zhǔn)品，用超純水溶 解定容，制得濃度為160 g/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液；分別移取1. 00 ml各標(biāo)準(zhǔn)溶液，混合并用超純水 逐級稀釋，制得各級別混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0020] 取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)高效液相色譜分析得到標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線，見圖1，色譜條件為： 檢測器：VWD (可變波長）檢測器； 色譜柱：CARBOSep CH0-620 (Ca 型，6.5 mmX300 mmXlO um); 流動相：超純水； '流速：〇· 5 ml/min ; 波長：190 nm ; 柱溫：80°C ; 時間：30min。
[0021] b、稱取lg 'Big top'桃品種果肉，加入7 ml 80%乙醇，避光超聲波提取10 min, 4?下10000 rpm離心10 min,取上清液定容到10ml ;再吸取2ml進(jìn)真空濃縮儀濃縮至干 燥，用〇. 5ml超純水溶解制得樣品溶液，經(jīng)0. 22 mm有機(jī)濾頭過濾。
[0022] c、對樣品溶液進(jìn)行高效液相色譜分析，進(jìn)樣量為5μ 1，得到樣品溶液的色譜圖，見 圖2,色譜條件同標(biāo)準(zhǔn)曲線的色譜條件。
[0023] d、將樣品溶液的色譜圖與標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線比對，得到桃果肉中各種糖的含量，見表 1，單位為g/L，即每L新鮮果肉中含有糖的含量。
[0024] 實施例2 準(zhǔn)確稱取lg '巨玫瑰'葡萄品種成熟果實果肉，樣品制備過程和色譜條件同實施例1。 所得樣品溶液的色譜圖見圖3,葡萄果肉中各種糖的含量見表1。
[0025] 實施例3 準(zhǔn)確稱取lg '紅富士'蘋果品種成熟果實果肉，樣品制備過程和色譜條件同實施例1。 所得樣品溶液的色譜圖見圖4,蘋果果肉中各種糖的含量見表1。
[0026] 實施例4 準(zhǔn)確稱取lg '開策'香蕉品種成熟果實果肉，樣品制備過程和色譜條件同實施例1。所 得樣品溶液的色譜圖見圖5,香蕉果肉中各種糖的含量見表1。
[0027] 實施例5 準(zhǔn)確稱取lg '豐水'梨品種成熟果實果肉，樣品制備過程和色譜條件同實施例1。所得 樣品溶液的色譜圖見圖6,梨果肉中各種糖的含量見表1。
[0028] 表1 :本發(fā)明實施例1-5中各品種水果中糖含量測量結(jié)果

【權(quán)利要求】
1. 一種液相色譜搭載VWD檢測器測定水果中糖組分的方法，其步驟包括： a、 配制4種糖的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線； b、 從水果果肉中提取糖配制樣品溶液； c、 在色譜條件下對樣品溶液進(jìn)行高效液相色譜分析，并用VWD檢測器進(jìn)行檢測； d、 將樣品溶液的分析結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線做比對，得出樣品溶液中的糖含量； 其中高效液相色譜分析的色譜條件為： 檢測器：VWD檢測器； 色譜柱：CARBOS印 CH0-620，Ca 型，6. 5 mmX300 mmX 10 um ; 流動相：超純水； '流速：〇· 5 ml/min ; 波長：190 nm ; 柱溫：80°C ; 時間：30min。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜搭載VWD檢測器測定水果中糖組分的方法，其特征 在于：步驟b中從果肉中提取糖配制樣品溶液的步驟為：稱取lg果肉，加入7 ml 80%乙醇， 避光超聲波提取10 min, 4°C下10000 rpm離心10 min,取上清液定容到10ml ;再吸取2ml 到真空濃縮儀濃縮至干燥，用〇. 5ml超純水溶解制得樣品溶液，經(jīng)0. 22 mm有機(jī)濾頭過濾。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的液相色譜搭載VWD檢測器測定水果中糖組分的方法，其特征 在于：步驟a中配制4種糖的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的步驟為：分別準(zhǔn)確稱取1.6g各種糖的標(biāo)準(zhǔn)品， 用超純水溶解定容，制得濃度為160 g/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液；分別移取1. 00 ml各標(biāo)準(zhǔn)溶液，混合 并用超純水逐級稀釋，制得混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的液相色譜搭載VWD檢測器測定水果中糖組分的方法，其特征 在于：所述糖包括蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨醇。
【文檔編號】G01N30/06GK104280472SQ201410548514
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2014年10月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月16日
【發(fā)明者】嚴(yán)娟, 沈志軍, 馬瑞娟, 蔡志翔, 張斌斌, 俞明亮 申請人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院