一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于食品安全【技術領域】，具體涉及一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法。本發(fā)明前處理方法包括待測樣品的稱量、提取、回旋振蕩、離心、固相萃取等操作；所用儀器包括離心機、旋轉蒸發(fā)和固相萃取裝置等；用本前處理方法制備出的樣品溶液可以直接用氣相色譜－質譜法進行檢測。該前處理方法與現有方法相比，具有操作高準確性、高重現性、高靈敏度等優(yōu)點，具有很強的可操作性，有望在農業(yè)、質檢部門及出入境檢驗檢疫等行業(yè)大規(guī)模推廣應用，具有顯著的經濟效益。本發(fā)明可以準確檢測到動物產品中是否含有氯丙嗪，經檢測后的動物產品是安全的，并符合我國國家標準的要求。
【專利說明】一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于食品安全【技術領域】，具體涉及一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法。

【背景技術】
[0002]氯丙嗪是吩噻嗪類代表藥物，為中樞多巴胺受體的阻斷劑，作用于中樞神經系統，常被用作催眠、鎮(zhèn)靜劑，在運輸過程中使用可以明顯減少動物的死亡率。這種藥主要在肝臟代謝，易產生藥物殘留，對人們的身體健康造成很大影響。在進出口貿易中，已被列入禁用類藥物，我國規(guī)定不得檢出。
[0003]現有檢測動物產品中氯丙嗪含量的方法包括高壓液相色譜(HPLC)，高壓液相色譜/熒光(HPLC/FLD)，液相色譜-質譜連用(LC-MS)，氣相色譜-質譜連用(GC-MS)，毛細管電泳等方法。這些方法靈敏準確，但是樣品處理煩瑣費時，尤其是氣相色譜-質譜連用(GC-MS)法，普遍存在因樣品前處理不好造成的回收率比較低的情況、且重現性不好，需要一種具有操作高準確性、高重現性、高靈敏度的樣品前處理方法進行推廣應用。中國專利(CN103454368A)公開了一種高效液相色譜檢測血液中氯丙嗪含量的方法，局限于檢測血液樣品中的氯丙嗪含量；農業(yè)部1163號公告-8-2009豬肝中氯丙嗪殘留檢測氣相色譜-質譜法的標準中也只局限于檢測動物肝臟中的氯丙嗪含量，不具備廣泛適用性。


【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明前處理方法包括待測樣品的稱量、提取、回旋振蕩、離心、固相萃取等操作；所用儀器包括離心機、旋轉蒸發(fā)和固相萃取裝置等；用本前處理方法制備出的樣品溶液可以直接用氣相色譜一質譜法進行檢測。該前處理方法與現有方法相比，具有操作高準確性、高重現性、高靈敏度等優(yōu)點，具有很強的可操作性，有望在農業(yè)、質檢部門及出入境檢驗檢疫等行業(yè)大規(guī)模推廣應用，具有顯著的經濟效益。本發(fā)明可以準確檢測到動物產品中是否含有氯丙嗪，經檢測后的動物產品是安全的，并符合我國國家標準的要求。
[0005]為實現上述目的，本發(fā)明提供一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法，由以下步驟組成:
[0006]I)稱取0.5?1.5g勻漿后的動物產品置于10mL離心管中，依次加入10?20mL乙酸乙酷和0.5?1.5mL 1.5?2.5mol/L的NaOH溶液，均質0.5?3min,回旋振蕩10?20min, 2000 ?3500r/min 離心 3 ?8min ；
[0007]2)取上清液轉入旋轉蒸發(fā)瓶中，試樣中再用5?15mL乙酸乙酯，重復提取一次，下層試樣再用5?15mL乙酸乙酯和0.3?ImL濃度為1.5?2.5mol/L的NaOH溶液,均質
0.5?3min,回旋振蕩10?20min, 2000?3500r/min離心3?8min重復提取一次，合并上清液，旋轉蒸干；
[0008]3)用1.5?2.5mL乙腈超聲溶解殘渣[是指步驟I離心后的殘渣還是旋蒸后的試樣殘禮:？]，加入3?5mL正己燒游潤0.5?2min, 500?1500r/min離心3?8min,棄去正己燒層，待用；
[0009]4)用I?3mL乙腈，沖洗PCX柱，取待用的提取液[指步驟(3)溶解殘渣后的提取液嗎？]至PCX柱，棄去流出液，用I?3mL水洗柱子，抽干；
[0010]5)用2?5mL3%?8%氨化乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液；
[0011]6)將洗脫液用氮吹儀吹干，用0.5?1.5mL乙酸乙酯溶解，用0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
[0012]所述步驟(I)進一步優(yōu)選為稱取1.0g勻楽:后的動物產品置于10mL離心管中，依次加入15mL乙酸乙酯和1.0mT, 2mol/L的NaOH溶液,均質Imin,回旋振蕩15min, 3000r/min離心5min。
[0013]所述步驟(2)進一步優(yōu)選為取上清液轉入旋轉蒸發(fā)瓶中，試樣中再用1mL乙酸乙酯，重復提取一次，合并上清液，旋轉蒸干。
[0014]所述步驟(3)進一步優(yōu)選為用2mL乙腈超聲溶解殘洛,加入4mL正己燒鏇潤Imin,1000r/min離心5min,棄去正己燒層,待用。
[0015]所述步驟⑷進一步優(yōu)選為用2mL乙腈，沖洗PCX柱，取待用的提取液至PCX柱，棄去流出液，用ImL水洗柱子,抽干。
[0016]所述步驟(5)進一步優(yōu)選為用3mL 5%氨化乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液。
[0017]所述步驟(6)進一步優(yōu)選為將洗脫液用氮吹儀吹干，用0.5mL乙酸乙酯溶解，用
0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
[0018]本發(fā)明具有回收率高、靈敏度高、重現性好、操作簡單、適用范圍廣等優(yōu)點，能夠滿足國內食品安全的標準和出口有關要求，與現有專利技術相比，具有如下特點:
[0019]1.高回收率。經實驗證明，目前很多檢測氯丙嗪的技術方法普遍存在回收率比較低情況，回收率一般在20-50%，一般本方法用乙酸乙酯提取，有效地提高了檢測的回收率，是回收率穩(wěn)定在70-85 %范圍內，確保準確的檢測到該物質。
[0020]2.重現性好。由于動物產品中存在蛋白、脂肪、氨基酸、多肽等生物干擾基質，其他方法的凈化效果不好，導致樣品乳化、濃縮造成的待測組分的損失。本方法用PCX柱凈化，5%氨化乙酸乙酯洗脫，可以將樣品中大部分的生物干擾基質去除，從而保證被測物質具有70%以上的回收率。
[0021 ] 3.其他專利技術方法一般只適用于肉類相比，本發(fā)明技術方法經實驗證明，可廣泛的適用于包括肉類、蛋類、動物內臟等動物產品，適用范圍廣等優(yōu)點。

【具體實施方式】
[0022]為使本發(fā)明的目的、技術方案及效果更加清楚、明確，以下對本發(fā)明進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例子僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0023]實施例1:
[0024]一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法，由以下步驟組成:
[0025]I)稱取1.0g勻漿后的動物產品置于10mL離心管中，依次加入15mL乙酸乙酯和
1.0mT, 2mol/L 的 NaOH 溶液,均質 Imin,回旋振蕩 15min, 3000r/min 離心 5min ；
[0026]2)取上清液轉入旋轉蒸發(fā)瓶中，試樣中再用1mL乙酸乙酯，重復提取一次，下層試樣再用5?15mL乙酸乙酯和0.5mL濃度為2.0moI/L的NaOH溶液，均質lmin，回旋振蕩15min, 3000r/min離心5min重復提取一次,合并上清液,旋轉蒸干；
[0027]3)用2mL乙腈超聲溶解殘洛,加入4mL正己燒鏇潤lmin, 1000r/min離心5min,棄去正己燒層，待用；
[0028]4)用2mL乙腈，沖洗PCX柱，取待用的提取液至PCX柱，棄去流出液，用ImL水洗柱子，抽干;
[0029]5)用3mL 5%氨化乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液；
[0030]6)將洗脫液用氮吹儀吹干，用0.5mL乙酸乙酯溶解，用0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
[0031]實施例2:
[0032]一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法，由以下步驟組成:
[0033]I)稱取0.5g勻漿后的動物產品置于10mL離心管中，依次加入20mL乙酸乙酯和
0.5mL 1.5mol/L 的 NaOH 溶液，均質 0.5min,回旋振蕩 20min, 2000r/min 離心 8min ；
[0034]2)取上清液轉入旋轉蒸發(fā)瓶中，試樣中再用5mL乙酸乙酯，重復提取一次，下層試樣再用5?15mL乙酸乙酯和ImL濃度為1.5mol/L的NaOH溶液，均質0.5min,回旋振蕩20min,2000r/min離心8min重復提取一次,合并上清液,旋轉蒸干；
[0035]3)用2.5mL乙腈超聲溶解殘洛,加入3mL正己燒鏇潤2min, 500r/min離心8min,棄去正己烷層，待用；
[0036]4)用ImL乙腈，沖洗PCX柱，取待用的提取液至PCX柱，棄去流出液，用3mL水洗柱子，抽干;
[0037]5)用2mL8%氨化乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液；
[0038]6)將洗脫液用氮吹儀吹干，用0.5mL乙酸乙酯溶解，用0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
[0039]實施例3:
[0040]一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法，由以下步驟組成:
[0041]I)稱取1.5g勻漿后的動物產品置于10mL離心管中，依次加入1mL乙酸乙酯和
1.5mL 1.5mol/L 的 NaOH 溶液，均質 3min,回旋振蕩 1min, 3500r/min 離心 3min ；
[0042]2)取上清液轉入旋轉蒸發(fā)瓶中，試樣中再用15mL乙酸乙酯，重復提取一次，下層試樣再用5?15mL乙酸乙酯和0.3mL濃度為1.5mol/L的NaOH溶液，均質3min，回旋振蕩1min, 3500r/min離心3min重復提取一次,合并上清液,旋轉蒸干；
[0043]3)用1.5mL乙腈超聲溶解殘洛，加入5mL正己燒鏇潤0.5min, 1500r/min離心3min,棄去正己燒層,待用；
[0044]4)用3mL乙腈，沖洗PCX柱，取待用的提取液至PCX柱，棄去流出液，用ImL水洗柱子，抽干;
[0045]5)用5mL3%氨化乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液；
[0046]6)將洗脫液用氮吹儀吹干，用1.5mL乙酸乙酯溶解，用0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
[0047]以上已將本發(fā)明做一詳細說明，以上所述，僅為本發(fā)明之較佳實施例而已，當不能限定本發(fā)明實施范圍，即凡依本申請范圍所作均等變化與修飾，皆應仍屬本發(fā)明涵蓋范圍內。
【權利要求】
1.一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法，其特征在于由以下步驟組成: 1)稱取0.5?1.5g勻漿后的動物產品置于10mL離心管中，依次加入10?20mL乙酸乙酯和0.5?1.5mL濃度為1.5?2.5mol/L的NaOH溶液，均質0.5?3min,回旋振蕩10 ?20min, 2000 ?3500r/min 離心 3 ?8min ； 2)取上清液轉入旋轉蒸發(fā)瓶中，下層試樣再用5?15mL乙酸乙酯和0.3?ImL濃度為1.5 ?2.5mol/L 的 NaOH 溶液，均質 0.5 ?3min，回旋振蕩 10 ?20min，2000 ?3500r/min離心3?Smin重復提取一次，合并上清液，旋轉蒸干，得到殘渣； 3)用1.5?2.5mL乙腈超聲溶解殘渣，加入3?5mL正己烷漩渦0.5?2min，500?1500r/min離心3?8min,棄去正己燒層,剩余提取液待用； 4)用I?3mL乙腈，沖洗PCX柱，取待用的提取液至PCX柱，棄去流出液，用I?3mL水洗柱子，抽干； 5)用2?5mL3%?8%氨化乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液； 6)將洗脫液用氮吹儀吹干，用0.5?1.5mL乙酸乙酯溶解，用0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
2.如權利要求1所述的一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法，其特征在于:所述步驟(I)為稱取1.0g勻衆(zhòng)后的動物產品置于10mL離心管中，依次加入15mL乙酸乙酯和1.0mL 2mol/L 的 NaOH 溶液,均質 Imin,回旋振蕩 15min, 3000r/min 離心 5min。
3.如權利要求1所述的一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法，其特征在于:所述步驟(2)為取上清液轉入旋轉蒸發(fā)瓶中，試樣中再用1mL乙酸乙酯，重復提取一次，合并上清液，旋轉蒸干。
4.如權利要求1所述的一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法，其特征在于:所述步驟(3)為用2mL乙腈超聲溶解殘洛,加入4mL正己燒鏇潤lmin, 1000r/min離心5min,棄去正己燒層，待用。
5.如權利要求1所述的一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法，其特征在于:所述步驟⑷為用2mL乙腈，沖洗PCX柱，取待用的提取液至PCX柱，棄去流出液，用ImL水洗柱子7抽干。
6.如權利要求1所述的一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法，其特征在于:所述步驟(5)為用3mL 5%氨化乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液。
7.如權利要求1所述的一種動物產品中氯丙嗪檢測的前處理方法，其特征在于:所述步驟(6)為將洗脫液用氮吹儀吹干，用0.5mL乙酸乙酯溶解，用0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
【文檔編號】G01N30/14GK104280484SQ201410495482
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2014年9月24日 優(yōu)先權日:2014年9月24日
【發(fā)明者】路平 申請人:中國動物衛(wèi)生與流行病學中心