雞肉中妥曲珠利、妥曲珠利砜殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制法
【專利摘要】本發(fā)明屬于獸藥殘留檢測的動(dòng)物源基體標(biāo)準(zhǔn)樣品【技術(shù)領(lǐng)域】，公開了一種雞肉中妥曲珠利、妥曲珠利砜殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，該方法以妥曲珠利對雞進(jìn)行養(yǎng)殖添加，經(jīng)代謝后控制時(shí)間使雞體內(nèi)含有妥曲珠利及代謝物妥曲珠利砜，將雞宰殺，取胸部肌肉去皮瀝血，加維生素C溶液勻漿制成肉糜，真空冷凍干燥，粉碎過篩，在厭氧工作站中充氮?dú)獍b，封口后再用鋁箔袋將聚乙烯瓶進(jìn)行真空封裝，制備得到凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品。得到的樣品可以在常溫下運(yùn)輸，保質(zhì)期長，目標(biāo)物和基體結(jié)合情形與真實(shí)檢測樣品一致，可用于相關(guān)檢測分析的質(zhì)量控制，樣品均勻穩(wěn)定、運(yùn)輸方便、使用可靠、產(chǎn)品具有顯著的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和市場競爭力。
【專利說明】雞肉中妥曲珠利、妥曲珠利砜殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于獸藥殘留檢測的動(dòng)物源基體標(biāo)準(zhǔn)樣品【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種雞肉中 妥曲珠利、妥曲珠利砜殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 妥曲珠利，中文名稱：甲基三嗪酮，百球清，英文名稱：Toltrazuil，CAS編號： 69004-03-1，分子式 ：C18H14F3N304S，屬三嗪酮化合物，具有廣譜抗球蟲活性，廣泛用于雞球 蟲病。妥曲珠利砜，中文名稱：帕托珠利，帕那珠利，英文名稱：Toltrazuril sulfone， Ponazuril，CAS 號：69004-04-2,分子式：C18H14F3N30 6S。
[0003] 家禽內(nèi)服妥曲珠利，約有50%以上藥物吸收，吸收后藥物主要匯集于肝臟、腎臟， 迅速被代謝成妥曲珠利砜和妥曲珠利亞砜。妥曲珠利在仔雞可食用組織中殘留時(shí)間很長， 停藥24天后在胸肌中仍能測出殘留藥物，因此，美國至20世紀(jì)末仍未批準(zhǔn)該產(chǎn)品上市。
[0004] 在食品安全檢測體系中，文字標(biāo)準(zhǔn)和實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)互為補(bǔ)充?；诮陙韲H權(quán)威機(jī) 構(gòu)對食品安全檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品越來越重視，與真實(shí)樣品接近的實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品將是以后發(fā)展的 一個(gè)非常重要的方向。目前我國的文字標(biāo)準(zhǔn)相對完善，但實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)特別是食品安全檢測實(shí) 物標(biāo)樣還很匱乏。
[0005] 動(dòng)物基體獸藥標(biāo)準(zhǔn)樣品對實(shí)驗(yàn)室獸藥殘留檢測質(zhì)量控制體系有著極其重要的作 用，是評價(jià)檢測標(biāo)準(zhǔn)方法精密度和準(zhǔn)確度的實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)，是保證實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量，評價(jià)檢測能 力的科學(xué)、權(quán)威證據(jù)。以雞肉為基體的妥曲珠利和妥曲珠利砜標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制可以在該類 獸藥殘留檢測中對方法的重復(fù)性、重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度進(jìn)行檢測確認(rèn)，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明是向動(dòng)物體內(nèi)飼喂一種藥物，經(jīng)動(dòng)物體代謝，獲得含有兩種藥物殘留：原藥 及代謝物，即妥曲珠利及其代謝物妥曲珠利砜同時(shí)存在的實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品。
[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種雞肉中妥曲珠利及其代謝物妥曲珠利砜殘留凍干粉標(biāo) 準(zhǔn)樣品的制備方法，通過添加妥曲珠利養(yǎng)殖肉雞，控制養(yǎng)殖時(shí)間，獲得樣品材料，并制備成 一種均勻性好、穩(wěn)定性好、易保存且目標(biāo)物和基體結(jié)合情形與真實(shí)檢測樣品一致的標(biāo)準(zhǔn)樣 品；該標(biāo)準(zhǔn)樣品可用于妥曲珠利、妥曲珠利砜等類藥物殘留檢測質(zhì)量控制、檢測方法評價(jià)、 檢測能力評價(jià)。
[0008] 本發(fā)明雞肉中妥曲珠利及其代謝物妥曲珠利砜殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方 法： 1、 采用妥曲珠利對雞進(jìn)行養(yǎng)殖添加，經(jīng)代謝后控制時(shí)間使雞體內(nèi)含有妥曲珠利及代謝 物妥曲珠利砜，且兩種藥物濃度保持在同一數(shù)量級； 2、 將雞宰殺，取胸部肌肉去皮浙血，加維生素 C溶液勻漿制成肉糜，真空冷凍干燥，粉 碎過篩，在厭氧工作站中充氮?dú)獍b，封口后再用鋁箔袋將聚乙烯瓶進(jìn)行真空封裝，制備得 到凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品。
[0009] 本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)是：模擬養(yǎng)殖條件下對肉雞添加妥曲珠利后選擇適當(dāng)時(shí)機(jī)，將 肉雞宰殺，取肌肉部分加維生素 C溶液勻漿制成肉糜，冷凍干燥，粉碎過篩，充氮?dú)夥庋b、均 勻性檢驗(yàn)、穩(wěn)定性研究和協(xié)同定值檢測，獲得預(yù)期含量的目標(biāo)物結(jié)合狀態(tài)與實(shí)際檢測樣品 一致的含妥曲珠利及代謝物妥曲珠利砜的雞肉陽性材料，采用攪碎和勻化介質(zhì)相結(jié)合的工 藝可以保證材料的均勻性，基質(zhì)中加入維生素 C、冷凍干燥、充氮?dú)夥庋b，可以保證樣品中藥 物不降解、不被氧化。本發(fā)明的產(chǎn)品可以在常溫下運(yùn)輸，保質(zhì)期長，目標(biāo)物和基體結(jié)合情形 與真實(shí)檢測樣品一致，可用于相關(guān)檢測分析的質(zhì)量控制，樣品均勻穩(wěn)定、運(yùn)輸方便、使用可 靠、產(chǎn)品具有顯著的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和市場競爭力。

【具體實(shí)施方式】
[0010] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0011] 實(shí)施例1，一種雞肉中妥曲珠利及其代謝物妥曲珠利砜殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制 備方法，本實(shí)施例以控制目標(biāo)含量水平20-100ug/kg為例，其具體步驟如下： (1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇：市購肉雞，要求個(gè)體大小均一、均重約2. 5 kg，先確認(rèn)肉雞未被飼 喂過妥曲珠利，隨機(jī)取樣，檢測確認(rèn)為陰性樣品后進(jìn)行喂養(yǎng)。正常飼養(yǎng)5天后，剔除受傷不 健康的雞。
[0012] (2)藥物飼養(yǎng)：將妥曲珠利藥粉準(zhǔn)確稱量0. 2mg，裝入膠囊中，每只雞每天喂1顆膠 囊，連喂2天，第2天停藥后10小時(shí)宰殺，取胸肌肉檢測，此時(shí)妥曲珠利及其代謝物妥曲珠 利砜在雞體內(nèi)濃度相差不大，均為10-20 ug/kg之間。妥曲珠利砜在雞體內(nèi)代謝很快，時(shí)間 掌握不準(zhǔn)，兩種藥物的濃度上就會有很大差異，達(dá)不到預(yù)期理想的濃度。從標(biāo)準(zhǔn)樣品在實(shí)驗(yàn) 室應(yīng)用的角度來看，兩種藥物的水平最好是控制在同一數(shù)量級，才更具實(shí)用性，因此藥物的 添加量和時(shí)間的控制至關(guān)重要。
[0013] (3)攪碎勻漿：將雞肉混合攪勻，每5 kg攪碎雞肉中加 1 kg維生素 C溶液(濃度 為500mg/kg)混勻制成肉糜。維生素 C溶液具有抗氧化作用，有利于樣品的長期保存。
[0014] (4)冷凍干燥：將肉漿放入真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)冷凍干燥，冷凍干燥條件：-70°C速 凍成厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時(shí)，直至凍塊 干燥。
[0015] (5)粉碎均質(zhì)：將冷凍干燥后的肉糜用粉碎機(jī)粉碎、混勻。
[0016] (6)過篩：勻質(zhì)后的雞粉過0.5 _孔篩，棄去篩余粗粉； (7)包裝：將厭氧工作站內(nèi)滅菌、氮?dú)鉂舛日{(diào)整到99%備用。先將包裝瓶放入無菌室 用紫外燈滅菌，在無菌室內(nèi)將干粉準(zhǔn)確稱量到瓶中，每個(gè)瓶內(nèi)雞肉粉重量5±0.5g，扣上蓋 子不擰，將所有裝好干粉樣品的包裝瓶分批移入?yún)捬豕ぷ髡局?，重新將厭氧工作站氮?dú)鉂?度調(diào)整至99%，在厭氧工作站內(nèi)擰緊包裝瓶的蓋子，完成充氮包裝取出。再用鋁箔袋將包裝 瓶進(jìn)行真空封裝。得到含有妥曲珠利及其代謝物妥曲珠利砜的雞肉基質(zhì)凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品。
[0017] 所制備的標(biāo)準(zhǔn)樣品經(jīng)均勻性檢驗(yàn)、穩(wěn)定性檢驗(yàn)、協(xié)同定值實(shí)驗(yàn)及不確定度合成后， 獲得最終成品。
[0018] 本產(chǎn)品最終定值妥曲珠利：64. 52±0. 89ug/kg，其代謝物妥曲珠利砜： 84. 65±0. 99ug/kg，，最終包裝數(shù)為779瓶，每瓶約5±0. 5g，室溫保存。
[0019] 以下是本發(fā)明的具體實(shí)施實(shí)驗(yàn)和效果數(shù)據(jù)，以進(jìn)一步說明本發(fā)明，但是本發(fā)明不 僅限于此。
[0020] 1、均勻性檢驗(yàn) 采用單因素方差分析進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)，隨機(jī)抽取15個(gè)樣品，每個(gè)樣品平行測定3次， 所有的樣品以隨機(jī)次序在重復(fù)性條件下測試，按照上述檢測方法對樣品進(jìn)行均勻性檢測。 標(biāo)準(zhǔn)樣品的特性應(yīng)當(dāng)均勻，即在規(guī)定的細(xì)分范圍內(nèi)保證其特性不變。在均勻性檢驗(yàn)過程中， 一般需同時(shí)考察組間均勻性及組內(nèi)均勻性，用方差分析法通過對兩者的比較來判斷各組測 量值之間有無系統(tǒng)性差異，如果兩者的比小于統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)的臨界值，則認(rèn)為樣品是均勻的。
[0021] 稱取lg樣品，加4. 0ml水還原60min以上，按SN/T 2318-2009《動(dòng)物源食品中地 克珠利、妥曲珠利、妥曲珠利亞砜和妥曲珠利砜殘留量的檢測高效液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜 法》方法進(jìn)行檢測，結(jié)果如下： (1)妥曲珠利均勻性檢驗(yàn)數(shù)據(jù)（ug/kg)

【權(quán)利要求】
1. 雞肉中妥曲珠利、妥曲珠利砜殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制法，其特征在于包括以下步 驟： (1) 采用妥曲珠利對雞進(jìn)行養(yǎng)殖添加，經(jīng)代謝后控制時(shí)間使雞體內(nèi)含有妥曲珠利及代 謝物妥曲珠利砜，且兩種藥物濃度保持在同一數(shù)量級； (2) 將雞宰殺，取胸部肌肉去皮浙血，加維生素 C溶液勻漿制成肉糜，真空冷凍干燥； (3) 粉碎過篩，在厭氧工作站中充氮?dú)獍b，封口后再用鋁箔袋將聚乙烯瓶進(jìn)行真空封 裝，制備得到凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品中妥曲珠利和妥 曲珠利砜濃度為20-100ug/kg。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟（2)所述冷凍干燥條件：-70°C速 凍成厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時(shí)，直至凍塊 干燥；所述維生素 C濃度為500mg/kg。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟（3)所述在厭氧工作站中充氮?dú)?包裝為：將厭氧工作站內(nèi)滅菌、氮?dú)鉂舛日{(diào)整到99%備用，先將包裝瓶放入無菌室用紫外燈 滅菌，在無菌室內(nèi)將干粉準(zhǔn)確稱量到瓶中，扣上蓋子不擰，將所有裝好干粉樣品的包裝瓶分 批移入?yún)捬豕ぷ髡局?，重新將厭氧工作站氮?dú)鉂舛日{(diào)整至99%，在厭氧工作站內(nèi)擰緊包裝瓶 的蓋子，完成充氮包裝取出，再用鋁箔袋將包裝瓶進(jìn)行真空封裝。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于控制目標(biāo)含量水平20-lOOug/kg的樣 品的制備： (1) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇：市購肉雞，要求個(gè)體大小均一，先確認(rèn)肉雞未被飼喂過妥曲珠利， 隨機(jī)取樣，檢測確認(rèn)為陰性樣品后進(jìn)行喂養(yǎng)，正常飼養(yǎng)5天后，剔除受傷不健康的雞； (2) 藥物飼養(yǎng)：將妥曲珠利藥粉準(zhǔn)確稱量0. 2mg，裝入膠囊中，每只雞每天喂1顆膠囊， 連喂2天，第2天停藥后10小時(shí)宰殺； (3) 攪碎勻楽：將雞肉混合攪勻，每5 kg攪碎雞肉中加1 kg維生素 C溶液，維生素 C濃 度為500mg/kg,混勻制成肉楽； (4) 冷凍干燥：將肉漿放入真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)冷凍干燥，冷凍干燥條件：-70°C速凍成 厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時(shí)，直至凍塊干 燥； (5) 粉碎均質(zhì)：將冷凍干燥后的肉漿用中藥粉碎機(jī)粉碎、混勻； (6) 過篩：勻質(zhì)后的雞粉過0. 5 mm孔篩，棄去篩余粗粉； (7) 包裝：快速用聚乙烯瓶分裝，在厭氧工作站中充氮?dú)獍b，封口后再用鋁箔袋將聚 乙烯瓶進(jìn)行真空封裝。
【文檔編號】G01N33/00GK104155163SQ201410418914
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年8月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月22日
【發(fā)明者】楊麗君, 王靜, 劉玉敏, 胡巧茹, 李兆杰, 王美玲 申請人:威海出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心