一種混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法，1）制作用氣相色譜法測得的丙酸濃度與峰面積的對應(yīng)關(guān)系標準曲線；或者丙酸相對于內(nèi)標物的校正因子；2）將待檢測樣品中的丙酸鹽轉(zhuǎn)化成游離丙酸，再用無水乙醇提取丙酸，得到混合液；3）取第2）步所得混合液的上清液并過一次性有機濾膜，通過氣相色譜法測得濾液中丙酸的峰面積；4）根據(jù)第1）步制作的丙酸濃度與峰面積的對應(yīng)關(guān)系標準曲線，再結(jié)合第3）步得到的濾液中丙酸的峰面積，計算濾液中丙酸的濃度，由此計算出待檢測樣品中總丙酸含量。本方法前處理簡單，所用試劑安全無毒，檢測人員安全性高，結(jié)果準確穩(wěn)定，并可減少對儀器的損壞。
【專利說明】一種混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及飼料添加劑成分的檢測，具體指一種混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法，屬于飼料添加劑或分析檢測【技術(shù)領(lǐng)域】。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003]丙酸是一種揮發(fā)性脂肪酸，為無色透明液體，易溶于水、乙醇、乙酸乙酯等溶劑。它是動物正常代謝的中間產(chǎn)物，具有很廣的抗菌譜，通常用于配制飼料防霉劑和酸化劑。由于丙酸的揮發(fā)性較強，單獨添加丙酸其作用時間短，因此飼料防霉劑中往往同時添加丙酸鹽，飼料防霉劑中常見的丙酸鹽為丙酸銨、丙酸鈣、丙酸鈉和丙酸鉀。丙酸鹽在酸性條件下會持續(xù)游離出丙酸以發(fā)揮防霉作用。將一定量的丙酸及其鹽，以及其他有效成分加入到二氧化硅和/或蛭石等載體中混合均勻即可制成一種飼料防霉劑或酸化劑。
[0004]飼料防霉劑中丙酸和丙酸鹽(以丙酸計)含量的檢測目前沒有統(tǒng)一的國家標準。飼料添加劑企業(yè)和飼料廠常用的方法有滴定法、絡(luò)合滴定法、液相色譜法和氣相色譜法等。前兩種方法都容易受到防霉劑中其他有機酸類影響，因此準確度和精密度均較低，只能用于丙酸含量的粗測。GB/T 17815-1999規(guī)定了填充柱氣相色譜法測定飼料中丙酸、丙酸鹽含量的方法，但此方法僅適用于飼料中丙酸含量在0.3%以下丙酸、丙酸鹽(以丙酸計)的測定，然而，飼料防霉劑中總丙酸含量較高，一般大于25%，并且目前填充柱已廣泛被毛細管柱所取代，因此此方法不適用于飼料防霉劑中總丙酸含量的檢測。目前，關(guān)于使用毛細管氣相色譜法檢測飼料防霉劑中總丙酸含量的文獻報道較少。這些方法都使用過量的無機酸(硫酸/磷酸)來酸化樣品，無機酸進入氣相色譜會造成進樣口污染，嚴重的會對毛細管柱造成不可逆的損壞。采用頂空進樣雖能夠避免上述問題，但是需要特殊設(shè)備，適用范圍有限。并且，上述文獻中前處理步驟較多，檢測人員工作量較大，所用有機溶劑(如乙酸乙酯、丙酮、乙醚等)通常具有一定的毒性，對檢測人員的健康造成一定的威脅。
[0005]
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對現(xiàn)有飼料添加劑中總丙酸測定時樣品前處理繁瑣，溶劑有毒害，對設(shè)備有損害等技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種前處理操作簡單，對檢測人員安全無毒，并可減少儀器損壞的混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法。
[0007]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是這樣的:
一種混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法，該混合型飼料添加劑中含有丙酸和丙酸鹽，檢測步驟如下，
O制作用毛細管氣相色譜法測得的丙酸濃度與峰面積的對應(yīng)關(guān)系標準曲線；步驟I)制作標準曲線時需要配置5-8個濃度梯度在0.4~20 mg/mL之間的丙酸標準工作液進樣分析，根據(jù)各濃度所測丙酸峰面積的大小與濃度的對應(yīng)關(guān)系做標準曲線，要求相關(guān)系數(shù)大于0.99 ο
[0008]2)將待檢測樣品中的丙酸鹽轉(zhuǎn)化成游離丙酸，再向待檢測樣品中加入足量的無水乙醇使待檢測樣品中的丙酸以及丙酸鹽轉(zhuǎn)化成的游離丙酸完全溶解于無水乙醇中，以將丙酸從待檢測樣品中提取出來，得到混合液；加入無水乙醇提取時應(yīng)充分振搖或者低溫超聲，然后離心或者放置6小時以上；
3)取第2)步所得混合液的上清液并過一次性有機濾膜，通過毛細管氣相色譜法測得濾液中丙酸的峰面積；
4)根據(jù)第I)步制作的丙酸濃度與峰面積的對應(yīng)關(guān)系標準曲線，再結(jié)合第3)步得到的濾液中丙酸的峰面積，計算濾液中丙酸的濃度，由此計算出待檢測樣品中總丙酸含量。
[0009]一種混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法，該混合型飼料添加劑中含有丙酸和丙酸鹽，檢測步驟如下，
I)配制確定濃度的丙酸標準儲備液，取一定體積該標準儲備液于容量瓶中，再加入一定體積的預(yù)先配置好的內(nèi)標物標準溶液，用無水乙醇定容，得到丙酸標準溶液；丙酸標準溶液過一次性有機濾膜，濾液用毛細管氣相色譜法測定丙酸和內(nèi)標物的峰面積，再結(jié)合丙酸標準儲備液和內(nèi)標物的濃度計算本方法下丙酸相對于內(nèi)標物的校正因子；
2 )將待檢測樣品中的丙酸鹽轉(zhuǎn)化成游離丙酸，再向待檢測樣品中加入足量的無水乙醇使待檢測樣品中的丙酸以及丙酸鹽轉(zhuǎn)化成的游離丙酸完全溶解于無水乙醇中，以將丙酸從待檢測樣品中提取出來，得到混合液；加入無水乙醇提取時應(yīng)充分振搖或者低溫超聲，然后離心或者放置6小時以上；
3)取第2)步所得混合液的上清液，將此上清液視為步驟I)中的丙酸標準儲備液，按步驟I)操作測定丙酸和內(nèi)標物的峰面積；
4)根據(jù)第I)步得到的丙酸相對于內(nèi)標物的校正因子，再結(jié)合第3)步得到的濾液中丙酸和內(nèi)標物的峰面積，計算濾液中丙酸的濃度，由此計算出待檢測樣品中總丙酸含量。
[0010]所述內(nèi)標物為巴豆酸標準品，步驟I)中應(yīng)重復(fù)配置6?8次丙酸標準溶液上機測定，計算本方法下丙酸相對于巴豆酸的平均校正因子。
[0011]所述步驟2)中提取丙酸的無水乙醇的量同時應(yīng)滿足上清液中丙酸濃度接近丙酸標準儲備液濃度。
[0012]本發(fā)明用于對以二氧化硅和/或蛭石為載體的混合型飼料添加劑，特別是防霉劑和/或酸化劑中總丙酸含量的氣相色譜定量分析方法，先利用強有機酸將丙酸鹽轉(zhuǎn)化成游離丙酸，再用無水乙醇提取，直接取上清液過有機濾膜，最后取濾液進樣檢測。
[0013]本方法前處理簡單，所用試劑安全無毒，檢測人員安全性高，結(jié)果準確穩(wěn)定，并可減少對儀器的損壞。
[0014]【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1-防霉劑中丙酸色譜圖。
[0016]圖2-丙酸標準曲線。
[0017]【具體實施方式】
[0018]本發(fā)明混合型飼料添加劑中含有丙酸和丙酸鹽，常見的丙酸鹽為丙酸銨、丙酸鈣、丙酸鈉和丙酸鉀。本發(fā)明有兩種方法可以實現(xiàn)混合型飼料添加劑中總丙酸含量的檢測，分別為外標法和內(nèi)標法。下面分別進行說明。
[0019]一、外標法
1)制作用毛細管氣相色譜法測得的丙酸濃度與峰面積的對應(yīng)關(guān)系標準曲線；在制作標準曲線時需要配置5-8個濃度梯度在0.1~20 mg/mL之間的丙酸標準工作液進樣分析，根據(jù)各濃度所測丙酸峰面積的大小與濃度的對應(yīng)關(guān)系做標準曲線，要求相關(guān)系數(shù)大于0.99 ；
2 )將待檢測樣品中的丙酸鹽轉(zhuǎn)化成游離丙酸，再向待檢測樣品中加入足量的無水乙醇使待檢測樣品中的丙酸以及丙酸鹽轉(zhuǎn)化成的游離丙酸完全溶解于無水乙醇中，以將丙酸從待檢測樣品中提取出來，得到混合液；加入無水乙醇提取時應(yīng)充分振搖或者低溫超聲，然后離心或者放置6小時以上；
3)取第2)步所得混合液的上清液并過一次性有機濾膜(0.22 μ m)，通過毛細管氣相色譜法測得濾液中丙酸的峰面積；
4)根據(jù)第I)步制作的丙酸峰面積與濃度的對應(yīng)關(guān)系標準曲線，再結(jié)合第3)步得到的濾液中丙酸的峰面積，計算濾液中丙酸的濃度，由此計算出待檢測樣品中總丙酸含量。
[0020]為了提高檢測準確性，本發(fā)明可以采用平均法，將待檢測樣品分為相等的幾份，按相同的操作進行檢測，第2)步加入的無水乙醇量也相等，最后求平均值即可。
[0021]二、內(nèi)標法
1)配制確定濃度的丙酸標準儲備液，取一定體積該標準儲備液于容量瓶中，再加入一定體積的預(yù)先配置好的內(nèi)標物標準溶液，用無水乙醇定容，得到丙酸標準溶液。丙酸標準溶液過一次性有機濾膜(0.22 μ m)，濾液用毛細管氣相色譜法測定丙酸和內(nèi)標物的峰面積，再結(jié)合丙酸標準儲備液和內(nèi)標物的濃度計算本方法下丙酸相對于內(nèi)標物的校正因子；
2 )將待檢測樣品中的丙酸鹽轉(zhuǎn)化成游離丙酸，再向待檢測樣品中加入足量的無水乙醇使待檢測樣品中的丙酸以及丙酸鹽轉(zhuǎn)化成的游離丙酸完全溶解于無水乙醇中，以將丙酸從待檢測樣品中提取出來，得到混合液；加入無水乙醇提取時應(yīng)充分振搖或者低溫超聲，然后離心或者放置6小時以上；
3)取第2)步所得混合液的上清液，將此上清液視為步驟I)中的丙酸標準儲備液，按步驟I)操作測定丙酸和內(nèi)標物的峰面積；
4)根據(jù)第1)步得到的丙酸相對于內(nèi)標物的校正因子，再結(jié)合第3)步得到的濾液中丙酸和內(nèi)標物的峰面積，計算濾液中丙酸的濃度，由此計算出待檢測樣品中總丙酸含量。
[0022]內(nèi)標物應(yīng)與被測組分的相對分子質(zhì)量和沸點相近、結(jié)構(gòu)相似，且保留時間相近，但又能分開。本發(fā)明使用巴豆酸，步驟I)中應(yīng)重復(fù)配置6~8次丙酸標準溶液上機測定，計算本方法下丙酸相對于巴豆酸的平均校正因子。
[0023]前面兩種方法步驟2)中將待檢測樣品中的丙酸鹽轉(zhuǎn)化成游離丙酸按如下方法進行，如果飼料添加劑中丙酸鹽唯一且為丙酸銨，則無需進行酸化處理。由于丙酸和丙酸銨都能溶解于無水乙醇中，實際處理時，樣品先用無水乙醇提取，丙酸銨在氣相色譜儀進樣口受熱分解為丙酸和氨。如果飼料添加劑中含有其他丙酸鹽(如丙酸鈣、丙酸鈉或者丙酸鉀)，則加入甲酸酸化待檢測樣品，所加入甲酸為分析純，添加量應(yīng)保證能夠全部置換出丙酸鹽中的丙酸，甲酸加入后充分搖勻，并放置一段時間。
[0024]上述步驟2)加入無水乙醇后應(yīng)充分振搖，所述無水乙醇的量應(yīng)滿足上清液中丙酸濃度接近丙酸標準儲備液濃度。雖然樣品中丙酸的含量不能確定，但對于飼料防霉劑和酸化劑來說，其含量通常有一個大致范圍，所以可以預(yù)先大概估計，基于估計含量來加入無水乙醇。所述充分振搖應(yīng)避免有利于體系中物質(zhì)揮發(fā)的操作。
[0025]氣相色譜法檢測條件應(yīng)滿足丙酸峰峰形良好，保留時間適宜。使用內(nèi)標物時，丙酸峰與內(nèi)標物峰分離徹底。
[0026]下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步說明。
[0027]本發(fā)明主要需要的設(shè)備有分析天平、氣相色譜儀及其配套設(shè)備，以及丙酸標準品、分析純的無水乙醇和甲酸等，分析步驟、方法敘述如下:
實施例一、丙酸和丙酸銨型防霉劑中總丙酸含量測定(外標法)
I試劑和溶液
1.1無水乙醇分析純
1.2丙酸標準品
1.3丙酸標準儲備液:50mg/mL無水乙醇溶液。(密封后4°C保存，保質(zhì)期3個月。)
1.4丙酸標準工作液:分別吸取40、20、10、4、2mL丙酸標準儲備液于IOOmL容量瓶中，用無水乙醇定容(用時現(xiàn)配)，配制成20、10、5、2和lmg/mL丙酸標準工作液。
[0028]2丙酸含量測定
2.1原理
丙酸和丙酸銨都能溶解于無水乙醇中。樣品用無水乙醇提取。丙酸銨在進樣口受熱分解為丙酸和氨。使用FID檢測丙酸峰面積，再通過標準曲線計算丙酸濃度，從而計算出防霉劑中總丙酸含量。
[0029]2.2樣品提取
快速準確稱取Ig左右(精確到0.0OOlg)樣品于50mL具塞三角瓶中，加入25mL無水乙醇，手動劇烈振搖5min后離心或者放置過夜(至少6h)。小心吸取上清液過0.22 μ m 一次性有機濾膜，濾液收集于樣品瓶中上機待測。
[0030]2.3儀器和條件
2.3.1儀器
氣相色譜儀:配備FID檢測器；
色譜柱:HP-FFAP毛細管色譜柱，30mX250ymX0.25 μ m ；
2.3.2主要儀器條件
調(diào)整儀器參數(shù)，使保留組分與試劑及雜峰分離。具體參數(shù)需根據(jù)不同氣相色譜儀作出調(diào)整。推薦的儀器條件如下(適用于安捷倫7890B):
進樣口溫度:230°C。
[0031]檢測器溫度:230 °C。
[0032]載氣:氮氣；恒流模式,柱流量1.0mL/min。
[0033]柱箱溫度:起始溫度100°C，恒溫5min。再以100°C /min速率升溫到200°C。
[0034]進樣量:1 UL ;分流比50:1 ;
空氣流量:400mL/min ;氫氣流量:40mL/min ;尾吹氣流量:30 mL/min ；2.4結(jié)果的計算
2.4.1丙酸標準曲線的制定:
將配制成的20、10、5、2和lmg/mL丙酸標準工作液按上面條件進行測定。以丙酸濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標做標準曲線。圖2為實施例一得到的丙酸標準曲線。圖1為防霉劑中丙酸色譜圖。
[0035]2.4.2 計算
樣品中有效組分丙酸含量按下式計算:
【權(quán)利要求】
1.一種混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法，該混合型飼料添加劑中含有丙酸和丙酸鹽，其特征在于:檢測步驟如下， 1)制作用毛細管氣相色譜法測得的丙酸濃度與峰面積的對應(yīng)關(guān)系標準曲線； 2 )將待檢測樣品中的丙酸鹽轉(zhuǎn)化成游離丙酸，再向待檢測樣品中加入足量的無水乙醇使待檢測樣品中的丙酸以及丙酸鹽轉(zhuǎn)化成的游離丙酸完全溶解于無水乙醇中，以將丙酸從待檢測樣品中提取出來，得到混合液；加入無水乙醇提取時應(yīng)充分振搖或者低溫超聲，然后離心或者放置6小時以上； 3)取第2)步所得混合液的上清液并過一次性有機濾膜，通過毛細管氣相色譜法測得濾液中丙酸的峰面積； 4)根據(jù)第1)步制作的丙酸濃度與峰面積的對應(yīng)關(guān)系標準曲線，再結(jié)合第3)步得到的濾液中丙酸的峰面積，計算濾液中丙酸的濃度，由此計算出待檢測樣品中總丙酸含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法，其特征在于:所述步驟I)制作標準曲線時需要配置5-8個濃度梯度在0.1~20 mg/mL之間的丙酸標準工作液進樣分析，根據(jù)各濃度所測丙酸峰面積的大小與濃度的對應(yīng)關(guān)系做標準曲線，要求相關(guān)系數(shù)大于0.99。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法，其特征在于:所述步驟2)中將待檢測樣品中的丙酸鹽轉(zhuǎn)化成游離丙酸按如下方法進行，如果丙酸鹽唯一且為丙酸銨，則無需進行酸化處理，其可在進樣口高溫環(huán)境下分解為丙酸和氨；否則，則需加入甲酸酸化待檢測樣品，所加入甲酸為分析純，添加量應(yīng)保證能夠全部置換出丙酸鹽中的丙酸，甲酸加入后充分搖勻，并放置一段時間。
4.一種混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法，該混合型飼料添加劑中含有丙酸和丙酸鹽，其特征在于:檢測步驟如下， 1)配制確定濃度的丙酸標準儲備液，取一定體積該標準儲備液于容量瓶中，再加入一定體積的預(yù)先配置好的內(nèi)標物標準溶液，用無水乙醇定容，得到丙酸標準溶液；丙酸標準溶液過一次性有機濾膜，濾液用毛細管氣相色譜法測定丙酸和內(nèi)標物的峰面積，再結(jié)合丙酸標準儲備液和內(nèi)標物的濃度計算本方法下丙酸相對于內(nèi)標物的校正因子； 2 )將待檢測樣品中的丙酸鹽轉(zhuǎn)化成游離丙酸，再向待檢測樣品中加入足量的無水乙醇使待檢測樣品中的丙酸以及丙酸鹽轉(zhuǎn)化成的游離丙酸完全溶解于無水乙醇中，以將丙酸從待檢測樣品中提取出來，得到混合液；加入無水乙醇提取時應(yīng)充分振搖或者低溫超聲，然后離心或者放置6小時以上； 3)取第2)步所得混合液的上清液，將此上清液視為步驟1)中的丙酸標準儲備液，按步驟I)操作測定丙酸和內(nèi)標物的峰面積； 4)根據(jù)第I)步得到的丙酸相對于內(nèi)標物的校正因子，再結(jié)合第3)步得到的濾液中丙酸和內(nèi)標物的峰面積，計算濾液中丙酸的濃度，由此計算出待檢測樣品中總丙酸含量。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法，其特征在于:所述步驟2)中將待檢測樣品中的丙酸鹽轉(zhuǎn)化成游離丙酸按如下方法進行，如果飼料添加劑中丙酸鹽唯一且為丙酸銨，則無需進行酸化處理，其可在進樣口高溫環(huán)境下分解為丙酸和氨；否則，則需加入甲酸酸化待檢測樣品，所加入甲酸為分析純，添加量應(yīng)保證能夠全部置換出丙酸鹽中的丙酸，甲酸加入后充分搖勻，并放置一段時間。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法，其特征在于:所述內(nèi)標物為巴豆酸標準品，步驟I)中應(yīng)重復(fù)配置6~8次丙酸標準溶液上機測定，計算本方法下丙酸相對于巴豆酸的平均校正因子。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的混合型飼料添加劑中總丙酸含量檢測方法，其特征在于:所述步驟2)中提取丙酸的無水乙醇的量同時應(yīng)滿足上清液中丙酸濃度接近丙酸標準儲備液濃 度。
【文檔編號】G01N30/06GK103884796SQ201410135214
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年4月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月4日
【發(fā)明者】周俊, 桂余, 陶有倫 申請人:重慶民泰香料化工有限責任公司