羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法，該方法采用超高效液相色譜法檢測(cè)羅紅霉素膠囊。本發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出最佳的流動(dòng)相組成，流速，檢測(cè)波長(zhǎng)和色譜柱等分析條件，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明，本發(fā)明提供的羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法，穩(wěn)定性和重復(fù)性好、分析速度快，分析效率高，可在3分鐘以內(nèi)檢測(cè)出羅紅霉素的含量，并且分離度好，可以靈敏準(zhǔn)確的定性、定量檢測(cè)目標(biāo)化合物，從而可以高效、客觀、全面、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)羅紅霉素膠囊的質(zhì)量，對(duì)控制羅紅霉素膠囊的質(zhì)量和保證臨床療效具有重要意義。
【專利說明】羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥物制劑的質(zhì)量控制方法，具體涉及一種羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002]羅紅霉素膠囊主要成份為羅紅霉素，9- {O- [ (2-甲氧基乙氧基)-甲基]-肟基}紅霉素，分子式為C41H76N2Otj羅紅霉素是紅霉素A的衍生物，是新一代的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要作用于革蘭氏陽(yáng)性菌、厭氧菌、衣原體和支原體等?，F(xiàn)有技術(shù)中一般采用HPLC法測(cè)定羅紅霉素含量，但是現(xiàn)有技術(shù)的測(cè)量方法，操作比較繁瑣，尤其是分析時(shí)間較長(zhǎng)，對(duì)于檢驗(yàn)時(shí)間有較高要求的生產(chǎn)企業(yè)，現(xiàn)有技術(shù)的普通HPLC方法的分析檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，并且精密度不高，檢測(cè)效率不高，不能滿足生產(chǎn)過程中，對(duì)于分析時(shí)間有較高要求的中間產(chǎn)品的質(zhì)量控制。
[0003]因此，為了控制好羅紅霉素膠囊制劑的臨床安全性，維護(hù)患者的利益，滿足快速分析的目的，很有必要在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)之上，研究設(shè)計(jì)出能準(zhǔn)確檢測(cè)羅紅霉素的檢測(cè)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種檢測(cè)靈敏度高，精密度高，檢測(cè)速度快，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，可以客觀、全面、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)羅紅霉素膠囊的質(zhì)量，對(duì)控制羅紅霉素膠囊劑的質(zhì)量和保證療效具有重要意義。
[0005]技術(shù)方案:為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所提供的羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟:
[0006]羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于，它包括以下步驟:
[0007](I)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備:精密稱取羅紅霉素對(duì)照品，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液溶解，用0.22 μ m濾膜過濾，制成濃度為lmg/mL的羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液；
[0008](2)羅紅霉素樣品溶液的制備:取羅紅霉素膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，精密稱取適量置于量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液，超聲振蕩20?30min,使羅紅霉素完全溶解,放冷至室溫，用0.22 μ m濾膜過濾,制成濃度為lmg/mL的羅紅霉素供試品溶液；
[0009](3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:取步驟(I)得到的羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別精密量取3ml、4ml、5ml、6ml、7ml對(duì)照品儲(chǔ)備液，置IOml量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度
0.067mol/L磷酸二氫銨溶液稀釋至刻度，搖勻，即得系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別精密量取系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各2 μ L，注入超高效液相色譜儀制備標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0010]所述的色譜條件為:色譜柱:反相C18柱；流動(dòng)相:體積比為45:55的乙腈:
0.067mol/L磷酸二氫銨溶液組成流動(dòng)相，并用三乙胺調(diào)節(jié)pH值為6.5，流速:1.5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):210nm，柱溫30°C ；[0011](4)羅紅霉素樣品中羅紅霉素的含量測(cè)定:精密吸取步驟(2)所述的羅紅霉素膠囊樣品溶液2 μ I，注入超高效液相色譜儀分析5分鐘，色譜條件為:色譜柱:反相C18柱；流動(dòng)相:體積比為45:55的乙腈:0.067mol.L-1磷酸二氫銨溶液組成的流動(dòng)相，并用三乙胺調(diào)節(jié)pH值為6.5，流速:1.5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):210nm，柱溫30°C，并按步驟(3)所述的標(biāo)準(zhǔn)
曲線測(cè)量羅紅霉素膠囊中羅紅霉素的含量。
[0012]本發(fā)明所述的羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法，本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)研究表明，采用常規(guī)的0.25 μ m濾膜過濾不能很好的過濾雜質(zhì)，研究表明，采用0.22 μ m孔徑的濾膜對(duì)羅紅霉素樣品或標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行過濾，可以有效將紅霉素等雜質(zhì)過濾，有利于整個(gè)分析過程，提高分析效率。
[0013]作為優(yōu)選方案，本發(fā)明所述的羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法，步驟(3)中以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為:y=261.34x+0.8224，r=0.9999，羅紅霉素在0.6026?1.4060mg/mL與峰面積的線性關(guān)系良好。
[0014]作為優(yōu)選方案，本發(fā)明所述的羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法，步驟(3)和(4)所述的反相 C18 柱為 Poroshell 20 SB-Clgo
[0015]作為優(yōu)選方案，以上所述的羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法，步驟(3)和(4)所述的超高效液相色譜儀的檢測(cè)器為DAD檢測(cè)器。
[0016]常規(guī)的檢測(cè)方法，靈敏度、精密度不高，尤其是分析時(shí)間長(zhǎng)，為了嚴(yán)格控制好羅紅霉素膠囊的質(zhì)量，制定檢測(cè)羅紅霉素膠囊含量的方法，本發(fā)明經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)對(duì)流動(dòng)相組成、流速、檢測(cè)波長(zhǎng)及色譜柱等色譜條件進(jìn)行篩選，得到適合分析羅紅霉素的最佳色譜條件。
[0017]1、本發(fā)明通過全波長(zhǎng)掃描和3D等高線觀察，確定羅紅霉素目標(biāo)化合物在210nm處有較大的吸收，靈敏度高，因此本發(fā)明采用210nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，可以準(zhǔn)確靈敏的檢測(cè)到目標(biāo)化合物。
[0018]2、為了縮短羅紅霉素的分析時(shí)間，提高分析效率，提高羅紅霉素的在色譜柱的分離度，本發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)篩選流動(dòng)相的組成，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用體積比為45:55的乙腈:
0.067mol -L-1磷酸二氫銨溶液組成的流動(dòng)相，并用三乙胺調(diào)節(jié)pH值為6.5作為流動(dòng)相，可以有效的將羅紅霉素在色譜柱上達(dá)到很好的分離，不會(huì)出現(xiàn)峰重疊等現(xiàn)象，目標(biāo)化合物峰形好，從而能保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，并且具有分析時(shí)間短，分析速度快的優(yōu)點(diǎn)。
[0019]3、同時(shí)本發(fā)明還對(duì)流動(dòng)相的流動(dòng)速度進(jìn)行了考察，如流速過快，分離度不夠理想，流速過慢，分析時(shí)間長(zhǎng)，因此本發(fā)明分別考察了 2.0mL/min, 1.5mL/min、lmL/min、0.8mL/min、0.6mL/min、0.5mL/min、0.4mL/min和0.2mL/min不同流速，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)流動(dòng)相的流速為1.5mL/min時(shí),各化合物的峰形最好、分離度最好,理論塔板數(shù)最高,并且分析速度快，分析時(shí)間短，分析效率高，因此本發(fā)明采用流動(dòng)相的流速為1.5mL/min。
[0020]4、同時(shí)本發(fā)明對(duì)色譜柱的柱溫進(jìn)行了篩選，考察了色譜柱在20 V、25 °C、28 V、30°C和35°C條件下化合物的分離效果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，色譜柱在30°C條件下分離效果最好，分離重復(fù)性和穩(wěn)定性最好。因此本發(fā)明采用色譜柱的柱溫為30°C。
[0021]5、本發(fā)明采用超高效液相(UPLC)取代現(xiàn)有技術(shù)中普通高效液相(HPLC)的色譜分析目標(biāo)化合物，選用安捷倫(Agilent) 1290Infinity系統(tǒng)。同時(shí)本發(fā)明對(duì)多種色譜柱也進(jìn)行了篩選，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Poroshell 20 SB-C18色譜柱的分離效果最好。因此，本發(fā)明以Poroshell 20 SB-C18柱作為分析柱。[0022]6、本發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)篩選，采用0.22 μ m孔徑的濾膜對(duì)羅紅霉素樣品或標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行過濾，可有效將雜質(zhì)過濾，提高分析效率。
[0023]有益效果:本發(fā)明提供的羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0024]本發(fā)明首選超高效液相色譜儀(UPLC)，并且根據(jù)羅紅霉素膠囊中活性成分和雜質(zhì)成分的結(jié)構(gòu)性質(zhì)特點(diǎn)，通過大量實(shí)驗(yàn)篩選出最佳的流動(dòng)相組成、流速，檢測(cè)波長(zhǎng)、色譜柱等分析條件，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明，本發(fā)明提供的羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法可以快速，靈敏、準(zhǔn)確的檢測(cè)目標(biāo)活性成分，可以在3分鐘以內(nèi)檢測(cè)出羅紅霉素的質(zhì)量，相比現(xiàn)有技術(shù)的分析條件，具有更強(qiáng)的分離能力、更高分離度、更高的速度及更高的靈敏度，尤其是具有很高的分析效率，可滿足羅紅霉素中間產(chǎn)品的質(zhì)量控制，可以克服現(xiàn)有檢測(cè)方法分離速度慢，分離效果差，檢測(cè)靈敏度低、準(zhǔn)確度低、穩(wěn)定性差等諸多缺點(diǎn)，且本發(fā)明提供的質(zhì)量檢測(cè)方法穩(wěn)定性好、對(duì)分析成分的分離度好，可定性、定量檢測(cè)分析羅紅霉素。因此，本發(fā)明提供的羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法可以客觀、全面、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)羅紅霉素膠囊的質(zhì)量，對(duì)控制羅紅霉素膠囊的質(zhì)量和保證臨床療效具有重要意義。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1為羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品的超高效液相色譜檢測(cè)分析圖。
[0026]圖2為羅紅霉素膠囊樣品中羅紅霉素的超高效液相色譜檢測(cè)分析圖。
【具體實(shí)施方式】
[0027]下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所限定的范圍。
[0028]實(shí)施列I羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法的方法學(xué)考察
[0029]1、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
[0030]取羅紅霉素膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，精密稱取適量置于量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液，超聲振蕩20?30min，使羅紅霉素完全溶解，放冷至室溫，用0.22 μ m濾膜過濾，制成濃度為lmg/mL的羅紅霉素供試品溶液；然后分別于
0、0.5、l、2、3h注入超高效液相色譜儀分析(色譜條件為:色譜柱:反相C18柱；流動(dòng)相:體積比為45:55的乙腈:0.067mol *L_1磷酸二氫銨溶液組成的流動(dòng)相，并用三乙胺調(diào)節(jié)pH值為
6.5，流速:1.5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):210nm，柱溫 30°C )，并按回歸方程為:y=261.34x+0.8224，r=0.9999測(cè)定羅紅霉素，結(jié)果羅紅霉素峰面積的RSD=L 4%，表明供試品溶液在3h內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定好。
[0031]2、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
[0032]精密稱定6份羅紅霉素膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取適量置于量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液，超聲振蕩20?30min，使羅紅霉素完全溶解，放冷至室溫，用0.22 μ m濾膜過濾，制成濃度為lmg/mL的羅紅霉素供試品溶液，各取2 μ L分別注入超高效液相色譜儀分析(色譜條件為:色譜柱:反相C18柱；流動(dòng)相:體積比為45:55的乙腈:0.067mol.L-1磷酸二氫銨溶液組成的流動(dòng)相，并用三乙胺調(diào)節(jié)pH值為6.5，流速:1.5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):210nm，柱溫 30°C )，并按回歸方程為:y=261.34x+0.8224，r=0.9999測(cè)定羅紅霉素，結(jié)果樣品中羅紅霉素平均含量為97.13%，RSD=0.7% (n=6)。以上重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的羅紅霉素膠囊的檢測(cè)方法的重復(fù)性好。
[0033]3、加樣回收率實(shí)驗(yàn)
[0034]稱取相當(dāng)于80%，100%, 120%標(biāo)示量的羅紅霉素加入相應(yīng)輔料各3份，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，并按2所述的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的色譜條件和標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算羅紅霉素回收率。結(jié)果羅紅霉素的平均回收率為99.68% (RSD=0.8%，n=9)。表明本發(fā)明提供的羅紅霉素膠囊的檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度高。
[0035]實(shí)施列2羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟:
[0036](I)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備:精密稱取羅紅霉素對(duì)照品，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液溶解，制成濃度為lmg/mL的羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液；
[0037](2)羅紅霉素樣品溶液的制備:取6批羅紅霉素膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，精密稱取適量置于量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液，超聲振蕩20min,使羅紅霉素完全溶解,放冷至室溫,用0.22 μ m濾膜過濾,制成濃度為lmg/mL的羅紅霉素供試品溶液；
[0038](3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:取步驟(I)得到的羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別精密量取3ml、4ml、5ml、6ml、7ml對(duì)照品儲(chǔ)備液，置IOml量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度
0.067mol/L磷酸二氫銨溶液稀釋至刻度，搖勻，即得系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別精密量取系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各2 μ L，注入超高效液相色譜儀制備標(biāo)準(zhǔn)曲線；以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為:y=261.34x+0.8224，r=0.9999，羅紅霉素在0.6026?
1.4060mg/mL與峰面積的線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)品的色譜分析圖如圖1所示；
[0039]所述的色譜條件為:色譜柱=Poroshel 120SB_C18 ;流動(dòng)相:體積比為45:55的乙腈:0.067mol/L磷酸二氫銨溶液組成流動(dòng)相，并用三乙胺調(diào)節(jié)pH值為6.5，流速:1.5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):210nm，柱溫30°C ；
[0040](4)羅紅霉素樣品中羅紅霉素的含量測(cè)定:精密吸取步驟(2)所述的羅紅霉素膠囊樣品溶液各2 μ I，注入超高效液相色譜儀分析5分鐘，樣品的色譜分析圖如圖2所示；
[0041]色譜條件為:色譜柱=Poroshell 20 SB-C18 ;流動(dòng)相:體積比為45:55的乙腈:
0.067mol.L-1磷酸二氫銨溶液組成的流動(dòng)相，并用三乙胺調(diào)節(jié)pH值為6.5，流速:1.5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):210nm，柱溫30°C，并按步驟(3)所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)量羅紅霉素膠囊中羅紅霉素的含量。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表I所示。
[0042]通過以上分析，羅紅霉素膠囊有效成分在本發(fā)明提供的分析條件下，能夠很好的分離，峰形好，檢測(cè)靈敏度高，化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好，r值均達(dá)到0.999以上，尤其是具有分析速度快，分析效率高的優(yōu)點(diǎn)，可滿足需要在短時(shí)間內(nèi)，對(duì)多個(gè)樣品中羅紅霉素進(jìn)行含量測(cè)定的要求。
[0043]表I羅紅霉素膠囊中甲鈷胺的檢測(cè)結(jié)果
[0044]
【權(quán)利要求】
1.羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于，它包括以下步驟: (1)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備:精密稱取羅紅霉素對(duì)照品，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液溶解，制成濃度為lmg/mL的羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液； (2)羅紅霉素樣品溶液的制備:取羅紅霉素膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，精密稱取適量置于量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液，超聲振蕩2(T30min，使羅紅霉素完全溶解，放冷至室溫，用0.22 μ m濾膜過濾,制成濃度為lmg/mL的羅紅霉素供試品溶液； (3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:取步驟(1)得到的羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別精密量取3ml、4 ml,5 ml,6 ml、7ml對(duì)照品儲(chǔ)備液，置IOml量瓶中，加體積比為45:55的乙腈和濃度0.067mol/L磷酸二氫銨溶液稀釋至刻度，搖勻，即得系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別精密量取系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各2 μ L，注入超高效液相色譜儀制備標(biāo)準(zhǔn)曲線； 所述的色譜條件為:色譜柱:反相C18柱；流動(dòng)相:體積比為45:55的乙腈:0.067mol/L磷酸二氫銨溶液組成流動(dòng)相，并用三乙胺調(diào)節(jié)pH值為6.5，流速:1.5 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng):210nm，柱溫 30°C ； (4)羅紅霉素樣品中羅紅霉素的含量測(cè)定:精密吸取步驟(2)所述的羅紅霉素膠囊樣品溶液2 μ 1，注入超高效液相色譜儀分析5分鐘，色譜條件為:色譜柱:反相C18柱；流動(dòng)相:體積比為45:55的乙腈:0.067mol -L-1磷酸二氫銨溶液組成的流動(dòng)相，并用三乙胺調(diào)節(jié)pH值為6.5，流速:1.5 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):210nm，柱溫30°C，并按步驟(3)所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)量羅紅霉素膠囊中羅紅霉素的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于，步驟(3)中以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為:y=261.34x+0.8224，r=0.9999，羅紅霉素在0.6026^1.4060 mg/mL與峰面積的線性關(guān)系良好。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羅紅霉素膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征在于，步驟(3)和(4)所述的反相C18柱為Poroshell 20 SB-Clgo
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK103776945SQ201410019957
【公開日】2014年5月7日 申請(qǐng)日期:2014年1月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月16日
【發(fā)明者】雷曉雪, 張高平, 王麗楠, 曹義海 申請(qǐng)人:揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)南京海陵藥業(yè)有限公司