專利名稱：一種免疫層析試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及到一種用于疾病診斷定量檢測(cè)的試劑盒。
背景技術(shù)：
目前，免疫層析技術(shù)已被廣泛的應(yīng)用于疾病的診斷中，但由于技術(shù)本身的局限性，已有的免疫層析技術(shù)絕大部分應(yīng)用于定性的診斷試劑中，而很難運(yùn)用于定量的診斷試劑中，其原因在于試劑盒中的檢測(cè)靈敏度低，無法達(dá)到幾十pg/ml的檢測(cè)水平，特別是偶合物和待檢測(cè)蛋白的聚合體顆粒的大小很難控制，其偶合顆粒還存在有不均勻的現(xiàn)象發(fā)生，造成精確度和準(zhǔn)確度低，變動(dòng)系數(shù)大，其變動(dòng)系數(shù)在低端臨近最低檢測(cè)水平時(shí)，檢測(cè)膜的檢測(cè)方法往往大于15%，制約了免疫層析技術(shù)精密定量的發(fā)展，從而達(dá)不到定量診斷的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問題是提供一種靈敏度、精確度高的免疫層析試劑盒。為了解決上述技術(shù)問題，本實(shí)用新型提供了一種免疫層析試劑盒，它包括至少一個(gè)試劑條，所述試劑條包括樣品墊片、檢測(cè)膜、吸水墊片和支撐片，所述檢測(cè)膜上設(shè)有測(cè)試帶和質(zhì)控帶，所述測(cè)試帶或質(zhì)控帶由蛋白或核糖核酸制成，所述樣品墊片和檢測(cè)膜之間設(shè)有偶合物墊片，所述樣品墊片與偶合物墊片之間設(shè)有第一層玻璃纖維墊片，所述偶合物墊片與檢測(cè)膜之間設(shè)有第二層玻璃纖維墊片，所述第一層玻璃纖維墊片或樣品墊片上包被有阻斷試劑，所述樣品墊片、偶合物墊片、第二層玻璃纖維墊片和檢測(cè)膜依次呈搭接的狀態(tài)，所述吸水墊片設(shè)置于檢測(cè) 膜上，并與檢測(cè)膜保持水平狀態(tài)。作為本實(shí)用新型的進(jìn)一步改進(jìn)，所述樣品墊片、偶合物墊片、第一層玻璃纖維墊片或第二層玻璃纖維墊片由玻璃纖維或棉纖維制成。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型具有以下優(yōu)點(diǎn)。(I)樣品墊過濾了樣品中的大顆粒雜質(zhì)和細(xì)胞，第一層玻璃纖維墊片或樣品墊片上包被有阻斷試劑，樣品與第一層玻璃纖維墊片上的阻斷試劑反應(yīng)，在第一層玻璃纖維墊片中先中和并過濾非特異性結(jié)合蛋白，再與偶合物結(jié)合反應(yīng)，從而有效的降低了假陽性，便于提供更精確的檢測(cè)結(jié)果。(2)所述樣本、免疫聚合體、內(nèi)控偶合物通過第二層玻璃纖維墊片進(jìn)一步過濾，使聚合體顆粒更加的均勻，減少了測(cè)試盒的整體變異系數(shù)，使偶合物與待檢測(cè)蛋白在檢測(cè)膜前的反應(yīng)充分，從而提高檢測(cè)的靈敏度和精確度，適用于定量診斷的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。(3)樣品墊片和檢測(cè)膜之間增加二層玻璃纖維墊片過濾點(diǎn)，通過上述結(jié)構(gòu)改進(jìn)，達(dá)到Pg/ml級(jí)的檢測(cè)水平，在混和檢測(cè)膜的情況下，變動(dòng)系數(shù)在接近低端檢測(cè)數(shù)值時(shí)，變動(dòng)系數(shù)(CV)小于15%。
圖1為本實(shí)用新型試劑盒中單個(gè)試紙條的剖面圖。 1-樣品墊片，2-檢測(cè)膜，3-吸水墊片，4-支撐片，5-偶合物墊片，6-1第一層玻璃纖維墊片，6-2第二層玻璃纖維墊片，7-測(cè)試帶，8-質(zhì)控帶。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)一步說明。實(shí)施例一。一種免疫層析試劑盒，它包括至少一個(gè)試劑條，所述試劑條包括樣品墊片1、檢測(cè)膜2、吸水墊片3和支撐片4，所述檢測(cè)膜2上設(shè)有測(cè)試帶7和質(zhì)控帶8，所述測(cè)試帶7或質(zhì)控帶8由蛋白或核糖核酸制成，所述樣品墊片I和檢測(cè)膜2之間設(shè)有偶合物墊片5，所述偶合物墊片5與檢測(cè)膜2之間設(shè)有第二層玻璃纖維墊片6-2，所述樣品墊片1、偶合物墊片5、第二層玻璃纖維墊片6-2和檢測(cè)膜2依次呈搭接的狀態(tài)，樣品墊片I上包被有阻斷試劑，所述吸水墊片3設(shè)置于檢測(cè)膜2上，并與檢測(cè)膜2保持水平狀態(tài)。所述樣品墊片1、偶合物墊片5和第二層玻璃纖維墊片6-2由玻璃纖維或棉纖維制成。本實(shí)用新型試劑盒的檢測(cè)流程為:1、采集樣品；2、過濾處理:取待測(cè)樣品60_100μ1滴入樣品墊片I上，樣品墊片I上包被有阻斷試劑，樣品墊片I過濾樣品中顆粒雜質(zhì)和細(xì)胞并阻斷樣品中的非特異性結(jié)合蛋白，過濾后，樣品中的待測(cè)蛋白再與偶合物墊片5中的偶合物結(jié)合反應(yīng)形成免疫聚合體，所述免疫聚合體與未結(jié)合的偶合物通過第二層玻璃纖維墊片6-2進(jìn)一步過濾，所述未結(jié)合的偶合物為內(nèi)控偶合物，使得聚合體顆粒均勻，減少試劑盒整體變異系數(shù)，免疫反應(yīng)充分；3、反應(yīng)處理:免疫聚合體和內(nèi)控偶合物流入檢測(cè)膜2，同時(shí)與測(cè)試帶7上的物質(zhì)免疫反應(yīng)并結(jié)合，待檢測(cè)蛋白聚合體固定于測(cè)試帶7位置，內(nèi)控偶合物繼續(xù)流入質(zhì)控帶8，同時(shí)與質(zhì)控帶8上的物質(zhì)免疫反應(yīng)并結(jié)合，偶合物停留于質(zhì)控帶8位置，多余液體流入吸水墊片3內(nèi)；4、捕獲信息:測(cè)試帶7和質(zhì)控帶8上的偶合物帶有光學(xué)信號(hào)，所述信號(hào)通過檢測(cè)儀器捕獲并按設(shè)定反應(yīng)曲線進(jìn)行定量計(jì)算；5、分析判斷:計(jì)算檢測(cè)蛋白的濃度；實(shí)施例二。如圖1所示,一種免疫層析試劑盒,它包括至少一個(gè)試劑條,所述試劑條包括樣品墊片1、檢測(cè)膜2、吸水墊片3和支撐片4，所述檢測(cè)膜2上設(shè)有測(cè)試帶7和質(zhì)控帶8，所述測(cè)試帶7或質(zhì)控帶8由蛋白或核糖核酸制成，所述樣品墊片I和檢測(cè)膜2之間設(shè)有偶合物墊片5，所述樣品墊片I與偶合物墊片5之間設(shè)有第一層玻璃纖維墊片6-1，所述偶合物墊片5與檢測(cè)膜2之間設(shè)有第二層玻璃纖維墊片6-2，所述第一層玻璃纖維墊片6-1上包被有阻斷試劑，所述樣品墊片1、偶合物墊片5、第二層玻璃纖維墊片6-2和檢測(cè)膜2依次呈搭接的狀態(tài)，所述吸水墊片3設(shè)置于檢測(cè)膜2上，并與檢測(cè)膜2保持水平狀態(tài)。所述樣品墊片1、偶合物墊片5、第一層玻璃纖維墊片6-1和第二層玻璃纖維墊片6-2由玻璃纖維或棉纖維制成。本實(shí)用新型試劑盒的檢測(cè)流程為:1、采集樣品；2、過濾處理:取待測(cè)樣品60-1001滴入樣品墊片I上，樣品墊片I過濾樣品中顆粒雜質(zhì)和細(xì)胞，過濾后樣品通過第一層玻璃纖維墊片6-1，第一層玻璃纖維墊片6-1上包被有免疫阻斷試劑，樣品與阻斷試劑反應(yīng)，將樣品中非特異性結(jié)合蛋白中和，降低假陽性，樣品中的待測(cè)蛋白再與偶合物墊片5中的偶合物結(jié)合反應(yīng)形成免疫聚合體，所述免疫聚合體與未結(jié)合的偶合物通過第二層玻璃纖維墊片6-2進(jìn)一步過濾，所述未結(jié)合的偶合物為內(nèi)控偶合物，使得免疫聚合體顆粒均勻，減少試劑盒整體變異系數(shù)，免疫反應(yīng)；3、反應(yīng)處理:免疫聚合體和內(nèi)控偶合物流入檢測(cè)膜2，同時(shí)與測(cè)試帶7上的物質(zhì)反應(yīng)并結(jié)合，待檢測(cè)蛋白免疫聚合體固定于測(cè)試帶7位置，內(nèi)控偶合物繼續(xù)流入質(zhì)控帶8，同時(shí)與質(zhì)控帶8上的物質(zhì)反應(yīng)并免疫結(jié)合，偶合物停留于質(zhì)控帶8位置，多余液體流入吸水墊片3內(nèi)；4、捕獲信息:測(cè)試帶7和質(zhì)控帶8上的偶合物帶有光學(xué)信號(hào)，所述信號(hào)通過檢測(cè)儀器捕獲并按設(shè)定反應(yīng)曲線進(jìn)行定量計(jì)算；5、分析判斷:計(jì)算檢測(cè)蛋白的濃度；6、結(jié)果評(píng)價(jià):使用此試紙條檢測(cè)，通過實(shí)驗(yàn)觀察，與現(xiàn)有技術(shù)相比數(shù)據(jù)，檢測(cè)的靈敏度提高，檢測(cè)結(jié)果見表1:表1標(biāo)準(zhǔn)品 I現(xiàn)有技術(shù)試劑條 I本試劑條
Opg/ml-1 0.009_0.007
Opg7ml-2 0.0100.006
Opg7ml-3 0.0080.0il
0pg7ml-4 0.0070.010
Opg/ml-5 0.0080.008
Opg7ml-6 0.0120.010
平場(chǎng)值 0090.009
Μ0.0020.002
菱I)系數(shù) 6.9%18.9%
T25pg/ml-l 0.0640.166
T^g/ml-2 0.0580.171
T25pg/ml-3 0.0440.177
T^g/ml-4 0.0680.151
T25pg/ml-5 0.0530.139
T^g/ml-6 0.0640.159
平菌值 0590.160
爾量0.0080.013
變動(dòng)系數(shù) Τ^%— 7.8%
平均值比例 k 5118.2表2臨床樣品I現(xiàn)有技術(shù)試劑條 I本試
樣品 I 0.218_0.678
韓品 2 |θ.320|θ.554 一
權(quán)利要求1.一種免疫層析試劑盒，它包括至少一個(gè)試劑條，所述試劑條主要包括樣品墊片(I)、檢測(cè)膜(2 )、吸水墊片(3 )和支撐片(4 )，所述檢測(cè)膜(2 )上設(shè)有測(cè)試帶(7 )和質(zhì)控帶(8 )，其特征在于:所述樣品墊片(I)和檢測(cè)膜(2)之間設(shè)有偶合物墊片(5)，所述偶合物墊片(5)與檢測(cè)膜(2)之間設(shè)有第二層玻璃纖維墊片(6-2)，所述樣品墊片(I)、偶合物墊片(5)、第二層玻璃纖維墊片(6-2)和檢測(cè)膜(2)依次呈搭接的狀態(tài)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫層析試劑盒，其特征在于:所述樣品墊片(1)與偶合物墊片(5)之間設(shè)有第一層玻璃纖維墊片(6-1)，所述第一層玻璃纖維墊片(6-1)或樣品墊片(I)上包被有阻斷試劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫層析試劑盒，其特征在于:所述吸水墊片(3)設(shè)置于檢測(cè)膜(2 )上，并與檢測(cè)膜(2 )保持水平狀態(tài)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫層析試劑盒，其特征在于:所述樣品墊片(I)、偶合物墊片(5)、第一層玻璃纖維墊片(6-1)或第二層玻璃纖維墊片(6-2)由玻璃纖維或棉纖維制成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫層析試劑盒，其特征在于:所述測(cè)試帶(7)或質(zhì)控帶(8)由蛋白或核糖核酸制成。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種免疫層析試劑盒，它包括至少一個(gè)試劑條，所述試劑條包括樣品墊片(1)、檢測(cè)膜(2)、吸水墊片(3)和支撐片(4)，所述檢測(cè)膜(2)上設(shè)有測(cè)試帶(7)和質(zhì)控帶(8)，所述樣品墊片(1)和檢測(cè)膜(2)之間設(shè)有偶合物墊片(5)所述偶合物墊片(5)與檢測(cè)膜(2)之間設(shè)有第二層玻璃纖維墊片(6-2)；采用上述結(jié)構(gòu)，減少了測(cè)試盒的整體變異系數(shù)，使偶合物與待檢測(cè)蛋白在檢測(cè)膜前的反應(yīng)充分，從而提高檢測(cè)的靈敏度和精確度，適用于定量診斷的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
文檔編號(hào)G01N33/566GK203148950SQ201320168148
公開日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2013年4月3日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月3日
發(fā)明者威廉姆·努特, 劉紅劍, 何小紅, 劉麗萍, 張丹 申請(qǐng)人:瑞萊生物科技(江蘇)有限公司