免疫五項(xiàng)檢測(cè)基礎(chǔ)試劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種免疫五項(xiàng)檢測(cè)基礎(chǔ)試劑，包括穩(wěn)定液1、穩(wěn)定液2，所述穩(wěn)定液1為緩沖液，包括：Tris緩沖液50-100mmol/L、聚乙二醇25-40g/L、疊氮鈉0.6-1.0g/L；穩(wěn)定液2為抗體保存液，包括：Tris緩沖液50-100mmol/L、牛血清蛋白1.5-3.0g/L、疊氮鈉0.6-1.0g/L。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：能夠方便的和IgA抗血清、IgG抗血清、IgM抗血清、C3抗血清、C4抗血清中的一種進(jìn)行結(jié)合，從而進(jìn)行免疫五項(xiàng)檢測(cè)，且靈敏度高、特異性好。
【專利說明】免疫五項(xiàng)檢測(cè)基礎(chǔ)試劑
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及檢測(cè)試劑及其應(yīng)用【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是涉及一種免疫五項(xiàng)檢測(cè)基礎(chǔ)試劑。
【背景技術(shù)】
[0002]免疫五項(xiàng)指的是免疫球蛋白A (IgA)、免疫球蛋白G (IgG)、免疫球蛋白M (IgM),補(bǔ)體C3和C4，其濃度在不同年齡段有差異，在某些疾病情況下，這些指標(biāo)的濃度將出現(xiàn)升高或降低，從而具有疾病診斷的價(jià)值。
[0003]補(bǔ)體系統(tǒng)在體內(nèi)作為一種有效的效應(yīng)機(jī)制，廣泛參與機(jī)體的抗微生物防御反應(yīng)，擴(kuò)大體液免疫功能，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答過程。同時(shí)，在補(bǔ)體活化過程中，某些裂解產(chǎn)物還可介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生一些病理性損傷。補(bǔ)體C3是補(bǔ)體系統(tǒng)中最重要的成分，是連接補(bǔ)體活化傳統(tǒng)途徑和替代途徑的樞紐。補(bǔ)體C4是補(bǔ)體傳統(tǒng)途徑活化中的一個(gè)早期成分。血清補(bǔ)體減少見于急、慢性腎小球腎炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其他自身免疫性疾病，血清補(bǔ)體增加見于各種炎癥、腫瘤、隨急性相反應(yīng)蛋白增高使補(bǔ)體合成增多。
[0004]免疫球蛋白由漿細(xì)胞產(chǎn)生，有特異性識(shí)別抗原和結(jié)合抗原啟動(dòng)體液免疫應(yīng)答的功倉(cāng)泛。
[0005]免疫球蛋白A是機(jī)體黏膜防御感染的重要因素，在血清中以單體形式存在，免疫球蛋白A單體由J鏈連接成二聚體，轉(zhuǎn)移至外分泌液防止黏膜感染。免疫球蛋白A的缺乏大多為先天性，如體液免疫缺陷和聯(lián)合免疫缺陷病，免疫球蛋白A缺乏的患者易呼吸道反復(fù)感染。肝硬化、肝癌、老慢支、免疫球蛋白A骨髓瘤等患者可發(fā)現(xiàn)免疫球蛋白A升高。
[0006]免疫球蛋白G是主要的抗感染抗體，占血清總免疫球蛋白的75%_80%。免疫球蛋白G缺乏在臨床上最常見的癥狀是反復(fù)細(xì)菌感染。營(yíng)養(yǎng)不良、腎病綜合癥、先天性體液免疫缺乏病、放射損傷和免疫抑制劑治療后可出現(xiàn)免疫球蛋白G減少。慢性感染、SLE、慢性活動(dòng)性肝炎、肝硬化、淋巴瘤等病人常可見免疫球蛋白G增多。
[0007]免疫球蛋白M由5個(gè)單體借J鏈連接成五聚體，主要在脾中合成，不能通過毛細(xì)血管壁。免疫球蛋白M是體液免疫應(yīng)答中首先產(chǎn)生的免疫球蛋白，半衰期較短，因此免疫球蛋白M增高常提示有近期感染。免疫球蛋白M不能通過胎盤，胎兒或新生兒血液中檢出高濃度的IgM提示宮內(nèi)感染。
[0008]目前，實(shí)驗(yàn)室測(cè)定免疫球蛋白的方法較多，有傳統(tǒng)的電泳方法(包括單向免疫擴(kuò)散法和火箭免疫電泳法)、紫外分光光度法、免疫比濁法、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、顆粒熒光檢測(cè)技術(shù)(PCFIA)、化學(xué)發(fā)光自顯影技術(shù)(CLAGIA)、高效親和色譜法(HPAC)、毛細(xì)管電泳法(CE)、橢偏光蛋白芯片法以及等離子體共振技術(shù)(SPR)等。然而，前述測(cè)定方法或多或少存在著靈敏度較低、特異性較差的缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的是提供一種免疫五項(xiàng)檢測(cè)基礎(chǔ)試劑，它具有能夠方便的和IgA抗血清、IgG抗血清、IgM抗血清、C3抗血清、C4抗血清中的一種進(jìn)行結(jié)合，從而進(jìn)行免疫五項(xiàng)檢測(cè)，且具有靈敏度高、特異性好的特點(diǎn)。
[0010]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:免疫五項(xiàng)檢測(cè)基礎(chǔ)試劑，包括穩(wěn)定液1、穩(wěn)定液2，所述
[0011]-穩(wěn)定液I為緩沖液，包括:Tris緩沖液50-100mmol/L、聚乙二醇25_40g/L、
疊氮鈉 0.6-1.0g/L ；
[0012]-穩(wěn)定液2為抗體保存液，包括:Tris緩沖液50-100mmol/L、牛血清蛋白
1.5-3.0g/L、疊氮鈉 0.6-1.0g/L。
[0013]所述穩(wěn)定液I和穩(wěn)定液2在25°C時(shí)的PH值均為7.3-8.8。
[0014]所述穩(wěn)定液2還包括濃度為0.01%-0.1%的活性劑，該活性劑為Thesit、曲拉通X-100、Brij35、花王 20AB 中的一種。
[0015]本發(fā)明所具有的優(yōu)點(diǎn)是:能夠方便的和IgA抗血清、IgG抗血清、IgM抗血清、C3抗血清、C4抗血清中的一種進(jìn)行結(jié)合，從而進(jìn)行免疫五項(xiàng)檢測(cè)，且靈敏度高、特異性好。本發(fā)明的免疫五項(xiàng)檢測(cè)基礎(chǔ)試劑涉及的人血清中IgA、IgG、IgM、C3、C4檢測(cè)原理為免疫比濁法?？乖贵w結(jié)合后，形成免疫復(fù)合物，在一定時(shí)間內(nèi)復(fù)合物聚合出現(xiàn)濁度。當(dāng)光線通過溶液時(shí)，可被免疫復(fù)合物吸收。免疫復(fù)合物量越多，光線吸收越多。光線被吸收的量在一定范圍內(nèi)與免疫復(fù)合物的量成正比。利用比濁計(jì)測(cè)定光密度值，復(fù)合物的含量與光密度值成正比，同樣當(dāng)抗體量一定時(shí)，光密度值也與抗原含量成正比。本法較單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和火箭電泳等一般免疫化學(xué)定量方法敏感、快速簡(jiǎn)便?？乖c抗體反應(yīng)具有高度的特異性。這一反應(yīng)是分子表面的結(jié)合，雖然相當(dāng)穩(wěn)定，但因抗原一抗體本身未受到破壞，它們?nèi)钥煞蛛x，因此，反應(yīng)是可逆的。此外，抗原分子與抗體分子的結(jié)合有一定的比例。一般來說，抗原是多價(jià)的，抗體是雙價(jià)的，因而一個(gè)抗體分子可結(jié)合兩個(gè)抗原分子，而一個(gè)抗原分子可結(jié)合多個(gè)抗體。所以，在比例適合時(shí)它們可形成高度交聯(lián)的抗原一抗體大分子復(fù)合物，沉淀下降?？贵w過多或抗原過多，都不能形成高度交聯(lián)的抗原一抗體大分子復(fù)合物，不產(chǎn)生沉淀或沉淀很少。
[0016]抗原一抗體反應(yīng)可分為兩個(gè)階段。第一階段為抗原與抗體的特異性結(jié)合階段。這一階段使親水系統(tǒng)變?yōu)樵魉到y(tǒng)，反應(yīng)很快，幾秒鐘至幾分鐘即可完成，但無可見反應(yīng)。第二階段為抗原與抗體反應(yīng)的可見階段，出現(xiàn)凝集、沉淀、補(bǔ)體結(jié)合等反應(yīng)。這一階段的反應(yīng)比較慢，需要幾分鐘至幾十分鐘，并受電解質(zhì)、溫度、酸堿度等因素的影響。
[0017]TRIS緩沖液的作用為抗原抗體反應(yīng)提供合適的酸堿度，即具有合適的PH值。聚乙二醇促進(jìn)抗原抗體復(fù)合物的凝集，減少反應(yīng)時(shí)間。疊氮鈉作為試劑的防腐劑存在。表面活性劑的加入，提高反應(yīng)的靈敏度，使測(cè)定的結(jié)果更為準(zhǔn)確。牛血清蛋白增加了抗血清在水溶液中的穩(wěn)定性，使試劑的有效期得到提高。本發(fā)明的通用緩沖體系提供了抗原抗體反應(yīng)的合適條件，抗體有效的保存條件，且為其他免疫診斷試劑提供參考。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明:
[0019]圖1是本發(fā)明的實(shí)施例1至實(shí)施例5的儀器測(cè)定樣本的過程示意圖。
【具體實(shí)施方式】[0020]以下實(shí)施例中
[0021]Tris (購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；
[0022]聚乙二醇(購(gòu)自泰州天鴻生化科技有限公司）；
[0023]牛血清蛋白（購(gòu)自北京九州天瑞科技有限公司）；
[0024]疊氮鈉(購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)）；
[0025]曲拉通X-100 (購(gòu)自上海西唐生物科技有限公司）。
[0026]實(shí)施例I
[0027]免疫五項(xiàng)檢測(cè)基礎(chǔ)試劑，包括作為緩沖液的穩(wěn)定液I、作為抗體保存液的穩(wěn)定液
2。其中：
[0028]該穩(wěn)定液I包括：Tris緩沖液50mmol/L、聚乙二醇25g/L、疊氮鈉O. 6g/L,而且,該穩(wěn)定液I在25°C時(shí)的PH值均為7. 3 ;配制過程為：以IL穩(wěn)定液I為例：取合適的容器，加入O. 8L純化水，攪拌的條件下加入6. 055g的TRIS (分子量121. I )，溶解后加入25g聚乙二醇。聚乙二醇完全溶解后，加入O. 6g疊氮鈉，將PH調(diào)至7. 3±0. 2 (25°C)，補(bǔ)足1L。
[0029]該穩(wěn)定液2包括：Tris緩沖液50mmol/L、牛血清蛋白I. 5g/L、疊氮鈉O. 6g/L,而且，該穩(wěn)定液2在25°C時(shí)的PH值均為7. 3。配制過程為：以IL穩(wěn)定液2為例：取合適的容器，加入O. 8L純化水，攪拌的條件下加入6. 055g的TRIS (分子量121. I )，溶解后加入I. 5g牛血清蛋白。牛血清蛋白完全溶解后，加入O. 6g疊氮鈉，將PH調(diào)至7. 3±0. 2 (25°C)。疊氮鈉溶解后補(bǔ)足1L。
[0030]取350ml前述免疫五項(xiàng)檢測(cè)基礎(chǔ)試劑中穩(wěn)定液2，加入150ml羊抗人IgA抗血清。
[0031]試劑可在自動(dòng)生化分析儀直接使用，典型的參數(shù)設(shè)定如下表。
[0032]表1 :IgA應(yīng)用參數(shù)設(shè)定
【權(quán)利要求】
1.免疫五項(xiàng)檢測(cè)基礎(chǔ)試劑，包括穩(wěn)定液I、穩(wěn)定液2，其特征在于：所述 -穩(wěn)定液I為緩沖液，包括=TriS緩沖液50-100mmol/L、聚乙二醇25_40g/L、疊氮鈉 O. 6-1. Og/L ； -穩(wěn)定液2為抗體保存液，包括：Tris緩沖液50-100mmol/L、牛血清蛋白.I.5-3. Og/L、疊氮鈉 O. 6-1. Og/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的免疫五項(xiàng)檢測(cè)基礎(chǔ)試劑，其特征在于：所述穩(wěn)定液I和穩(wěn)定液2在25°C時(shí)的PH值均為7. 3-8. 8。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的免疫五項(xiàng)檢測(cè)基礎(chǔ)試劑，其特征在于：所述穩(wěn)定液2還包括濃度為O. 01%-0. 1%的活性劑，該活性劑為Thesit、曲拉通X-100、Bri j35、花王20AB中的一種。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK103713136SQ201310664009
【公開日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2013年12月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月9日
【發(fā)明者】卓偉奇, 許國(guó)和, 范翠翠, 胡露群 申請(qǐng)人:寧波普瑞柏生物技術(shù)有限公司