食品中d-α-生育酚和l-α-生育酚氣相色譜檢測法
【專利摘要】本發(fā)明涉及食品中d-α-生育酚和l-α-生育酚氣相色譜檢測法。目的是提供的方法具有特異性強，操作簡便，抗干擾能力好、準(zhǔn)確度高的特點，適合食品中d-α-生育酚和l-α-生育酚含量的測定。技術(shù)方案是：一種檢測食品中d-α-生育酚和l-α-生育酚的氣相色譜方法，按照以下步驟進行：1）樣品制備；2）濃縮；3）上機檢測。所述步驟1）中清洗皂化瓶，是用50mL水分3次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中；再用100mL石油醚分兩次洗皂化瓶及其殘渣，石油醚液并入分液漏斗中；之后振搖分液漏斗2min，靜置分層，棄去水層；用50mL蒸餾水洗分液漏斗中石油醚液，用pH試紙檢驗直至水層不顯堿性，備用。
【專利說明】食品中d-α-生育酚和卜α-生育酚氣相色譜檢測法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測方法，尤其是食品中氣相色譜測定d-α -生育酚和l-α -生育酚的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]對大多數(shù)維生素來說，天然維生素與合成維生素除在來源上不同之外，它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)、生物活性及人體的吸收利用上并無很大差別，但維生素E是個例外。維生素Ε，又名生育酹，其化學(xué)結(jié)構(gòu)為色滿(Chroman)的衍生物。維生素E有α、β、gamma、δ生育酹和α、β、Y、δ生育三烯酚8種不同異構(gòu)體，只有α-生育酚以天然和合成形式工業(yè)化生產(chǎn)，其它三種生育酚β _、Y _、S -僅有天然的形式，四種生育三烯酚(α -、β -、Υ -、δ -)也是如此，沒有合成的生育三烯酚。
[0003]天然的和合成的不但在來源上有差異，而且分子結(jié)構(gòu)上有差異，生物活性有差異，在體內(nèi)的吸收也有差異，從母體傳輸?shù)阶訉m胎兒的途徑也有重要差異。(I)來源差異:合成的由石油化工產(chǎn)品丙酮、乙烯、間甲酚等經(jīng)一系列反應(yīng)生成三甲基氫醌和異植物醇，兩者再經(jīng)化學(xué)反應(yīng)縮合而成合成；天然的廣泛存在于各種植物油料的種子中，特別是大豆、玉米胚芽、棉籽、菜籽、葵花籽、米胚芽中。(2)立體結(jié)構(gòu)差異:根據(jù)側(cè)鏈結(jié)構(gòu)的不同，天然的所含的d-α -生育酚(天然形式:RRR-型，即D-型)是單一的立體異構(gòu)體；而合成dl_ α -生育酚是由八個不同的立體異構(gòu)體分子的混合物，在這8個立體異構(gòu)體中每種異構(gòu)體占12.5%，只有一種與天然形式的是完全相同的，其它七個天然中并不存在。(3)生物活性差異:關(guān)于天然d-α-生育酚比合成dl-α-生育酚具有更高的生物活性已成定論，F(xiàn)DA (美國食品與藥品管理局)、WH0 (世界衛(wèi)生組織)、USP (美國藥典)等認為天然品比合成品的生物活性高36%，該差異是二十世紀五十年代通過“鼠胎吸收法”測定的；而非α-生育酚的活性只有α-生育酚的幾十分之一至幾分之一。α -生育酚是一種有效的抗氧化劑，可以延緩衰老，抑制腫瘤，抗心血管病，降低血壓等生理功能，也可以起到美容作用。目前對維生素E的認識存在二個誤區(qū)，一方面檢驗機構(gòu)測定的是維生素E的總量，對是d-α型還是dl-α型的量無法進行檢測；另一方面生產(chǎn)企業(yè)其產(chǎn)品所標(biāo)識的也是總生育酚含量，不標(biāo)明所添加的維生素E是d-α型還是dl-α型，消費者無法知道其中真正功效成分d-α-生育酚的含量。因此，建立一套準(zhǔn)確有效的分析方法獲取食品中d- α -生育酚的數(shù)據(jù)，使消費者知道其中真正功效成分d-α -生育酚的含量，對規(guī)范食品中維生素E的營養(yǎng)標(biāo)識和規(guī)范市場特別是保健食品行業(yè)起到一定的作用。
[0004]關(guān)于維生素E的分析報道較多，主要有比色法、熒光法、薄層層析法、氣相色譜法及高效液相色譜法等。這些方法中(I)比色法:此法操作簡單，靈敏度較高；但由于維生素E沒有特異反應(yīng)，需要采用一些方法除去干擾。(2)熒光法:此法特異性強、干擾少、靈敏、快速、簡單，但分析結(jié)果實際上只是a-E的值。(3)薄層層析法:此法同熒光法類似，也只適用于α-Ε的測定。(4)氣相色譜法:此法目前雖能正確定量維生素Ε，但是對不同型分離困難，同時膽固醇等硬脂類對測定有干擾。(5)高效液相色譜法:為各國維生素E的首選分析方法,但當(dāng)食物中的β型或Y型維生素E含量較少時，β型和Y型維生素E的兩峰重疊，并且dl-α-生育酚8個異構(gòu)體峰都重疊。這些方法所有測定結(jié)果都為對α-生育酚進行定量，未對d- α -生育酚和1- α -生育酚的量進行有效的測定，目前國內(nèi)還未有對食品中d- α -生育酚測定方法的分析報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是克服上述【背景技術(shù)】的不足，提供一種檢測食品中d-α -生育酚和l-α -生育酚的氣相色譜方法，該方法具有特異性強，操作簡便，抗干擾能力好、準(zhǔn)確度高的特點，適合食品中d-α -生育酚和l-α -生育酚含量的測定。
[0006]為了達到上述目的，發(fā)明人進行了廣泛深入的研究試驗，確定了以下的技術(shù)方案:
[0007]一種檢測食品中d-α -生育酚和Ι-α -生育酚的氣相色譜方法，按照以下步驟進行:
[0008]I)、樣品制備:
[0009]稱取I?IOg (精確到0.0lg)食品于皂化瓶中，加入5mL抗壞血酸溶液、IOmL氫氧化鉀溶液和30mL無水乙醇充分混勻后，于沸水浴回流20?40min,冷卻到室溫后,將阜化液移入分液漏斗中；接著清洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗；
[0010]2)、濃縮:將上述提取液過無水硫酸鈉柱干燥，于水浴中充氮保護旋轉(zhuǎn)濃縮至近干，氮氣吹干，用甲醇溶解、混合、并定容至2.0OmL，然后上離心機離心分離5min，取上清液待測尚心待測；
[0011]3)、上機檢測:將上述待測液輸入配有氫火焰檢測器的氣相色譜檢測。
[0012]所述步驟I)中清洗皂化瓶，是用50mL水分3次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中；再用IOOmL石油醚分兩次洗皂化瓶及其殘渣，石油醚液并入分液漏斗中；之后振搖分液漏斗2min，靜置分層，棄去水層；用50mL蒸餾水洗分液漏斗中石油醚液，用pH試紙檢驗直至水層不顯堿性，備用。
[0013]所述步驟I)用于皂化的氫氧化鉀溶液是指濃度為50%氫氧化鉀溶液。
[0014]所述步驟I)中抗壞血酸溶液濃度為10%。
[0015]所述步驟2)中水浴溫度為40±2°C ；
[0016]所述步驟2)中離心機分離時的轉(zhuǎn)速為5000r/min。
[0017]本發(fā)明的有益效果是:
[0018]I)、樣品采用氫氧化鉀-乙醇溶液加熱皂化，抗氧化劑(抗壞血酸)保護，石油醚提取，避免了樣品基質(zhì)對色譜出峰的干擾，提高了 d — α-生育酚和I 一 α-生育酚提取率；
[0019]2)、采用DB-23毛細管色譜法對d — α -生育酚和I 一 α -生育酚進行了有效分離，分離效果好。
[0020]3)、該發(fā)明建立的檢測方法具有線性良好，檢測靈敏度高(d-α-生育酚和l-α -生育酹最低檢出濃度分別為:3.8mg/L、4.4mg/L),抗特異性好(d-α -生育酹和l-α -生育酚平均回收率分別為90.55%, 86.84%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.92%, 5.93%)，具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點，適用于食品中d-α -生育酚和l-α -生育酚含量的分析測定，為食品的質(zhì)量監(jiān)管提供了有力的技術(shù)支撐?！緦＠綀D】

【附圖說明】
[0021]圖1是標(biāo)準(zhǔn)品α-生育酚色譜示意圖；圖中I指d-α-生育酚，2指l-α-生育酚。
[0022]圖2是天然維生素E膠囊的氣相色譜示意圖。
[0023]圖3是營養(yǎng)米粉的氣相色譜示意圖。
【具體實施方式】
[0024]本發(fā)明的思路是:采用合適的樣品前處理技術(shù)和毛細管色譜分離柱，稱取一定量的食品于皂化瓶中，加入抗壞血酸溶液、氫氧化鉀溶液和無水乙醇于沸水浴皂化回流，然后將皂化液移入分液漏斗中，水洗、石油醚洗，過無水硫酸鈉柱，水浴下于旋轉(zhuǎn)濃縮至近干，力口入甲醇溶解、混合、定容，然后上離心機離心分離，取上清液輸入配有氫火焰檢測器的氣相色譜檢測。其中:
[0025](I)方法中的第一要點是樣品采用氫氧化鉀-乙醇溶液加熱皂化，石油醚提取，避免了樣品基質(zhì)對色譜出峰的干擾，除去了樣品中的可皂化物，使樣品中的目標(biāo)物得到凈化。
[0026](2)方法中的第二要點是樣品皂化前加入抗氧化劑(抗壞血酸)保護，提高了目標(biāo)物d — a-生育酚和I 一 a-生育酚的提取效率。
[0027](3)方法中的第三要點是在氣相色譜檢測中采用DB-23毛細管色譜柱對d —a -生育酚和I 一 a -生育酚進行了有效分離，分離效果好，提高了檢測的準(zhǔn)確性。
[0028]以下把本發(fā)明的有關(guān)細節(jié)描述如下:
[0029]I試劑和材料
[0030]除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的三級水。
[0031]石油醚；
[0032]無水乙醇；
[0033]無水硫酸鈉；
[0034]甲醇,色譜純；
[0035]抗壞血酸溶液(10%) -M 10.0Og抗壞血酸，溶于水中，定容至IOOmL ；
[0036]氫氧化鉀溶液(50%):取50.0Og氫氧化鉀,溶于水中，定容至IOOmL ；
[0037]d-a-生育酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液:準(zhǔn)確稱取d- a -生育酚標(biāo)準(zhǔn)品50mg，溶于甲醇中，定容至IOOmL,貯于棕色瓶，此時d- a -生育酚的濃度為0.5mg/mL ；
[0038]dl-a -生育酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液:準(zhǔn)確稱取dl- a -生育酚標(biāo)準(zhǔn)品(含d_ a -生育酚43%，1-α-生育酚57%)200mg，溶于甲醇中，定容至IOOmL,貯于棕色瓶；
[0039]pHl ?14 試紙。
[0040]2儀器和設(shè)備
[0041]氣相色譜儀:配有FID檢測器；
[0042]分析天平:感量為0.0OOlg和0.0lg ;
[0043]恒溫水浴鍋；
[0044]高速離心機；
[0045]旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
[0046]3樣品處理[0047]3.1樣品制備
[0048]稱取I?IOg (精確到0.0lg)食品于皂化瓶中，加入5mL抗壞血酸溶液、IOmL氫氧化鉀溶液和30mL無水乙醇充分混勻后，于沸水浴回流20?40min (優(yōu)選30min)，冷卻到室溫。將皂化液移入分液漏斗中，用50mL水分3次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用IOOmL石油醚分兩次洗皂化瓶及其殘渣，石油醚液并入分液漏斗中，振搖分液漏斗2min，靜置分層，棄去水層。用50mL蒸餾水洗分液漏斗中石油醚液，用pH試紙檢驗直至水層不顯堿性，備用。
[0049]3.2 濃縮
[0050]將上述提取液過無水硫酸鈉柱干燥，于水浴中充氮保護旋轉(zhuǎn)濃縮至近干，氮氣吹干，用甲醇溶解、混合、并定容至2.0OmL，然后上離心機離心分離5min，取上清液待測離心待測；
[0051]3.3上機檢測
[0052]將上述待測液輸入配有氫火焰檢測器的氣相色譜檢測。
[0053]4氣相色譜測定參考條件
[0054]色譜柱:DB_23毛細管柱(3OmX0.25mm1.d.)；
[0055]柱溫:240°C；
[0056]進樣口和FID檢測器溫度均為300°C ；
[0057]載氣:高純氮；
[0058]柱流速:0.8mL/min (恒流)；
[0059]尾吹流速:25mL/min；
[0060]氫氣流速:30mL/min；
[0061]空氣流速:350mL/min；
[0062]分流比15:1;
[0063]進樣量I μ L。
[0064]5線性范圍
[0065]根據(jù)響應(yīng)值大小取適量dl-α -生育酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液，稀釋后在上述最佳條件下檢測，以峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)被分析物的質(zhì)量濃度(mg/L)為橫坐標(biāo)做曲線，d-α -生育酚和l-α -生育酚分別在0.04?0.9mg/mL、0.06?1.lmg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)圖譜見圖1。
[0066]6檢測靈敏度
[0067]通過不同濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品注入氣相色譜儀，根據(jù)信噪比S/N=3計算出d-a -生育酚和1- a -生育酚最低檢測濃度分別為3.8mg/L、4.4mg/L。
[0068]7精密度和回收率
[0069]按本發(fā)明方法操作，對嬰兒配方奶粉樣品分別進行6次平行測定，測得樣品中d-a -生育酚和l-α -生育酚含量重復(fù)性良好，其變異系數(shù)都在6%以下。采用加標(biāo)回收的方式驗證了檢測的準(zhǔn)確度，d-a-生育酚和l-α -生育酚平均回收率分別為90.55%, 86.84%，可以滿足實驗室分析測定天然維生素E和合成維生素E的需要。8實際樣品的測定
[0070]采用本檢測技術(shù)對天然維生素E膠囊、配方奶粉、營養(yǎng)米粉等食品樣品共6個樣品進行了測定，并將測定結(jié)果與權(quán)威檢驗機構(gòu)采用國家標(biāo)準(zhǔn)方法(HPLC法)測定的總a -生育酚結(jié)果進行比較，用本檢測技術(shù)分別測定的d-α -生育酚和l-α -生育酚結(jié)果之和與HPLC法測定結(jié)果相近，其相對誤差小于7%，方法準(zhǔn)確可靠。結(jié)果見表1。
[0071]表1本檢測技術(shù)與HPLC法測定結(jié)果的比較分析
【權(quán)利要求】
1.一種食品中d-α -生育酚和Ι-α -生育酚的的氣相色譜方法，按照以下步驟進行: I)、樣品制備: 稱取I?IOg食品于阜化瓶中，加入5mL抗壞血酸溶液、IOmL氫氧化鉀溶液和30mL無水乙醇充分混勻后，于沸水浴回流20?40min，冷卻到室溫后，將皂化液移入分液漏斗中；接著清洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗； 2)、濃縮:將上述提取液過無水硫酸鈉柱干燥，于水浴中充氮保護旋轉(zhuǎn)濃縮至近干，氮氣吹干，用甲醇溶解、混合、并定容至2.0OmL，然后上離心機離心分離5min，取上清液待測尚心待測； 3)、上機檢測:將上述待測液輸入配有氫火焰檢測器的氣相色譜檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種食品中d-α -生育酚和1- α -生育酚的氣相色譜方法，其特征在于:所述步驟I)中清洗皂化瓶，是用50mL水分3次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中；再用IOOmL石油醚分兩次洗皂化瓶及其殘渣，石油醚液并入分液漏斗中；之后振搖分液漏斗2min，靜置分層，棄去水層；用50mL蒸餾水洗分液漏斗中石油醚液，用pH試紙檢驗直至水層不顯堿性，備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種食品中d-α -生育酚和1- α -生育酚的氣相色譜方法，其特征在于:所述步驟I)用于皂化的氫氧化鉀溶液是指濃度為50%氫氧化鉀溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種食品中d-α -生育酚和1- α -生育酚的氣相色譜方法，其特征在于:所述步驟I)中抗壞血酸溶液濃度為10%。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種食品中d-α -生育酚和1- α -生育酚的氣相色譜方法，其特征在于:所述步驟2)中水浴溫度為40±2°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種食品中d-α -生育酚和1- α -生育酚的氣相色譜方法，其特征在于:所述步驟2)中離心機分離時的轉(zhuǎn)速為5000r/min。
【文檔編號】G01N30/14GK103487522SQ201310431998
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月18日
【發(fā)明者】鮑忠定, 許榮年, 丁獻榮 申請人:浙江贊宇科技股份有限公司