南極磷蝦二十八烷醇的提取及薄層層析掃描檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種南極磷蝦二十八烷醇的提取及薄層層析掃描檢測方法，具體步驟是：提取南極磷蝦蝦油，經(jīng)過NaOH乙醇溶液加熱回流、石油醚萃取和蒸除石油醚處理蝦油后，得到二十八烷醇；分別制取樣品液和標(biāo)準(zhǔn)液，分別點到同一塊高效薄層硅膠板GF254上，展開染色，進行薄層掃描，得到二十八烷醇比移值和鋒面積積分值，計算出標(biāo)準(zhǔn)液質(zhì)量和峰面積積分值關(guān)系，根據(jù)得出的關(guān)系計算出樣品液二十八烷醇的質(zhì)量。本發(fā)明不僅可用于南極磷蝦中二十八烷醇提取和檢測，更重要的是可用于任何一種含二十八烷醇的原材料、產(chǎn)品和副產(chǎn)品中二十八烷醇含量的檢測，在二十八烷醇開發(fā)中具有廣泛、重要的應(yīng)用價值。
【專利說明】南極磷蝦二十八烷醇的提取及薄層層析掃描檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及南極磷蝦二十八烷醇的提取及薄層層析掃描檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]二十八烷醇是一種天然存在的一元高級醇，廣泛存在于植物的根、莖、葉、殼、籽仁的脂質(zhì)中，存在于昆蟲分泌的蠟質(zhì)(如白蠟、蟲膠蠟、蜂蠟等)，廣泛分布于動物的表皮、內(nèi)臟、動物脂質(zhì)(如羊毛蠟、鯨蠟、魚卵脂質(zhì)和海生甲殼動物等)。
[0003]1949年美國伊利諾斯大學(xué)Cureton博士用天然的二十八燒醇和合成二十八燒醇對動物和894名受試者進行了 42個項目的試驗，并取得重大進展。Cureton研究結(jié)果表明，十八燒醇對人體具有以下作用:①增進耐力和精力；②提聞反應(yīng)靈敏性；③提聞應(yīng)激能力促進激素作用，減輕肌肉痛疼改善心肌功能；⑥降低收縮期血壓；⑦提高機體代謝率。隨后有學(xué)者對二十八烷醇的毒性進行了研究，通過急性毒性試驗證實白鼠半數(shù)致死劑量LD50=18g/kg (白鼠口服)，安全性比食鹽高(食鹽LD50=3g/kg)。
[0004]二十八烷醇在醫(yī)藥、化工、食品(尤其是保健品)、化妝品中應(yīng)用廣泛。在化妝品的主要作用是促進血液循環(huán)、提高氧輸送能、提高基礎(chǔ)代謝率，經(jīng)皮膚吸收，具有細胞賦活作用，增進皮膚活化、消除皮膚皺紋，也用于口紅、指甲油和護發(fā)素，對脫發(fā)癥有明顯醫(yī)療效果
坐寸ο
[0005]南極磷蝦是一種生活在南極洲水域的磷蝦，以群集方式生活，是南極生態(tài)系統(tǒng)的關(guān)鍵物種，若以生物質(zhì)能來說，它可能是地球上最成功的生物物種(大約有五億噸)。蘊藏量巨大，每年可允許捕撈量為I?1.5億噸,全世界每年實際捕撈量為10?50萬噸。但因其含氟量高(2.4g/kg)，不能直 接作為食品食用?，F(xiàn)捕撈后主要作為魚餌料和提取加工成保健油。若以南極磷蝦為原料，開發(fā)天然藥物進行綜合利用，則具有廣闊的開發(fā)前景。
[0006]如果證明南極磷蝦含有二十八烷醇，并對其開發(fā)利用，其經(jīng)濟效益、社會效益會十分顯著。這之前二十八烷醇的檢測多采用氣相色譜、液相色譜方法，如進行結(jié)構(gòu)分析，這兩種方法還要結(jié)合紅外色譜、紫外、質(zhì)譜和核磁共振譜聯(lián)合分析。氣相和液相色譜檢測方法花費大、時間長。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了南極磷蝦二十八烷醇的提取及薄層層析掃描檢測方法。
[0008]本發(fā)明提供的技術(shù)方案是:
[0009]南極磷蝦二十八烷醇的提取及薄層層析掃描檢測方法，具體步驟是:
[0010]I)將干南極磷蝦用正己烷進行提取，過濾蒸除正己烷后，得南極磷蝦蝦油。
[0011]2)將蝦油先用濃度為10%Na0H乙醇溶液進行水浴加熱回流，后再加入石油醚萃取，萃取后的液體加入水進行分層，取出上層石油醚溶液，蒸除石油醚后得到固體二十八烷醇提取物。[0012]3)利用三氯甲烷溶解二十八烷醇提取物和二十八烷醇標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma公司)分別配成樣品液和標(biāo)準(zhǔn)液。
[0013]4)不同質(zhì)量的二十八烷醇標(biāo)準(zhǔn)液和單一質(zhì)量的樣品液分別點于同一塊高效薄層硅膠板GF254上，加入展開劑，預(yù)平衡，后將硅膠板放入展開缸，上行展開，展距達到8 cm時取出晾干，隨后染色液沖洗染色，烘干。
[0014]5)進行薄層掃描，得到二十八烷醇Rf (比移值)和峰面積積分值；由薄層色譜儀管理軟件WinCATS計算出標(biāo)準(zhǔn)液質(zhì)量和峰面積積分值關(guān)系，根據(jù)樣品液的峰面積積分值計算出樣品液二十八烷醇的質(zhì)量。
[0015]所述的步驟1)，其中正己烷為南極磷蝦的6倍質(zhì)量體積，提取3次
[0016]所述的步驟2)中的濃度10%Na0H乙醇溶液、石油醚和水的體積比例為1:1:1。
[0017]所述的步驟4)中的不同濃度二十八烷醇標(biāo)準(zhǔn)液為5種質(zhì)量梯度，分別為0.375ug，0.5ug，0.625ug，0.75ug，1.125ug。
[0018]所述的步驟4)中的展開劑為石油醚:乙酸乙酯:甲苯，體積比例為3?5:0.5?
1.5:0.05 ?0.1。
[0019]所述的步驟4)中的染色液為水:溴百里酚藍:氫氧化鈉，體積質(zhì)量比例為80?IlOml:0.08 ?0.12g:0.6 ?0.8g。
[0020]二十八烷醇廣泛存在于植物和動物體，本發(fā)明首次從南極磷蝦中提取到了二十八烷醇，并對南極磷蝦中二十八烷醇進行了薄層層析檢測，更重要的是可用于任何一種含二十八烷醇的原材料、產(chǎn)品和副產(chǎn)品中二十八烷醇含量的檢測，在二十八烷醇開發(fā)中具有廣泛、重要的應(yīng)用價值。
【具體實施方式】
[0021]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
[0022]實施例1
[0023]稱取干南極磷蝦60g，加360ml正己烷，提取3次，合并的提取液過濾后蒸除正己烷得南極磷蝦蝦油3g。向蝦油中加入120ml 10%Na0H乙醇溶液，80°C水浴加熱，回流反應(yīng)2小時；降溫至50°C，加入120ml石油醚，70°C回流萃取40分鐘；再加入120ml水，充分?jǐn)嚢?0分鐘，50°C下靜置分層；取上層石油醚溶液，蒸除石油醚后用三氯甲烷溶解得樣品液8ml。
[0024]精密稱取二十八燒醇標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma公司)Img,加入三氯甲燒定容至4ml,制成濃度為0.25mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)液。精密吸取1.5,2,2.5,3,4.5ul 二十八烷醇標(biāo)準(zhǔn)液及1.5ul樣品液點于同一塊高效薄層娃膠板GF254 (IOcmX IOcm)上,加入IOml展開劑,展開劑為石油BI:乙酸乙酯:甲苯=4:1:0.05，預(yù)平衡20分鐘，將板放入展開缸(12cmX 15cmX 10cm),上行展開，展距8 Cm，取出晾干，用IOOml染色液沖洗染色I分鐘，染色液配方為水:溴百里酚藍:氫氧化鈉=IOOml:0.1g:0.7g，50°C烘干，可見標(biāo)準(zhǔn)品和樣品在同一水平上兩個點對齊且均被染成藍色，利用Camag3型薄層掃描儀以615nm吸收波長進行薄層層析掃描，掃描速度為20mm/s，數(shù)據(jù)分辨率為50um/st印，得Rf=0.45，照射燈為鎢燈進行檢測計算，以二十八烷醇標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量(ng)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，由薄層色譜儀管理軟件winCATS直接得到標(biāo)準(zhǔn)品與峰面積積分值關(guān)系的回歸方程Y=20.5552+10.8837Χ，r=0.99962，RSD=L 35%。結(jié)果表明，樣品液在0.375?1.125ug線性良好，1.5ul樣品液中二十八烷醇的含量為0.59666ug,經(jīng)計算8ml提取液中含二十八烷醇3.182mg,即60g干南極磷蝦中二十八烷醇的含量為3.182mg。
[0025]實施例2
[0026]與實施例1的區(qū)別在于:展開劑為15ml，展開劑為石油醚:乙酸乙酯:甲苯=5:1.5:0.1，染色劑80ml，染色液配方為水:溴百里酚藍:氫氧化鈉=80ml:0.08g:0.6g，其他步驟與實施例1相同，按照實施例1的線性回歸方程得8ml樣品液(即60g干南極磷蝦)含二十八燒醇平均為3.181mg0
[0027]實施例3
[0028]與實施例1的區(qū)別在于:展開劑為12ml，展開劑為石油醚:乙酸乙酯:甲苯=3:
0.5:0.05，染色劑IlOml,染色液配方為水:溴百里酚藍:氫氧化鈉=IlOml:0.12g:0.8g，其他步驟與實施例1相同，按照實施例1的線性回歸方程得8ml樣品液(即60g干南極磷蝦)含二十八燒醇平均為3.183mg0
【權(quán)利要求】
1.南極磷蝦二十八烷醇的提取及薄層層析掃描檢測方法，其特征是，具體步驟是:1)將干南極磷蝦用正己烷進行提取，過濾蒸除正己烷后，得南極磷蝦蝦油；2)將奸油先用濃度為10%Na0H乙醇溶液進行水浴加熱回流,后再加入石油醚萃取,萃取后的液體加入水進行靜置分層，取出上層石油醚溶液，蒸除石油醚后得到固體二十八烷醇提取物；3)利用三氯甲烷溶解二十八烷醇提取物和二十八烷醇標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma公司)分別配成樣品液和標(biāo)準(zhǔn)液；4)不同質(zhì)量的二十八烷醇標(biāo)準(zhǔn)液和單一質(zhì)量的樣品液分別點于同一塊高效薄層硅膠板GF254上，加入展開劑，預(yù)平衡，后將硅膠板放入展開缸，上行展開，展距達到8 cm時取出晾干，隨后染色液沖洗染色，烘干；5)進行薄層掃描，得到二十八烷醇比移值Rf和峰面積積分值；由薄層色譜儀管理軟件WinCATS計算出標(biāo)準(zhǔn)液質(zhì)量和峰面積積分值關(guān)系，根據(jù)樣品液的峰面積積分值計算出樣品液二十八烷醇的質(zhì)量。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述的步驟1)，其中正己烷為南極磷蝦的6倍質(zhì)量體積，提取3次。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述的步驟2)中的濃度10%Na0H乙醇溶液、石油醚和水的體積比例為1:1:1。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述的步驟4)中的不同濃度二十八烷醇標(biāo)準(zhǔn)液為 5 種質(zhì)量梯度，分別為 0.375ug, 0.5ug, 0.625ug, 0.75ug, 1.125ug。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述的步驟4)中的展開劑為石油醚:乙酸乙酯:甲苯，體積比為3?5:0.5?1.5:0.05?0.1。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述的步驟4)中的染色液水:溴百里酚藍:氫氧化鈉，體積質(zhì)量比例為80?IlOml:0.08?0.12g:0.6?0.8g。
【文檔編號】G01N30/90GK103439451SQ201310360389
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月16日
【發(fā)明者】高文芳, 劉代成 申請人:山東師范大學(xué)