脫脂南極磷蝦皂甙的提取及薄層層析掃描檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種脫脂南極磷蝦皂甙的提取及薄層層析掃描檢測(cè)方法，其具體步驟主要包括：提取脫脂南極磷蝦皂甙和薄層層析掃描檢測(cè)。本發(fā)明提供了脫脂南極磷蝦皂甙的提取方法和薄層層析檢測(cè)方法，檢測(cè)方法簡單、快速、準(zhǔn)確、可靠、穩(wěn)定。
【專利說明】脫脂南極磷蝦皂甙的提取及薄層層析掃描檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及脫脂南極磷蝦皂甙的提取及薄層層析掃描檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]南極磷奸(Euphausia superba),是一種生活在南極洲水域的磷奸，以群集方式生活，有時(shí)密度可達(dá)每立方米10，000?30，000只。它們以微小的浮游植物作為食物，身長大約6厘米，重約2克，有6年的壽命。它們是南極生態(tài)系統(tǒng)的關(guān)鍵物種，若以生物質(zhì)能來說，它們可能是地球上最成功的生物物種(大約有5億噸)。因南極磷蝦蘊(yùn)藏量巨大，加上群體的生活容易捕撈，所以吸引很多國家對(duì)它進(jìn)行開發(fā)。目前，南極磷蝦最主要用途是作為魚飼料。而在挪威、加拿大等國則把南極磷蝦蝦油提取出來作為保健品，價(jià)格約2000元人民幣/kg。由于南極磷蝦含有大量氟(約2400mg/kg)，不能直接食用。因而，以南極磷蝦為原料，開發(fā)天然藥物，對(duì)其綜合利用，具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003]我們對(duì)南極磷蝦的開發(fā)利用進(jìn)行了數(shù)年研究。發(fā)現(xiàn)在蒸除南極磷蝦蝦油中溶劑的過程中總是有大量泡沫產(chǎn)生。南極磷蝦的水提液和醇提液在加熱攪拌時(shí)，泡沫更多；停止加熱攪拌，泡沫依然持久不消。該現(xiàn)象說明南極磷蝦中含有皂甙。目前，還沒有對(duì)南極磷蝦皂甙提取的研究，本發(fā)明對(duì)南極磷蝦皂甙進(jìn)行了提取，并對(duì)其進(jìn)行了檢測(cè)定量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供了一種操作簡單、快速、準(zhǔn)確、可靠的脫脂南極磷蝦皂甙提取和檢測(cè)方法。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0006]脫脂南極磷蝦皂甙的提取及薄層層析掃描檢測(cè)方法，具體步驟是:
[0007]I)將疏水性溶劑除去油脂的干南極磷蝦利用甲醇進(jìn)行加熱提取，蒸發(fā)除去甲醇，得到膏狀物。
[0008]2)往步驟I)所得膏狀物加入乙醚，攪拌溶解，過濾得濾液，蒸發(fā)去除乙醚得皂甙粗提取物。
[0009]3)將步驟2)所得的皂甙粗提物溶于甲醇制成樣品液，用甲醇溶解齊墩果酸制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。
[0010]4)將步驟3)所得的樣品液和不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液分別點(diǎn)于同一塊高效薄層硅膠板GF254上，展開劑加入展開缸中進(jìn)行預(yù)平衡，后將高效薄層硅膠板放入展開缸中進(jìn)行展開，展距達(dá)到8cm,取出晾干。
[0011]5)將濃度為10%的硫酸乙醇溶液加到高效薄層硅膠板上進(jìn)行烘烤染色，再用濃度10%液體石蠟氯仿溶液進(jìn)行二次染色。
[0012]6)利用薄層掃描儀進(jìn)行薄層層析掃描，得到皂甙Rf (比移值)和峰面積積分值；由薄層色譜儀管理軟件計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)液質(zhì)量和峰面積積分值關(guān)系，根據(jù)樣品液的峰面積積分值計(jì)算出樣品液皂甙的質(zhì)量。[0013]步驟I)中，所述疏水性溶劑是正己烷，、植物油抽提溶劑或石油醚。
[0014]步驟I)中，所述甲醇與南極磷蝦體積質(zhì)量比例為6:1，甲醇提取3次，反應(yīng)溫度為80。。。
[0015]步驟2)中，所述所得膏狀物與乙醚的質(zhì)量體積比例為1:6?10。
[0016]步驟2)中，所述的標(biāo)準(zhǔn)液為5種不同濃度，為0.6，2.4，3.0, 3.6,4.2 Ug/μ L0
[0017]步驟4)中，所述展開劑為二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸，體積比例為9?11:2?5:0.3 ?0.5。
[0018]步驟4)中，所述的展開劑預(yù)平衡和硅膠板展開過程的溫度為10°C。
[0019]步驟5)中，所述的染色過程的烘烤溫度為110°C。
[0020]本發(fā)明在進(jìn)行薄層層析時(shí)，為取得有效效果，對(duì)展開劑進(jìn)行了探索，并利用不同的試劑組合:氯仿-甲醇-水；正丁醇-水-冰乙酸；正丁醇-甲苯-冰乙酸；正丁醇-正己烷-冰乙酸；正丁醇-二甲苯-冰乙酸；正己醇-二甲苯-冰乙酸；正辛醇-二甲苯-冰乙酸和二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸。每一種組合，都進(jìn)行了多次的比例調(diào)試，最后，以配比為二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸=9?11:2?5:0.3?0.5的展開劑和展開溫度10°C時(shí)展開效果最佳。
[0021]目前動(dòng)物種類中主要在棘皮動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)有皂甙，甲殼動(dòng)物中至今未發(fā)現(xiàn)有皂甙，利用本發(fā)明的方法首次在南極磷蝦中提取了皂甙，并對(duì)提取的皂甙進(jìn)行薄層檢測(cè)。檢測(cè)方法簡單、快速、準(zhǔn)確、可靠、穩(wěn)定。
【具體實(shí)施方式】
[0022]根據(jù)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0023]實(shí)施例1
[0024]脫脂干南極磷蝦100g，加入甲醇600mL，在80攝氏度水浴中加熱攪拌提取3次，每次提取30分鐘之后過濾。合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇得膏狀物60g。向膏狀物中加入乙醚360mL，攪拌溶解，濾除沉渣得濾液。蒸除濾液中的乙醚，得皂甙粗提取物15g。
[0025]將含皂甙的粗提物溶于甲醇制成濃度為30 μ g/μ L的樣品液。齊墩果酸配制成五種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液:0.6，2.4，3.0, 3.6, 4.2 μ g/ μ L。
[0026]將樣品液(3μ L/點(diǎn))和標(biāo)準(zhǔn)液(I μ L/點(diǎn))點(diǎn)于同一塊GF254高效薄層娃膠板(IOXlOcm2)上。展開劑為二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸，體積比例為9:2:0.5。將展開劑加入展開缸(10 X 12 X 15cm3)在10攝氏度下預(yù)平衡15分鐘。高效薄層板放入展開缸中，在10攝氏度以下展開，展距達(dá)到8cm時(shí),展開結(jié)束后,將娃膠板板取出晾干。用12ml濃度為10%的硫酸乙醇溶液染色，然后置于110攝氏度下烘烤5分鐘。再用IOml濃度為10%的液體石蠟氯仿溶液二次染色。樣品液和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)的點(diǎn)染成紫色。用camag3型薄層掃描儀，以530nm的吸收波長掃描，得到峰面積積分值和皂甙遷移值Rf為0.49，薄層掃描儀軟件winCATSl.4.1統(tǒng)計(jì)計(jì)算峰面積積分值與標(biāo)準(zhǔn)液質(zhì)量的關(guān)系的回歸方程Y=8836.9094+5.6585Χ，相關(guān)性系數(shù)r=0.99928，rsd=l.40%。經(jīng)檢測(cè)和計(jì)算得脫脂干南極磷蝦中皂甙含量為0.16g/100g。
[0027]實(shí)施例2
[0028]與實(shí)施例1的區(qū)別在于:得到的膏狀物為61g，向膏狀物加入乙醚488ml，得到的皂甙粗提取物15.3g;展開劑中二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸的體積比例為10:3:0.4，濃度為10%的硫酸乙醇溶液體積為10ml，其他步驟與實(shí)施例1相同，使用實(shí)施例1中所得關(guān)系回歸方程，得皂甙的含量為0.17g/100g。
[0029]實(shí)施例3
[0030]與實(shí)施例1的區(qū)別在于:得到的膏狀物為62g，向膏狀物加入乙醚620ml，得到的皂甙粗提取物15.5g;展開劑中二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸的體積比例為11:5:0.3，濃度為10%的硫酸乙醇溶液體積為10ml，其他步驟與實(shí)施例1相同，使用實(shí)施例1中所得關(guān)系回歸方程，得皂甙的含量為0.17g/100g。
【權(quán)利要求】
1.脫脂南極磷蝦皂甙的提取及薄層層析掃描檢測(cè)方法，其特征是，具體步驟是: 1)將疏水性溶劑除去油脂的干南極磷蝦利用甲醇進(jìn)行加熱提取，蒸發(fā)除去甲醇，得到膏狀物； 2)往步驟I)所得膏狀物加入乙醚，攪拌溶解，過濾得濾液，蒸發(fā)去除乙醚得皂甙粗提取物； 3)將步驟2)所得的皂甙粗提取物溶于甲醇制成樣品液，用甲醇溶解齊墩果酸制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液； 4)將步驟3)所得的樣品液和不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液點(diǎn)于同一塊高效薄層硅膠板GF254上，展開劑加入展開缸中進(jìn)行預(yù)平衡，后將高效薄層硅膠板放入展開缸中進(jìn)行展開，展距達(dá)到8cm,取出晾干； 5)將濃度為10%的硫酸乙醇溶液加到高效薄層硅膠板上進(jìn)行烘烤染色，再用濃度10%液體石蠟氯仿溶液進(jìn)行二次染色； 6)利用薄層掃描儀進(jìn)行薄層層析掃描，得到皂甙比移值和峰面積積分值；由薄層色譜儀管理軟件計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)液質(zhì)量和峰面積積分值關(guān)系，根據(jù)樣品液的峰面積積分值計(jì)算出樣品液皂甙的質(zhì)量。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述步驟I)中，疏水性溶劑是正己烷、植物油抽提溶劑或石油醚。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述步驟I)中，甲醇與南極磷蝦體積質(zhì)量比例為6:1，甲醇提取3次，提取溫度為80°C。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述步驟2)中，所得膏狀物與乙醚的質(zhì)量體積比例為I:6?10。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述步驟2)中，標(biāo)準(zhǔn)液為5種不同濃度，為0.6, 2.4, 3.0, 3.6, 4.2 μ g/ μ L。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述步驟4)中，展開劑為二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸，體積比例為9?11:2?5:0.3?0.5。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述步驟4)中，展開劑預(yù)平衡和硅膠板展開過程的溫度為10°c。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述步驟5)中，染色過程的烘烤溫度為110°C。
【文檔編號(hào)】G01N30/90GK103439450SQ201310360204
【公開日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2013年8月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月16日
【發(fā)明者】王翩翩, 劉代成 申請(qǐng)人:山東師范大學(xué)