專利名稱：一種高效液相色譜在線分析方法及應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于色譜分析技術領域，具體涉及一種高效液相色譜在線分析方法及其在中藥生產過程在線分析中應用。
背景技術：
中藥生產過程質量檢測近來受到了生產企業(yè)的極大重視，近紅外光譜技術也因其快速、無損等優(yōu)點廣泛地應用于中藥生產過程在線檢測中。但是近紅外光譜技術有著明顯的局限性:第一，近紅外光譜分析的靈敏度相對較低，其檢測限僅為千分之一；第二，近紅外光譜分析技術屬于二級分析方法，需要較大的前期投入來建立穩(wěn)健的近紅外校正模型，且其準確性與模型建立的質量和模型的合理使用有很大關系。中藥生產過程中有很多情況質控指標含量小于0.1%或者需要更為精確的定量，此時，近紅外光譜技術的應用則受到了限制，因此需要尋找其他合適的在線分析方法。高效液相色譜技術(HPLC)作為一種傳統(tǒng)的分析技術具有分辨率高、重復性好、色譜柱可反復使用等優(yōu)點，目前廣泛應用于中藥有效成分的測定。常見的高效液相色譜分析方法均為離線分析，即分析人員在現(xiàn)場取樣后拿到實驗室進行樣品預處理后使用液相色譜進行分析。這樣的分析效率較低，分析人員工作量大，對于揮發(fā)性樣品還會有較大的分析誤差，最重要的是對生產過程質控指標無法實現(xiàn)實時監(jiān)測和反饋。高效液相色譜樣品處理復雜、操作繁瑣并且分析周期長的缺陷限制了其作為在線分析技術的應用。近年來，超高效液相色譜的發(fā)展是分離技術的巨大進步，峰容量、分析效率、靈敏度和分辨率較常規(guī)HPLC有了很大的提高，這便為使液相色譜成為一種新的在線分析技術提供了可能。但是由于液相色譜復雜的預處理及進樣方式等問題仍然限制了其作為在線分析技術的應用。目前，已有液相色譜介質的預處理系統(tǒng)的相關研究并在不斷完善，例如張以民等發(fā)明的在線色譜分析的液相介質預處理裝置(專利號ZL 200720074371.X)，該裝置除了可以實現(xiàn)液相介質預處理外還可達到流量大、防堵及基本 消除氣泡的目的。另外，也有液相色譜在線脫鹽、富集與質譜在線聯(lián)用系統(tǒng)(專利號ZL 200610134981.4)以及固相萃取一液相色譜在線聯(lián)用分析水中痕量有機物的方法(專利號ZL 200610023536.0)的相關報道。但是，這些研究都具有相應的局限性和不全面性。張以民等的發(fā)明僅提供了在線液相色譜分析的預處理裝置，并未將其與液相色譜儀真正連成一個在線分析系統(tǒng)，并不能真正實時得到分析結果，沒有真正意義上實現(xiàn)在線分析。張麗華等發(fā)明的液相色譜與質譜在線聯(lián)用系統(tǒng)強調的也不是利用液相色譜實現(xiàn)在線分析，而僅僅將雙分流納升級HPLC用于脫鹽、富集并與質譜聯(lián)用，并未實現(xiàn)液相色譜的在線分析。陳玲等采用固相萃取一液相色譜在線聯(lián)用分析水中痕量有機物，該在線聯(lián)用系統(tǒng)僅適合于飲用水、地表水及其他低粘度液體中痕量有機污染物的富集和分析，且不能真正實現(xiàn)在線取樣和在線分析，也不適用于大流量樣品，用途較為局限。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種高效液相色譜在線分析方法，可實現(xiàn)高效液相樣品自動預處理及自動進樣分析，同時可實現(xiàn)分析結果的實時監(jiān)測。本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn):
1.設計高效液相在線分析系統(tǒng)，該系統(tǒng)主要由樣品預處理系統(tǒng)(I)、高效液相色譜儀
(2)、遠程電腦(3)、可編程邏輯控制器(4)及觸摸屏(5)、交換機(6)構成，樣品預處理系統(tǒng)
(I)與高效液相色譜儀(2)內的六通閥(24)相連，可實現(xiàn)樣品自動取樣進樣；高效液相色譜儀(2 )和觸摸屏(5 )通過交換機(6 )與遠程電腦(3 )相連；可編程邏輯控制器(4 )和觸摸屏(5)通過網(wǎng)線(7)連接，樣品預處理系統(tǒng)(I)由清洗罐(8)、兩通電磁閥(9)、清洗罐三通電磁閥(10 )、回收三通電磁閥(16 )、進液比例電磁閥(13 )、回收比例電磁閥(17 )、進液流量變送器(14)、回收流量電磁閥(18)、初濾過濾器(11)、精密過濾器(15)、單向閥(19)、進液口(20)、出液口(21)、液相回收口(22)和預處理系統(tǒng)回收口(23)組成，進液口(20)通過兩通電磁閥(9 )連接清洗罐三通電磁閥(IO )，清洗罐三通電磁閥(IO )的一個通路連接清洗罐
(8)，另一個通路連接初濾過濾器(11)，初濾過濾器(11)連接蠕動泵(12)，蠕動泵(12)的一條支路通過進液比例電磁閥(13 )串連接流量變送器(14)、精密過濾器(15 )和回收三通電磁閥(16 )，回收三通電磁閥(16 )另外兩個支路分別連接單向閥(19 )及出液口( 21)，單向閥
(19)的一個支路連接預處理系統(tǒng)回收口(23)，另一支路連接比例電磁閥(17)及流量變送器(18)，在單向閥(19)與回收三通電磁閥(16)之間連接液相回收口(22)，樣品預處理系統(tǒng)的出液口( 21)和液相回收口( 22 )連接高效液相色譜儀(2 )內的六通閥(24)。預處理系統(tǒng)的出液口( 21)連接六通閥(24)的e端口，a端口和d端口連接定量環(huán)g，b端口連接高效液相色譜的泵，c端口連接色譜柱，f為廢液端口，f連接液相回收口(22)。遠程電腦(3)上安裝色譜工作站和液相數(shù)據(jù)管理軟件。2.將在線樣品管線連接樣品預處理系統(tǒng)(I)的進液口(20)，打開高效液相色譜儀(2)及色譜工作站并使用相應流動相平衡系統(tǒng)，選擇進樣方式為進樣器程序，設置進樣器程序:閥旁路一等待0.2 min—進樣；選擇序列進樣，以實現(xiàn)多次進樣分析，設置序列和序列參數(shù)。3.當高效液相色譜儀流動相平衡30 min后壓力達到平衡時打開樣品預處理系統(tǒng)電源，點擊觸摸屏(5)進入控制界面，進行運行、清洗和停止預處理，通過樣品預處理系統(tǒng)
(I)預處理后的樣品經蠕動泵由出液口連接高效液相色譜的六通閥(24)的e端口，此時六通閥(24)處于load (取樣)狀態(tài)(圖2 B)，預處理后的樣品連續(xù)經過定量環(huán)g，多余樣品經f端口排出回收。4.預處理系統(tǒng)運行10 min達到穩(wěn)定后在液相色譜儀(2)上開始進樣:此時高效液相色譜(2)按照進樣器程序進樣分析，六通閥(24)切換至inject (進樣)狀態(tài)(圖2A)，高效液相色譜的泵將流動相連同定量環(huán)(g)中樣品泵入色譜柱進行分析，而預處理系統(tǒng)處理后的樣品從六通閥(f )端口直接連接樣品預處理系統(tǒng)液相回收口( 22 )進行回收。5.在開始液相進樣分析時打開液相數(shù)據(jù)管理軟件并設置液相數(shù)據(jù)保存的文件位置及相應色譜參數(shù)，啟動液相數(shù)據(jù)管理軟件。色譜參數(shù)設置包括所需色譜峰的保留時間，采集范圍及采集周期。其中，采集范圍表示在所設置保留時間前后采集范圍內找尋所需的色譜峰，常規(guī)設置為30秒，可根據(jù)所需分析的不同樣品性質差異略作調整；采集周期表示軟件讀取液相分析結果的 時間間隔，常規(guī)設置為20秒。軟件啟動后即可實時讀取液相分析結果并做相應處理，然后將處理后結果傳輸至遠程電腦(3)上并顯示分析結果及含量曲線，該結果還可同步至觸摸屏上實時顯示。分析結果除可以實時顯示外還可在遠程電腦(3)上通過液相數(shù)據(jù)管理軟件按照時間查詢歷史結果。6.當高效液相色譜序列分析結束時，在觸摸屏(5)控制界面點擊“停止”以停止運行樣品預處理系統(tǒng)，關閉液相數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)軟件。7.另外，分析結束后預處理系統(tǒng)需要清洗，點擊觸摸屏控制界面上“清洗”按鈕可實現(xiàn)系統(tǒng)自動清洗。此時，清洗罐三通電磁閥(10)切換至清洗罐，回收三通電磁閥(16)切換至廢液通路。高效液相色譜儀(2)由色譜工作站控制進樣分析以及生成積分結果。液相數(shù)據(jù)處理軟件讀取液相積分結果并進行處理，處理后分析結果可在遠程電腦上進行實時顯示，同時傳輸?shù)接|摸屏上進行同步顯示。本發(fā)明的另一個目的是提供所述方法在中藥生產過程在線分析中應用。尤其在中藥生產過程中有效成分含量或比例的在線分析中的應用。本發(fā)明提供的液相樣品預處理系統(tǒng)將液相樣品預處理、自動進樣以及液相分析結果自動處理和顯示三部分集成為液相在線分析系統(tǒng)，能夠真正實現(xiàn)在線實時分析。另外，相比上述關于液相在線分析的研究，本發(fā)明還具有以下優(yōu)勢:首先，液相預處理系統(tǒng)采用兩級過濾并通過比例電磁閥可調節(jié)進樣流量，可以達到液相色譜樣品分析的精度及流速要求，保證了液相色譜分析的穩(wěn)定性，同時，通過PLC及觸摸屏程控系統(tǒng)可以實現(xiàn)液相預處理系統(tǒng)的自動化控制，減少人工取樣和預處理的工作量，可以真正實現(xiàn)在線取樣、預處理及進樣分析，而且優(yōu)化的人機界面方便進行參數(shù)更改設置；第二，本發(fā)明通過液相色譜儀本身的進樣程序控制自動進樣器的六通閥自動切換從而實現(xiàn)進樣，無需額外增加六通閥或進樣裝置；第三，本發(fā)明提供開發(fā)了液相數(shù) 據(jù)管理系統(tǒng)，可實現(xiàn)液相分析結果的實時讀取和分析并存儲至遠程數(shù)據(jù)庫，同時可實現(xiàn)遠程電腦與觸摸屏上實時同步顯示處理后的含量結果及趨勢圖等信息。本發(fā)明提供的高效液相在線分析系統(tǒng)可用于中藥生產過程的實時質量監(jiān)測，對保證中藥產品質量安全、提高中藥質量標準具有極大的促進作用。本發(fā)明具有自動化程度高、操作簡單、樣品自動預處理和分析、分析結果實時顯示、系統(tǒng)可自動清洗等優(yōu)點，可用于生產過程樣品含量及組分比例的在線檢測。


圖1是本發(fā)明的結構示意圖。圖2是樣品預處理系統(tǒng)與高效液相色譜六通閥連接圖。圖3是燈盞花乙素標準品液相色譜圖。圖4是燈盞花素大孔樹脂洗脫過程洗脫液樣品液相色譜圖。圖5是燈盞花素大孔樹脂洗脫過程流出液中燈盞花乙素含量變化曲線。圖6是羥基紅花黃色素A對照品液相色譜圖。圖7是紅花浸提過程提取液樣品液相色譜圖。圖8是紅花浸提過程羥基紅花黃色素A含量變化曲線。
具體實施方式
本發(fā)明結合附圖和實施例作進一步的說明。實施例1
1.參見圖1，設計高效液相在線分析系統(tǒng)，該系統(tǒng)主要由樣品預處理系統(tǒng)(I)、高效液相色譜儀(2)、遠程電腦(3)、可編程邏輯控制器(4)及觸摸屏(5)、交換機(6)構成，樣品預處理系統(tǒng)(I)直接與生產工藝管線相連接，樣品預處理系統(tǒng)(I)與高效液相色譜儀(2)相連，可實現(xiàn)樣品自動取樣進樣；高效液相色譜儀(2)、遠程電腦(3)和觸摸屏(5)通過交換機(6)相連；可編程邏輯控制器(4)和觸摸屏(5)通過網(wǎng)線(7)連接。樣品預處理系統(tǒng)(I)由清洗罐(8)，兩通電磁閥(9)、清洗罐三通電磁閥(10)、回收三通電磁閥(16)、進液比例電磁閥(13)、回收比例電磁閥(17)、進液流量變送器(14)、回收流量電磁閥(18)、初濾過濾器(11)、精密過濾器(15)，單向閥(19)以及進液口(20)、出液口(21)、液相回收口(22)、預處理系統(tǒng)回收口(23)組成，可實現(xiàn)樣品過濾和流量控制，并可實現(xiàn)系統(tǒng)自動清洗。樣品經進液口( 20 )進入預處理系統(tǒng)(I)，通過兩通電磁閥(9 )連接一個清洗罐三通電磁閥(10 )，清洗罐三通電磁閥(10)的一個通路連接清洗罐(8)，另一個通路連接初濾過濾器(11)，初濾過濾器(11)連接蠕動泵(12)，蠕動泵(12)的一條支路通過進液比例電磁閥(13)連接流量變送器(14)進行流量控制，接著經過一個精密過濾器(15)后連接回收三通電磁閥(16)，回收三通電磁閥(16)另外兩個支路分別連接單向閥(19)及出液口(21)，單向閥(19)連接預處理系統(tǒng)回收口(23)，另一支路連接比例電磁閥(17)及流量變送器(18)后與預處理系統(tǒng)回收口(23)相連。樣品預處理系統(tǒng)(I)的出液口(21)與高效液相色譜儀(2)內的六通閥(24)連接。六通閥(24)具體連接方式參見圖2。出液口(21)連接六通閥(24)的e端口，a端口和d端口連接定量環(huán)g，b端口連接高效液相色譜的泵，c端口連接色譜柱，f為廢液端口，f連接液相回收口(22)。遠程電腦(3)上安裝色譜工作站和液相數(shù)據(jù)管理軟件(軟件著作權登記號 2012SR098059)。利用本發(fā)明在線檢測燈盞花素大孔樹脂洗脫過程燈盞花乙素含量變化，從而大致判斷燈盞花素洗脫接收起點和接收終點。燈盞花素大孔樹脂純化過程參數(shù)如下:柱體積(BV)為I L，以3 B V/h上樣，上樣體積為2.5 BV，上樣結束后用純水以3 BV/h的流速洗脫。2.將在線樣品管線連接樣品預處理系統(tǒng)(I)的進液口(20)，打開高效液相色譜儀(2)及色譜工作站并使用相應流動相平衡系統(tǒng)，選擇進樣方式為進樣器程序，設置進樣器程序:閥旁路一等待0.2 min—進樣；選擇序列進樣，以實現(xiàn)多次進樣分析，設置序列和序列參數(shù)。序列所用色譜條件為:Diamonsil C18 column (250 mmX4.6 mm, 5 μ m);甲醇-0.4%磷酸溶液(V / V, 35: 65)為流動相；流速I mL/min ;檢測波長335 nm ;柱溫40 V ;進樣量5 μ L，運行時間15 min。3.當高效液相色譜儀流動相平衡30 min后壓力達到平衡，此時打開樣品預處理系統(tǒng)電源，在觸摸屏(5)上點擊“控制界面”按鈕進入控制界面，點擊“運行”以啟動系統(tǒng)。樣品預處理系統(tǒng)啟動時兩通電磁閥(9)開啟，蠕動泵(12)開啟，調節(jié)進液比例電磁閥(13)和回收比例電磁閥(17)至進液流量變送器(14)流量為0.3 L/h，樣品經過初濾過濾器(11)和精密過濾器(15)過濾處理后經過出液口(21)與高效液相色譜(2)內的六通閥(24) e端口連接，此時六通閥處于load (取樣)狀態(tài)(圖2 B)，S卩，經樣品預處理系統(tǒng)預處理后的樣品連續(xù)經過定量環(huán)(g)，多余樣品經六通閥(24)f端口連接樣品預處理系統(tǒng)(I)的液相回收口
(22)回收。
4.樣品預處理系統(tǒng)運行10 min達到穩(wěn)定后在高效液相色譜(2)上開始進樣，此時高效液相色譜(2)按照進樣器程序進樣分析，六通閥(24)切換至inject (進樣)狀態(tài)(圖
2A)，高效液相色譜(2)的泵將流動相及定量環(huán)(g)中樣品泵入色譜柱進行分析，而經過樣品預處理系統(tǒng)處理后的樣品從六通閥(24)的f端口直接連接樣品預處理系統(tǒng)的液相回收口(22)進行回收。5.在開始液相進樣分析時打開遠程電腦(3)上的液相數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)軟件并設置液相數(shù)據(jù)保存的文件位置及相應色譜參數(shù)，啟動液相數(shù)據(jù)管理軟件。色譜參數(shù)設置包括所需色譜峰的保留時間，采集范圍及采集周期。其中，采集范圍表示在所設置保留時間前后采集范圍內找尋所需的色譜峰，常規(guī)設置為30 S，可根據(jù)所需分析的不同樣品性質差異略作調整；采集周期表示軟件讀取液相分析結果的時間間隔，常規(guī)設置為20 S。色譜參數(shù)設置:按照步驟2中液相色譜條件燈盞花乙素的保留時間約為12 min，因此設置所需色譜峰的保留時間為12 min，采集范圍為30 S，采集周期為20 S。軟件啟動后即可實時讀取液相分析結果并做相應處理，然后將處理后結果傳輸至遠程電腦上并顯示分析結果及含量曲線等，該結果還可同步至觸摸屏上實時顯示。此外，分析結果除可以實時顯示外還可在遠程電腦
(3)上通過液相數(shù)據(jù)管理軟件按照時間查詢歷史結果。6.當高效液相色譜序列分析結束時，在觸摸屏(5)的控制界面上點擊“停止”以停止運行樣品預處理系統(tǒng)，關閉液相數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)軟件。7.另外，分析結束后預處理系統(tǒng)需要清洗，點擊觸摸屏(5)控制界面上“清洗”按鈕可實現(xiàn)系統(tǒng)自動清洗。此時，清洗罐三通電磁閥(10)切換至清洗罐，回收三通電磁閥
(16)可切換至廢液通路。清洗約10 min后關閉樣品預處理系統(tǒng)。高效液相色譜儀(2)由色譜工作站控制進樣分析以及生成積分結果。液相數(shù)據(jù)處理軟件讀取液相積分結果并進行處理，處理后分析結果可在遠程電腦上進行實時顯示，同時傳輸?shù)接|摸屏上進行同步顯示。按照上述燈盞花素液相色譜條件分析得到的燈盞花素標準品液相色譜圖具體參見圖3，燈盞花素洗脫過程樣品色譜圖參見圖4。液相自動進樣分析得到的燈盞花素大孔樹脂洗脫過程燈盞花乙素含量變化曲線參見圖5。結果表明，通過高效液相色譜在線分析系統(tǒng)實現(xiàn)了燈盞花素大孔樹脂洗脫過程 含量的在線分析。從圖5中可以看到燈盞花素洗脫過程含量變化趨勢，即當洗脫進行60 min時燈盞花素含量基本保持恒定，可以判定洗脫基本完成。實施例2
液相色譜在線分析系統(tǒng)連接方式同實施例1，利用該系統(tǒng)在線檢測紅花浸提過程羥基紅花黃色素A的含量變化。紅花浸提過程參數(shù)如下:取I kg紅花，加入10 L純水，常溫下浸泡提取。采用高效液相色譜在線分析方法對紅花浸提過程進行在線檢測的操作步驟如下所述:
1.樣品預處理系統(tǒng)(I)的進液口(20)連接軟管置于提取罐內實時取樣，樣品預處理系統(tǒng)的出液口( 21)與高效液相色譜儀(2 )內的六通閥(24)的e端口相連，液相回收口( 22 )與六通閥(24)的f端口連接。2.打開高效液相色譜儀(2)，并使用相應流動相平衡系統(tǒng)；同時，進樣設置中選擇進樣方式為進樣器程序，設置進樣器程序:閥旁路一等待0.2 min—進樣；選擇序列進樣以實現(xiàn)多次進樣分析，根據(jù)設置序列和序列參數(shù)。序列所用色譜條件為=DiamonsilC18 column (250 mmX4.6 mm, 5 μ m);甲醇-乙臆-0.7% 憐酸溶液(ν/ν, 26:2:72)為流動相；流速0.7 mL/min ;檢測波長403 nm ;柱溫25 V ;進樣量10 μ L。3.當高效液相色譜儀流動相平衡30 min后壓力達到平衡，此時打開樣品預處理系統(tǒng)電源，在觸摸屏(5)上點擊“控制界面”按鈕進入控制界面，點擊“運行”以啟動系統(tǒng)。樣品預處理系統(tǒng)啟動時兩通電磁閥(9)開啟，蠕動泵(12)開啟，調節(jié)進液比例電磁閥(13)和回收比例電磁閥(17)至進液流量變送器(14)流量為0.3 L/h，樣品經過初濾過濾器(11)和精密過濾器(15)過濾處理后經過出液口(21)與高效液相色譜(2)內的六通閥(24)連接，此時六通閥處于load (取樣)狀態(tài)(圖2 B)，S卩，經樣品預處理系統(tǒng)預處理后的樣品連續(xù)經過定量環(huán)g，多余樣品經六通閥f端口連接樣品預處理系統(tǒng)的液相回收口(22)回收。4.樣品預處理系統(tǒng)運行10 min達到穩(wěn)定后在高效液相色譜工作站上開始進樣，此時高效液相色譜儀按照進樣器程序進樣分析，六通閥切換至inject(進樣)狀態(tài)(圖2 A)，高效液相色譜的泵將流動相及定量環(huán)g中樣品泵入色譜柱進行分析，而經過樣品預處理系統(tǒng)處理后的樣品從六通閥f端口直接連接樣品預處理系統(tǒng)的液相回收口(22)進行回收。5.在開始液相進樣分析時打開遠程電腦(3)上的液相數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)軟件并設置液相數(shù)據(jù)保存的文件位置及相應色譜參數(shù)，啟動軟件。色譜參數(shù)設置:按照(2)中液相色譜條件得到羥基紅花黃色素A的保留時間約為8.8 min,因此設置所需色譜峰的保留時間為8.8 min，采集范圍為30s，采集周期為20 S。軟件啟動后即可實時讀取液相分析結果并做相應處理，然后將處理后結果傳輸至遠程電腦上并顯示分析結果及含量曲線等，該結果還可同步至觸摸屏上實時顯示。此外，還可在遠程電腦(3)上通過液相數(shù)據(jù)管理軟件按照時間查詢歷史結果 。6.當高效液相色譜序列分析結束時，在觸摸屏(5)的控制界面上點擊“停止”以停止運行預處理系統(tǒng)，關閉液相數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)軟件。7.分析結束后預處理系統(tǒng)需要清洗，點擊觸摸屏控制界面上“清洗”按鈕可實現(xiàn)系統(tǒng)自動清洗。此時，清洗罐三通電磁閥(10)切換至清洗罐，回收三通電磁閥(16)可切換至廢液通路。清洗約10 min后關閉樣品預處理系統(tǒng)。按照上述紅花色譜條件分析得到的羥基紅花黃色素A (羥A)對照品液相色譜圖具體參見圖6，紅花浸提過程樣品色譜圖參見圖7。液相自動進樣分析得到的紅花浸提過程羥A的含量變化曲線參見圖8。結果表明，通過本發(fā)明提供的高效液相色譜在線分析方法可以實現(xiàn)紅花浸提過程羥基紅花黃色素含量的在線分析。
權利要求
1.一種高效液相色譜在線分析方法，其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn): (1)設計高效液相在線分析系統(tǒng)，該系統(tǒng)主要由樣品預處理系統(tǒng)(I)、高效液相色譜儀(2)、遠程電腦(3)、可編程邏輯控制器(4)及觸摸屏(5)、交換機(6)構成，樣品預處理系統(tǒng)(I)與高效液相色譜儀(2 )內的六通閥(24 )相連，高效液相色譜儀(2 )和觸摸屏(5 )通過交換機(6)與遠程電腦(3)相連，可編程邏輯控制器(4)和觸摸屏(5)通過網(wǎng)線(7)連接，樣品預處理系統(tǒng)(I)由清洗罐(8)、兩通電磁閥(9)、清洗罐三通電磁閥(10)、回收三通電磁閥(16 )、進液比例電磁閥(13 )、回收比例電磁閥(17 )、進液流量變送器(14 )、回收流量電磁閥(18)、初濾過濾器(11)、精密過濾器(15)、單向閥(19)、進液口(20)、出液口(21)、液相回收口( 22 )和預處理系統(tǒng)回收口( 23 )組成，進液口( 20 )通過兩通電磁閥(9 )連接清洗罐三通電磁閥(10)，清洗罐三通電磁閥(10)的一個通路連接清洗罐(8)，另一個通路連接初濾過濾器(11)，初濾過濾器(11)連接蠕動泵(12)，蠕動泵(12)的一條支路通過進液比例電磁閥(13)串連接流量變送器(14)、精密過濾器(15)和回收三通電磁閥(16)，回收三通電磁閥(16)另外兩個支路分別連接單向閥(19)及出液口(21)，單向閥(19)的一個支路連接預處理系統(tǒng)回收口(23)，另一支路連接比例電磁閥(17)及流量變送器(18)，在單向閥(19)與回收三通電磁閥(16 )之間連接液相回收口( 22 )，樣品預處理系統(tǒng)的出液口( 21)連接六通閥(24 )的e端口，液相回收口( 22 )連接六通閥(24 )的f端口，遠程電腦(3 )上安裝色譜工作站和液相數(shù)據(jù)管理軟件； (2)將在線樣品管線連接樣品預處理系統(tǒng)(I)的進液口(20)，打開高效液相色譜儀(2)并使用相應流動相平衡系統(tǒng)，選擇進樣方式為進樣器程序，設置進樣器程序:閥旁路——等待0.2 min—進樣；選擇序列進樣，設置序列和序列參數(shù)； (3)當高效液相色譜儀流動相平衡30min后壓力達到平衡時打開樣品預處理系統(tǒng)電源，點擊觸摸屏(5)進入控制界面，進行運行、清洗和停止預處理，通過樣品預處理系統(tǒng)(I)預處理后的樣品經蠕動泵(12)由出液口(21)連接六通閥(24)的(e)端口，此時六通閥(24)處于取樣狀態(tài)，預處理后的樣品連續(xù)經過定量環(huán)(g)，多余樣品經(f)端口排出回收； (4)預處理系統(tǒng)(I)運行10min達到穩(wěn)定后在液相色譜儀(2)上開始進樣，此時高效液相色譜(2)按照進樣器程序進樣分析，六通閥(24)切換至進樣狀態(tài)，高效液相色譜的泵將流動相連同定量環(huán)(g)中樣品泵入色譜柱進行分析，而預處理系統(tǒng)處理后的樣品從六通閥(f)端口直接連接樣品預處理系統(tǒng)液相回收口(22)進行回收； (5)在開始液相進樣分析時打開液相數(shù)據(jù)管理軟件并設置液相數(shù)據(jù)保存的文件位置及相應色譜參數(shù)，啟動液相數(shù)據(jù)管理軟件，色譜參數(shù)設置包括所需色譜峰的保留時間，采集范圍及采集周期，其中，采集范圍設置為30秒，根據(jù)所需分析的不同樣品性質差異作調整；采集周期設置為20秒，軟件啟動后即可實時讀取液相分析結果并做相應處理，然后將處理后結果傳輸至遠程電腦(3)上并顯示分析結果及含量曲線，該結果還可同步至觸摸屏上實時顯示； (6)當高效液相色譜序列分析結束時，在觸摸屏(5)控制界面點擊“停止”以停止運行樣品預處理系統(tǒng)，關閉液相數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)軟件。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種高效液相色譜在線分析方法，其特征在于，六通閥(24)的(a)端口和(d)端口連接定量環(huán)(g)，(b)端口連接高效液相色譜的泵，(c)端口連接色譜柱，(f)為廢液端口 ，連接液相回收口(22)。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種高效液相色譜在線分析方法，其特征在于，步驟(5)中分析結果除可以實時顯示外還可在遠程電腦(3)上通過液相數(shù)據(jù)管理軟件按照時間查詢歷史結果。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種高效液相色譜在線分析方法，其特征在于，步驟(6)后，分析結束后預處理系統(tǒng)需要清洗，點擊觸摸屏控制界面上“清洗”按鈕進行系統(tǒng)自動清洗，此時，清洗罐三通電磁閥(10)切換至清洗罐，回收三通電磁閥(16)切換至廢液通路。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種高效液相在線分析方法在中藥生產過程中在線分析中的應用，其特征在于， 在中藥生產過程中有效成分含量或比例的在線分析中的應用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種高效液相色譜在線分析方法，設計由樣品預處理系統(tǒng)、高效液相色譜儀、可編程邏輯控制器、觸摸屏、交換機構成的高效液相在線分析系統(tǒng)，通過液相色譜在線分析系統(tǒng)可實現(xiàn)樣品預處理、液相色譜自動進樣分析以及液相色譜分析結果的實時處理與顯示。本發(fā)明具有自動化程度高、操作簡單、樣品自動預處理和分析、分析結果實時顯示、系統(tǒng)可自動清洗等優(yōu)點，可用于生產過程樣品含量及組分比例的在線檢測。
文檔編號G01N30/88GK103235074SQ20131010747
公開日2013年8月7日 申請日期2013年3月30日 優(yōu)先權日2013年3月30日
發(fā)明者吳永江, 劉雪松, 丁海櫻, 金葉, 陳勇, 欒連軍, 王龍虎 申請人:浙江大學