豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素快速檢測試紙條的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種豬細(xì)菌病內(nèi)毒素檢測試劑顯示的器具，特別是涉及一種豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素（ApxIV）快速檢測試紙條，試紙條含支撐層、反應(yīng)試劑載體吸附層，支撐層為不吸水薄片條，反應(yīng)試劑載體吸附層粘貼于支撐層上，從樣品測試端依次為纖維層，ApxIV金標(biāo)單抗或多抗纖維層，纖維素膜層，手柄端為吸水材料層；分別用ApxIV配對單抗或多抗或單抗溶液在纖維層上噴檢測印跡“｜”、“/”或“＼”，分別用羊（兔）抗小鼠或豬IgG的多抗或用SPA溶液在纖維素膜層上噴對照印跡“｜”、“/”或“＼”。該試紙條特異、敏感、直觀、準(zhǔn)確、簡便、快速，能在畜禽飼養(yǎng)、肉類加工和檢疫等相關(guān)部門推廣應(yīng)用。
【專利說明】豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素快速檢測試紙條
[0001]一、【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明是一種涉及豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素(ApxIV)的檢測試劑顯示器具，特別是涉及一種可檢測豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素(ApxIV)的檢測試紙條。
[0002]二、技術(shù)背景
豬胸膜肺炎是由豬胸膜肺炎放線桿菌(APP)引起的豬的一種急性、熱性、高度傳染性的呼吸道疾病。豬胸膜肺炎放線桿菌為巴氏桿菌科放線桿菌屬的成員，是一種革蘭氏染色陰性小球桿菌，有的呈纖細(xì)桿狀或絲狀，表現(xiàn)為多形態(tài)性和兩極著色性。有莢膜，有菌毛，無芽孢。臨床上以急性出血性纖維素性胸膜肺炎和慢性纖維素性壞死性胸膜肺炎為特征。本病分布于世界許多國家和地區(qū)，是一種世界性疾病，目前呈上升的流行趨勢。我國于1987年證實(shí)存在本病，給規(guī)?；B(yǎng)豬場造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。天氣的變化和秋冬季節(jié)的來臨易導(dǎo)致本病的發(fā)生與流行，應(yīng)引起高度重視，采取有力措施，避免寒冷季節(jié)本病的發(fā)生與流行。
[0003]病豬、隱性感染的帶菌豬是本病的主要傳染源，特別是亞臨床感染的母豬是病原的主要貯存宿主，在本菌的傳播中起重要作用。本病雖然不會(huì)通過垂直傳播感染仔豬，但可通過直接接觸經(jīng)呼吸道傳染，影響到仔豬的安全。通過空氣傳播，可從一個(gè)發(fā)病豬舍跳躍式傳給另一個(gè)豬舍。也可以通過接觸被病原污染的車輛、工具、器械以及飼養(yǎng)人員流動(dòng)等間接傳播。嚙齒類動(dòng)物和鳥類也可傳播本病。各種年齡、性別的豬只都有易感性，其中以6?16周齡的豬發(fā)病較多，以3月齡的豬發(fā)病率最高，可達(dá)80%?100%，死亡率一般為50%。
[0004]豬胸膜肺炎是當(dāng)前危害世界各國養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病之一。目前APP共發(fā)現(xiàn)有15種血清型，并且各個(gè)國家流行的優(yōu)勢血清型各不相同。不同血清型之間及同一血清型的不同菌株的毒力均存在差異，致病性也有強(qiáng)弱之分，從而導(dǎo)致該病的診斷和治療非常困難。近幾年來的研究表明，與病原菌毒力相關(guān)的因子有毒素、莢膜、外膜蛋白、脲酶等，其中毒素既是主要的毒力因子，也是主要的免疫原，可作為診斷抗原建立血清學(xué)檢測方法，還可以用于診斷和衡量免疫狀態(tài)，因此毒素研究已成為該病的研究熱點(diǎn)。APP共有4種毒素，即毒素
1、I1、 III以及最近發(fā)現(xiàn)的毒素IV，它們均屬于RTX(Repeatsinthe structural, RTX)
毒素家族。近年發(fā)現(xiàn)，沒有一種血清型的APP能同時(shí)分泌4種毒素，但APP所有血清型在感染動(dòng)物體內(nèi)都能分泌ApxlV毒素蛋白，而體外培養(yǎng)的細(xì)菌卻不能分泌該毒素。因此，在動(dòng)物體內(nèi)檢測到ApxlV毒素，就能證明APP的感染，ApxlV毒素蛋白在建立診斷方法方面具較大的理論價(jià)值和應(yīng)用前景，可用于區(qū)別診斷APP的感染與非感染。目前對上述疾病的診斷方法主要有以下幾種。
[0005](I)鏡檢。取鼻腔與支氣管的分泌物或肺部病變材料涂片，革蘭氏染色，顯微鏡檢查，如見到多形態(tài)的兩極濃染的革蘭氏陰性的小球桿菌或纖細(xì)桿菌，可作進(jìn)一步鑒定。
[0006](2)病原分離鑒定。無菌取病料，用5%綿羊血液瓊脂平板與金黃色葡萄球菌交叉劃線接種，在5%?10%二氧化碳濃度條件下37°C培養(yǎng)24小時(shí)，在金黃色葡萄球菌周圍有衛(wèi)星菌落，再進(jìn)行脲酶及甘露糖發(fā)酵等生化鑒定。并進(jìn)行環(huán)磷酸腺苷(CAMP)試驗(yàn)、溶血性測定以及血清型等檢查。[0007](3)血清學(xué)診斷。熒光抗體技術(shù)可用于特異抗原的檢查；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)與補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)可用于檢測抗體，查出隱性感染的豬只。間接血凝試驗(yàn)(IHA)，APP的間接血凝試驗(yàn)用于APP的檢測與分型。乳膠凝集試驗(yàn)是一種簡便快速的檢測方法，它既可以用于APP的診斷，也可用于分型。以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行APP的血清學(xué)診斷，可以分為型特異性ELISA和種特異性ELISA。前者是只能對一種血清型的APP做出檢測，后者是對所有血清型的APP都可做出檢測。
[0008](4)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù):PCR技術(shù)具有高靈敏度、高特異性等優(yōu)點(diǎn)，多重PCR方法已被廣泛運(yùn)用于APP或ApxIV的鑒定和流行病學(xué)調(diào)查。
[0009]上述檢測方法需要專業(yè)人員在實(shí)驗(yàn)室操作，操作繁瑣，檢測費(fèi)時(shí)費(fèi)力；而且需要昂貴的儀器設(shè)備，如PCR儀、酶標(biāo)儀等，對非專業(yè)人員而言，上述檢測方法很難完成。雖然上述方法特異敏感，但無法實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測或診斷。本發(fā)明，研究一種簡便快速、實(shí)時(shí)在線檢測試紙，對控制和消滅此疾病意義重大。
[0010]三、
【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中檢測豬病病原存在的缺點(diǎn)，提供一種特異、敏感、簡便快速檢測豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素的方法，研制出檢測豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素(ApxIV)的檢測試紙條。
[0011]本發(fā)明的技術(shù)方案是:提供一種豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素(ApxIV)的檢測試紙條，該試紙條含有支撐層和吸附層，支撐層為不吸水的薄片層，吸附層附著在支撐層上，吸附層從測試端依次為樣品吸附纖維層、金標(biāo)抗體纖維層、纖維素膜層和手柄端的吸水材料層，在纖維素膜層上設(shè)有檢測印跡和對照印跡；金標(biāo)抗體纖維層吸附有納米級(jí)金顆粒標(biāo)記的抗ApxIV的單克隆抗體,檢測印跡用抗ApxIV的配對單抗印制,對照印跡用羊或兔抗小鼠IgG的多克隆抗體；或金標(biāo)抗體纖維層吸附有納米級(jí)金顆粒標(biāo)記的抗ApxIV的多克隆抗體，檢測印跡用抗ApxIV的單抗制備，對照印跡用金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)或抗豬IgG多抗制備。
[0012]檢測印跡用抗ApxIV的配對單抗制備即用ApxIV的配對單抗溶液制備；檢測印跡用抗ApxIV的多克隆抗體制備即為用ApxIV的多克隆抗體制備。
[0013]支撐層用不吸水的硬質(zhì)塑膠片條或硬紙條制成；測試端樣品吸附纖維層用玻璃棉制成；金標(biāo)抗體纖維層用玻璃棉和金標(biāo)抗體制成，金標(biāo)抗體可以是單抗或多克隆抗體。
[0014]纖維素膜層用硝酸纖維素膜、或純纖維素膜、或羧化纖維素膜、或聚偏二氟乙烯PVDF纖維素膜制成。
[0015]吸水材料層用吸水紙制成。
[0016]檢測印跡和對照印跡為直線式、或斜線式，纖維素膜層上含有一條檢測印跡和一條對照印跡，檢測印跡和對照印跡的排列形式為“ I I ”、“/ /”、“\ \”中的任一種。
[0017]試紙條吸附層上面含有一層保護(hù)層，保護(hù)層附著在吸附層上，在測試端樣品吸附纖維層、金標(biāo)抗體纖維層及吸水材料層上覆蓋有保護(hù)膜，在測試端樣品吸附纖維層與金標(biāo)抗體纖維層交界處對應(yīng)的保護(hù)膜上印制有樣品標(biāo)記線，該標(biāo)記線偏向測試端樣品吸附纖維層一側(cè)處約0.5cm處。
[0018]根據(jù)需要，選擇上述金標(biāo)抗體纖維層、檢測印跡和對照印跡排列形式中一種形式。
[0019]本發(fā)明的積極有益效果: 1.檢測特異性強(qiáng)、敏感性高:本發(fā)明檢測試紙條以納米級(jí)金顆粒標(biāo)記高親和力特異性單克隆抗體或特異性多克隆抗體為基礎(chǔ)而制成，金標(biāo)抗體中金顆粒與抗體分子之間無共價(jià)鍵形成，二者通過異性電荷間的范德華力相結(jié)合，金顆粒不影響單克隆抗體或多克隆抗體的特異性和結(jié)合力，并且具有較高的標(biāo)記率。本發(fā)明檢測試紙條具有較高的特異性和敏感性，可檢測到納克級(jí)豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素。
[0020]2.操作簡便、快速:使用本發(fā)明試紙條檢測時(shí)無需附加任何其它儀器和試劑，只需將其測試端插入待檢的樣品液中30秒左右，然后在1-5分鐘內(nèi)即可判定檢測結(jié)果。
[0021]3.檢測結(jié)果直觀、準(zhǔn)確:本發(fā)明試紙條以是否顯示棕紅色的檢測線和對照線作為判定陽性和陰性結(jié)果的依據(jù)，即只在纖維素膜的對照線印記處顯示一條棕紅色對照線C，而在檢測線印記處無棕紅色條帶顯示，表示被檢測的ApxIV為陰性結(jié)果；在纖維素膜的對照線印記處顯示一條棕紅色對照線C，在檢測印跡處顯示一條棕紅色條帶T，則表示被檢測的ApxIV為陽性結(jié)果。無論陽性結(jié)果或陰性結(jié)果對照線C均應(yīng)顯示，當(dāng)對照線C不顯示時(shí)，說明試紙條失效。
[0022]4.檢測費(fèi)用降低:使用本發(fā)明檢測試紙條，不需其它儀器及試劑，節(jié)省了儀器、設(shè)備和附加試劑費(fèi)用；非專業(yè)人員也可隨時(shí)實(shí)時(shí)在線檢測，無需支付專家診斷檢查費(fèi)及其相關(guān)費(fèi)用，可極大的降低檢測成本的投入，降低檢測費(fèi)用。
[0023]5.使用范圍廣:本發(fā)明檢測試紙條操作簡單，即“傻瓜式”操作，而且攜帶方便、易保存，可滿足不同單位和不同層次人員的需要，包括專業(yè)化驗(yàn)、海關(guān)檢疫、衛(wèi)生防疫、質(zhì)量監(jiān)測、畜產(chǎn)品加工、集約化養(yǎng)殖到個(gè)體養(yǎng)殖等，具有廣闊的市場前景和社會(huì)效益。
[0024]四、【專利附圖】

【附圖說明】:
圖1 一種豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素(ApxIV)的檢測試紙條的側(cè)視結(jié)構(gòu)示意圖 圖2 —種豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素(ApxIV)的檢測試紙條的俯視結(jié)構(gòu)示意圖 五、【具體實(shí)施方式】:
以下實(shí)施例僅為了進(jìn)一步說明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明的內(nèi)容。豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素(ApxIV)的檢測試紙條的制備，需要制備抗ApxIV的單克隆抗體和多克隆抗體，用于制備檢測印跡和金標(biāo)抗體纖維層；同時(shí)需要制備羊或兔抗鼠IgG抗體，羊或兔抗豬IgG抗體，用于制備對照印跡。
[0025]1.羊(兔)抗鼠或抗豬IgG抗體的制備:
以飽和硫酸銨法提取小鼠或豬血清中的IgG，取I份血清加2份PBS液(pH 7.2)混勻，加等體積飽和硫酸銨液混勻，置4°C冰箱內(nèi)2h，在4°C、10000r/min離心15min，棄上清液；以適量PBS液(pH7.2)溶解沉淀，加飽和硫酸銨液至其最終濃度為33%，置4°C冰箱內(nèi)2h，在4°C、10000r/min條件下離心15min，棄上清液，以少量PBS液(pH7.2)溶解沉淀，置4°C冰箱內(nèi)用PBS液(pH7.2)過夜透析，換液2?3次，在4°C、10000r/min條件下離心15min，收集上清液，以紫外分光光度計(jì)測定其蛋白濃度。以50 μ g?100 μ g (IgG) /kg體重經(jīng)皮下或肌肉注射抗體陰性健康羊或家兔3?4次，末次免疫20天后，靜脈采血，以ELISA測定其血清抗體效價(jià)在1:2000以上，心臟采血或頸動(dòng)脈放血，收集其高免血清，以飽和硫酸銨法提取羊(兔)抗小鼠或豬的IgG (其提取方法與上述提取小鼠血清IgG相同，不再重述)，用于制備本發(fā)明試紙條的對照印跡。
[0026]2.ApxIV單克隆抗體(Mi)的制備:每只用50 μ g~100 μ g ApxIV抗原免疫Balb/c系小鼠三次,每次間隔15~30d ;第三次加強(qiáng)免疫后3~4d，將免疫小鼠眼球放血，拉頸致死，用75%酒精浸泡5~lOmin，無菌取其脾臟，剪碎并經(jīng)100目尼龍網(wǎng)過濾，1000r/min離心10min，收集脾細(xì)胞；將IX IO8個(gè)脾細(xì)胞與2~5 X IO7個(gè)NSO骨髓瘤細(xì)胞混合，1000r/min離心10min棄上清，將含有沉淀細(xì)胞的離心管置于37°C的水中，并緩緩加入0.7~Iml 40%~50% PEG4000 (pH 8.5~9.0)作用lmin，然后緩慢加入無血清1640培養(yǎng)基15ml，以終止PEG的作用，37°C水浴5~lOmin，1000r/min離心10min棄上清，將細(xì)胞沉淀重懸于HAT選擇培養(yǎng)基中，并加入
96孔培養(yǎng)板(100μΙ~200μ1/孔)，置于37°C 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)7~IOd后，以548~1(^ g/ml的純化的病原體特異抗原包被96孔酶標(biāo)板，以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測雜交瘤的培養(yǎng)上清，挑取強(qiáng)陽性細(xì)胞克隆(OD45tl ^ 0.5)，進(jìn)行連續(xù)三次的有限稀釋法克隆化，獲得陽性雜交瘤細(xì)胞株，其染色體數(shù)為92~98，其分泌的單克隆抗體，能夠特異識(shí)別ApxIV，而不與其它毒素發(fā)生交叉反應(yīng)，親和力常數(shù)達(dá)109~1(1，輕鏈亞型為K或入，重鏈亞型為IgG1UgG2aUgG2bUgG3 ;獲得的配對單克隆抗體，用于制金標(biāo)單抗體玻璃棉或檢測印跡。
[0027]3.金標(biāo)單抗玻璃棉的制備:
利用檸檬酸鈉還原法制備納米級(jí)金顆粒:即在50~100mL沸騰的0.01~0.05%氯金酸水溶液中加入2~4ml的0.5~2%檸檬酸三鈉溶液，獲得直徑15nm左右的納米級(jí)金顆粒。以0.lmol/L的K2CO3調(diào)金顆粒溶液的pH至8.5~9.5，以1:1000~1300的標(biāo)記比將待標(biāo)記的單克隆抗體加入PH8.5~9.5的金溶膠中，標(biāo)記IOmin后，加20% PEG10000至最終濃度為0.05%, 4°C、1500~3000r/min離心20min,除去未結(jié)合的金顆粒顆粒，4°C、15000r/min離心lh，棄上清，獲金標(biāo)抗體混合物后,用丙烯葡聚糖S-400柱層析，分離純化金標(biāo)抗體,獲得的金標(biāo)抗體。將1:100~ 500稀釋的金標(biāo)抗體，吸附于精制玻璃棉中，4°C低溫真空干燥，制備金標(biāo)單克隆抗體玻璃棉。
[0028]4.ApxIV多克隆抗體(Ci)的制備:
ApxIV多克隆抗體(Ci)的制備。采用ApxIV抗原多次免疫接種抗體陰性健康豬。末次免疫20天后靜脈采血，以ELISA測定其血清抗體效價(jià)在1:2000以上，心臟采血或頸動(dòng)脈放血，收集其高免血清，以飽和硫酸銨法提取血清中IgG抗體(方法與小鼠血清IgG的提取相同，不再重述)。
[0029]金標(biāo)多抗和金標(biāo)多抗玻璃棉的制備，與金標(biāo)單抗玻璃棉的制備方法相同，不再重述。詳見【具體實(shí)施方式】中的內(nèi)容3。
[0030]5.本發(fā)明檢測試紙條檢測原理
當(dāng)本發(fā)明檢測試紙條測試端插入待檢樣品溶液后，待檢溶液通過虹吸帶動(dòng)待檢ApxIV進(jìn)入金標(biāo)抗體纖維層，并與其中的金標(biāo)抗體(Mi或Ci ) 一起沿硝酸纖維素膜向手柄端擴(kuò)散，最終滲入手柄端吸水材料層，擴(kuò)散過程中金標(biāo)抗體能夠與相應(yīng)的待檢ApxIV結(jié)合，結(jié)合金標(biāo)抗體的ApxIV能夠被纖維素膜上檢測印跡的配對單抗或多抗攔截，當(dāng)樣品液中含有被檢ApxIV時(shí)，則出現(xiàn)一條棕紅色的檢測線；羊或兔抗鼠或抗豬IgG則可與相應(yīng)的金標(biāo)單抗或多抗結(jié)合，出現(xiàn)I條棕紅色對照線。當(dāng)待檢樣品液中不含ApxIV時(shí)，試紙條只顯示出一條棕紅色對照線；當(dāng)纖維素膜上沒有對照線顯示時(shí)，則表明試紙條已失效。
[0031]6.本發(fā)明檢測試紙條的檢測操作方法 (I)檢測樣品的處理:取病豬病變組織，1:1?5加入生理鹽水并用剪刀剪碎，浸出液為待檢樣品，病豬全血或血清加入生理鹽水1:1?5稀釋后為待檢樣品。
[0032](2)檢測操作:將本發(fā)明檢測試紙條樣品端插入待檢樣品液中，插入深度不超過標(biāo)記線9，約30秒后取出試紙條，水平放置約I?5分鐘，同時(shí)觀察結(jié)果。
[0033](3)結(jié)果判定:如果在檢測試紙條纖維素膜上只顯示出一條棕紅色對照線C，表示檢測結(jié)果為陰性，說明在被檢樣品中不含ApxIV;如果檢測試紙條上的纖維素膜出現(xiàn)對照線C，檢測印跡處出現(xiàn)一條檢測線，表示檢測結(jié)果為陽性，即在待檢樣品中含有ApxIV ;如果纖維素膜上沒有對照線C顯示，則表明試紙條已失效。
[0034]實(shí)施例一:豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素(ApxIV)的檢測試紙條
參見圖1和圖2，圖中I為支撐層，用硬質(zhì)塑膠薄片條制成，2為測試端的樣品吸附纖維層，用玻璃棉制成，3為金標(biāo)抗體纖維層，吸附有納米級(jí)金顆粒標(biāo)記的抗ApxIV的單克隆抗體的玻璃棉，根據(jù)上述【具體實(shí)施方式】3中所述的制備方法制備其金標(biāo)單抗玻璃棉，4為纖維素膜層，采用硝酸纖維素膜制成，5為吸水材料層，用吸水紙制成，將編號(hào)2、3、4、5各層從左端測試端至右粘貼在硬質(zhì)塑膠薄片條I上，彼此之間交界處互相交叉重疊。在硝酸纖維素膜層4上，6為用抗ApxIV的配對單抗溶液印制的檢測印跡T，7為用羊或兔抗鼠IgG溶液印制的對照印跡C，檢測印跡和對照印跡為直線式、或斜線式，兩種印跡帶排列形成的組合形式為“ I I ”、“/ /”、“\ \”中的任一種。8 -1為覆蓋在測試端樣品吸附纖維層2和金標(biāo)抗體纖維層3上面的白色保護(hù)膜，在2和3交界處對應(yīng)保護(hù)膜8-1位置上偏向于樣品吸附纖維層2 —側(cè)0.5cm處印有標(biāo)記線9，9的右端印有箭頭及max字樣，吸水材料層5(手柄端)上覆蓋有其它顏色(如黃色)保護(hù)膜8-2。
[0035]待測樣品溶液的制備及檢測操作步驟，與【具體實(shí)施方式】6中的檢測操作方法相同，不再重述。
[0036]實(shí)施例二:豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素(ApxIV)的檢測試紙條，與實(shí)施例一基本相同，不同之處在于:
金標(biāo)抗體纖維層3用吸附有金顆粒標(biāo)記的抗ApxIV的多克隆抗體的玻璃棉制成，根據(jù)上述【具體實(shí)施方式】3中所述的制備方法制備其金標(biāo)多克隆抗體玻璃棉；在硝酸纖維素膜層4上，6為用抗ApxIV的單抗溶液印制的檢測印跡T，7為用羊或兔抗豬的IgG溶液印制對照印跡C，兩種印跡帶排列形成的組合形式為“ I I ”、“/ /”、“\ \”中的任一種。其它包括檢測樣品制備、操作方法和結(jié)果判定等均與【具體實(shí)施方式】6中的操作方法相同，不再重述。
【權(quán)利要求】
1.一種檢測豬胸膜肺炎放線桿菌內(nèi)毒素(ApxIV)的檢測試紙條，該試紙條含有支撐層和吸附層，支撐層為不吸水的薄片層，吸附層附著在支撐層上，吸附層從測試端依次為樣品纖維層、金標(biāo)抗體纖維層、纖維素膜層和手柄端的吸水材料層，在纖維素膜層上制備有檢測印跡和對照印跡，其特征是金標(biāo)抗體纖維層吸附有納米級(jí)金顆粒標(biāo)記的抗ApxIV的單克隆抗體，檢測印跡用抗Apx IX的配對單抗或多克隆抗體印制，對照印跡用羊或兔抗小鼠IgG的多克隆抗體或金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)印制。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是金標(biāo)抗體纖維層吸附有納米級(jí)金顆粒標(biāo)記的抗Apx B'單克隆抗體，檢測印跡用抗Apx W的配對單抗或多克隆抗體印制，對照印跡用羊或兔抗小鼠IgG的多克隆抗體或金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)印制，或金標(biāo)抗體纖維層吸附有納米級(jí)金顆粒標(biāo)記的抗Apx IV的多克隆抗體，檢測印跡用抗Apx IV的單抗制備，對照印跡用金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)或抗豬IgG多抗制備。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試紙條，其特征是檢測印跡用抗ApxW的配對單抗制備即用抗Apx IX的配對單抗溶液制備；檢測印跡用抗Apx IY的多克隆抗體制備即為用抗Apx IX的多克隆抗體制備。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是支撐層用不吸水的硬質(zhì)塑膠片條或硬紙條制成；測試端樣品吸附纖維層用玻璃棉制成；金標(biāo)抗體纖維層用玻璃棉和金標(biāo)抗體制成，金標(biāo)抗體可以是單抗或多克隆抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是纖維素膜層用硝酸纖維素膜、或純纖維素膜、或羧化纖維素膜、或聚偏二氟乙烯PVDF纖維素膜制成。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是吸水材料層用吸水紙制成。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是檢測印跡和對照印跡為直線式、或斜線式，纖維素膜層上含有三條檢測印跡和一條對照印跡，檢測印跡和對照印跡的排列形式為“I I中的任一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是試紙條吸附層上面含有一層保護(hù)層，保護(hù)層附著在吸附層上，在測試端樣品吸附纖維層、金標(biāo)抗體纖維層及吸水材料層上覆蓋有保護(hù)膜，在測試端樣品吸附纖維層與金標(biāo)抗體纖維層交界處對應(yīng)的保護(hù)膜上印制有樣品標(biāo)記線，該標(biāo)記線偏向測試端樣品吸附纖維層一側(cè)約0.5cm處。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK103941013SQ201310083779
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2013年3月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月15日
【發(fā)明者】李學(xué)伍, 鄧瑞廣, 楊繼飛, 趙東, 王麗, 柴書軍, 王方雨, 張改平 申請人:河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院