專利名稱：一種測定利血平含量的高效液相色譜方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種利血平含量的高效液相色譜測定方法，具體要求保護的是一種測定利血平含量的高效液相色譜方法。
背景技術：
利血平是于1930年在印度草藥中被發(fā)現(xiàn)具有顯著地降壓作用，經(jīng)過藥物化學和藥理學研究最終闡明了其降血壓作用機制，并于二十世紀五十年代初開發(fā)完成的降血壓新藥(壽比南)。由于進口藥品價格昂貴，我國于二十世紀五十年代初組織開展了蘿芙木類資源的綜合研究，在云南、廣西等地找到較為豐富的植物資源，并與1958年以蘿芙木總生物堿開發(fā)了治療高血壓的新藥“降壓靈”，主要成分即是利血平。后來又逐步發(fā)展了以利血平單位為原料藥的各種制劑，如利血平片、復方降壓片等。利血平的各種制劑在臨床上得到較為廣泛的、長期持續(xù)的應用。近幾年關于測定利血平片中利血平含量方法的報道越來越多，研究利血平含量分析方法具有很重要的意義。利血平是一種吲哚型生物堿。分子式C33H4(lN209。利血平(結(jié)構式見附圖1)存在于蘿芙木屬多種植物中，在催吐蘿芙木中含量最高可達1%。無色棱狀晶體。熔點264 265 0C (分解)，比旋光度-117.7° (氯仿，C= I)。易溶于氯仿、二氯甲烷、冰醋酸，能溶于苯、乙酸乙酯，稍溶于丙酮、甲醇、乙醇、乙醚、乙酸和檸檬酸的稀水溶液。利血平的溶液放置一定時間后變黃，并有顯著的突光，加酸和曝光后突光增強。利血平是一個弱堿，它的鹽酸鹽為無色晶體，熔點224°C (分解)；吡啶復合物為黃色結(jié)晶，熔點183 186°C (分解)。利血平能降低血壓和減慢心率，作用緩慢、溫和而持久，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有持久的安定作用，是一種很好的鎮(zhèn)靜藥。在國內(nèi)，對復方利血平片中利血平含量測定方法方面已經(jīng)有很多報道。王昕等(HPLC法測定復方降壓片中利血平的含量，王昕，孫悅，米婭嫻，天津藥學，2003,15(6):15 16。)報道了一種HPLC法測定復方降壓片中利血平的含量的方法。采用C18 (200mmx4.6mm, 5 μ m)色譜柱，乙腈一水(41: 59)用高氯酸調(diào)節(jié)pH值至(2.15 ±0.05)為流動相，利血平在4.0 16 μ g/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系，線性相關系數(shù)為 0.9996，RSD = 0.34% (η = 9)，平均回收率 100.5%0歐陽曉玫等(RP-HPLC法測定利血平片劑的含量，歐陽曉玫，何英梅，常琦，中國藥事，2003,17(12):758 759。)報道了一種HPLC法測定利血平片劑的含量的方法。采用HyperSilC18柱，甲醇-水-冰醋酸(70: 30: 0.8)為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為268nm，利血平在4.0 36 μ g/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系，線性相關系數(shù)為 0.9999，平均回收率 100.4% (η = 6)。梁選革等(HPLC法測定復方利血平片中利血平的含量，梁選革，石慧秋，中國藥房，2007,18(25):1978 1979。)報道了一種HPLC法測定復方降壓片中利血平的含量的方法。采用C18色譜柱，流動相為乙腈:水(60: 40)，利血平在1.93 38.6 μ g/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系，線性相關系數(shù)為1.0，平均回收率98.9%。
目前，關于測定復方利血平片中利血平含量的方法很多，但這些測定方法濃度與線性關系曲線中的濃度范圍均較窄，本發(fā)明中濃度與峰面積線性關系中濃度范圍最小可至
0.5μ g/ml，最大可達100 μ g/ml，線性關系中濃度范圍較大。本發(fā)明還具有分離效果好,測定準確，靈敏度高，分析簡便快速等技術特點，對于準確測定利血平制劑及原料藥中利血平的含量具有重要的應用價值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種更穩(wěn)定、分離效果更好、精密度和準確性更高的利血平含量檢測方法。為達上述目的，本發(fā)明采用了如下技術方案:在一種優(yōu)化實驗中，本發(fā)明方法選用了流動相中乙腈成分體積百分比由30%遞增至55%。優(yōu)選乙腈體積分數(shù)為55%。在上述優(yōu)化實驗中，確定本發(fā)明方法中流動相成分含45%的0.2M的乙酸銨溶液。本發(fā)明HPLC方法中，其特點在于選用上述的流動相。按上述流動相所得利血平樣品圖譜有較好的峰形，如附圖2所示。在優(yōu)化實驗中，本發(fā)明分析方法中，樣品制備方法為:精密量取25mg樣品，置于25ml容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度線。本發(fā)明HPLC分析方法進樣量為5 μ 1，利用標準品溶液多次進樣進行進樣精密度試驗，進樣次數(shù)為6次，RSD值為0.15%，進樣精密度良好。


圖1為利血平結(jié)構式，圖2為利血平圖譜，圖3為利血平標樣濃度與峰面積線性關系。
具體實施例方式色譜條件:采用Agilent-1260高效液相色譜儀，用C18反相色譜柱(ThermoC184.6x250mm5mm)柱溫:30°C檢測器:紫外檢測器，檢測波長268nm流動相溶液:A溶液:稱取7.72g乙酸銨(AR)，溶解在IOOOml水中，醋酸調(diào)PH至
4.0。流動相按A溶液:乙腈=55: 45體積比混合，0.2 μ m孔徑過濾器過濾。采用外標法，需要分別對標準品和待測樣品溶液進行測定。標準品溶液配制:精密稱取25mg標準品，置于25ml容量瓶中，加乙腈超聲Imin使樣品溶解并定容至刻度線。待測樣品配制:精密稱取與標準品同等重量的待測樣品，置于25ml容量瓶中，力口乙腈超聲Imin使樣品溶解并定容至刻度線。根據(jù)公式:利血平(％) = A1XC2/A2XC1其中Al為待測樣品峰面積A2為標準品峰面積Cl待測樣品濃度(mg/ml)C2標準品濃度(mg/ml)
帶入數(shù)據(jù)即可得到利血平含量。實例一按照上述色譜條件，對成都恒瑞制藥有限公司購買的已標定含量為98.5%的利血平進行含量測定。標準品溶液配制:精密稱取25mg標準品，置于25ml容量瓶中，加乙腈超聲Imin使樣品溶解并定容至刻度線。待測樣品配制:精密稱取與標準品同等重量的成都恒瑞制藥有限公司的利血平樣品，置于25ml容量瓶中，加乙腈超聲Imin使樣品溶解并定容至刻度線。標準溶液與待測樣品均分別配制3個，分別量取5 μ I進色譜柱，所得峰面積取平均值帶入上述公式計算。測定結(jié)果如下表:
權利要求
1.一種利血平HPLC含量檢測方法，其特征在于流動相為乙腈和0.2M乙酸銨的混合溶液，其組成的體積比例為乙腈30% 55%，0.2M乙酸銨45% 70%，優(yōu)選其中體積比例乙 55%,0.2M 乙酸銨 45%。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于色譜柱為以碳十八烷基鍵合硅膠為填充物的反相色譜柱。
3.如權利要求1所述的方法，使用紫外檢測器，檢測波長為268nm，柱溫30°C，流速為1.5ml/min,進樣體積為5 μ I。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于配制的樣品溶液濃度為lmg/ml。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于本HPLC法采用外標法進行利血平的含量測定。濃度與峰面積線性關系中濃度范圍為0.5 μ g/ml 100 μ g/ml。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利血平含量檢測的高效液相色譜方法，色譜柱C18(4.6×250mm5μm)；流動相乙腈∶0.2M乙酸銨(55∶45，體積比)；柱溫30℃，進樣量5μl；流速1.5ml/min；紫外檢測器，檢測波長268nm。利血平在0.5～100μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系，線性相關系數(shù)r＝1。采用本發(fā)明的HPLC方法檢測利血平含量，可縮短樣品分析時間，降低流動相配制費用和樣品配制成本和提高樣品分析結(jié)果的準確性。
文檔編號G01N30/89GK103197024SQ20131008262
公開日2013年7月10日 申請日期2013年3月15日 優(yōu)先權日2013年3月15日
發(fā)明者彭學東, 張梅, 趙金召, 祁亞楠 申請人:張家港威勝生物醫(yī)藥有限公司