專利名稱：一種食物過敏原檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及ー種食物過敏原檢測盒，尤其涉及ー種半定量或定量檢測人血清中食物不耐受特異性IgG的免疫印跡(Western Blot)檢測試劑盒。
背景技術：
過敏性疾病是現(xiàn)代社會中最常見的ー種疾病，其發(fā)病機理是機體受抗原物質(zhì)(也稱過敏原allergen或變應原)刺激后引起的組織損傷或生理功能紊亂。食物不耐受性是過敏性疾病的ー種，其為復雜的變態(tài)反應性疾病，病變機理為人的免疫系統(tǒng)把進入體內(nèi)的某種或多種食物當作是有害物質(zhì)，從而針對這些物質(zhì)產(chǎn)生過度的保護性免疫反應，產(chǎn)生食物特異性IgG抗體。食物在進入消化道后，理論上應當被消化分解為氨基酸、甘油和單糖，然后轉(zhuǎn)化為 能量或者人體組織構成。但事實并非如此，很多食物(包括我們最常食用的某些食物)因為缺乏相應的酶而無法被人體完全消化，從而以多肽或其它形式進入腸道，其中一些會被機體作為外來物質(zhì)識別而產(chǎn)生免疫反應，最后生成具有食物特異性的IgG抗體。當該IgG抗體與再次食物顆粒接觸的時候，其將與食物顆粒形成免疫復合物(III型變態(tài)反應)，并被機體當作廢物從腎臟排出。而并不是所有的免疫復合物都能通過腎小球濾膜，無法過濾的免疫復合物則會堵塞腎臟的濾過結構，導致腎小球濾過壓升高，繼而導致血壓升高、血管壁擴張和膽固醇沉積。人體廢液(尤其是脂肪細胞)不能正常通過腎臟排出而潴留在組織中，最終會導致水腫和肥胖。如果不及時改變飲食結構，不耐受的食物會繼續(xù)形成復合物，加重原有的癥狀并不斷持續(xù)。從而導致免疫系統(tǒng)超負荷，致使人體各系統(tǒng)出現(xiàn)如高血壓、月巴胖、頭痛或偏頭痛、慢性腹瀉、疲勞、感染等一系列癥狀疾病。目前確定過敏原的方法主要皮內(nèi)試驗和點刺試驗，該方法一般半小時即可獲得檢測結果，具有簡便、快速、價廉的優(yōu)點。但缺陷在于假陽性高并受其他藥物的影響較大，試驗前24小時內(nèi)服用抗過敏藥物會影響測定結果，甚至嚴重過敏反應的患者進行皮膚試驗還會有一定的生命危險。當然也可以通過體外實驗檢測出過敏原的種類，如通過抽取少量血清，然后采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測樣品中對某些過敏原產(chǎn)生的特異性IgG的含量，完成過敏原篩查及特異性過敏原的檢測，但該方法往往操作起來極為不便。

實用新型內(nèi)容鑒于現(xiàn)有技術的不足，本實用新型第一方面提供一種靈敏度高，使用方便、安全的食物過敏原檢測試劑盒。本實用新型提供如下技術方案ー種食物過敏原檢測試劑盒，其特征在于食物過敏原檢測試劑盒包括包被有過敏原蛋白及人IgG標準品的硝酸纖維膜試紙條及反應槽，所述試紙條位于反應槽的底部。進ー步,所述食物過敏原檢測試劑盒還包括生物素標記的抗人IgG抗體試劑瓶，親和素-辣根過氧化物酶試劑瓶，TMB底物顯色瓶，樣本稀釋液瓶。進ー步，所述硝酸纖維膜試紙條不同位置包被有若干種食物過敏原蛋白，此不同位置區(qū)域定義為檢測區(qū)域。進ー步，所所述食物過敏原蛋白為奶類、蛋類、肉類、谷物類、堅果類、水果類、蔬菜類、水產(chǎn)類、豆類的之中的若干種。進ー步，所述硝酸纖維膜試紙條在特定位置還包被有若干不同濃度的人IgG標準品，此特定位置區(qū)域定義為標準品區(qū)域。本實用新型的有益效果由于反應槽內(nèi)底部設硝酸纖維膜試紙條，該硝酸纖維膜試紙條被有若干種過敏原蛋白及人IgG標準品，試劑盒中還盛放有其他反應與檢測試劑，加入檢測者的血清樣本于反應槽中，可方便的檢測出檢測者食物過敏原的種類及程度，靈 敏度高，使用方便、安全。

下面將結合附圖及實施例對本實用新型作進ー步說明，附圖中圖I是本實用新型中反應槽結構示意圖。
具體實施方式
為了使本實用新型的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚明白，下面結合實施例和附圖，對本實用新型進ー步詳細說明。請參閱附圖I，本實用新型提供了 ー種食物過敏原檢測試劑盒，可用于對人體食物過敏IgG抗體進行檢測，包括包被有過敏原蛋白及人IgG標準品的硝酸纖維膜試紙條200及反應槽100，所述試紙條位于反應槽100的底部。該試劑盒還包括生物素標記的抗人IgG抗體試劑瓶、親和素-辣根過氧化物酶試劑瓶、TMB底物顯色瓶、樣本稀釋液瓶，其在盒中的位置沒有特別要求。該試紙條上包被有若干食物過敏原蛋白300，該食物過敏原蛋白300分居于硝酸纖維膜試紙條200的不同位置。該試紙條上還包被有人IgG標準品400，該人IgG標準品400分居于硝酸纖維膜試紙條200的不同位置。按照人體日常進食，食物過敏原蛋白300包括為奶類、蛋類、肉類、谷物類、堅果類、水果類、蔬菜類、水產(chǎn)類、豆類的之中的若干種。例如奶類食物過敏原可以包括牛奶、羊奶等提取蛋白；蛋類食物過敏原可以包括家禽蛋白、家禽蛋黃等提取蛋白；肉類食物過敏原可以包括豬肉、牛肉、羊肉、鴨肉、雞肉、鵝肉、火雞肉、驢肉等提取蛋白；谷物類食物過敏原蛋白可以包括玉米、小麥、燕麥、大麥、喬麥、大米、小米等提取蛋白；堅果類食物過敏原蛋白可以包括杏仁、花生、棒子、腰果、核桃、開心果、巴西堅果、芝麻等提取蛋白；水果類食物過敏原蛋白可以包括西瓜、菠蘿、橙子、芒果、香蕉、柑桔、胡袖、擰橡、蘋果、葡萄、梨、草莓、桃等提取蛋白；蔬菜類過敏原蛋白可以包括蘿卜、芹菜、菠菜、洋蔥、茄子、大蒜、辣椒、土豆、西紅柿等提取蛋白；水產(chǎn)類食物過敏原蛋白可以包括帶魚、黃魚、比目魚、三文魚、鯧鳊魚、鯽魚、草魚、鏈魚、龍蝦、河蝦、蟹、蛘、貝類、牡蠣、黃鱔、鯉魚等提取的蛋白；豆類食物過敏原蛋白可以包括扁豆、蠶豆、黃豆、豌豆等提取的蛋白；一般情況所述過敏原蛋白應盡可能種類全，以便搜尋出過敏原蛋白種類；當然如果需要檢查某人對特定食物是否過敏，則只需提取該特定食物過敏原蛋白即可。食物過敏原的制備方法為將含過敏原蛋白300的食物經(jīng)粉碎、脫脂、提取、濃縮、SDS-PAGE電泳鑒定、洗脫、然后冷凍貯存?zhèn)溆?。試劑盒的組裝如下按每盒12份粘貼于反應槽100底部的硝酸纖維膜試紙條200，一瓶生物素標記抗體(4ml);—瓶親和素-辣根過氧化物酶(4ml); —瓶TMB底物顯色液(4ml);—瓶(25X)濃縮清洗液(20ml);—瓶樣本稀釋液(IOml)。使用本實用新型進行檢測步驟為步驟一提取血清制備樣本液并加以稀釋，加入所述樣本液到帶有硝酸纖維膜試紙條200的反應槽100中室溫下孵育45分鐘，使樣本液中的食物不耐受IgG抗體與試紙條上固相過敏原蛋白結合成IgG抗體-過敏原蛋白復合物，清洗反應槽100除去雜質(zhì)蛋白；步驟ニ 向反應槽100中加入生物素標記的抗人IgG抗體在室溫中孕育45分鐘 后，使IgG抗體-過敏原蛋白復合物與生物素標記的抗人IgG抗體結合成生物素標記的抗人IgG抗體-IgG抗體-過敏原蛋白復合物，使人IgG標準品與生物素標記的抗人IgG抗體結合成生物素標記的抗人IgG抗體-人IgG抗體標準品復合物，清洗反應槽100除去多余抗人IgG抗體；步驟三向反應槽100中加入親和素-HRP室溫孵育20分鐘，使其與IgG抗體-過敏原蛋白-抗人IgG抗體復合物及生物素標記的抗人IgG抗體-人IgG抗體標準品復合物相結合，清洗反應槽100除去多余的親和素-HRP ；步驟四向反應槽100中加入TMB底物顯色液避光反應15分鐘，根據(jù)顯色液產(chǎn)生顔色的位置判斷樣本液中食物不耐受IgG的種類，根據(jù)顏色的深淺半定量判斷食物不耐受IgG的濃度，或使用適配生物信號分析儀分析過敏原的種類及定量判斷濃度；步驟一前所述反應槽100在室溫下平衡10分鐘，用稀釋的清洗液快速濕潤。本實用新型由于反應槽100內(nèi)底部設有硝酸纖維膜試紙條200，該硝酸纖維膜試紙條200被有若干種過敏原蛋白300及若干種人IgG標準品400，試劑盒中還盛放有其他反應與檢測試劑，加入檢測者的血清樣本于反應槽100中，按照本實用新型前述使用步驟檢測，即可方便的檢測出檢測者食物過敏原的種類及程度，靈敏度高，使用方便、安全。以上所述僅為本實用新型的較佳實施例而已，并不用以限制本實用新型，凡在本實用新型的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在實用新型的保護范圍之內(nèi)。
權利要求1.ー種食物過敏原檢測試劑盒，其特征在于食物過敏原檢測試劑盒包括包被有過敏原蛋白及人IgG標準品的硝酸纖維膜試紙條及反應槽，所述試紙條位于反應槽的底部。
2.根據(jù)權利要求I所述的試劑盒，其特征在于所述食物過敏原檢測試劑盒還包括生物素標記的抗人IgG抗體試劑瓶、親和素-辣根過氧化物酶試劑瓶、TMB底物顯色瓶、樣本稀釋液瓶。
3.根據(jù)權利要求2所述的試劑盒，其特征在于所述硝酸纖維膜試紙條不同位置包被有若干種食物過敏原蛋白，此不同位置區(qū)域定義為檢測區(qū)域。
4.根據(jù)權利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述食物過敏原蛋白為奶類、蛋類、肉類 、谷物類、堅果類、水果類、蔬菜類、水產(chǎn)類、豆類的之中的若干種。
5.根據(jù)權利要求2所述的試劑盒，其特征在于所述硝酸纖維膜試紙條在特定位置還包被有若干不同濃度的人IgG標準品，此特定位置區(qū)域定義為標準品區(qū)域。
專利摘要本實用新型提供一種食物過敏原檢測試劑盒，其特征在于食物過敏原檢測試劑盒包括包被有過敏原蛋白及人IgG標準品的硝酸纖維膜試紙條及反應槽，所述試紙條位于反應槽的底部。本實用新型的有益效果由于反應槽內(nèi)底部設硝酸纖維膜試紙條，該硝酸纖維膜試紙條被有若干種過敏原蛋白及人IgG標準品，試劑盒中還盛放有其他反應與檢測試劑，加入檢測者的血清樣本于反應槽中，可方便的檢測出檢測者食物過敏原的種類及程度，靈敏度高，使用方便、安全。
文檔編號G01N33/68GK202649216SQ20122024656
公開日2013年1月2日 申請日期2012年5月28日 優(yōu)先權日2012年5月28日
發(fā)明者王永昌, 李光星 申請人:上虞常春生物技術有限公司