專利名稱：三黃分散片的質量標準及其檢測方法
技術領域：
本發(fā)明屬于藥品檢測技術領域，涉及中藥制劑的質量標準及檢測方法，尤其涉及一種三黃分散片的質量標準及其檢測方法。
背景技術：
三黃分散片是邯鄲摩羅丹藥業(yè)股份有限公司與承德醫(yī)學院合作開發(fā)的改劑型中藥新藥，以大黃提取物、鹽酸小檗堿和黃芩浸膏為主要成分，加輔料后再依次進行制粒、干燥、混勻、壓片、包衣的步驟所得。三黃分散片具有清熱解毒、瀉火通便、排毒養(yǎng)顏之效，可用于三焦熱盛所致的目赤腫痛、口鼻生瘡、咽喉腫痛、牙齦腫痛、心煩口渴、尿黃便秘以及急性胃腸炎、痢疾，具有藥效高、服用方便的特點，具有廣闊的應用前景。現(xiàn)有技術中尚未建立起三黃分散片的質量標準，不利于對其質量的控制，藥品療效得不得保證。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種三黃分散片的質量標準及其檢測方法，該方法對三黃分散片中的三種主要成分全部進行含量測定，能夠更有效地控制產品的內在質量并保證產品質量的穩(wěn)定，進而確保藥物療效。本發(fā)明所檢測的三黃分散片是邯鄲摩羅丹藥業(yè)股份有限公司與承德醫(yī)學院合作開發(fā)的改劑型中藥新藥，邯鄲摩羅丹藥業(yè)股份有限公司擁有該產品的技術專有權，獨家使用權及技術的改進、提高權。本發(fā)明所檢測的三黃分散片的標準處方為大黃600_1800g，鹽酸小檗堿10_30g，黃岑浸膏42-126g。本發(fā)明所檢測的三黃分散片的制備方法為①取大黃，加乙醇回流提取，提取液濾過，回收乙醇，調pH值至9-11，上混合樹脂柱,5%氫氧化鈉乙醇溶液洗脫，洗脫液回收乙醇，調pH值至2-3，過濾沉淀，烘干，粉碎成細粉，得大黃提取物；②取黃芩，加水煎煮三次，合并煎液，濾過，濾液用鹽酸調節(jié)pH值至1-2，靜置，沉淀，用水洗滌至PH值至5-7，烘干，粉碎成細粉，得黃芩浸膏；③將步驟①獲得的大黃提取物、鹽酸小檗堿、步驟②獲得的黃芩浸膏按照重量份數(shù) 60-180:1-3:4. 2-12. 6 的比例混合；④再與常規(guī)輔料混合均勻，高速攪拌制粒，50°C以下干燥后，按常規(guī)制造片劑的方法依次進行整粒、壓片、包衣的步驟，即得三黃分散片。本發(fā)明所檢測的三黃分散片的規(guī)格為0. 46g/片。為達到本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術方案一種三黃分散片的質量標準及其檢測方法，包括利用高效液相色譜法對大黃總蒽醌、鹽酸小檗堿、黃芩苷進行定性鑒別、土大黃苷的檢查、溶出度的檢查以及利用液相色譜法對大黃總蒽醌、鹽酸小檗堿、黃芩苷進行含量測定。
具體地，所述的三黃分散片的質量標準及其檢測方法如下性狀薄膜衣片，除去包衣后顯棕黃色；味苦。鑒別照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D收錄的高效液相色譜法測定。在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品的大黃總蒽醌中的5個單體(蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚)、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間均應與相應對照品的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間一致。檢查(I) 土大黃苷 采用2010年版中國藥典中三黃片的檢查項收載的土大黃苷檢查方法。取土大黃苷對照品，加甲醇制成土大黃苷濃度為0. 1-0. 5mg/ml的溶液，作為土大黃苷對照品溶液；其他試劑均為分析純。取本品I片，研細，加甲醇20_40ml，功率120-200W及頻率30-50KHZ的條件下超聲處理20-40min，放冷，過濾，濾液作為供試品溶液。照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法(TLC)試驗吸取對照品溶液和供試品溶液各2 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:25-35:1. 5-2. 5:2. 5-3. 5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的熒光斑點。上述土大黃苷檢查方法經過了方法學考察試驗①制備土大黃苷對照品溶液取土大黃苷對照品，加甲醇制成土大黃苷濃度為0. 3mg/ml的溶液，作為土大黃苷對照品溶液。②超聲時間的確定取本品I片，研細，加甲醇30ml，同時加入土大黃苷對照品溶液1ml，超聲提取20min，放冷，過濾，濾液作為土大黃苷陽性樣品供試品溶液(I )；取本品I片，研細，加甲醇30ml，同時加入土大黃苷對照品溶液lml，超聲提取30min,放冷，過濾，濾液作為土大黃苷陽性樣品供試品溶液(II );取本品I片，研細，加甲醇30ml，同時加入土大黃苷對照品溶液1ml，超聲提取40min,放冷，過濾，濾液作為土大黃苷陽性樣品供試品溶液(III)；同時考察土大黃苷陽性樣品供試品溶液(I )、(II)、(III)的土大黃苷斑點顏色，發(fā)現(xiàn)溶液(II)、(III)的斑點顏色比溶液(I )的斑點顏色明顯，而溶液(II)、(III)的斑點顏色無差異，故選擇超聲30min作為提取方法。③制備供試品溶液取本品I片(批號1010004)，研細，加甲醇30ml，功率160w及頻率40KHz的條件下超聲處理30min，放冷，過濾，濾液作為樣品一；取本品I片(批號1010005)，研細，加甲醇30ml，功率160w及頻率40KHz的條件下超聲處理30min，放冷，過濾，濾液作為樣品二 ；取本品I片(批號1010006)，研細，加甲醇30ml，功率160w及頻率40KHz的條件下超聲處理30min，放冷，過濾，濾液作為樣品三；④照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法(TLC)試驗吸取供試品(樣品一、樣品二、樣品三)、土大黃苷陽性樣品供試品溶液(II)、土大黃苷對照品溶液各2 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水(100:30:2:3)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，結果如

圖1所示。⑤從圖1可以看出，供試品(樣品一、樣品二、樣品三)色譜中，在與土大黃苷對照品色譜相應的位置上，均未顯相同顏色的熒光斑點；而土大黃苷陽性樣品供試品溶液(II)在與土大黃苷對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(2)溶出度取本品，照《中國藥典》2010年版二部附錄X C第二法溶出度測定法，以0. 3wt%-0. 5wt%的十二烷基硫酸鈉水溶液800-1000ml為溶出介質，轉速為80-120轉/min，依法操作，經30-60min時，取溶液5ml，濾過，取續(xù)濾液，照含量測定方法中測定黃芩苷的色譜條件，精密上樣，隨行黃芩苷對照品溶液，計算黃芩苷的溶出量，限度為標示量的70%，應符合規(guī)定。 (3)其他應符合《中國藥典》2010年版二部附錄IA片劑項下分散片下有關的各項規(guī)定。含量測定(I)大黃總蒽醌照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0. 1%磷酸溶液70-100:10-15為流動相；檢測波長為254nm。理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于2000。②對照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品分別溶于甲醇，分別制成蘆薈大黃素濃度為70-90i!g/ml的蘆薈大黃素對照品溶液、大黃酸濃度為70-90 ii g/ml的大黃酸對照品溶液、大黃素濃度為70-90 ii g/ml的大黃素對照品溶液、大黃酚濃度為70-90 ii g/ml的大黃酚對照品溶液、大黃素甲醚濃度為35-45 u g/ml的大黃素甲醚對照品溶液。精密量取蘆薈大黃素對照品溶液4ml、大黃酸對照品溶液10ml、大黃素對照品溶液3ml、大黃酚對照品溶液3ml、大黃素甲醚對照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇補足25ml，得混合對照品溶液?；旌蠈φ掌啡芤褐刑J薈大黃素的濃度為11. 2-14. g/ml、大黃酸的濃度為28-36 ii g/ml、大黃素的濃度為
8.4-10. 8 u g/ml、大黃酹的濃度為8. 4-10. 8 u g/ml、大黃素甲醚的濃度為2. 8-3. 6 u g/ml。③供試品溶液的制備取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取80_120mg置于錐形瓶中，精密加95%乙醇40-60ml，密塞，稱定重量，超聲5_20min，放冷，用乙醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每片含大黃總蒽醌以蘆薈大黃素(C15H10O5)、大黃酸(C15H8O6)、大黃素(C15H1Q05)、大黃酚(C15HltlO4)和大黃素甲醚(C16H12O5)的總量計算，不得少于10. 2mg。(2)鹽酸小檗堿照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水0. 8-1. 2:0. 8-1. 2 (每IOOOml中加入磷酸二氫鉀3. 4g和十二烷基硫酸鈉1. 7g)為流動相；檢測波長為265nm。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應不低于3000。②對照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿對照品溶于甲醇，制成鹽酸小檗堿濃度為0. 05-0. 15mg/ml的鹽酸小檗堿對照品溶液，即得。 ③供試品溶液的制備取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取40_60mg置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇40-60ml，密塞，稱定重量，功率120-200W及頻率30_50KHz的條件下超聲處理20-40min,放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測定，即得。三黃分散片每片含鹽酸小檗堿(C2tlH17NO4 HCL 2H20)應為標示量的85%_115%。(3)黃芩苷
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照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸42-52:48-58:0. 15-0. 25為流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于2000。②對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品溶于甲醇，制成黃芩苷濃度為0. 04-0. 10mg/ml的黃芩苷對照品溶液，即得。③供試品溶液的制備取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取40_60mg置于量瓶中，加70%乙醇15-25ml，功率120-200w及頻率30_50KHz的條件下超聲處理10_30min，放冷，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇補足25ml，即得。④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測定，即得。三黃分散片每片含黃芩浸膏以黃芩苷(C21H18O11)計，應在51. 0-69. Omg之間。功能與主治清熱解毒，瀉火通便，排毒養(yǎng)顏。用于三焦熱盛所致的目赤腫痛、口鼻生瘡、咽喉腫痛、牙齦腫痛、心煩口渴、尿黃便秘；亦用于急性胃腸炎，痢疾。用法與用量口服。一次I片，一日2次，小兒酌減。注意孕婦慎用。規(guī)格每片重0.46g(含黃岑苷60mg,鹽酸小檗堿20mg)貯藏密封，置干燥處。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的三黃分散片的質量標準及其檢測方法如下
性狀薄膜衣片，除去包衣后顯棕黃色；味苦。鑒別照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D收錄的高效液相色譜法測定。在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品的大黃總蒽醌中的5個單體(蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚)、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間均應與相應對照品的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間一致。檢查(I) 土大黃苷采用2010年版中國藥典中三黃片的檢查項收載的土大黃苷檢查方法。取土大黃苷對照品，加甲醇制成土大黃苷濃度為0. 2-0. 4mg/ml的溶液，作為土大黃苷對照品溶液；其他試劑均為分析純。取本品I片，研細，加甲醇25-35ml，功率150-180W及頻率35-45KHZ的條件下超聲處理25-35min，放冷，過·濾，濾液作為供試品溶液。照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法(TLC)試驗吸取對照品溶液和供試品溶液各2 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:28-32:1. 8-2. 2:2. 8-3. 2為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的熒光斑點。(2)溶出度取本品，照《中國藥典》2010年版二部附錄X C第二法溶出度測定法，以0. 35wt%-0. 45wt%的十二烷基硫酸鈉水溶液850-950ml為溶出介質，轉速為90-110轉/min,依法操作，經40-50min時，取溶液5ml，濾過，取續(xù)濾液，照含量測定方法中測定黃芩苷的色譜條件，精密上樣，隨行黃芩苷對照品溶液，計算黃芩苷的溶出量，限度為標示量的70%，應符合規(guī)定。(3)其他應符合《中國藥典》2010年版二部附錄IA片劑項下分散片下有關的各項規(guī)定含量測定(I)大黃總蒽醌照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0. 1%磷酸溶液80-90:12-18為流動相；檢測波長為254nm。理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于2000。②對照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品分別溶于甲醇，分別制成蘆薈大黃素濃度為75-85 y g/ml的蘆薈大黃素對照品溶液、大黃酸濃度為75-85ii g/ml的大黃酸對照品溶液、大黃素濃度為75-85 ii g/ml的大黃素對照品溶液、大黃酚濃度為75-85 ii g/ml的大黃酚對照品溶液、大黃素甲醚濃度為38-42 u g/ml的大黃素甲醚對照品溶液。精密量取蘆薈大黃素對照品溶液4ml、大黃酸對照品溶液IOml、大黃素對照品溶液3ml、大黃酚對照品溶液3ml、大黃素甲醚對照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇補足25ml，得混合對照品溶液?；旌蠈φ掌啡芤褐刑J薈大黃素的濃度為12-13. 6 ii g/ml、大黃酸的濃度為30-34 ii g/ml、大黃素的濃度為9-10. 2 y g/ml、大黃酹的濃度為9-10. 2 V- g/ml、大黃素甲醚的濃度為3. 04-3. 36 u g/ml。③供試品溶液的制備取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取90_110mg置于錐形瓶中，精密加95%乙醇45-55ml，密塞，稱定重量，超聲8_15min，放冷，用乙醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每片含大黃總蒽醌以蘆薈大黃素(C15H1(i05)、大黃酸(C15H806)、大黃素(C15H1Q05)、大黃酚(C15HltlO4)和大黃素甲醚(C16H12O5)的總量計算，不得少于10. 2mg。(2)鹽酸小檗堿照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水0.9-1. 1:0. 9-1.1 (每IOOOml中加入磷酸二氫鉀3. 4g和十二烷基硫酸鈉1. 7g)為流動相；檢測波長為265nm。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應不低于3000。②對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對照品溶于甲醇，制成鹽酸小檗堿濃度為0. 06-0. 10mg/ml的鹽酸小檗堿對照品溶液，即得。③供試品溶液的制備取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取45_55mg置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇45-55ml，密塞，稱定重量，功率150-180W及頻率35-45KHZ的條件下超聲處理25-35min,放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。三黃分散片每片含鹽酸小檗堿(C2tlH17NO4 HCL 2H20)應為標示量的85%_115%。(3)黃芩苷照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸45-50:50-55:0. 18-0. 22為流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于2000。②對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品溶于甲醇，制成黃芩苷濃度為0. 05-0. 08mg/ml的黃芩苷對照品溶液，即得。③供試品溶液的制備取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取45_55mg置于量瓶中，加70%乙醇18-22ml，功率150-180w及頻率35_45KHz的條件下超聲處理15_25min，放冷，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇補足25ml，即得。④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測定，即得。三黃分散片每片含黃芩浸膏以黃芩苷(C21H18O11)計，應在51. 0-69. Omg之間。功能與主治清熱解毒，瀉火通便，排毒養(yǎng)顏。用于三焦熱盛所致的目赤腫痛、口鼻生瘡、咽喉腫痛、牙齦腫痛、心煩口渴、尿黃便秘；亦用于急性胃腸炎，痢疾。用法與用量口服。一次I片，一日2次，小兒酌減。注意孕婦慎用。規(guī)格每片重0.46g(含黃岑苷60mg,鹽酸小檗堿20mg)貯藏密封，置干燥處。最優(yōu)選地，本發(fā)明所述的三黃分散片的質量標準及其檢測方法如下性狀薄膜衣片，除去包衣后顯棕黃色；味苦。鑒別
照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D收錄的高效液相色譜法測定。在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品的大黃總蒽醌中的5個單體(蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚)、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間均應與相應對照品的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間一致。檢查(I) 土大黃苷采用2010年版中國藥典中三黃片的檢查項收載的土大黃苷檢查方法。取土大黃苷對照品，加甲醇制成土大黃苷濃度為0. 3mg/ml的溶液,作為土大黃苷對照品溶液；其他試劑均為分析純。取本品I片，研細，加甲醇30ml，功率160w及頻率40KHz的條件下超聲處理30min，放冷，過濾，濾液作為供試品溶液。照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法(TLC)試驗吸取對照品溶液和供試品溶液各2 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:30:2:3為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的熒光斑點。(2)溶出度取本品，照《中國藥典》2010年版二部附錄X C第二法溶出度測定法，以0. 4%的十二烷基硫酸鈉水溶液900ml為溶出介質，轉速為100轉/min，依法操作，經45min時，取溶液5ml，濾過，取續(xù)濾液，照含量測定方法中測定黃芩苷的色譜條件，精密上樣，隨行黃芩苷對照品溶液，計算黃芩苷的溶出量，限度為標示量的70%，應符合規(guī)定。(3)其他應符合《中國藥典》2010年版二部附錄IA片劑項下分散片下有關的各項規(guī)定。含量測定(I)大黃總蒽醌
照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定； ①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0. 1%磷酸溶液85:15為流動相；檢測波長為254nm ;理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于2000 ；②對照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品分別溶于甲醇，分別制成蘆薈大黃素濃度為80y g/ml的蘆薈大黃素對照品溶液、大黃酸濃度為80 ii g/ml的大黃酸對照品溶液、大黃素濃度為80 ii g/ml的大黃素對照品溶液、大黃酚濃度為80 ii g/ml的大黃酚對照品溶液、大黃素甲醚濃度為40 ii g/ml的大黃素甲醚對照品溶液；精密量取蘆薈大黃素對照品溶液4ml、大黃酸對照品溶液10ml、大黃素對照品溶液3ml、大黃酚對照品溶液3ml、大黃素甲醚對照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇補足25ml，得混合對照品溶液；混合對照品溶液中蘆薈大黃素的濃度為12. 8 ii g/ml、大黃酸的濃度為32. Oii g/ml、大黃素的濃度為9. 6 y g/ml、大黃酚的濃度為
9.6 ii g/ml、大黃素甲醚的濃度為3. 2 ii g/ml ；③供試品溶液的制備取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取IOOmg置于錐形瓶中，精密加95%乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲lOmin，放冷，用乙醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得；④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測定，即得；三黃分散片每片含大黃總蒽醌以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的總量計算，不得少于10. 2mg。(2)鹽酸小檗堿照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水1:1 (每IOOOml中加入磷酸二氫鉀
3.4g和十二烷基硫酸鈉1. 7g)為流動相；檢測波長為265nm ;理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應不低于3000 ；②對照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿對照品溶于甲醇，制成鹽酸小檗堿濃度為0. 08mg/ml的鹽酸小檗堿對照品溶液，即得；③供試品溶液的制備取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取50mg置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率160w及頻率40KHz的條件下超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測定，即得；三黃分散片每片含鹽酸小檗堿應為標示量的85%_115% ；(3)黃芩苷
照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸47:53:0. 2為流動相；檢測波長為280nm ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于2000 ；②對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品溶于甲醇，制成黃芩苷濃度為0. 06mg/ml的黃芩苷對照品溶液，即得；③供試品溶液的制備取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取50mg置于量瓶中，加70%乙醇20ml，功率160w及頻率40KHz的條件下超聲處理20min，放冷，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇補足25ml，即得；④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得；三黃分散片每片含黃岑浸膏以黃岑苷計，應在51. 0-69. Omg之間。功能與主治清熱解毒，瀉火通便，排毒養(yǎng)顏。用于三焦熱盛所致的目赤腫痛、口鼻生瘡、咽喉腫痛、牙齦腫痛、心煩口渴、尿黃便秘；亦用于急性胃腸炎，痢疾。用法與用量口服。一次I片，一日2次，小兒酌減。注意孕婦慎用。規(guī)格每片重0.46g(含`黃岑苷60mg,鹽酸小檗堿20mg)貯藏密封，置干燥處。本發(fā)明所述三黃分散片中大黃總蒽醌的含量測定方法經過了系列方法學考察試驗(I)儀器、藥品與試劑儀器島津LC-10ATVP型高效液相色譜儀，島津AEG-45SM分析天平。對照品均購自中國藥品生物制品檢定所。試劑色譜甲醇(西隴化工股份有限公司生產)，磷酸(分析純，西隴化工股份有限公司生產)，水為重蒸水。(2)高效液相色譜條件參照2010年版中國藥典一部大黃原料的色譜條件，其它成份和輔料對大黃總蒽醌無干擾。色譜柱DiamonsilC18 反相柱(250mmX4. 6mm, 5 u m);檢測波長254nm;柱溫室溫；流動相甲醇-0. 1%磷酸溶液(85:15)。本發(fā)明中選擇甲醇-0. 1%磷酸溶液(85:15)代替腐蝕性較強的高氯酸來作為流動相，避免了腐蝕，優(yōu)化了高效液相色譜條件。(3)對照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素對照品(110795-201007) 8. OOmg,大黃酸對照品(110757-200206) 8. OOmg,大黃素對照品(110756-200110) 8. OOmg,大黃酚對照品(110796-201118)8. OOmg、大黃素甲醚對照品(110758-201013)4. OOmg，分別溶于甲醇，分別制成蘆薈大黃素濃度為80μ g/ml的蘆薈大黃素對照品溶液、大黃酸濃度為80μ g/ml的大黃酸對照品溶液、大黃素濃度為80 μ g/ml的大黃素對照品溶液、大黃酚濃度為80 μ g/ml的大黃酚對照品溶液、大黃素甲醚濃度為40 μ g/ml的大黃素甲醚對照品溶液。五種對照品溶液各取5μ I進樣，記錄各自保留時間，五種對照品出峰的先后順序依次是蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚。精密量取蘆薈大黃素對照品溶液4ml、大黃酸對照品溶液IOml、大黃素對照品溶液3ml、大黃酚對照品溶液3ml、大黃素甲醚對照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇至25ml，得混合對照品溶液?；旌蠈φ掌啡芤褐刑J薈大黃素的濃度為11. 4 μ g/ml、大黃酸的濃度為32. 83 μ g/ml、大黃素的濃度為10. 08 μ g/ml、大黃酚的濃度為9. 84 μ g/ml、大黃素甲醚的濃度為3. 30 μ g/ml。為了便于鑒別和減少含量測定誤差，本發(fā)明選擇了與大黃提取物和三黃分散片中五種大黃蒽醌(蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚)的濃度比例近似的濃度作為五種對照品母液(蘆薈大黃素對照品溶液、大黃酸對照品溶液、大黃素對照品溶液、大黃酚對照品溶液、大黃素甲醚對照品溶液)的濃度；并且參照《中國藥典》大黃藥材含量測定項下對照品的制備方法配制了五種對照品母液，為了操作簡便和節(jié)約，再將五種對照品母液依照比例混合。(4)供試品溶液的制備

因三黃片中大黃提取物用聚丙烯酸樹脂制粒，聚丙烯酸樹脂易溶于甲醇、乙醇，參照大黃提取物中總蒽醌測定方法中供試品溶液的制備，通過對提取方法和用量的選擇，最后確定供試品溶液的制備方法為取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取IOOmg置于錐形瓶中，精密加95%乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲lOmin，放冷，用乙醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。(5)精密度試驗精密量取(3)的混合對照品溶液10μ 1，注入液相色譜儀，按照(2)的色譜條件進行測定分析；重復測定6次，記錄峰面積值，根據測定結果計算精密度，結果如表I所示表I精密度試驗結果
權利要求
1.一種三黃分散片的質量標準及其檢測方法，其特征在于，包括利用高效液相色譜法對大黃總蒽醌、鹽酸小檗堿、黃芩苷進行定性鑒別、土大黃苷的檢查、溶出度的檢查以及利用液相色譜法對大黃總蒽醌、鹽酸小檗堿、黃芩苷進行含量測定。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用高效液相色譜法對大黃總蒽醌、鹽酸小檗堿、黃芩苷進行定性鑒別包括如下步驟照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D收錄的高效液相色譜法，在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間均應與相應對照品的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間一致。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟 性狀
薄膜衣片，除去包衣后顯棕黃色；味苦； 鑒別
照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D收錄的高效液相色譜法測定； 在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間均應與相應對照品的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間一致； 檢查
(1)土大黃苷 采用2010年版中國藥典中三黃片的檢查項收載的土大黃苷檢查方法； 取土大黃苷對照品,加甲醇制成土大黃苷濃度為0. 1-0. 5mg/ml的溶液,作為土大黃苷對照品溶液；其他試劑均為分析純； 取本品I片，研細，加甲醇20-40ml，功率120-200W及頻率30-50KHZ的條件下超聲處理20-40min,放冷,過濾,濾液作為供試品溶液； 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗吸取對照品溶液和供試品溶液各2iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:25-35:1. 5-2. 5:2. 5-3. 5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視;供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的熒光斑點； (2)溶出度 取本品，照《中國藥典》2010年版二部附錄X C第二法溶出度測定法，以0. 3wt%-0. 5wt%的十二烷基硫酸鈉水溶液800-1000ml為溶出介質，轉速為80-120轉/min，依法操作，經30-60min時，取溶液5ml，濾過，取續(xù)濾液，照含量測定方法中測定黃芩苷的色譜條件，精密上樣，隨行黃芩苷對照品溶液，計算黃芩苷的溶出量，限度為標示量的70%，應符合規(guī)定； (3)其他 應符合《中國藥典》2010年版二部附錄I A片劑項下分散片下有關的各項規(guī)定； 含量測定
(I)大黃總蒽醌 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定； ①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0. 1%磷酸溶液70-100:10-15為流動相；檢測波長為254nm ;理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于2000 ； ②對照品溶液的制備 精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品分別溶于甲醇，分別制成蘆薈大黃素濃度為70-90i!g/ml的蘆薈大黃素對照品溶液、大黃酸濃度為70-90 ii g/ml的大黃酸對照品溶液、大黃素濃度為70-90 ii g/ml的大黃素對照品溶液、大黃酚濃度為70-90 ii g/ml的大黃酚對照品溶液、大黃素甲醚濃度為35-45 u g/ml的大黃素甲醚對照品溶液；精密量取蘆薈大黃素對照品溶液4ml、大黃酸對照品溶液10ml、大黃素對照品溶液3ml、大黃酚對照品溶液3ml、大黃素甲醚對照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇補足25ml，得混合對照品溶液；混合對照品溶液中蘆薈大黃素的濃度為11. 2-14. g/ml、大黃酸的濃度為28-36 ii g/ml、大黃素的濃度為.8.4-10. 8 u g/ml、大黃酹的濃度為8. 4-10. 8 u g/ml、大黃素甲醚的濃度為2. 8-3. 6 u g/ml ； ③供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取80-120mg置于錐形瓶中，精密加95%乙醇40-60ml，密塞，稱定重量，超聲5-20min，放冷，用乙醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得； ④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各lOyl，注入液相色譜儀，測定，即得； 本品每片含大黃總蒽醌以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的總量計算，不得少于10. 2mg ； (2)鹽酸小檗堿 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定； ①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；每IOOOml中加入磷酸二氫鉀3. 4g和十二烷基硫酸鈉1.1g的乙腈-水0. 8-1. 2:0. 8-1. 2為流動相；檢測波長為265nm ;理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應不低于3000 ； ②對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品溶于甲醇，制成鹽酸小檗堿濃度為0. 05-0. 15mg/ml的鹽酸小檗堿對照品溶液，即得； ③供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取40-60mg置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇40-60ml，密塞，稱定重量，功率120-200W及頻率30_50KHz的條件下超聲處理20-40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； ④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10yl，注入液相色譜儀，測定，即得； 三黃分散片每片含鹽酸小檗堿應為標示量的 85%-115% ； (3)黃芩苷 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。
①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸42-52:48-58:0. 15-0. 25為流動相；檢測波長為280nm ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于2000 ； ②對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品溶于甲醇，制成黃芩苷濃度為0. 04-0. 10mg/ml的黃芩苷對照品溶液，即得； ③供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取40-60mg置于量瓶中，加70%乙醇15-25ml，功率120-200w及頻率30-50KHz的條件下超聲處理10_30min，放冷，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇補足25ml，即得； ④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10yl，注入液相色譜儀，測定，即得； 三黃分散片每片含黃芩浸膏以黃芩苷計，應在51. 0-69. Omg之間。
4.根據權利要求1-3所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟 性狀
薄膜衣片，除去包衣后顯棕黃色；味苦； 鑒別
照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D收錄的高效液相色譜法測定； 在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間均應與相應對照品的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間一致； 檢查
(1)土大黃苷 采用2010年版中國藥典中三黃片的檢查項收載的土大黃苷檢查方法； 取土大黃苷對照品,加甲醇制成土大黃苷濃度為0. 2-0. 4mg/ml的溶液,作為土大黃苷對照品溶液；其他試劑均為分析純； 取本品I片，研細，加甲醇25-35ml，功率150-180W及頻率35-45KHZ的條件下超聲處理25-35min,放冷，過濾，濾液作為供試品溶液； 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗吸取對照品溶液和供試品溶液各2iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水100:28-32:1. 8-2. 2:2. 8-3. 2為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視;供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的熒光斑點； (2)溶出度 取本品，照《中國藥典》2010年版二部附錄X C第二法溶出度測定法，以0. 35wt%-0. 45wt%的十二烷基硫酸鈉水溶液850-950ml為溶出介質，轉速為90-110轉/min,依法操作，經40-50min時，取溶液5ml，濾過，取續(xù)濾液，照含量測定方法中測定黃芩苷的色譜條件，精密上樣，隨行黃芩苷對照品溶液，計算黃芩苷的溶出量，限度為標示量的70%，應符合規(guī)定； (3)其他 應符合《中國藥典》2010年版二部附錄IA片劑項下分散片下有關的各項規(guī)定；含量測定: (1)大黃總蒽醌 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定； ①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0. 1%磷酸溶液80-90:12-18為流動相；檢測波長為254nm ;理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于2000 ； ②對照品溶液的制備 精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品分別溶于甲醇，分別制成蘆薈大黃素濃度為75-85i!g/ml的蘆薈大黃素對照品溶液、大黃酸濃度為75-85ii g/ml的大黃酸對照品溶液、大黃素濃度為75-85ii g/ml的大黃素對照品溶液、大黃酚濃度為75-85 ii g/ml的大黃酚對照品溶液、大黃素甲醚濃度為38-42 u g/ml的大黃素甲醚對照品溶液；精密量取蘆薈大黃素對照品溶液4ml、大黃酸對照品溶液IOml、大黃素對照品溶液3ml、大黃酚對照品溶液3ml、大黃素甲醚對照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇補足25ml，得混合對照品溶液；混合對照品溶液中蘆薈大黃素的濃度為12-13. 6 ii g/ml、大黃酸的濃度為30-34 ii g/ml、大黃素的濃度為9-10. 2 y g/ml、大黃酹的濃度為9-10. 2 V- g/ml、大黃素甲醚的濃度為3. 04-3. 36 u g/ml ； ③供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取90-1 IOmg置于錐形瓶中，精密加95%乙醇45-55ml，密塞，稱定重量，超聲8-15min，放冷，用乙醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得； ④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10yl，注入液相色譜儀，測定，即得； 本品每片含大黃總蒽醌以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的總量計算，不得少于10. 2mg ； (2)鹽酸小檗堿 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定； ①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；每IOOOml中加入磷酸二氫鉀3. 4g和十二烷基硫酸鈉1. 7g的乙腈-水0. 9-1. 1:0. 9-1.1為流動相；檢測波長為265nm ;理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應不低于3000 ； ②對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品溶于甲醇，制成鹽酸小檗堿濃度為0. 06-0. 10mg/ml的鹽酸小檗堿對照品溶液，即得； ③供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取45-55mg置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇45-55ml，密塞，稱定重量，功率150-180W及頻率35_45KHz的條件下超聲處理·25-35min,放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； ④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10yl，注入液相色譜儀，測定，即得；三黃分散片每片含鹽酸小檗堿應為標示量的85%-115% ； (3)黃芩苷 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定； ①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸45-50:50-55:0. 18-0. 22為流動相；檢測波長為280nm ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于2000 ； ②對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品溶于甲醇，制成黃芩苷濃度為0. 05-0. 08mg/ml的黃芩苷對照品溶液，即得； ③供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取45-55mg置于量瓶中，加70%乙醇18-22ml，功率150-180w及頻率35-45KHz的條件下超聲處理15_25min，放冷，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇補足25ml，即得； ④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各lOyl，注入液相色譜儀，測定，即得； 三黃分散片每片含黃芩浸膏以黃芩苷計，應在51. 0-69. Omg之間。
5.根據權利要求1-4所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟 性狀
薄膜衣片，除去包衣后顯棕黃色；味苦； 鑒別
照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D收錄的高效液相色譜法測定； 在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間均應與相應對照品的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、鹽酸小檗堿、黃芩苷的主峰的保留時間一致； 檢查
(1)土大黃苷 采用2010年版中國藥典中三黃片的檢查項收載的土大黃苷檢查方法； 取土大黃苷對照品,加甲醇制成土大黃苷濃度為0. 3mg/ml的溶液,作為土大黃苷對照品溶液；其他試劑均為分析純； 取本品I片，研細，加甲醇30ml，功率160w及頻率40KHz的條件下超聲處理30min，放冷，過濾，濾液作為供試品溶液； 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗吸取對照品溶液和供試品溶液各2 ii I,分別點于同一娃膠G薄層板上，以三氯甲燒-甲醇-甲酸-水100:30:2:3為展開齊U，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的熒光斑點； (2)溶出度 取本品，照《中國藥典》2010年版二部附錄X C第二法溶出度測定法，以0. 4%的十二烷基硫酸鈉水溶液900ml為溶出介質，轉速為100轉/min，依法操作，經45min時，取溶液5ml，濾過，取續(xù)濾液，照含量測定方法中測定黃芩苷的色譜條件，精密上樣，隨行黃芩苷對照品溶液，計算黃芩苷的溶出量，限度為標示量的70%，應符合規(guī)定； (3)其他 應符合《中國藥典》2010年版二部附錄IA片劑項下分散片下有關的各項規(guī)定； 含量測定
(1)大黃總蒽醌 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定； ①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0. 1%磷酸溶液85:15為流動相；檢測波長為254nm ;理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于2000 ； ②對照品溶液的制備 精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品分別溶于甲醇，分別制成蘆薈大黃素濃度為80μg/ml的蘆薈大黃素對照品溶液、大黃酸濃度為80 μg/ml的大黃酸對照品溶液、大黃素濃度為80 μ g/ml的大黃素對照品溶液、大黃酚濃度為80 μ g/ml的大黃酚對照品溶液、大黃素甲醚濃度為40 μ g/ml的大黃素甲醚對照品溶液；精密量取蘆薈大黃素對照品溶液4ml、大黃酸對照品溶液10ml、大黃素對照品溶液3ml、大黃酚對照品溶液3ml、大黃素甲醚對照品溶液2ml共同加入到25ml容量瓶中，加甲醇補足25ml，得混合對照品溶液；混合對照品溶液中蘆薈大黃素的濃度為.12. 8 μ g/ml、大黃酸的濃度為32. 0μ g/ml、大黃素的濃度為9. 6 μ g/ml、大黃酚的濃度為.9.6 μ g/ml、大黃素甲醚的濃度為3. 2 μ g/ml ； ③供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取IOOmg置于錐形瓶中，精密加95%乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲10min，放冷，用乙醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得； ④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各l0μl，注入液相色譜儀，測定，即得； 三黃分散片每片含大黃總蒽醌以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的總量計算，不得少于10. 2mg； (2)鹽酸小檗堿 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定； ①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；每1000ml中加入磷酸二氫鉀3. 4g和十二烷基硫酸鈉1. 7g的乙腈-水1:1為流動相；檢測波長為265nm ;理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應不低于3000 ； ②對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品溶于甲醇，制成鹽酸小檗堿濃度為0. 08mg/ml的鹽酸小檗堿對照品溶液，即得； ③供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取50mg置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率160w及頻率40KHz的條件下超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測定，即得； 三黃分散片每片含鹽酸小檗堿應為標示量的85%-115% ； (3)黃芩苷 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定； ①色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸47:53:0. 2為流動相；檢測波長為280nm ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于2000 ； ②對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品溶于甲醇，制成黃芩苷濃度為0. 06mg/ml的黃芩苷對照品溶液，即得； ③供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細，過四號篩，精密稱取50mg置于量瓶中，加70%乙醇20ml，功率160w及頻`率40KHz的條件下超聲處理20min，放冷，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml置25ml量瓶中，加70%乙醇補足25ml，即得； ④分別精密吸取步驟②的對照品溶液與步驟③的供試品溶液各lOyl，注入液相色譜儀，測定，即得； 三黃分散片每片含黃芩浸膏以黃芩苷計，應在51. 0-69. Omg之間。
全文摘要
本發(fā)明提供一種三黃分散片的質量標準及其檢測方法，其包括定性鑒別以及三種主要成分大黃總蒽醌、鹽酸小檗堿、黃芩苷的含量測定。本發(fā)明操作簡便、分離效果好、精密度好、穩(wěn)定性高、重復性好、專屬性強，可有效地控制三黃分散片的內在質量及產品的穩(wěn)定性，確保了藥物療效。
文檔編號G01N30/90GK103063767SQ201210563560
公開日2013年4月24日 申請日期2012年12月21日 優(yōu)先權日2012年12月21日
發(fā)明者陳致慜, 李春雷, 霍志金, 苗靈音, 劉喜綱 申請人:邯鄲摩羅丹藥業(yè)股份有限公司