齊帕特羅的免疫膠體金檢測卡及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明齊帕特羅的免疫膠體金檢測卡及其制備方法，涉及β-腎上腺素受體激動(dòng)劑檢測【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明的檢測卡外殼中的試紙條，由PVC膠板、樣品墊、膠體金結(jié)合墊、包被膜和吸水墊組成；膠體金膜為含齊帕特羅單克隆抗體的玻璃纖維素膜，包被膜是硝酸纖維素膜，其上設(shè)有T線和C線，T線包被有齊帕特羅蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，C線包被有羊抗鼠IgG抗體。本發(fā)明有效用于快速檢測齊帕特羅，方便、快捷、結(jié)果準(zhǔn)確。
【專利說明】齊帕特羅的免疫膠體金檢測卡及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及0 -腎上腺素受體激動(dòng)劑檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及齊帕特羅的免疫膠體金檢測卡及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]-腎上腺素能激動(dòng)劑是一類常見的生長促進(jìn)劑，此類物質(zhì)被用于動(dòng)物養(yǎng)殖中時(shí)，可以增加飼料轉(zhuǎn)化率，提高組織中肌肉和脂肪的比例。P2 -腎上腺素能激動(dòng)劑屬于兒茶酚胺類化合物，根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為苯胺類、間苯二酚類及苯酚類。齊帕特羅(Zilpateix)I)是一種新型P2-腎上腺素能激動(dòng)劑，其化學(xué)結(jié)構(gòu)(見式I)與常見的苯胺類-腎上腺素類激動(dòng)劑(克侖特羅和沙丁胺醇)和苯酚類P-腎上腺素類激動(dòng)劑(萊克多巴胺)是完全不同的，它的作用效果相當(dāng)于克侖特羅的十分之一，但比萊克多巴胺更有效。在墨西哥和南非齊帕特羅被允許作為宰殺期牛的飼料添加劑使用，但是在歐盟被明令禁止使用。
【權(quán)利要求】
1.齊帕特羅膠體金檢測卡，其特征在于按照下述步驟制備得到: (1)膠體金溶液制備:取IL三角燒瓶I個(gè),加入超純水495 mL，而后加入1%氯金酸HAuCl4 *3H20) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加熱煮沸后在持續(xù)攪拌的情況下加入1%檸檬酸三鈉Na3C6H5O7 ? 2H20溶液5_7 mL,繼續(xù)攪拌加熱，當(dāng)溶液的顏色完全變?yōu)橥该鞯淖霞t色時(shí)，維持5 min后停止加熱，補(bǔ)水至原體積，冷卻至室溫，2-8°C保存?zhèn)溆茫? (2)抗體的預(yù)處理:將要標(biāo)記的齊帕特羅抗體在1000r/min, 4°C條件下，離心20min,取上清，用 0.01 mol/L PBS 稀釋成 I mg/mL ;或者用 0.01 mol/L PBS 稀釋成 I mg/ml,過0.22 Mm濾膜； (3)膠體金標(biāo)記物的制備:取步驟(1)中的膠體金溶液40mL，用0.25 mol/L K2CO3調(diào)節(jié)膠體金溶液pH至8.5,電磁攪拌器250 r/min攪拌,逐滴加入4 mL含0.3 mg抗體蛋白的蛋白溶液，反應(yīng)10 min;逐滴加入4 mL 10% BSA,繼續(xù)攪拌反應(yīng)10 min ;金標(biāo)抗體溶液常溫1500 r/min離心10 min,棄去由凝聚的金顆粒形成的沉淀；紅色上清溶液4°C, 12000 r/min離心20 min,棄上清,收集沉淀,將沉淀用金標(biāo)抗體稀釋液定容至I mL,制備成齊帕特羅單克隆抗體膠體金標(biāo)記物； (4)膠體金膜的制備:將步驟(3)齊帕特羅單克隆抗體膠體金標(biāo)記物用劃膜儀以5ML/cm的濃度均勻噴在載體玻璃纖維素膜上，室溫自然晾干或者37°C烘干3 h，制成含齊帕特羅單克隆抗體膠體金標(biāo)記物的膠體金膜； (5)包被膜制備:將羊抗鼠IgG抗體、齊帕特羅蛋白質(zhì)偶聯(lián)物稀釋成Img/mL，用劃膜儀依次以I ML/cm的濃度噴涂在硝酸纖維素膜上，制備成包被膜，37°C包被2 h后，室溫自然晾干或者37°C烘干； (6)樣品墊前處理:將樣品墊處理液均勻涂布在玻璃纖維素膜上，在空氣濕度低于60%的條件下，室溫自然晾干； (7)檢測卡的組裝:PVC膠板自上而下依次粘貼樣品墊、膠體金膜、包被膜和吸水墊，組裝成試紙條，切割成一定寬度的長條，再將試紙條安裝在長條扁平殼狀的檢測卡外殼中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齊帕特羅膠體金檢測卡，其特征在于所述步驟(5)中所包被的檢測線T設(shè)在質(zhì)控線C的下方； 所述步驟(6)中的樣品墊處理液是由I g小牛血清蛋白(BSA)和0.8 g氯化鈉(NaCl),用含有 0.5%TRIT0N-100 的 0.01 mol/L PBS 定容至 100 mL。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK103808930SQ201210438039
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2012年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月6日
【發(fā)明者】杜道林, 洪霞 申請人:江蘇維賽科技生物發(fā)展有限公司