專利名稱：一種使用吡嘧磺隆分子印跡聚合物分析磺酰脲類除草劑的方法與用途的制作方法
一種使用吡嘧磺隆分子印跡聚合物分析磺酰脲類除草劑的方法與用途
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分析檢測技術(shù)。更具體地，本發(fā)明涉及一種使用吡嘧磺隆分子印跡聚合物分析磺酰脲類除草劑的方法，還涉及所述方法在食品、農(nóng)業(yè)等技術(shù)領(lǐng)域中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
磺酰脲類除草劑是目前世界上使用量最大的一類除草劑，目前在我國廣泛應(yīng)用的磺酰脲類除草劑有氯磺隆、甲磺隆、芐嘧磺隆、胺苯磺隆、吡嘧磺隆、醚磺隆等。除草劑的應(yīng)用最大程度地節(jié)省了勞動力，提高了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)效率，也提高了農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化的程度，還大大降低了人工除草的強(qiáng)度及成本。隨著該類除草劑在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的廣泛使用，其殘留問題以及對后茬作物產(chǎn)生的危害已經(jīng)引起人們關(guān)注。由于在環(huán)境和生物樣品中存在痕量磺酰脲類除草劑，且其化學(xué)和熱不穩(wěn)定性差，在酸性條件下易水解，以及在各國貿(mào)易往來中對最大殘留·限量值采用日益嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)，使其殘留分析成為一項(xiàng)極具挑戰(zhàn)性的工作。另外，由于發(fā)達(dá)國家設(shè)置進(jìn)口貿(mào)易技術(shù)壁壘措施，美國、歐盟、日本等國已制定了多種磺酰脲類除草劑在食品、飼料中的最高殘留限量(Maximum residue limits MRLs) 美國規(guī)定自2007年2月起，稻米產(chǎn)品中的磺酰脲類除草劑殘留限量為O. 05mg/kg。日本規(guī)定青花菜的氟啶嘧磺隆、啶嘧磺隆、四唑嘧磺隆、芐嘧磺隆的MRL均為O. 02mg/kg。歐盟規(guī)定荔枝中甲酰胺磺隆和啶嘧磺隆為0.01mg/kg。而我國在2005年的國標(biāo)(GB 2763-2005)中僅制定了吡嘧磺隆的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，卻沒有制定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法。我國2007年10月16日才實(shí)施“進(jìn)出口糧谷中咪唑磺隆殘留量檢測方法液相色譜法”行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。目前文獻(xiàn)報(bào)道對吡嘧磺隆類的磺酰脲除草劑的檢測以HPLC、LC-MS或CE等儀器檢測為主，其前處理需要經(jīng)過液-液多次分配或固相萃取柱富集、凈化，而目前使用較多的C18固相萃取填料缺乏特異性，會引入許多雜質(zhì)，干擾檢測結(jié)果，無法準(zhǔn)確定量。由于環(huán)境污染和食品安全日益受到人們的重視，國內(nèi)外除草劑的分子印跡研究已經(jīng)成為熱點(diǎn)課題，目前有較多文獻(xiàn)均報(bào)道了應(yīng)用固相萃取技術(shù)測定磺酰脲類除草劑的殘留量的文章。葉貴標(biāo)等人在題為“高效液相色譜/質(zhì)譜法測定土壤中10種磺酰脲類除草劑多殘留”，《分析化學(xué)學(xué)報(bào)》，34 (9)，P1207-1212 (2006)中研究了高效液相色譜-質(zhì)譜同時檢測土壤中10種磺酰脲類除草劑殘留量的方法,并比較了 CleanertC、CleannertHXN和0asisHLB3種SPE商品柱的凈化效果。趙永剛等人在題為“固相萃取/高效液相色譜法測定地表水中磺酰脲類農(nóng)藥的研究”，《分析科學(xué)學(xué)報(bào)》，24 (3)，P287-300 (2008)中對BondElutC18、SupelcoC18、OasisHLB SPE固相萃取小柱對水中磺酰脲類農(nóng)藥的保留效果進(jìn)行了比較，Bond ElutC18和OasisHLB SPE的保留效果較好。李軍等人在題為“糧谷中四唑嘧磺隆、啶嘧磺隆和氯吡嘧磺隆殘留的高效液相色譜檢驗(yàn)方法”，《檢驗(yàn)檢疫科學(xué)》，15 (I),P24-26 (2005)中對其三種磺酰脲類除草劑殘留量檢測進(jìn)行了研究，并考察了 Bond ElutSAX柱、PRS柱、NH柱和SCX柱等離子交換柱對樣品的凈化效果。針對傳統(tǒng)固相萃取柱(C18、硅膠柱或硅酸鎂柱)在磺酰脲類除草劑檢測中存在的一些技術(shù)缺陷，本發(fā)明人研究出采用吡嘧磺隆分子印跡固相萃取柱分析磺酰脲類除草劑的方法。

發(fā)明內(nèi)容[要解決的技術(shù)問題]本發(fā)明的目的是提供一種使用吡嘧磺隆分子印跡聚合物分析磺酰脲類除草劑的方法。本發(fā)明的另一個目的是提供所述分析方法的用途。[技術(shù)方案] 本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明涉及一種使用吡嘧磺隆分子印跡聚合物分析磺酰脲類除草劑的方法。該分析磺酰脲類除草劑的方法包括下述步驟A、MISPE 柱的準(zhǔn)備稱取15(T250mg吡嘧磺隆分子印跡聚合物，裝填到Γ8πι1固相萃取空柱中，得到吡嘧磺隆分子印跡固相萃取柱MISPE ;所述的MISPE柱在使用前使用2 10ml 二氯甲烷、乙腈或它們的混合物進(jìn)行活化處理。分子印跡技術(shù)(Molecular imprinting technology,MIT)是一種新興的分子識別技術(shù)，是指模擬自然界所存在的分子識別作用機(jī)理如酶與底物、抗體與抗原等特異性識別相互作用，以目標(biāo)分子為模板合成具有特殊分子識別功能的高分子聚合物的一種技術(shù)。分子印跡技術(shù)MIT是在溶液中將模板分子與功能單體、交聯(lián)劑進(jìn)行聚合得到高分子聚合物，再通過物理或化學(xué)的方法除去聚合物中的模板分子，得到在空間和結(jié)合位點(diǎn)上與模板分子完全匹配的聚合物。分子印跡聚合物能夠特異性識別模板分子，具有類似抗體的特異性、高選擇性、高穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，與天然抗體相比制備簡單、且耐強(qiáng)酸、堿及高溫。分子印跡固相萃取(Molecular imprinting solid phase extractMISPE)技術(shù)是分子印跡技術(shù)應(yīng)用最為成熟的方向之一，MISPE由于對目標(biāo)物具有特異識別性，在痕量分析方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢。根據(jù)分子印跡聚合物的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)，將其用作固相萃取的吸附劑材料，近年來被成功用于農(nóng)藥、獸藥分析檢測的前處理過程中。固相萃取(solid phase extract, SPE)技術(shù)基于液-固相色譜理論,采用選擇性吸附、選擇性洗脫的方式對樣品進(jìn)行富集、分離、凈化，是一種包括液相和固相物理萃取過程；也可以將其近似地看作一種簡單的色譜過程。較常用的方法是使液體樣品溶液通過吸附劑，保留其中被測物質(zhì)，再選用適當(dāng)強(qiáng)度溶劑沖去雜質(zhì)，然后用少量溶劑迅速洗脫被測物質(zhì)，從而達(dá)到快速分離凈化與濃縮的目的。也可選擇性吸附干擾雜質(zhì)，而讓被測物質(zhì)流出；或同時吸附雜質(zhì)和被測物質(zhì)，再使用合適的溶劑選擇性洗脫被測物質(zhì)。固相萃取柱是目前市場上銷售的產(chǎn)品，例如北京明尼克分析儀器設(shè)備中心銷售的固相萃取柱。所述吡嘧磺隆分子印跡聚合物是采用下述制備方法得到的(i)聚合反應(yīng)步驟在聚合反應(yīng)瓶中，按照α-甲基丙烯酸功能單體與吡嘧磺隆的摩爾比4: f 8:1，將α -甲基丙烯酸功能單體和模板分子吡嘧磺隆溶于二氯甲烷溶劑中，超聲混合Γ6π η，于是得到一種二氯甲烷預(yù)聚合體系；然后，按照α -甲基丙烯酸功能單體、交聯(lián)劑與引發(fā)劑的摩爾比4:4:1，往所述的二氯甲烷預(yù)聚合體系中加入三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯交聯(lián)劑與偶氮二異丁腈引發(fā)劑，接著再進(jìn)行超聲混合脫氣4飛min，最后充氮?dú)獬鯕猞?π η，再在溫度5(T70°C的水浴中加熱反應(yīng)2(T30h，得到一種高分子聚合物；(ii)模板分子洗脫步驟用力搖動步驟(i )使用的聚合反應(yīng)瓶，得到具有一定粒徑的高分子聚合物，然后在烘箱中在溫度65 75°C的條件下進(jìn)行干燥，再使用索氏提取裝置加入洗脫劑洗脫所述模板分子，洗脫l(Tl4h ;然后，把洗脫的高分子聚合物進(jìn)行干燥，再加入甲醇，在攪拌下加熱至溫度65 75°C，直到無乙酸味放出，接著再加入丙酮洗去細(xì)小聚合物顆粒，最后移入烘箱進(jìn)行干燥，得到顆粒度D5tl為9. 15 μ m的吡嘧磺隆分子印跡聚合物。同時，按照與上述相同的方式制備空白印跡聚合物(NIP)，即除不加模板分子外，其他步驟均與上述印跡聚合物制備方法相同。
所述的吡嘧磺隆分子印跡聚合物、α -甲基丙烯酸、吡嘧磺隆與空白印跡聚合物進(jìn)行了紅外光譜分析，其分析條件如下紅外光譜儀美國Thermo Nicolet公司生產(chǎn)的Nexus 470傅立葉變換(原位)紅外光譜儀。紅外光譜測定條件采用溴化鉀壓片法，掃描波數(shù)在4000 - 400CHT1范圍。吡嘧磺隆分子印跡聚合物、模板分子吡嘧磺隆及空白聚合物的紅外光譜圖列于附圖1-3中。由吡嘧磺隆分子印跡聚合物紅外光譜圖I可以清楚地看出，在1577. 23CHT1和1608. 99cm-1分別出現(xiàn)了模板分子吡嘧磺隆的仲酰胺-NH彎曲振動吸收峰和苯環(huán)C=C伸縮振動吸收峰；而在1369. 17cm-1出現(xiàn)了 -SO2-的反對稱伸縮振動吸收峰。由模板分子吡嘧磺隆紅外光譜圖2可以清楚地看出，在1577. 23cm-1和1614. 26^1分別出現(xiàn)了模板分子吡嘧磺隆的仲酰胺-NH彎曲振動吸收峰和苯環(huán)C=C伸縮振動吸收峰；而在1361. 86cm-1出現(xiàn)了 -SO2-的反對稱伸縮振動吸收峰。附圖3的空白聚合物紅外光譜圖沒有出現(xiàn)上述這些吸收峰。由這些附圖可以認(rèn)為吡嘧磺隆印跡聚合物具有明顯的印跡效果，含有典型的模板分子吸收峰。本發(fā)明人還進(jìn)行了本發(fā)明吡嘧磺隆分子印跡聚合物在不同溶劑中的吸附實(shí)驗(yàn)，其實(shí)驗(yàn)方法是分別稱取制備的吡嘧磺隆印跡聚合物和空白聚合物各O. 200克置于離心試管中，加入5ml濃度為4mmol/l吡嘧磺隆在不同溶劑中的溶液，在室溫下震蕩吸附4h，然后以轉(zhuǎn)速4000r/min離心IOmin,上清液采用O. 45 μ m的有機(jī)濾頭過濾,得到的濾液采用本說明書描述的高效液相色譜法(HPLC)測定其中游離吡嘧磺隆的濃度，根據(jù)下述公式計(jì)算吡嘧磺隆印跡聚合物對吡嘧磺隆的單位吸附量。Q= (ΜΗ,
m式中Q 為吸附量(μ g. g_0 ;C0為吡嘧磺隆的初始濃度(μ g. πιΓ1);Ct為在吸附不同時間后的吡嘧磺隆濃度(μ g. mr1);m是吡嘧磺隆印跡聚合物的質(zhì)量(g)；V是所述濾液的體積。
該吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于附圖4中。該圖是吡嘧磺隆分子印跡聚合物在吸附4h后在吸附溶劑中游離吡嘧磺隆的高效液相色譜圖。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在正己烷中游離吡嘧磺隆的液相色譜峰面積最小，也即該吡嘧磺隆分子印跡聚合物的吸附量最大，可以達(dá)到1150. 71±4· 87 μ g g—1。該吡嘧磺隆分子印跡聚合物還進(jìn)行了吸附動力學(xué)實(shí)驗(yàn)，其具體實(shí)驗(yàn)方法是稱取20mg吡嘧磺隆印跡聚合物，加入濃度為5. 70mg Γ1正己烷吡嘧磺隆溶液5ml，采用100轉(zhuǎn)/分鐘的速度震蕩吸附，分別于3h、4h、5h、7h與9h后取出吸附液，離心和過濾，然后采用高效液相色譜方法測定游離吡嘧磺隆的含量，所述的高效液相色譜法是本說明書描述的高效液相色譜法。該吸附動力學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見附圖5，從附圖5可以清楚地看出吡嘧磺隆分子印跡聚合物在3-4h吸附量增加較快，而4h后吸附量幾乎沒有明顯的增加，還可以看出該合成的吡嘧磺隆分子印跡聚合物吸附速度比較快，與劉秋葉等人在題為“硅膠修飾-表面分子印跡牛血紅蛋白及其識別性能的研究”，《化學(xué)學(xué)報(bào)》，66 (1)ρ56-62 (2008)中制備的大分子牛血紅蛋白印跡聚合物相比較(7小時后達(dá)到飽和)，本發(fā)明制備的吡嘧磺隆印跡聚合物具 有較快的吸附速度。在本發(fā)明中，所述的活化處理應(yīng)該理解為一種潤濕其聚合物并使該聚合物達(dá)到良好吸附效果的處理方法。根據(jù)本發(fā)明，所述的磺酰脲類除草劑是吡嘧磺隆、芐嘧磺隆、甲磺隆、苯磺隆和煙嘧磺隆，當(dāng)然，還包括在化學(xué)結(jié)構(gòu)、化學(xué)性質(zhì)與除草功能上與本發(fā)明所述磺酰脲類除草劑結(jié)構(gòu)相近或相似的那些化合物。根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實(shí)施方式，在制備吡嘧磺隆分子印跡聚合物的步驟(ii)中，所述的洗脫劑是甲醇、乙腈與乙酸按照其體積比I. 5^2. 5:0. 8^1. 2:0. 8^1. 2混合的混合溶劑。根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實(shí)施方式，在制備吡嘧磺隆分子印跡聚合物的步驟(ii)中，在洗脫模板分子的過程中每隔3 5h更換一次洗脫劑，洗脫溫度控制在80-100°C。根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實(shí)施方式，在制備吡嘧磺隆分子印跡聚合物的步驟(ii)中，洗脫的高分子聚合物在溫度6(T80°C的條件下干燥f 3h。根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實(shí)施方式，在制備吡嘧磺隆分子印跡聚合物的步驟(ii)中，所述的丙酮洗滌進(jìn)行2 3次。B、磺酰脲類除草劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液的制備分別稱量5mg吡嘧磺隆、芐嘧磺隆、甲磺隆、煙嘧磺隆和苯磺隆標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)放于50mL容量瓶中，用乙腈充分溶解后并定容，于是配制得到ΙΟΟμ g/mL標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液。制備的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液進(jìn)行超聲混勻5min后，再進(jìn)行密封保存，在冰箱中在溫度為O至-4° C下保存可以穩(wěn)定使用約I個月。本發(fā)明使用的吡嘧磺隆、芐嘧磺隆、甲磺隆、煙嘧磺隆和苯磺隆標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)都是純度在96%以上的標(biāo)準(zhǔn)品。C、磺酰脲類除草劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別移取一定量的在步驟B制備的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液于IOmL容量瓶中，用乙腈稀釋并定容，得到其濃度分別為I. 00,5. 00、10. 00、15. 00,20. 00 μ g/mL標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后在下述條件下進(jìn)行HPLC分析。
本發(fā)明使用的HPLC儀是目前市場上銷售的產(chǎn)品,例如Waters、Agilent、島津等品牌。高壓液相色譜柱為C18柱，它是美國Waters公司銷售的產(chǎn)品，250mmX 4. 6mm,填料粒徑5 μ m,使用流動相A與流動相B進(jìn)行梯度洗脫，流動相A為含有O. 01重量％磷酸的乙腈-水混合物，乙腈與水的體積比為20 80,流動相B為含有O. 01重量％磷酸的乙腈-水混合物，乙腈與水的體積比為80 20 ;流速O. 8mL/min ;柱溫30°C ;檢測波長241nm，進(jìn)樣量10 μ L0其HPLC的流動相洗脫梯度如下
洗脫時間(min) 流動相A ( % ) 流動相B ( % )
O6040
104060
153070
18O100
20O100
216040
266040流動相使用前用0.45 μ m濾膜抽濾裝置進(jìn)行脫氣，其脫氣方法是采用抽濾瓶抽濾，中間放置O. 45 μ m有機(jī)相濾膜。每個標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度重復(fù)進(jìn)樣3次，然后以液相色譜峰面積積分對其相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度進(jìn)行繪圖，于是得到所述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線，由其相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性部分得到其相應(yīng)的線性方程。在本發(fā)明中，由其標(biāo)準(zhǔn)曲線線性部分獲得線性方程的方法是本技術(shù)領(lǐng)域里技術(shù)人員熟知的方法。按照上述方法得到如下線性方程
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)線性方程相關(guān)系數(shù)R2
吡嘧磺隆y=33429x-4278.60.9998
芐嘧磺隆y=25260x-69680.9991
煙嘧磺隆y=22436x-1750.50.9982
甲磺隆y=22809x-4198O 9998
苯磺隆y=26673x-9618.40.9997式中y是峰面積積分；X是標(biāo)準(zhǔn)物的濃度μ g/mL。相關(guān)系數(shù)R2表明，該分析方法滿足其定量要求。采用本HPLC方法對同一標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品平行測定6次，其測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%，上述五種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品的測定相對標(biāo)準(zhǔn)偏差也小于5%，說明本HPLC方法的精密度很好。使用同一標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制三個濃度相同的樣品，每個濃度樣品重復(fù)測定3次，檢驗(yàn)其方法的再現(xiàn)性，其測定相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%，說明本方法符合高效液相色譜方法相對標(biāo)準(zhǔn)偏差要求，因此，該方法能夠滿足實(shí)際樣品檢測要求。D、凈化樣品溶液制備稱取待分析樣品5. OOOg于50mL離心管中進(jìn)行預(yù)處理。所述預(yù)處理是該分析樣品先用IOmL水潤濕并攪拌，然后加入IOmL乙腈溶劑，再用漩渦混勻器混勻，在100轉(zhuǎn)/min的條件下振蕩3h，最后雙層濾紙過濾，離心，收集上清液用氮?dú)獯党?，得到一種殘留物。將所述的殘留物溶于正己烷溶劑中得到一種樣品溶液，把該樣品溶液加到在步驟A準(zhǔn)備的MISPE柱上，先進(jìn)行淋洗，然后進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，合并洗脫液在N2氣下進(jìn)行濃縮，除去有機(jī)溶齊U，其殘留物用O. 5^1. 5mL乙腈溶解，得到一種凈化樣品溶液。

淋洗是本技術(shù)領(lǐng)域里的一種常規(guī)操作，在本發(fā)明中，其淋洗目的在于去除雜質(zhì)。本發(fā)明使用正己烷進(jìn)行淋洗，其淋洗速度通常保持O. 5mL/min，淋洗劑的體積是2. 5mL。洗脫也是本技術(shù)領(lǐng)域里的一種常規(guī)操作。在本發(fā)明中，使用甲醇-乙酸溶劑混合物進(jìn)行洗脫。所述的甲醇-乙酸溶劑混合物是甲醇與乙酸按照體積比8:2-9:1混合的混合溶劑。洗脫速度不能太快，通常保持在O. 5mL/min,洗脫劑的體積是3X 2. 5mL。合并洗脫液在N2氣下進(jìn)行濃縮，除去有機(jī)溶劑，這是一種常規(guī)濃縮方式，通過氮?dú)鈸]發(fā)帶走有機(jī)溶劑，而待分析物殘留在試管底部，其濃縮是在溫度為常溫或者50度以下的條件下進(jìn)行的。E、待分析樣品的HPLC分析步驟D得到的凈化樣品溶液在步驟C描述的條件下進(jìn)行HPLC分析，根據(jù)步驟C得到的其線性方程，由其液相色譜峰面積積分計(jì)算得到待分析樣品的磺酰脲類除草劑含量。本發(fā)明還涉及在測定農(nóng)產(chǎn)品、水樣、土壤與食品的磺酰脲類除草劑中的用途。該類除草劑現(xiàn)已成為水稻、玉米、大豆、油菜、麥類及草坪、林地、非耕地和部分旱地作物雜草防治的主要品種，對水稻和旱地禾本科雜草、闊葉雜草、莎草、看麥娘、稗草等均有較好的防除效果。因此，本發(fā)明的方法具有非常廣泛的應(yīng)用前景。本發(fā)明的合成方法得到D5tl為9. 15 μ m的吡嘧磺隆分子印跡聚合物(丙酮沉降洗滌之前的顆粒度)，避免了本體聚合法合成得到大塊狀聚合物需要研磨和過篩的步驟，也避免了沉淀聚合法得到較小顆粒聚合物(粒度1-5微米)，從而導(dǎo)致裝填固相萃取柱在使用時流速慢，比沉淀聚合法能較大程度地節(jié)約溶劑，降低成本，還利于環(huán)保。本發(fā)明的模板洗脫程序(耗時10-12h)，比傳統(tǒng)的洗脫程序(耗時24h)要節(jié)省時間10-12h，而且洗脫更徹底，其模板化合物殘留量未檢出(可能是由于模板在97° C高溫反復(fù)抽提導(dǎo)致結(jié)構(gòu)改變，因此在抽提液中采用高效液相方法未檢出模板分子)，避免了模板化合物殘留在應(yīng)用時導(dǎo)致的假陽性。本發(fā)明制備吡嘧磺隆固相萃取柱能特異性地吸附吡嘧磺隆、苯磺隆、甲磺隆、芐嘧磺隆和煙嘧磺隆等結(jié)構(gòu)類似物，具有非常明顯的選擇性，對吡嘧磺隆吸附和凈化效果顯著，簡化對樣品富集和凈化步驟，提高預(yù)處理效率，同時提高了檢測方法的靈敏度和準(zhǔn)確性。吡嘧磺隆分子印跡固相萃取柱制備方法簡單，成本低，并可重復(fù)使用。還可以建立分子印跡固相萃取柱與HPLC儀器聯(lián)用檢測方法，最終能建立各種農(nóng)產(chǎn)品、水和土壌等生物樣品的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。[有益效果]
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明合成方法得到D5tl為9. 15 μ m的吡嘧磺隆分子印跡聚合物(再采用丙酮沉降3-5次，去除細(xì)小顆粒，得顆粒度在10 μ m以上的聚合物裝填固相萃取柱)，不需要研磨和過篩，采用該方法合成聚合物可以節(jié)省溶劑16-20%，固相萃取柱使用時流速快50%，分析時間減少50%，成本降低，有利于環(huán)保。其模板化合物殘留量幾乎為0，避免了模板化合物殘留在應(yīng)用時導(dǎo)致的假陽性。本發(fā)明制備吡嘧磺隆固相萃取柱能特異性地吸附吡嘧磺隆、苯磺隆、甲磺隆、芐嘧磺隆和煙嘧磺隆等結(jié)構(gòu)類似物，具有非常明顯的選擇性，對吡嘧磺隆的浄化效果顯著，簡化對樣品富集和浄化，提高預(yù)處理效率。與現(xiàn)有技術(shù)同類方法相比，以大米為例，采用該MISPE比SPE的回收率高10-30%。吡嘧磺隆分子印跡固相萃取柱制備方法簡單，成本低，并可重復(fù)使用。還可以建立分子印跡固相萃取柱與HPLC儀器聯(lián)用檢測方法，最終能建立各種農(nóng)產(chǎn)品、水和土壌等生物樣品的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。

圖I是吡嘧磺隆分子印跡聚合物的紅外光譜圖。圖2是吡嘧磺隆模板分子的紅外光譜圖。圖3是空白印跡聚合物的紅外光譜圖。圖4是吡嘧磺隆分子印跡聚合物在不同溶劑中吸附后的液相色譜圖。圖5是吡嘧磺隆分子印跡聚合物吸附動力學(xué)曲線圖。圖6是芐嘧磺隆、甲磺隆、煙嘧磺隆、苯磺隆和吡嘧磺隆的標(biāo)準(zhǔn)曲線；TBM-苯磺隆，PS-吡嘧磺隆，BSM-芐嘧磺隆，MSM-甲磺隆，NS-煙嘧磺隆。圖7是吡嘧磺隆分子印跡固體萃取柱、空白柱加混標(biāo)(13. OOyg mL-1)的HPLC色譜圖。B-大米試驗(yàn)液直接進(jìn)樣的HPLC分析所得到的液相色譜圖；C-大米樣品加標(biāo)樣后未經(jīng)MISPE柱子處理而直接進(jìn)行HPLC分析所得到的液相色譜圖；D-正己烷淋洗MISPE柱時所收集淋洗液的HPLC液相色譜圖；(從D可以看出正己烷淋洗效果非常好，淋洗液中幾乎不含有任何ー種磺酰脲類除草剤。這樣說明該柱子對這五種磺酰脲類除草劑吸附效果比較好。)E-洗脫劑洗脫MISPE柱時所收集洗脫液的HPLC液相色譜圖；F-正己烷淋洗NISPE (空白印跡聚合物)柱時所收集淋洗液的HPLC液相色譜圖；G-洗脫劑洗脫NISPE柱時所收集洗脫液的HPLC液相色譜圖；H-五種混標(biāo)(13. 00 μ g mL-1)的HPLC液相色譜圖。圖8是土壤試驗(yàn)溶液處理液的HPLC色譜圖A- 土壤試驗(yàn)溶液的HPLC色譜B- 土壤試驗(yàn)溶液加混標(biāo)的HPLC色譜圖；C- 土壤試驗(yàn)溶液通過MISPE柱后的淋洗液的HPLC色譜圖；D- 土壤試驗(yàn)溶液通過MISPE柱的洗脫液的HPLC色譜圖；E-五種標(biāo)準(zhǔn)磺酰脲類除草劑混合液的HPLC色譜圖。圖9是水稻田水試驗(yàn)溶液處理液的HPLC色譜圖A-水稻田水試驗(yàn)溶液的HPLC色譜圖；B-水稻田水試驗(yàn)溶液加混標(biāo)的HPLC色譜圖；C-水稻田水試驗(yàn)溶液通過MISPE柱的淋洗液的HPLC色譜圖； D-水稻田水試驗(yàn)溶液通過MISPE柱的洗脫液的HPLC色譜圖；E-五種標(biāo)準(zhǔn)磺酰脲類除草劑混合液的HPLC色譜圖。
具體實(shí)施方式通過下述實(shí)施例將能夠更好地理解本發(fā)明。實(shí)施例I :大米中磺酰脲類除草劑的分析該實(shí)施例的實(shí)施步驟如下首先，制備吡嘧磺隆分子印跡聚合物(i)聚合反應(yīng)步驟在聚合反應(yīng)瓶中，將170yL α-甲基丙烯酸功能単體與O. 2g吡嘧磺隆(它們的摩爾比4:1)溶解于16mL ニ氯甲烷中，超聲混合脫氣5min，于是得到一種ニ氯甲烷預(yù)聚合體系；然后，往所述的預(yù)聚合體系中加入750μ L三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TRM)交聯(lián)劑、O. Ig偶氮ニ異丁腈引發(fā)劑，所述α-甲基丙烯酸功能単體、交聯(lián)劑與引發(fā)劑的摩爾比是4:4:1 ;接著再進(jìn)行超聲混合脫氣5min，最后充氮?dú)?min，立即封ロ，將蓋子綁緊，于溫度60°C的水浴中加熱反應(yīng)24h，于是得到ー種高分子聚合物；(ii)模板分子洗脫步驟用カ搖動步驟(i)使用的聚合反應(yīng)瓶，得到具有一定粒徑的高分子聚合物，得到粒度D5tl為9. 15 μ m的吡嘧磺隆分子印跡聚合物。然后在烘箱中溫度為70°C的條件下進(jìn)行干燥，把它裝填到索氏提取筒中并加入洗脫劑(甲醇、こ腈與こ酸的體積比為2:1 I)洗脫模板分子，洗脫12h，每4h更換一次洗脫劑，洗脫溫度控制在80°C以上；然后，洗脫的高分子聚合物在溫度80°C的條件下進(jìn)行干燥，然后加入甲醇，在攪拌下加熱至溫度70 V，直到無こ酸味放出，接著再加入丙酮洗去小顆粒聚合物，用丙酮洗滌3次，最后移入烘箱中進(jìn)行干燥，與此同時，制備空白印跡聚合物(NIP)，除不加模板分子外，其他步驟均與印跡聚合物制備相同。其次，準(zhǔn)備吡嘧磺隆分子印跡固相萃取柱稱取200mg上述干燥吡嘧磺隆分子印跡聚合物，干法手工裝填到3ml固相萃取空柱中，反復(fù)壓實(shí)，得到吡嘧磺隆分子印跡固相萃取柱(MISPE);所述的MISPE柱在使用前用5ml ニ氯甲烷與こ腈的混合物(其體積比1:1)進(jìn)行活化處理。第三、磺酰脲類除草劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液的制備分別稱量5mg吡嘧磺隆、芐嘧磺隆、甲磺隆、煙嘧磺隆和苯磺隆標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)放于50mL容量瓶中，用こ腈充分溶解后并定容，于是配制得到100 μ g/mL標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液。
第四，磺酰脲類除草劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別移取一定量的在第三步驟制備的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液于IOmL容量瓶中，用こ腈稀釋并定容，得到其濃度分別為I. 00,5. 00、10. 00、15. 00,20. 00 μ g/mL標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后在下述條件下進(jìn)行HPLC色譜分析色譜條件為C18柱，250mmX4. 6mm，填料粒徑為5 μ m，使用流動相A與流動相B進(jìn)行梯度洗脫，流動相A為含有O. 01重量％磷酸的こ腈-水混合物，こ腈與水的體積比為20 80，流動相B為含有O. 01重量％磷酸的こ腈-水混合物，こ腈與水的體積比為80 20 ;流速O. 8mL/min ;柱溫30 °C ;檢測波長241nm，進(jìn)樣量10 μし配制好的流動相在使用前用0.45 μ m濾膜抽濾裝置進(jìn)行脫氣，然后超聲處理20min ;每個標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度重復(fù)進(jìn)樣3次，以液相色譜峰面積積分對其相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度作圖，得到所述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線(見附圖6)，由其相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性部分得到其相應(yīng)的線性方程；
第五，大米試驗(yàn)溶液的制備取江西產(chǎn)的大米樣品粉碎通過50目的標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)篩，稱取5g篩下大米，放入50mL離心管中，加入IOmL蒸餾水，用玻璃棒輕微攪拌后靜置浸潤2h，接著加入IOmLこ腈，經(jīng)玻璃棒攪拌后靜置Ih,用潤旋混勻器混勻15min,然后在轉(zhuǎn)速4000r/min的條件下進(jìn)行離心15min,用雙層濾紙過濾，得到的濾液用氮?dú)獯党軇┖笥谜和槿芙膺M(jìn)行上MISPE柱分析。第六，大米試驗(yàn)溶液的分析MISPE柱在使用前先用7. 5mL (2. 5X3mL)洗脫劑(甲醇與こ酸的混合物，其體積比9:1)將柱子的雜質(zhì)洗掉，然后用5mL (2. 5X2mL)活化劑(こ腈與ニ氯甲烷的混合物，其體積比I : I)進(jìn)行活化。取ImL用正己烷為溶劑配制的混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(濃度為13 μ g/mL)將其加入上述制備的大米試驗(yàn)液(已氮?dú)獯党軇┖蟮臍埩粑?的試管中，超聲混勻，得到一種上樣液，全部轉(zhuǎn)移到MISPE柱上樣，用2. 5mL正己烷進(jìn)行淋洗。收集的淋洗液用氮?dú)獯蹈扇軇┖笤儆肐mLこ腈溶解，超聲混勻，然后進(jìn)行HPLC分析，通過檢測淋洗液可以判斷淋洗液中是否有五種磺酰脲類除草剤，如果沒有這些除草剤，則說明淋洗時沒有將除草劑淋洗下來，于是能保證五種磺酰脲類除草劑全部留在柱上，即能保證洗脫液含有所有除草剤，從而提高回收率。然后用7.5mL (2. 5X3mL)所述洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，用氮?dú)獯党軇?，殘留物用ImL的こ腈溶解，超聲混勻得到ー種大米試驗(yàn)溶液，然后進(jìn)行HPLC分析?？瞻譔ISPE柱子大米上樣液與MISPE柱子大米上樣液相同。第六，HPLC檢測結(jié)果采用Waters 2487高效液相色譜儀,色譜條件為C18柱,250_X 4. 6mm,填料粒度為5 μ m，使用流動相A與流動相B進(jìn)行梯度洗脫，使用流動相A與流動相B進(jìn)行梯度洗脫，流動相A為含有O. 01重量％磷酸的こ腈-水混合物，こ腈與水的體積比為20 :80，流動相B為含有O. 01重量％磷酸的こ腈-水混合物，こ腈與水的體積比為80 20 ;流速O. 8mL/min ；柱溫30で；檢測波長24111111，進(jìn)樣量1(^し梯度洗脫程序如說明書中所述。大米試驗(yàn)溶液的HPLC檢測結(jié)果列于附圖7中。附圖7B是本實(shí)施例制備的大米試驗(yàn)液直接進(jìn)行HPLC液相色譜分析所得到的色譜圖。附圖7C是所述大米樣品溶液在加五種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)后的HPLC液相色譜圖。
附圖7D是所述的大米樣品溶液通過MISPE柱，用正己烷淋洗MISPE柱時所收集淋洗液的HPLC液相色譜圖。從該附圖可以看出，正己烷淋洗效果非常好，淋洗液中幾乎不含有任何ー種磺酰脲類除草剤。這樣說明該柱子對這五種磺酰脲類除草劑吸附效果比較好。附圖7E-洗脫劑洗脫MISPE柱時所收集洗脫液的HPLC液相色譜圖。
附圖7F-正己烷淋洗NISPE (空白印跡聚合物)柱時所收集淋洗液的HPLC液相色譜圖；附圖7G-洗脫劑洗脫NISPE柱時所收集洗脫液的HPLC液相色譜圖；附圖7H-五種混標(biāo)(13. 00 μ g mじ1)的HPLC液相色譜圖。然后，根據(jù)前面所得到的其線性方程，由其液相色譜峰面積積分得到待分析樣品大米的芐嘧磺隆、甲磺隆、煙嘧磺隆、苯磺隆和吡嘧磺隆含量分別是10. 547,7. 936,6. 701、5. 110 與 12. 92μ g/g。其測定的精密度是在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值沒有超過算術(shù)平均值的10%。實(shí)施例2 :土壤中磺酰脲類除草劑的分析使用實(shí)施例I制備的吡嘧磺隆聚合物、按照與實(shí)施例I相同方式準(zhǔn)備固相萃取柱。其次，土壤試驗(yàn)溶液的制備取農(nóng)大實(shí)驗(yàn)田里的土壌樣品晾干、碾碎后通過50目標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)篩，稱取5g篩下土壌粉末，放入50mL離心管中，加入IOmL蒸餾水，用玻璃棒輕微攪拌后靜置浸潤2h，接著加入IOmLこ腈,經(jīng)玻璃棒攪拌后靜置Ih,用潤旋混勻器混勻15min,然后在轉(zhuǎn)速4000r/min的條件下進(jìn)行離心15min，用雙層濾紙過濾，得到的濾液進(jìn)行分析；第三，土壤試驗(yàn)溶液的分析MISPE柱在使用前先用7. 5mL (2. 5X3mL)洗脫劑(甲醇與こ酸的混合物，其體積比9:1)將柱子的雜質(zhì)洗掉，然后用5mL (2. 5X2mL)活化劑(こ腈與ニ氯甲烷的混合物，其體積比I: I)進(jìn)行活化。3mL配制的混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(13. 05 μ g mじ1)用氮?dú)獯蹈?，再加?mL正己烷超聲混勻5min，然后將其倒入裝有3mL上述制備的土壤試驗(yàn)液(已氮吹干)的試管中，再超聲混勻，得到一種用于MISPE柱的上樣液體，移取ImL所述液體上MISPE柱，用2. 5mL正己烷進(jìn)行淋洗，然后用7. 5mL (2. 5X 3mL)洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集淋洗液和洗脫液，用氮?dú)獯蹈?，殘留物用ImL的こ腈溶解，超聲混勻，然后進(jìn)行HPLC分析。第六，HPLC檢測結(jié)果采用Waters 2487高效液相色譜儀,色譜條件為C18柱,250mmX 4. 6mm,直徑5 μ m,使用流動相A與流動相B進(jìn)行梯度洗脫，流動相A為含有O. 01重量％磷酸的こ腈-水混合物，こ腈與水的體積比為20 80,流動相B為以體積計(jì)80 20的こ腈-水混合物；流速O. 8mL/min ;柱溫30°C;檢測波長241nm，進(jìn)樣量10 μ L ;梯度洗脫程序如說明書中所述。得到了土壤試驗(yàn)溶液轉(zhuǎn)移到MISPE柱上樣，按照與實(shí)施例I相同的方法進(jìn)行淋洗和洗脫，合并洗脫液經(jīng)與實(shí)施例I相同處理后再進(jìn)行HPLC測定。HPLC檢測結(jié)果列于附圖8中。附圖8是土壤試驗(yàn)溶液處理液的HPLC色譜圖。圖中A為土壤試驗(yàn)溶液的HPLC色譜圖出為土壤試驗(yàn)溶液加混標(biāo)的HPLC色譜圖；(為土壤試驗(yàn)溶液通過MISPE柱后的淋洗液的HPLC色譜圖；D為土壤試驗(yàn)溶液通過MISPE柱的洗脫液的HPLC色譜圖；E為五種標(biāo)準(zhǔn)磺酰脲類除草劑混合液的HPLC色譜圖。
根據(jù)其HPLC色譜圖得到的線性方程，由其液相色譜峰面積積分得到待分析樣品大米的芐嘧磺隆、甲磺隆、煙嘧磺隆、苯磺隆和吡嘧磺隆含量分別是7. 4496,5. 0021、8.3395,7.6966、12. 4943 μ g/g。實(shí)施例3 :水稻田水中磺酰脲類除草劑的分析使用實(shí)施例I制備的吡嘧磺隆聚合物、按照與實(shí)施例I相同方式準(zhǔn)備固相萃取柱。其次，水稻田水試驗(yàn)溶液的制備取農(nóng)大水稻田間的水20mL用雙層濾紙過濾，所得濾液再用O. 45 μ m的濾膜過濾，所得濾液氮?dú)獯蹈?，然后再加?mL的正己烷，超聲混溶，待用；第三，水稻田水試驗(yàn)溶液的分析MISPE柱在使用前先用7. 5mL (2. 5X3mL)洗脫劑(甲醇與こ酸的混合物，其體積比9:1)將柱子的雜質(zhì)洗掉，然后用5mL (2. 5X2mL)活化劑(こ腈與ニ氯甲烷的混合物，其體積比I : I)進(jìn)行活化。分別取上述的待用溶液ImL進(jìn)MIP柱子及，用2. 5mL正己烷進(jìn)行淋洗，然后用7.5mL (2. 5X3mL)洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集淋洗液和洗脫液，用氮?dú)獯蹈?，殘留物用ImL的こ腈溶解，超聲混勻，然后進(jìn)行HPLC分析。其中剩下ImL的上述待用溶液直接氮吹干后，加入ImL的こ腈，超聲混溶，也進(jìn)行HPLC分析；第四，HPLC檢測結(jié)果采用Waters 2487高效液相色譜儀,色譜條件為C18柱,250mmX 4. 6mm,直徑5 μ m,使用流動相A與流動相B進(jìn)行梯度洗脫，流動相A為含有O. 01重量％磷酸的こ腈-水混合物，こ腈與水的體積比為20 80,流動相B為以體積計(jì)80 20的こ腈-水混合物；流速
O.8mL/min ;柱溫30°C;檢測波長241nm，進(jìn)樣量10 μ L ;梯度洗脫程序如說明書中所述。得到了水稻田水試驗(yàn)溶液轉(zhuǎn)移到MISPE柱上樣，按照與實(shí)施例I相同的方法進(jìn)行淋洗和洗脫，合并洗脫液經(jīng)與實(shí)施例I相同處理后再進(jìn)行HPLC測定。HPLC檢測結(jié)果列于附圖9中。附圖9水稻田水試驗(yàn)溶液處理液的HPLC色譜圖。圖中A為水稻田水試驗(yàn)溶液的HPLC色譜圖；Β為水稻田水試驗(yàn)溶液加混標(biāo)的HPLC色譜圖；C為水稻田水試驗(yàn)溶液通過MISPE柱的淋洗液的HPLC色譜圖；D為水稻田水試驗(yàn)溶液通過MISPE柱的洗脫液的HPLC色譜圖；E為五種標(biāo)準(zhǔn)磺酰脲類除草劑混合液的HPLC色譜圖。根據(jù)前面得到的其線性方程，由其液相色譜峰面積積分得到待分析樣品田水的芐嘧磺隆、甲磺隆、煙嘧磺隆、苯磺隆和吡嘧磺隆含量分別是8. 9462、9. 1732、8. 2273、12.6451,13. 5361 μ g/g。
權(quán)利要求
1.一種使用吡嘧磺隆分子印跡聚合物分析磺酰脲類除草劑的方法，其特征在于該方法包括下述步驟 A、MISPE柱的制備 稱取15(T250mg吡嘧磺隆分子印跡聚合物，裝填到Γ8πι1固相萃取空柱中，得到吡嘧磺隆分子印跡固相萃取柱MISPE ;所述的MISPE柱在使用前用2 10ml 二氯甲烷、乙腈或它們的混合物進(jìn)行活化處理； 所述吡嘧磺隆分子印跡聚合物是采用下述合成方法得到的 (i)聚合反應(yīng)步驟 在聚合反應(yīng)瓶中，按照α -甲基丙烯酸功能單體與吡嘧磺隆的摩爾比4: f 8:1，將α -甲基丙烯酸功能單體和模板分子吡嘧磺隆溶于二氯甲烷溶劑中，超聲混合Γ6π η，于是得到一種二氯甲烷預(yù)聚合體系；然后，按照α -甲基丙烯酸功能單體、交聯(lián)劑與引發(fā)劑的摩爾比4:4:1，往所述的二氯甲烷預(yù)聚合體系中加入三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯交聯(lián)劑與偶氮二異丁腈引發(fā)劑，接著再進(jìn)行超聲混合脫氣4飛min，最后充氮?dú)獬鯕猞?π η，再在溫度5(T70°C的水浴中加熱反應(yīng)2(T30h，得到一種高分子聚合物； (ii)模板分子洗脫步驟 用力搖動步驟(i )使用的聚合反應(yīng)瓶，得到具有一定粒徑的高分子聚合物，然后在烘箱中溫度為65 75°C的條件下進(jìn)行干燥，再把聚合物裝入索氏提取裝置中加入洗脫劑洗脫所述模板分子，洗脫l(Tl4h ;然后，把洗脫的高分子聚合物進(jìn)行干燥，再加入甲醇邊攪拌邊加熱至溫度65 75°C，直到無乙酸味放出，接著再加入丙酮洗去細(xì)小顆粒聚合物，最后移入烘箱中進(jìn)行干燥，得到顆粒度D5tl為9. 15 μ m的吡嘧磺隆分子印跡聚合物； B、磺酰脲類除草劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液的制備 分別稱量5mg吡嘧磺隆、芐嘧磺隆、甲磺隆、煙嘧磺隆和苯磺隆標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)放于50mL容量瓶中，用乙腈充分溶解后并定容，于是配制得到ΙΟΟμ g/mL標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液； C、磺酰脲類除草劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別移取一定量的在步驟B制備的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液于IOmL容量瓶中，用乙腈稀釋并定容，得到其濃度分別為I. 00,5. 00、10. 00、15. 00,20. 00 μ g/mL標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的工作溶液，然后在下述條件下進(jìn)行HPLC分析 色譜柱C18柱，250mmX4. 6mm,填料直徑5 μ m,使用流動相A與流動相B進(jìn)行梯度洗脫，流動相A為含有O. 01重量％磷酸的乙腈-水混合物，乙腈與水的體積比為20 :80，流動相B為O. 01重量％磷酸的乙腈-水混合物，乙腈與水的體積比為80 20 ;流速O. 8mL/min ;柱溫.30 0C ;檢測波長241nm，進(jìn)樣量10 μ L ; 流動相在使用前用有機(jī)相O. 45 μ m濾膜抽濾裝置進(jìn)行抽濾和超聲波超聲脫氣20min ；每個標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度重復(fù)進(jìn)樣3次，以液相色譜峰面積積分對其相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度作圖，得到所述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線，由其相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性部分得到其相應(yīng)的線性方程； D、凈化樣品溶液制備 把待分析樣品經(jīng)預(yù)處理后溶于正己烷溶劑中得到一種樣品溶液，把該樣品溶液加到在步驟A準(zhǔn)備的MISPE柱上，先進(jìn)行淋洗，然后進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，合并洗脫液在N2氣下進(jìn)行濃縮，除去有機(jī)溶劑，其殘留物用O. 5^1. 5mL乙腈溶解，得到一種凈化樣品溶液； E、待分析樣品的HPLC分析步驟D中得到的凈化樣品溶液在步驟C描述的條件下進(jìn)行HPLC分析，根據(jù)步驟C得到的其線性方程，由其液相色譜峰面積積分代入相應(yīng)的公式得到待分析樣品的磺酰脲類除草劑含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述的磺酰脲類除草劑是吡嘧磺隆、芐嘧磺隆、甲磺隆、苯磺隆和煙嘧磺隆。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于在制備吡嘧磺隆分子印跡聚合物的步驟(ii)中，洗脫模板分子的洗脫劑是甲醇、乙腈與乙酸按照其體積比I. 5^2. 5:0. 8^1. 2:0. 8^1. 2 混合的混合溶劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于在制備吡嘧磺隆分子印跡聚合物的步驟(ii)中，在洗脫模板分子的過程中每隔:T5h更換一次洗脫劑，洗脫溫度控制在80-100°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于在制備吡嘧磺隆分子印跡聚合物的步驟(ii)中，洗脫的高分子聚合物在溫度6(T80°C的條件下干燥f 3h。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于在制備吡嘧磺隆分子印跡聚合物的步驟(ii)中，所述的丙酮洗滌進(jìn)行2 3次。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于在步驟C中，其HPLC的流動相洗脫梯度如下 洗脫時間(min)流動相A ( % ) 流動相B ( % ) O6040 104000 153070 18O100 。
20O100 216040 26 60 40
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于在步驟D中，使用正己烷進(jìn)行淋洗；使用甲醇-乙酸混合溶劑進(jìn)行洗脫。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其特征在于在步驟D中，所述的甲醇-乙酸溶劑混合物是甲醇與乙酸按照體積比8:2、 I混合的混合溶劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法在測定農(nóng)產(chǎn)品、水樣、土壤與食品的磺酰脲類除草劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用吡嘧磺隆分子印跡聚合物分析磺酰脲類除草劑的方法。該方法包括MISPE柱準(zhǔn)備、除草劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液制備、除草劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、凈化樣品溶液制備與待分析樣品HPLC分析等步驟。該方法使用的吡嘧磺隆固相萃取柱能特異性地吸附吡嘧磺隆等多種結(jié)構(gòu)類似物，具有非常明顯的選擇性，流速快50%，因此分析時間減少50%，模板化合物殘留量幾乎為0，避免了殘留模板化合物導(dǎo)致的假陽性。該固相萃取柱凈化效果顯著，簡化對樣品富集和凈化，提高預(yù)處理效率，并可重復(fù)使用。還可以建立分子印跡固相萃取柱與HPLC儀器聯(lián)用檢測方法，最終能建立各種農(nóng)產(chǎn)品、水和土壤等生物樣品的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。
文檔編號G01N30/88GK102866226SQ201210401808
公開日2013年1月9日 申請日期2012年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月19日
發(fā)明者湯凱潔, 羅秋水, 吳國平, 熊建華, 余瑞龍 申請人:江西農(nóng)業(yè)大學(xué)