專利名稱：一種千山活血膏的質(zhì)量控制方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，確切地說，涉及ー種千山活血膏中藥藥物質(zhì)量的控制方法，特別是千山活血膏制劑組方三七藥材中人參皂苷Rgl、Rbl及三七皂苷Rl三種成分高效液相色譜含量測定方法。
背景技術：
千山活血膏是由土鱉蟲、大黃、三七、延胡索 、血竭、續(xù)斷、黃柏、乳香、沒藥、兒茶、細辛、千年健、山慈姑、澤瀉、羚羊角、木香、白及、白主、桂枝、羌活20味藥組成，收載于地方標準WS-10415 (ZD-0415)-2002，具有活血化瘀、舒筋活絡、消腫止痛的功效，用于肌膚、關節(jié)腫脹、疼痛、活動不利以及跌打損傷，腰、膝部骨性關節(jié)炎等癥。千山活血膏原質(zhì)量標準對血竭、三七進行了薄層色譜的鑒別，對三七中的人皂皂苷Rgl進行了含量測定，檢測指標少，難以全面控制產(chǎn)品質(zhì)量，特別是三七中所含的人參皂苷Rgl和人參皂苷Rbl、三七皂苷均為四環(huán)三萜類皂苷，在紫外區(qū)為末端吸收，與ー些常用的有機溶劑的紫外吸收波長接近，影響測定，使用紫外低波長檢測，會給測定帶來一定困難，影響含量測定的準確性和重現(xiàn)性。蒸發(fā)光閃射檢測器(ELSD)是ー種新型通用檢測器，其信號響應與被測物的質(zhì)量成正比，而不依賴于被測物的光學特性及官能團，理論上可用于揮發(fā)性低于流動相的任何組分的檢測。它對無紫外吸收或為紫外末端吸收的物質(zhì)如糖類、皂苷類、留類等有較好的響應。ELSD消除了溶劑的干擾和因溫度變化引起的基線漂移，即使用梯度洗脫也不會產(chǎn)生基線漂移。ELSD的響應不依賴樣品的光學性質(zhì)，只要樣品的揮發(fā)性低于流動相即可被檢測，尤其適用于流動相有紫外吸收干擾或梯度洗脫時基線漂移影響的情況，克服了傳統(tǒng)檢測方法的不足，已經(jīng)越來越多的應用于高效液相色譜中。蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)最大的優(yōu)越性在于能檢測不含發(fā)色團的化合物，ELSD的通用檢測方法消除了常見于傳統(tǒng)HPLC檢測方法中的難點，不同于紫外和熒光檢測器，ELSD的響應不依賴與樣品的光學特性，任何揮發(fā)性低于流動相的樣品均能被檢測，在低溫下也能使用。蒸發(fā)光散射檢測器基線噪音小，不受梯度影響，峰形尖鋭，雜質(zhì)峰很少。而紫外檢測器基線受梯度影響，在分析過程中基線漂移較大。三七中皂苷類成分的分析常使用較低的紫外檢測波長(203nm)，該波段為末端吸收，噪音信號很大，難以獲得滿意的結果。ELSD檢測器作為ー種通用型檢測器，僅對不揮發(fā)被分析物產(chǎn)生信號，其信號響應值僅取決于被分析物質(zhì)顆粒的大小和數(shù)量，不存在紫外末端吸收的問題。且對流動相的變化不敏感，即使在梯度洗脫時基線也很平穩(wěn)。通過調(diào)節(jié)ELSD檢測器的漂移管溫度與載氣流速，可以使基線噪音最小，響應值相對最高，從而獲得好的色譜圖。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的千山活血膏的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明通過如下技術方案實現(xiàn)本發(fā)明的千山活血膏質(zhì)量控制方法包括如下鑒別和/或含量測定方法
鑒別包括如下方法(I)取本品5g，加こ醇10ml，超聲處理15分鐘，放冷，濾過，取濾液，作為供試品溶液。另取血竭對照藥材0. lg，加こ醇5ml使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(19 I)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顔色的主斑點。(2)取本品10g，加水70ml，加熱煮沸30分鐘，放冷，濾過，濾液加こ醚30ml振搖提取，棄去こ醚液，水層用水飽和的正丁醇振搖提取2次，毎次40ml，合并正丁醇液，用氨試液30ml洗滌，棄去氨液，再用正丁醇飽和的水30ml洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取三七對照藥材lg，加甲醇20ml，回流提取I小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，毎次25ml，合并正丁醇液，同法制成對照藥材溶液；再取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl對照品，加甲醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一 部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各5 u 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2)10°C以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中。在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，分別顯相同顔色的斑點或熒光斑點。含量測定包括如下方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以こ腈-水為流動相，按下表進行梯度洗脫
時間(分鐘)_流速_ 一 _水(％) _ ~Z^m (%)
0 "1.08515
10 1.0 80 20 251.07822
281.07525
301.06832
351.08515
451.08515蒸發(fā)光閃射檢測器條件為漂移管溫度為120°C，載氣流速為2. OL/min ;理論板數(shù)按人參皂苷Rgl峰計算應不低于2000。對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化ニ磷干燥至恒重的人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、三七皂苷Rl對照品適量，加甲醇制成每Iml含人參皂苷RglO. 5mg/ml、人參苷RblO. 5mg/ml、三七皂苷RIO. 15mg/ml的混合溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備取千山活血膏，除去蓋襯，取2. 5g精密稱定，置索氏提取器中，加こ醚回流提取3小時，棄去こ醚液，藥渣揮干，加甲醇回流提取4小時，甲醇提取液蒸干,殘渣加水微熱使溶解,放冷,上大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑I. 5cm,長IOcm)，用2_4倍柱體積的20%的こ醇溶液洗滌，棄去20%こ醇洗脫液，再用70%的こ醇5-8倍柱體積洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液5 iU、10 ill和供試品溶液10 U 1，注入液相色譜儀，測定，即得。下面對本發(fā)明的千山活血膏質(zhì)量控制方法進行進一步的說明。千山活血膏含量測定方法試驗I、儀器與試劑高效液相色譜儀日本島津公司(LC-2010A);檢測器蒸發(fā)光散射檢測器(SEDEX75);こ睛為色譜純，Dikma公司，水為超純水。 對照品三七皂苷Rl (批110745-201012)、人參皂苷Rgl (批號0703-201018)、人參皂苷Rbl (批號110704-201018)，購自中國藥品生物制品檢定所。2、方法與結果色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；Dikma 5 u m, 150mm*4. 6mm ;流動相為こ腈-水按下表進行梯度洗脫
權利要求
1.一種千山活血膏的質(zhì)量控制方法，包括采用(1)薄層色譜法鑒別千山活血膏血竭中 血竭素高氯酸鹽；(2)薄層色譜法鑒別千山活血膏三七中人參皂苷Rgl ; (3)高效液相色譜法測定千山活血膏三七中人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl以及三七皂苷Rl。
2.根據(jù)權利要求I所述的一種千山活血膏的質(zhì)量控制方法，其特征在于(1)薄層色譜法鑒別千山活血膏血竭中血竭素高氯酸鹽；(2)薄層色譜法鑒別千山活血膏三七中人參皂苷Rgl ; (3)高效液相色譜-蒸發(fā)光閃射檢測法同時測定千山活血膏三七中人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl以及三七皂苷Rl三種成分的含量。
3.根據(jù)權利要求I或2所述的一種千山活血膏的質(zhì)量控制方法，其特征在于(1)薄層色譜法鑒別千山活血膏血竭中血竭素高氯酸鹽的方法為取本品5g，加乙醇10ml，超聲處理15分鐘，放冷，濾過，取濾液，作為供試品溶液。另取血竭對照藥材0. Ig,加乙醇5ml使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(19 I)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。
(2)薄層色譜法鑒別千山活血膏三七中人參皂苷Rgl的方法為取本品10g，加水70ml，加熱煮沸30分鐘，放冷，濾過，濾液加乙醚30ml振搖提取，棄去乙醚液，水層用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液30ml洗滌，棄去氨液，再用正丁醇飽和的水30ml洗漆，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取三七對照藥材lg，加甲醇20ml，回流提取I小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，同法制成對照藥材溶液；再取人參皂苷RbURgl及三七皂苷Rl對照品，加甲醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各5 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2)10°C以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中。在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，分別顯相同顏色的斑點或熒光斑點。
(3)高效液相色譜-蒸發(fā)光閃射檢測法同時測定千山活血膏三七中人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl以及三七皂苷Rl三種成分的含量，條件為 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動相，按下表進行梯度洗脫
全文摘要
本發(fā)明公開了一種千山活血膏的質(zhì)量控制方法。千山活血膏收載于國家中成藥地方標準WS-10415(ZD-0415)-2002。本發(fā)明即為該中成藥的一種質(zhì)量控制方法，包括薄層色譜鑒別方中血竭和三七藥材，高效液相色譜測定方中三七所含人參皂苷Rg1、Rb1以及三七皂苷R1。含量測定采用高效液相色譜-蒸發(fā)光閃射檢測法測定，克服了原質(zhì)量標準含量測定采用紫外檢測器203nm檢測受溶劑影響的弊端，效果良好，可很好地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。
文檔編號G01N30/90GK102809626SQ20121030171
公開日2012年12月5日 申請日期2012年8月23日 優(yōu)先權日2012年8月23日
發(fā)明者張修成, 張宇 申請人:北京修成藥業(yè)有限公司