專利名稱：一種lc-ms/ms聯(lián)用檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于煙草和化學技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及使用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法。
背景技術(shù)：
卷煙在燃燒過程中，發(fā)生了蒸餾、干餾、熱解、合成、冷凝等多種物理和化學反應(yīng)，形成大量新生化合物，煙氣成分非常復(fù)雜。側(cè)流煙氣是從卷煙燃燒錐直接釋放到空氣以及從卷煙紙擴散出來的煙氣物質(zhì)，大部分側(cè)流煙氣是在卷煙陰燃過程中發(fā)生的，也有一小部分是抽吸過程中生成，因此，主流和側(cè)流煙氣的化合物種類基本相同，但是含量有較大差另O。氨基甲酸乙酯在卷煙主流和側(cè)流煙氣中均有分布，是Hoffmann 43種煙氣有害成分之 一，也被美國食品及藥物管理局(FDA)列為煙草中的致癌物質(zhì)(CA)和生殖系統(tǒng)/發(fā)育有毒物(RDT)。氨基甲酸乙酯是一種多位點致癌物，可導(dǎo)致肺癌、肝癌、皮膚癌和淋巴癌等多種癌癥，在生物體內(nèi)的代謝途徑主要有兩條，一條是酯酶代謝，另一條主要與細胞色素P450有關(guān)，進入生物體后，約O. 5%左右的氨基甲酸乙酯被細胞色素P450氧化為乙烯基-氨基-甲酸乙酯，隨后形成乙烯基-氨基-甲酸乙酯環(huán)氧化物，該種環(huán)氧化物在體內(nèi)形成DNA加聚物，造成DNA雙鏈損壞，從而導(dǎo)致細胞癌變，約O. 1%的氨基甲酸乙酯被細胞色素P450氧化后形成的物質(zhì)能夠?qū)е翫NA雙鏈復(fù)制時錯配，從而造成基因的嚴重缺失或突變。氨基甲酸乙酯主要存在于發(fā)酵食品及酒類飲料中，加拿大衛(wèi)生與福利組織對酒類中氨基甲酸乙酯含量的最高濃度做了相關(guān)規(guī)定，美國、日本等其他國家隨后也有類似的規(guī)定。目前建立的氨基甲酸乙酯的檢測方法主要集中于泡菜、酸奶、面包等發(fā)酵食品及黃酒、白蘭地等酒類飲料行業(yè)。中國專利200910099554. O公開“一種檢測黃酒中氨基甲酸乙酯的方法”，該方法通過減壓蒸懼一與鹽酸及9-羥基噸溶液混合進行衍生化反應(yīng)一利用高校液相色譜儀對組分進行分離，然后采用外標法計算氨基甲酸乙酯的含量。該方法可以有效檢測黃酒中氨基甲酸乙酯。另外中國專利201110339615. 3和中國專利201110288339. 2分別公開了一種在蒸餾酒和飲料中氨基甲酸乙酯的檢測方法。隨著公眾對吸煙與健康問題的日益關(guān)注，卷煙煙氣有害成分一尤其是氨基甲酸乙酯的含量一成為人們關(guān)注的焦點問題，但是，由于上述專利方法中的基質(zhì)組成較為簡單，干擾組分較小，而側(cè)流煙氣組成復(fù)雜，成分種類繁多，存在的檢測干擾因素更多、更復(fù)雜、基質(zhì)干擾嚴重，食品行業(yè)建立的檢測方法能否適用于側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯的測定尚未可知，而目前國內(nèi)外尚沒有檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯的任何文獻報道和專利。環(huán)境煙草煙氣(ETS)是重要的室內(nèi)污染物，被動吸煙者感受的就是該種物質(zhì)，而卷煙的側(cè)流煙氣是環(huán)境煙草煙氣的主要來源，約占環(huán)境煙草煙氣的85%。隨著公眾對吸煙與健康問題的日益關(guān)注，卷煙中有害成分釋放量逐漸成為人們關(guān)注的焦點。目前，加拿大等一些國家和地區(qū)已經(jīng)制定了相關(guān)的法律，要求卷煙生產(chǎn)商提供卷煙煙氣中有害成分的釋放量，有鑒于此，建立一種檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法對研究卷煙抽吸過程中氨基甲酸乙酯在卷煙主流和側(cè)流煙氣中的分布規(guī)律有著重要意義，也有利于客觀評價卷煙危害性的大小。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種操作簡便、分離效果好、定性準確、樣品分析時間短、檢測靈敏度高的使用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜LC-MS/MS檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法。本發(fā)明提供一種LC-MS/MS聯(lián)用檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，包括以下步驟利用魚尾罩和玻璃纖維濾片捕集卷煙側(cè)流煙氣中的氨基甲酸乙酯，用乙醇萃取濾片和清洗魚尾罩，萃取液稀釋后經(jīng)固相萃取小柱，用二氯甲烷洗脫，洗脫液用高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀進行檢測，采用內(nèi)標法得到卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯的含量。進一步地，所述內(nèi)標物為氘代氨基甲酸乙酯。 進一步地，所述固相萃取小柱固定相為石墨化炭黑。進一步地，所述高效液相色譜儀條件為C18反相柱，檢測溫度30°C，進樣量I μ L 10 μ L，流速O. 2 O. 4mL/min,乙腈和水作為流動相進行梯度洗脫；所述質(zhì)譜儀條件為離子化模式為電噴霧；掃描模式為正離子；霧化氣35 45psi ;氣簾氣IOpsi ;輔助加熱氣45 55psi ;碰撞氣5psi ;離子源噴射電壓5000 5800V ;離子源溫度350 400°C。進一步地，所述高效液相色譜儀流動相A為含O. 1%乙酸的乙腈/水以V:V=90:10的混合溶液，流動相B為乙腈；梯度洗脫程序為
權(quán)利要求
1.一種LC-MS/MS聯(lián)用檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，包括以下步驟利用魚尾罩和玻璃纖維濾片捕集卷煙側(cè)流煙氣中的氨基甲酸乙酯，用乙醇萃取濾片和清洗魚尾罩，萃取液稀釋后經(jīng)固相萃取小柱凈化，用二氯甲烷洗脫，洗脫液用高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀進行檢測，采用內(nèi)標法得到卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的LC-MS/MS聯(lián)用檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述內(nèi)標物為氘代氨基甲酸乙酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的LC-MS/MS聯(lián)用檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述固相萃取小柱固定相為石墨化炭黑。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的LC-MS/MS聯(lián)用檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述高效液相色譜儀條件為C18反相柱，檢測溫度30 V，進樣量I y L 10 u L，流速0. 2 0. 4mL/min,乙腈和水作為流動相進行梯度洗脫；所述質(zhì)譜儀條件為 離子化模式為電噴霧；掃描模式為正離子；霧化氣35 45psi ;氣簾氣IOpsi ;輔助加熱氣45 55psi ;碰撞氣5psi ;離子源噴射電壓5000 5800V ;離子源溫度350 40CTC。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的LC-MS/MS聯(lián)用檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述高效液相色譜儀流動相A為含0. 1%乙酸的乙腈/水以V:V=90:10的混合溶液，流動相B為乙腈；梯度洗脫程序為__
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的LC-MS/MS聯(lián)用檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，包括如下步驟 1)將待測卷煙在GB/T16447-2004規(guī)定的煙草及煙草制品調(diào)節(jié)和測試的大氣環(huán)境條件下平衡48h ;確定和標記抽吸卷煙的煙蒂長度，按照YC/T185中側(cè)流煙氣抽吸方法，調(diào)節(jié)側(cè)流吸煙機的抽吸流量為3000mL/min，抽吸3支卷煙，用魚尾罩和玻璃纖維濾片捕集側(cè)流煙氣總粒相物； 2)抽吸完成后，將濾片置于IOOmL錐形瓶中，向其中加入IOmL含有約320納克(ng)內(nèi)標物的乙醇溶液,并用IOmL乙醇分2 3次清洗魚尾罩，清洗液一并轉(zhuǎn)移入錐形瓶中，錐形瓶置于振蕩器上振蕩30min ； 3)移取上述萃取液約IOmL于容器中，向其中加入IOOmL去離子水稀釋，將稀釋液轉(zhuǎn)移至固相萃取小柱上，過柱速度約4mL/min，流出液棄去，抽干小柱3min后，采用二氯甲烷洗脫，收集洗脫液； 4)洗脫液于50°C條件下采用氮吹濃縮儀濃縮至干，用約ImL流動相重新溶解后，經(jīng)高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀進行測定 所述高效液相色譜儀條件為C18反相柱，檢測溫度30°C，進樣量I y L IOii L，流速.0.2 0. 4mL/min,乙腈和水作為流動相進行梯度洗脫； 所述質(zhì)譜儀條件為離子化模式為電噴霧；掃描模式為正離子；霧化氣35 45L/min ;氣簾氣10L/min ;輔助加熱氣45 55L/min ;碰撞氣5L/min ;離子源噴射電壓5000 .5800V ;離子源溫度350 400°C ； . 5)配制10ng/mL 600ng/mL的氨基甲酸乙酯系列標準工作溶液,濃度梯度5個以上且均勻分布，各級標準溶液含有的內(nèi)標的濃度為300ng/mL左右；利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀對標準溶液進行檢測，將得到的氨基甲酸乙酯峰面積與內(nèi)標峰面積的比值作為縱坐標，氨基甲酸乙酯濃度與內(nèi)標濃度比作為橫坐標，繪制標準曲線并得到回歸方程，然后在相同條件下對樣品進行檢測，將得到的氨基甲酸乙酯與內(nèi)標的峰面積比值代入方程中，即可計算得出氨基甲酸乙酯的含量。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的LC-MS/MS聯(lián)用檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述氨基甲酸乙酯的定量離子對m/z為90. 0/62. 1，定性離子對m/z為.90. 0/44. 0，駐留時間為200ms，碰撞能為14. OV。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的LC-MS/MS聯(lián)用檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述氘代氨基甲酸乙酯的定量離子對m/z為95. 0/63. 2，定性離子對m/z為.95. 0/44. 2，駐留時間為200ms，碰撞能為25. O。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種LC-MS/MS聯(lián)用檢測卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法；利用魚尾罩和玻璃纖維濾片捕集卷煙側(cè)流煙氣中的氨基甲酸乙酯，用乙醇萃取濾片和清洗魚尾罩，萃取液稀釋后經(jīng)固相萃取小柱凈化，用二氯甲烷洗脫，洗脫液用高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀進行檢測，采用內(nèi)標法得到卷煙側(cè)流煙氣中氨基甲酸乙酯的含量；該方法操作簡便、分離效果好、定性準確、樣品分析時間短、檢測靈敏度高。
文檔編號G01N30/08GK102809615SQ20121029145
公開日2012年12月5日 申請日期2012年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月16日
發(fā)明者朱懷遠, 莊亞東, 張媛, 劉獻軍, 張映, 熊曉敏, 朱瑩, 沈曉晨 申請人:江蘇中煙工業(yè)有限責任公司