專利名稱：一種基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及薄層色譜分離領(lǐng)域，具體涉及ー種基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
色譜技術(shù)是對(duì)復(fù)雜混合物分離分析最有效的方法。薄層色譜(Thin LayerChromatography)又稱為薄層層析,是屬于固_液吸附色譜。其點(diǎn)樣斑點(diǎn)小、清晰不擴(kuò)散、分 離時(shí)間短、靈敏度高、分離效果好，是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種高效、快速而又簡(jiǎn)單的色譜法。因此，薄層色譜被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化工、環(huán)保、食品等領(lǐng)域，尤其是對(duì)天然化學(xué)產(chǎn)物中有效成分的分離和分析發(fā)揮著很大的作用。與紙層析相比，薄層層析具有較好的分離效能，混合物展開(kāi)分離迅速，一般展開(kāi)ー次約在15-60分鐘，分離效能比紙層析好。此外，樣品溶液上樣量少，一般幾微升至幾十微升就可以在薄層層析板上很好的分離，且操作簡(jiǎn)便，不需要特殊昂貴而又復(fù)雜的儀器，便于普及。因?yàn)楸訉游錾V的固定相物質(zhì)多為惰性無(wú)機(jī)化合物，所以可以使用ー些腐蝕性顯色試劑，這是紙層析法所不能比擬的。另外，薄層色譜的分離容量較紙色譜大，因此可以用作微量物質(zhì)分離的制備色譜。作為ー種純化手段，薄層層析色譜與氣相色譜、液相色譜、紅外光譜等方法聯(lián)用常見(jiàn)于報(bào)道，利用薄層層析色譜做為樣品的前處理方法，操作簡(jiǎn)單，應(yīng)用廣泛。近年來(lái)，食品中農(nóng)藥殘留、獸藥殘留和非法食品添加劑等成為食品安全領(lǐng)域的熱點(diǎn)話題。在檢測(cè)手段上，針對(duì)這些問(wèn)題發(fā)展了一系列檢測(cè)方法，而這些方法中樣品的前處理成為ー個(gè)影響分析質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。為提高儀器靈敏度，減少干擾，固相萃取以及凝膠色譜浄化等技術(shù)在這些樣品前處理中被廣泛應(yīng)用并取得極大的發(fā)展。然而，盡管當(dāng)前固相萃取技術(shù)已經(jīng)成為ー項(xiàng)相當(dāng)成熟的樣品前處理技術(shù)，但本身也ー些不足。如需要一定量的溶劑分別完成浄化、洗脫的過(guò)程，耗材成本較高、溶劑消耗量大、操作過(guò)程較為繁瑣等。因此，將薄層色譜引入這些樣品前處理過(guò)程中，可以通過(guò)較為簡(jiǎn)單的薄層層析過(guò)程對(duì)樣品提取液進(jìn)行浄化，以減少溶劑的消耗，極大的降低了檢測(cè)成本。薄層層析色譜兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，既能適用于少量樣品(幾到幾百微克，最少甚至0.01微克)的分離，調(diào)整吸附層固相物質(zhì)的量，也可分尚較大量的樣品，最多可達(dá)500暈克?，F(xiàn)有技術(shù)中的樣品前處理方法中所使用的薄層層析板，不能方便地隨意裁減和卷曲折疊，得到樣品恒定比移值的條帶進(jìn)行處理時(shí)，富集的目標(biāo)化合物難以被完全洗脫附，不可避免受到其余位置富集物的影響，進(jìn)而影響了制備效率，難以實(shí)現(xiàn)方便快捷的樣品前處理。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法及其應(yīng)用，所要富集的待測(cè)組分能夠有效集中在條帶恒定比移值位置，且富集區(qū)域的色譜條帶可以按需要剪切下來(lái)，用有機(jī)溶劑提取待測(cè)組分，然后用氣相色譜等儀器進(jìn)行定量分析，重現(xiàn)性好，并可同時(shí)分析多個(gè)樣品，快速高效地完成對(duì)復(fù)雜樣品的浄化和待測(cè)物的富集。一種基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法，包括如下步驟在紙基薄層層析板底部位置負(fù)載待測(cè)樣品濃縮液，將紙基薄層層析板放入展開(kāi)槽，加入展開(kāi)劑進(jìn)行薄層層析分離，剪切下恒定比移值位置的目標(biāo)檢測(cè)物條帶，提取待測(cè)物，完成所述的樣品前處理。所述的待測(cè)物即為采用本發(fā)明的前處理方法對(duì)被檢樣品進(jìn)行處理得到的。在固定的層析條件下，待測(cè)物在紙基薄層層析板上的比移值是恒定的，這一點(diǎn)可以通過(guò)預(yù)先的實(shí)驗(yàn)獲得，在之后的前處理過(guò)程中，直接在預(yù)定位置剪切下對(duì)應(yīng)部分的紙基薄層層析板(剪切下恒定比移值位置的目標(biāo)檢測(cè)物條帶)即可。 所述的紙基薄層層析板包括紙基板和涂布在紙基板上的涂布層；所述的紙基板為至少一面覆蓋有聚こ烯膜的紙；所述的涂布層涂布在紙基板的聚こ烯膜上。所述的紙基板的厚度為O. 10 O. 30mm,所述的涂布層的厚度為O. 20 I. 00mm。所述的涂布層采用涂布液制成，該涂布液各組分的質(zhì)量百分比組成為粘合劑O. 75% 7%，吸附劑 12% 33. 25%，水 65% 85%。所述的粘合劑為聚こ烯醇、羧甲基纖維素鈉、淀粉中的ー種或多種，可以使吸附劑牢固地涂布在紙基板上，提高層析板的機(jī)械強(qiáng)度。所述的吸附劑為硅膠、硅藻土、氧化鋁、硅酸鎂、硅酸鈣、碳酸鋅或玻璃粉，吸附劑的粒徑為150目 200目，可以提高分離效果。該紙基薄層層析板可以通過(guò)將粘合劑配制成水溶液形式，過(guò)濾去除不溶物后，カロ入吸附劑，攪拌均勻，成糊狀，采用手工或者機(jī)器涂布的方式涂布在所述的紙基板上，烘干后再裁切成需要的形狀而制成，并且根據(jù)不同行業(yè)的需要還可以在涂布液中加入ー些添加劑，例如煅制石膏、熒光指示劑等。紙基薄層層析板的固相物質(zhì)可以根據(jù)待處理樣品的種類進(jìn)行選擇，紙基薄層層析板的大小規(guī)格根據(jù)待處理樣品的量來(lái)選擇。所述的紙基薄層層析板可以剪切。由于以紙作為基板，該紙基薄層層析板可以任意剪切，因此，目標(biāo)檢測(cè)物的條帶可以方便的剪切下來(lái)，放入有機(jī)溶劑中提取，然后進(jìn)行色譜定量分析，避免了其他位置處組分的干擾，操作方便，分離效能有效提高，對(duì)被測(cè)組分獲得滿意的回收率。所述的紙基薄層層析板可以卷曲折疊。由于以紙作為基板，該紙基薄層層析板可以任意彎曲折疊，攜帯方便，適用于曲面等特殊情況下樣品的處理。所述的紙基薄層層析板寬度可以依據(jù)展開(kāi)槽大小進(jìn)行調(diào)節(jié)。由于紙基薄層層析板可以任意剪切，因此，可以依據(jù)展開(kāi)槽的大小或者被處理樣品濃縮液的量，剪切出合適寬度的紙基薄層層析板進(jìn)行樣品薄層層析，適應(yīng)性更強(qiáng)，且操作更方便。所述的展開(kāi)槽可以是普通的展開(kāi)缸也可以是多個(gè)底部連接相通的卡槽?？ú鄣臄?shù)目依據(jù)樣品的量而定，通常選擇2 10個(gè)，如果樣品的量很大，可以選擇10個(gè)以上以滿足分離要求。所述的薄層層析分離在密封體系下完成，所述的密閉體系可以通過(guò)在展開(kāi)槽上部加蓋實(shí)現(xiàn)。所述的基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法可以同時(shí)處理多個(gè)樣品?？梢酝ㄟ^(guò)在多個(gè)同等規(guī)格的紙基薄層層析板相同位置處負(fù)載不同待測(cè)樣品濃縮液，將紙基薄層層析板放入展開(kāi)槽，加入展開(kāi)劑同時(shí)進(jìn)行薄層層析分離，剪切下恒定比移值位置的目標(biāo)檢測(cè)物條帶，提取待測(cè)物，完成樣品前處理，提高了分離的效率，減少了分離過(guò)程中所用展開(kāi)劑、溫度等條件差異對(duì)分離效果的影響，對(duì)檢測(cè)樣品有非常好的平行性。利用本發(fā)明方法進(jìn)行樣品前處理之后，后續(xù)的色譜等檢測(cè)分離手段均采用現(xiàn)有技木。另外就樣品本身而言，為現(xiàn)有技術(shù)中可以利用薄層層析以及后續(xù)檢測(cè)儀器進(jìn)行分析的各類樣品。本發(fā)明還提供了ー種樣品檢測(cè)方法，將樣品利用本發(fā)明所述的前處理方法進(jìn)行處 理，得到所述的待測(cè)物，然后利用氣相色譜、液相色譜、質(zhì)譜聯(lián)用或紅外光譜等檢測(cè)手段對(duì)所述的待測(cè)物進(jìn)行定量分析。本發(fā)明提供的一種基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法，由于所采用的紙基薄層層析板可以任意裁和卷曲折疊，可以根據(jù)待處理的樣品量方便地裁成某ー規(guī)格，批處理樣品時(shí)，同時(shí)進(jìn)行薄層層析分離，避免了分次處理過(guò)程中層析條件差異對(duì)分離結(jié)果的影響，具有很好的平行性，適應(yīng)不同數(shù)量樣品的處理。同時(shí)，可以將待測(cè)物恒定比移值位置的條帶剪切下來(lái)，進(jìn)行后續(xù)的提取及色譜分析，避免其余位置富集物的干擾，使分析過(guò)程操作簡(jiǎn)單，分離高效。分離過(guò)程中展開(kāi)劑的需要量相對(duì)較少，分離過(guò)程可以在較短時(shí)間內(nèi)完成，所使用的紙基薄層層析板價(jià)廉易得，整個(gè)處理過(guò)程環(huán)保高效，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。
具體實(shí)施例方式制備例I稱取I. Og羧甲基纖維素納，溶于IOOml熱水中，在磁力攪拌下使其全部溶解，再過(guò)濾去除不溶物后，加入粒徑為200目的硅膠20g，繼續(xù)攪拌均勻，得到涂布液，待用。將正面有聚こ烯膜的紙基板平放在平臺(tái)上，再將一部分涂布液倒在紙基板的上邊緣，用玻璃棒或者刮刀將涂布液均勻的涂布在紙基板上。紙基板的厚度為O. 20mm，干燥后涂布層的厚度為
O.30mm。將薄層層析板在110°C環(huán)境中活化30分鐘，置于有干燥劑的干燥箱中備用，將制得的薄層層析板裁切為5cmX IOcm的薄層層析板。實(shí)施例I稱取3份均勻土壤樣品各10. 0g，分別加入100毫升正己烷丙酮以索氏抽提法回流提取，提取液均移入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中濃縮至O. 5毫升。各取濃縮液O. I毫升在點(diǎn)樣區(qū)均勻負(fù)載在3塊制備例I中得到的5cmX IOcm的紙基薄層層析板(硅膠G型)距底部邊緣Icm處，溶劑吹干后，將點(diǎn)樣完成的紙基薄層層析板放入展開(kāi)缸(槽)的卡槽中，以正己烷乙醚(體積比為50 10)混合溶劑進(jìn)行層析分離。待層析分離完成后，剪切下各薄層層析板上目標(biāo)待測(cè)物的條帶，各放入5毫升試管中，均加入正己烷こ醚(體積比為50 10)混合溶劑5毫升，超聲提取5分鐘后取出紙基條帯。將提取液試管置于氮吹儀上以氮?dú)饬骶抵罯. 5毫升以下，再以正己烷分別定容至O. 5毫升，采用氣相色譜-ECD檢測(cè)器檢測(cè)土壌中的有機(jī)氯類化合物。實(shí)施例2分別稱取菠菜、小青菜、黃瓜各20. 0g，每個(gè)樣品平行3份試驗(yàn)。切碎后各加入30毫升こ腈以均質(zhì)器均質(zhì)勻漿，再加入5克氯化鈉、5克硫酸鎂再次均質(zhì)，離心分離后，取上清液15毫升過(guò)無(wú)水硫酸鈉層，移入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中濃縮至O. 5毫升。將濃縮液O. I毫升在點(diǎn)樣區(qū)均勻點(diǎn)樣在制備例I中得到的5cmX IOcm的紙基薄層層析板(硅膠G型)底部邊緣Icm處，溶劑吹干后，將點(diǎn)樣完成的紙基薄層層析板放入展開(kāi)缸(槽)的9個(gè)卡槽，以體積比為I I的苯こ醇混合溶劑進(jìn)行層析分離。待層析分離完成后，剪切下各薄層層析板上目標(biāo)待測(cè)物有機(jī)磷的條帶，放入5毫升試管中，加入丙酮/ ニ氯甲烷(V V= I 1)5毫升，超聲提取5分鐘后取出紙基條帯。將提取液置于氮吹儀上以氮?dú)饬鞔抵罯. 5毫升以下，以丙酮定容至O. 5毫升，采用氣相色譜檢測(cè)有機(jī)磷。實(shí)施例3稱取3份汽水各50. Og于100毫升燒杯中，加熱驅(qū)除ニ氧化碳。稱取3份粉碎的奶糖各10. 0g，用こ醇-氨溶液溶解，再沉淀蛋白，取濾液。稱取3份粉碎的蛋糕各10. 0g， 加少許海砂混勻，熱風(fēng)風(fēng)干，加石油醚去脂肪后，用こ醇-氨溶液溶解再沉淀蛋白，取濾液。三種樣品的處理液用聚酰胺粉吸附其中的色素，再用こ醇-氨溶液溶解全部色素，收集全部溶解液，并與水浴上驅(qū)氨蒸至近干，將濃縮液O. I毫升在點(diǎn)樣區(qū)均勻點(diǎn)樣在制備例I中得到的5cmX IOcm的紙基薄層層析板底部邊緣Icm處，溶劑吹干后，將點(diǎn)樣完成的紙基薄層層析板進(jìn)行放入展開(kāi)缸(槽)的9個(gè)卡槽，同時(shí)進(jìn)行層析分離。待層析分離完成，剪切下各薄層板上顔色接近的條帶，插入5毫升試管中，加4毫升水，超聲提取5分鐘后取出紙基條帯，以水定容至5毫升，采用高效液相色譜檢測(cè)合成色素。
權(quán)利要求
1.一種基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法，其特征在于，包括如下步驟在紙基薄層層析板底部位置負(fù)載待測(cè)樣品濃縮液，將紙基薄層層析板放入展開(kāi)槽，加入展開(kāi)劑進(jìn)行薄層層析分離，剪切下恒定比移值位置的目標(biāo)檢測(cè)物條帶，提取待測(cè)物，完成所述的樣品前處理。
2.如權(quán)利要求I所述的基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法，其特征在于，所述的紙基薄層層析板包括紙基板和涂布在紙基板上的涂布層；所述的紙基板為至少一面覆蓋有聚乙烯膜的紙；所述的涂布層涂布在紙基板的聚乙烯膜上。
3.如權(quán)利要求2所述的基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法，其特征在于，所述的涂布層由涂布液制成，該涂布液各組分的質(zhì)量百分比組成為粘合劑O. 75% 7%，吸附劑12% 33. 25%，水 65% 85%。
4.如權(quán)利要求2所述的基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法，其特征在于，所述的粘合劑為聚乙烯醇、羧甲基纖維素鈉、淀粉中的一種或多種。
5.如權(quán)利要求2所述的基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法，其特征在于，所述的吸附劑為硅膠、硅藻土、氧化鋁、硅酸鎂、硅酸鈣、碳酸鋅或玻璃粉。
6.如權(quán)利要求I所述的基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法，其特征在于，所述的薄層層析分離在密封體系下完成。
7.如權(quán)利要求I所述的基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法，其特征在于，在紙基薄層層析板底部位置以點(diǎn)方式或者以條帶方式完成待測(cè)樣品的濃縮液上樣。
8.一種樣品檢測(cè)方法，其特征在于，將樣品利用權(quán)利要求I 7任一項(xiàng)所述的前處理方法進(jìn)行處理，得到所述的待測(cè)物，然后對(duì)所述的待測(cè)物進(jìn)行定量分析。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種基于紙基薄層層析板的樣品前處理方法及其應(yīng)用，其中樣品前處理方法包括如下步驟在紙基薄層層析板底部位置負(fù)載待測(cè)樣品濃縮液，將紙基薄層層析板放入展開(kāi)槽，加入展開(kāi)劑進(jìn)行薄層層析分離，剪切下恒定比移值位置的目標(biāo)檢測(cè)物條帶，提取待測(cè)物，完成所述的樣品前處理。本發(fā)明方法可以將待測(cè)組分恒定比移值位置的條帶剪切下來(lái)并進(jìn)行后續(xù)的定量分析，避免了其余位置處干擾物質(zhì)的影響，回收率高；可以在同一展開(kāi)條件下，同時(shí)進(jìn)行多條紙基薄層層析分離，避免了處理過(guò)程中條件差異對(duì)分離結(jié)果的影響，平行性好；所使用的紙基薄層層析板價(jià)廉易得，整個(gè)處理過(guò)程操作簡(jiǎn)單，環(huán)保高效，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。
文檔編號(hào)G01N30/08GK102636596SQ20121013400
公開(kāi)日2012年8月15日 申請(qǐng)日期2012年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月28日
發(fā)明者葉海朋, 寧?kù)o恒, 壽林飛, 張宜明, 王姝婷, 王彥波 申請(qǐng)人:杭州市疾病預(yù)防控制中心