專(zhuān)利名稱(chēng)：六味木香制劑的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種藥物組合物制劑的檢測(cè)方法，尤其涉及一種六味木香制劑的檢測(cè)方法，屬于中藥檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
六味木香丸為藏藥，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》藏藥分冊(cè)中，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為WS3-BC-0283-95。該標(biāo)準(zhǔn)記載內(nèi)容主要包括處方木香200g、巴夏嘎360g、余甘子500g、豆蘧80g、石槽子400g、蓽發(fā)100g。制法以上六味，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，用水泛丸，干燥，即得。性狀本品為棕褐色水丸；具木香特異香氣，味酸苦。鑒別取本品2g，加こ酸こ酯20ml，于60 80°C水浴回流30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液；另取木香、石榴子對(duì)照藥材各O. 5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取胡椒堿對(duì)照品，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每ml含胡椒堿Img的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄57頁(yè))試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各10 μ 1，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-こ酸こ酯(6 2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顔色的熒光斑點(diǎn)。噴以5%香草醛濃硫酸溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同顔色的斑點(diǎn)。檢查應(yīng)符合丸劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。功能與主治止吐，止疼。用干“培根木布”引起的疼痛，噯氣，腹脹，嘔吐等。用法與用量一次5 6丸,一日3次。規(guī)格每10丸重6. 5g。貯藏密閉，置陰涼干燥處。木香收載于《中國(guó)藥典》2010年版一部，第57頁(yè)，本品為菊科植物木香Aucklandia lappa decene.的干燥根。秋、冬ニ季采挖,除去泥沙和須根,切段,大的再中剖成瓣，干燥后撞去粗皮。巴夏嘎為S粟科植物小花黃堇Corydalis racemosa(Thunb. )Pers的干燥地上部分，盛花期米收地上部分，晾干或切段晾干備用。余甘子收載于《中國(guó)藥典》2010年版一部，第167頁(yè)，本品系藏族習(xí)用藥材，為大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果實(shí)。冬季至次春果實(shí)成熟時(shí)采收，除去雜質(zhì)，干燥。豆蘧收載于《中國(guó)藥典》2010年版一部,第156頁(yè),本品為姜科植物白豆蘧Amomumkravanh Pierre ex Gagnep.或爪睡 H丑蘧 Amomumcompactun Soland ex Maton 的十す栄成熟果實(shí)。按產(chǎn)地不同分為“原豆蓮”和“印尼豆蓮”。蓽茇收載于《中國(guó)藥典》2010年版一部，第219頁(yè)，本品為胡椒科植物蓽茇Piper longum L.的干燥近成熟或成熟果穗。果穗由綠變黑時(shí)采收，除去雜質(zhì)，曬干。石榴子收載于中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藏藥部頒標(biāo)準(zhǔn)第一冊(cè)第26頁(yè)(標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)WS3-BC-0026-95)。本品為安石槽科植物安石槽Punicagranatum L.的干燥種子。秋季果實(shí)成熟后除去果皮，曬干。由上述內(nèi)容可見(jiàn)，原部頒標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)木香、石榴子、蓽茇的薄層鑒別均采用統(tǒng)ー的提取方法和展開(kāi)劑條件進(jìn)行，實(shí)踐中經(jīng)過(guò)多次的薄層鑒別試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，木香仍有陰性干擾、石榴子的Rf值偏高、蓽茇供試品溶液無(wú)任何斑點(diǎn)，標(biāo)準(zhǔn)的重復(fù)性和專(zhuān)屬性較差，無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)六味木香丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的可控性。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的是提供一種六味木香制劑的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法改進(jìn)了原部頒標(biāo)準(zhǔn)中木香、石榴子、蓽茇的提取方法和展開(kāi)劑，改進(jìn)后的檢測(cè)方法與原標(biāo)準(zhǔn)相比，重復(fù)性和專(zhuān)屬性較強(qiáng)，符合簡(jiǎn)便、快速的原則；建立了六味木香制劑中余甘子的專(zhuān)屬性薄層鑒別方法。 在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式中，進(jìn)ー步建立了六味木香制劑中木香所含木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的含量測(cè)定方法，以便提供一種重現(xiàn)性好、專(zhuān)屬性強(qiáng)，符合準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、靈敏、快速的原則，可以有效的控制產(chǎn)品的質(zhì)量，使其質(zhì)量穩(wěn)定、安全可控。針對(duì)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種六味木香制劑的檢測(cè)方法，所述六味木香制劑包含木香、巴夏嘎、余甘子、豆蓮、石榴子和蓽茇六種藥材成分；其特征在干，該方法通過(guò)薄層色譜法鑒別所述六味木香制劑中的木香、石榴子、余甘子和/或蓽茇；其中(A)所述木香和石榴子的鑒別包括以下步驟(I)取所述六味木香制劑，加入こ酸こ酷，超聲提取，將所得提取液濃縮后作為木香、石榴子供試品溶液；(2)將上步所得木香、石榴子供試品溶液點(diǎn)樣于硅膠薄層板，以環(huán)己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯為展開(kāi)劑展開(kāi)進(jìn)行鑒別；和/或(B)所述余甘子和蓽茇的鑒別包括以下步驟(I’ )取所述六味木香制劑，加入こ醇，超聲提取，將所得提取液濃縮后作為余甘子、蓽茇供試品溶液；(2’ )將上步所得余甘子、蓽茇供試品溶液點(diǎn)樣于硅膠薄層板，以石油醚-こ酸こ酷-甲酸為展開(kāi)劑展開(kāi)進(jìn)行鑒別。優(yōu)選地，所述步驟(I)中還包括取木香、石榴子對(duì)照藥材，按照所述木香、石榴子供試品溶液的配制方法分別制成木香、石榴子對(duì)照藥材溶液；步驟(2)中還包括將木香、石榴子對(duì)照藥材溶液點(diǎn)樣于硅膠薄層板，以環(huán)己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯為展開(kāi)劑展開(kāi)；和/或所述步驟(Γ )中還包括取余甘子對(duì)照藥材，加入こ醇，超聲提取，將所得提取液濃縮后作為余甘子對(duì)照藥材溶液；取胡椒堿對(duì)照品，加甲醇制成胡椒堿的甲醇溶液，作為胡椒堿對(duì)照品溶液；步驟(2’)中還包括將余甘子對(duì)照藥材溶液、胡椒堿對(duì)照品溶液點(diǎn)樣于硅膠薄層板，以石油醚-こ酸こ酯-甲酸為展開(kāi)劑展開(kāi)。優(yōu)選地，所述步驟⑴中還包括按處方比例及制備エ藝，分別配制不含木香、石榴子的陰性樣品，并照所述木香、石榴子供試品溶液的配制方法制成木香、石榴子陰性樣品溶液；步驟(2)中還包括將木香、石榴子陰性樣品溶液點(diǎn)樣于硅膠薄層板，以環(huán)己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯為展開(kāi)劑展開(kāi)；和/或所述步驟(Γ )中還包括按處方比例及制備エ藝，分別配制不含余甘子、蓽茇的陰性樣品，并照所述余甘子、蓽茇供試品溶液的配制方法制成余甘子、蓽茇陰性樣品溶液；步驟(2’ )中還包括將余甘子、蓽茇陰性樣品溶液點(diǎn)樣于硅膠薄層板，以石油醚-こ酸こ酷-甲酸為展開(kāi)劑展開(kāi)。優(yōu)選地，所述步驟⑴為取六味木香制劑O. 5 5重量份，研細(xì)后，加こ酸こ酯5 40體積份,超聲處理10 60分鐘,濾過(guò),濾液濃縮至O. 5 5體積份,作為木香、石槽子供試品溶液；另取木香、石榴子對(duì)照藥材各O. I 3重量份，按照所述木香、石榴子供試品溶液的制備方法分別制成木香、石榴子對(duì)照藥材溶液；按處方比例及制備エ藝，配制不含木香、石榴子的陰性樣品，并按所述木香、石榴子供試品溶液的配制方法制成木香、石榴子陰性樣品溶液；其中，上述重量份以g計(jì)量時(shí)，體積份以mL計(jì)。優(yōu)選地，所述步驟(I)為取六味木香制劑2重量份，研細(xì)后，加こ酸こ酯20體積 份，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至2體積份，作為木香、石榴子供試品溶液；另取木香、石榴子對(duì)照藥材各O. 5重量份，按照所述木香、石榴子供試品溶液的制備方法分別制成木香、石榴子對(duì)照藥材溶液；按處方比例及制備エ藝，配制不含木香、石榴子的陰性樣品，并按所述木香、石榴子供試品溶液的配制方法制成木香、石榴子陰性樣品溶液；其中，上述重量份以g計(jì)量時(shí)，體積份以mL計(jì)。優(yōu)選地，所述步驟(2)為照薄層色譜法《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B試驗(yàn)，吸取步驟(I)中制得的樣品溶液，將其分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯為展開(kāi)劑，薄層板置展開(kāi)缸中飽和，展開(kāi)，取出，晾干，噴以香草醛硫酸溶液，風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。優(yōu)選地，所述吸取的樣品溶液中的供試品溶液和陰性樣品溶液均為5 20 μ I、對(duì)照藥材溶液為I 10 μ 1，優(yōu)選所述吸取的樣品溶液中的供試品溶液和陰性樣品溶液均為10μ I、對(duì)照藥材溶液為5μ I ;所述展開(kāi)劑環(huán)己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯的體積比為8 22 : 3 8 : O. I 1，優(yōu)選體積比為15 5 O. 5 ;所述薄層板置展開(kāi)缸中飽和O 40分鐘，優(yōu)選飽和20分鐘；所述香草醛硫酸溶液重量體積百分比為5% (稱(chēng)取5重量份香草醛，加100體積份硫酸，攪拌均勻即得。重量份/體積份=g/ml)，用熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。優(yōu)選地，所述步驟(I，)為:取六味木香制劑O. 5 5重量份，研細(xì)后，加こ醇5 40體積份，超聲處理10 60分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至O. 5 5體積份，作為余甘子、蓽茇供試品溶液；另取余甘子對(duì)照藥材O. I 3重量份，按照所述余甘子、蓽茇供試品溶液的制備方法制成余甘子對(duì)照藥材溶液；再取胡椒堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml含胡椒堿O. 5 3mg的溶液，作為胡椒堿對(duì)照品溶液；按處方比例及制備エ藝，配制不含余甘子、蓽茇的陰性樣品，并按所述余甘子、蓽茇供試品溶液的配制方法制成余甘子、蓽茇陰性樣品溶液；其中，上述重量份以g計(jì)量吋，體積份以mL計(jì)。優(yōu)選地，所述步驟(Γ )為取六味木香制劑2重量份，研細(xì)后，加こ醇20體積份，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至2體積份，作為余甘子、蓽茇供試品溶液；另取余甘子對(duì)照藥材O. 5重量份，按照所述余甘子、蓽茇供試品溶液的制備方法制成余甘子對(duì)照藥材溶液；再取胡椒堿對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每Iml含胡椒堿Img的溶液，作為胡椒堿對(duì)照品溶液；按處方比例及制備エ藝，配制不含余甘子、蓽茇的陰性樣品，并按所述余甘子、蓽茇供試品溶液的配制方法制成余甘子、蓽茇陰性樣品溶液；其中，上述重量份以g計(jì)量時(shí)，體積份以HiL計(jì)。優(yōu)選地，所述步驟(2’ )為照薄層色譜法《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B試驗(yàn)，吸取步驟(Γ)中制得的樣品溶液，將其分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚-こ酸こ酯-甲酸為展開(kāi)劑，薄層板置展開(kāi)缸中飽和，展開(kāi)，取出，晾干，于254nm紫外光燈下檢視。 優(yōu)選地，所述吸取的樣品溶液均為5 20 μ 1，優(yōu)選均為10 μ I ;所述石油醚_こ酸こ酷-甲酸的體積比為I 10 : 2 6 : O. 05 O. 5，優(yōu)選體積比為6 4 O. 25，所述石油醚的沸程為60 90°C ;所述薄層板置展開(kāi)缸中飽和O 40分鐘，優(yōu)選飽和20分鐘。優(yōu)選地，所述檢測(cè)方法進(jìn)ー步包括用高效液相色譜法測(cè)定所述六味木香制劑中木香所含木香烴內(nèi)酯和/或去氫木香內(nèi)酯的含量，其中所述高效液相色譜法測(cè)定的步驟包括(I”)制備木香供試品溶液，以及木香烴內(nèi)酯和/或去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品溶液；(2”)將上步所得木香供試品溶液，以及木香烴內(nèi)酯和/或去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品溶液注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。優(yōu)選地，所述步驟(I”)中還包括制備木香陰性樣品溶液；所述步驟(2”)中還包括將木香陰性樣品溶液注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。優(yōu)選地，所述高效液相色譜法測(cè)定的色譜條件為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為60 70 30 40的こ腈-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為225±2nm ;柱溫20 40°C，理論板數(shù)按木香烴內(nèi)酯峰計(jì)算不低于3000。優(yōu)選地，所述高效液相色譜法測(cè)定的色譜條件為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為65 35的こ腈-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm ;柱溫25°C，理論板數(shù)按木香烴內(nèi)酯峰計(jì)算不低于3000。優(yōu)選地，所述步驟(I”)為取六味木香制劑O. I 3重量份，研細(xì)后，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10 50體積份，稱(chēng)定重量，在功率250W，頻率40kHz下超聲處理15 45分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為木香供試品溶液；另外精密稱(chēng)取木香烴內(nèi)酯對(duì)照品和去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml含木香烴內(nèi)酯20 140 μ g和去氫木香內(nèi)酯40 200 μ g的混合溶液，作為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯混合對(duì)照品溶液；按處方比例及制備エ藝，配制不含木香的陰性樣品，并按所述木香供試品溶液的配制方法制成木香陰性樣品溶液；其中，上述重量份以g計(jì)量時(shí)，體積份以mL計(jì)。優(yōu)選地，所述步驟(I”)為取六味木香制劑I重量份，研細(xì)后，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25體積份，稱(chēng)定重量，在功率250W，頻率40kHz下超聲處理30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為木香供試品溶液；另外精密稱(chēng)取木香烴內(nèi)酯對(duì)照品與和去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每Iml含木香烴內(nèi)酯40 μ g和去氫木香內(nèi)酯60 μ g的混合溶液，作為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯混合對(duì)照品溶液；按處方比例及制備エ藝，配制不含木香的陰性樣品，并按所述木香供試品溶液的配制方法制成木香陰性樣品溶液；其中，上述重量份以g計(jì)量吋，體積份以mL計(jì)。優(yōu)選地，所述步驟(2” )為分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液各5 20 μ 1，優(yōu)選各10 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。優(yōu)選地，所述六味木香制劑的原料藥組成包括木香200重量份、巴夏嘎360重量份、余甘子500重量份、丑蘧80重量份、石槽子400重量份和蓽發(fā)100重量份。優(yōu)選地，所述六味木香制劑的制備方法為將所述原料藥粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，加水適量制丸，即得丸劑；或?qū)⑺鲈纤幏鬯槌杉?xì)粉，過(guò)篩，混勻，按藥劑學(xué)常規(guī)方法，加入常規(guī)輔料，制成臨床上接受的ロ服制劑顆粒劑、丸剤、膠囊劑、片劑或散剤。優(yōu)選地，所述六味木香制劑為顆粒劑、丸劑、膠囊劑、片劑或散劑。該藏藥六味木香制劑具有和胃，止痛，止吐作用。用于治療“培根木布”(相當(dāng)于胃炎，消化道潰瘍)引起的上腹部劇痛，惡心嘔吐，噯氣等。本發(fā)明的檢測(cè)方法對(duì)處方中木香、石榴子、余甘子和蓽茇進(jìn)行了薄層鑒別研究。本發(fā)明進(jìn)ー步建立了木香所含木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯高效液相色譜法含量測(cè)定方法。本發(fā)明的檢測(cè)方法具有重現(xiàn)性、穩(wěn)定性好、操作方法簡(jiǎn)便、精密度高、專(zhuān)屬性強(qiáng)、斑點(diǎn)顯色清晰、分離度好等優(yōu)點(diǎn)；通過(guò)建立方法可靠，專(zhuān)屬性強(qiáng)的質(zhì)量檢測(cè)方法，能夠有效控制六味木香制劑的質(zhì)量，使六味木香制劑的質(zhì)量達(dá)到穩(wěn)定、安全可控。


以下，結(jié)合附圖來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方案，其中圖I為部頒標(biāo)準(zhǔn)鑒別方法鑒別木香、石榴子、蓽茇的薄層色譜圖；圖中1-3為供試品，4為木香對(duì)照藥材，5為木香陰性樣品，6石榴子對(duì)照藥材，7為石榴子陰性樣品，8為胡椒堿對(duì)照品，9為蓽茇陰性樣品。圖2為本發(fā)明所述的木香、石榴子的薄層色譜圖；圖中1-3為供試品，4-5為木香對(duì)照藥材，6為木香陰性樣品，7-9為供試品，10-11為石榴子對(duì)照藥材，12為石榴子陰性樣
品O圖3為本發(fā)明所述的余甘子、蓽茇的薄層色譜圖；圖中1-4為供試品，5為余甘子對(duì)照藥材，6為余甘子陰性樣品，7-10為供試品，11為胡椒堿對(duì)照品，12為蓽茇陰性樣品。圖4為本發(fā)明所述的木香所含木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的色譜圖；其中色譜圖A為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品；色譜圖B為木香供試品；色譜圖C為木香陰性樣
品O圖5為本發(fā)明所述木香烴內(nèi)酯的峰面積與對(duì)照品濃度的線性關(guān)系圖。圖6為本發(fā)明所述木香烴內(nèi)酯的峰面積與對(duì)照品濃度的線性關(guān)系圖。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例只是用于說(shuō)明本發(fā)明而不是限制本發(fā)明。除非另外說(shuō)明，本發(fā)明實(shí)施例中所用的展開(kāi)劑和流動(dòng)相的比值均為體積比。
_5] 實(shí)驗(yàn)例I :木香、石榴子、蓽茇的薄層鑒別I. I按照部頒標(biāo)準(zhǔn)鑒別方法鑒別木香、石榴子和蓽茇供試品溶液的制備取所述六味木香制劑2g，加こ酸こ酯20ml，于60 80°C水浴回流30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液；對(duì)照藥材溶液的制備取木香、石槽子對(duì)照藥材各O. 5g,同法制成對(duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取胡椒堿對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每Iml含胡椒堿Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；木香陰性樣品溶液的制備按處方比例，配制不含木香的陰性樣品，并照上述供試品溶液的制備方法制成木香陰性樣品溶液；石榴子陰性樣品溶液的制備按處方比例，配制不含石榴子的陰性樣品，并照上述供試品溶液的制備方法制成石榴子陰性樣品溶液；蓽茇陰性樣品溶液的制備按處方比例，配制不含蓽茇的陰性樣品，并照上述供試 品溶液的制備方法制成蓽茇陰性樣品溶液。照薄層色譜法《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B試驗(yàn)，吸取上述六種溶液各10 μ I,點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，以環(huán)己燒-こ酸こ酯(6 : 2)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顔色的熒光斑點(diǎn)。噴以重量體積百分比為5% (稱(chēng)取5重量份香草醛，加100體積份硫酸，攪拌均勻即得。重量份/體積份=g/ml)香草醛濃硫酸溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同顔色的斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)附圖I所示木香的陰性有干擾；石榴子的Rf值太大；蓽茇供試品溶液中在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上無(wú)斑點(diǎn)，重復(fù)幾次結(jié)果仍然不理想，故在此檢測(cè)方法中只將木香和石榴子采用了統(tǒng)一方法，并對(duì)提取方法和展開(kāi)劑進(jìn)行了改進(jìn)和完善，蓽茇另外進(jìn)行了薄層鑒別。I. 2本發(fā)明鑒別木香、石榴子的薄層色譜篩選試驗(yàn)(I)儀器乳鉢、量筒、圓底燒瓶、回流裝置、蒸發(fā)皿、點(diǎn)樣器、層析缸、噴霧瓶、分析天平(梅特勒托利多、型號(hào)XS205)、超聲波提取器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司、型號(hào)SK8200HP)、娃膠G薄層板(青島海洋化工廠、規(guī)格200 X 200mm)。(2)對(duì)照藥材木香對(duì)照藥材(批號(hào)120921-200506)、石榴子對(duì)照藥材(批號(hào)121431-200501)，均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。(3)試劑こ酸こ酷、ニ氯甲烷、こ醇、甲醇、濃硫酸、香草醛、苯、甲酸こ酷、甲酸、環(huán)己烷、蒸餾水。(4)檢驗(yàn)方法提取溶劑的選擇分別采用こ醇、こ酸こ酷、甲醇為提取溶劑；提取方法的選擇分別采用超聲提取和回流提??；展開(kāi)劑的選擇分別采用環(huán)己烷-こ酸こ酯(6 2)、苯-こ酸こ酯(19 I)、環(huán)己烷-甲酸こ酷-甲酸(15 5 I)、環(huán)己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯(15 :5:0.5)為展開(kāi)劑。分別選擇以上提取溶劑、提取方法和展開(kāi)劑進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果如下
權(quán)利要求
1.一種六味木香制劑的檢測(cè)方法，所述六味木香制劑包含木香、巴夏嘎、余甘子、豆蓮、石榴子和蓽茇六種藥材成分；其特征在干，該方法通過(guò)薄層色譜法鑒別所述六味木香制劑中的木香、石榴子、余甘子和/或蓽茇；其中 (A)所述木香和石榴子的鑒別包括以下步驟 (1)取所述六味木香制劑，加入こ酸こ酷，超聲提取，將所得提取液濃縮后作為木香、石榴子供試品溶液； (2)將上步所得木香、石榴子供試品溶液點(diǎn)樣于硅膠薄層板，以環(huán)己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯為展開(kāi)劑展開(kāi)進(jìn)行鑒別；和/或 (B)所述余甘子和蓽茇的鑒別包括以下步驟 (Γ )取所述六味木香制劑，加入こ醇，超聲提取，將所得提取液濃縮后作為余甘子、蓽茇供試品溶液； (2’)將上步所得余甘子、蓽茇供試品溶液點(diǎn)樣于硅膠薄層板，以石油醚-こ酸こ酷-甲酸為展開(kāi)劑展開(kāi)進(jìn)行鑒別。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，其中 所述步驟(I)中還包括取木香、石榴子對(duì)照藥材，按照所述木香、石榴子供試品溶液的配制方法分別制成木香、石榴子對(duì)照藥材溶液；步驟(2)中還包括將木香、石榴子對(duì)照藥材溶液點(diǎn)樣于硅膠薄層板，以環(huán)己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯為展開(kāi)劑展開(kāi)；和/或 所述步驟(Γ )中還包括取余甘子對(duì)照藥材，加入こ醇，超聲提取，將所得提取液濃縮后作為余甘子對(duì)照藥材溶液；取胡椒堿對(duì)照品，加甲醇制成胡椒堿的甲醇溶液，作為胡椒堿對(duì)照品溶液；步驟(2’)中還包括將余甘子對(duì)照藥材溶液、胡椒堿對(duì)照品溶液點(diǎn)樣于硅膠薄層板，以石油醚-こ酸こ酯-甲酸為展開(kāi)劑展開(kāi)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的檢測(cè)方法，其中 所述步驟(I)中還包括按處方比例及制備エ藝，分別配制不含木香、石榴子的陰性樣品，并照所述木香、石榴子供試品溶液的配制方法制成木香、石榴子陰性樣品溶液；步驟(2)中還包括將木香、石榴子陰性樣品溶液點(diǎn)樣于硅膠薄層板，以環(huán)己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酷為展開(kāi)劑展開(kāi)；和/或 所述步驟(Γ )中還包括按處方比例及制備エ藝，分別配制不含余甘子、蓽茇的陰性樣品，并照所述余甘子、蓽茇供試品溶液的配制方法制成余甘子、蓽茇陰性樣品溶液；步驟(2’ )中還包括將余甘子、蓽茇陰性樣品溶液點(diǎn)樣于硅膠薄層板，以石油醚-こ酸こ酯-甲酸為展開(kāi)劑展開(kāi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其中 所述步驟(I)為取六味木香制劑0.5 5重量份，研細(xì)后，加こ酸こ酯5 40體積份，超聲處理10 60分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至O. 5 5體積份，作為木香、石榴子供試品溶液；另取木香、石榴子對(duì)照藥材各O. I 3重量份，按照所述木香、石榴子供試品溶液的制備方法分別制成木香、石榴子對(duì)照藥材溶液；按處方比例及制備エ藝，配制不含木香、石榴子的陰性樣品，并按所述木香、石榴子供試品溶液的配制方法制成木香、石榴子陰性樣品溶液；其中，上述重量份以g計(jì)量時(shí)，體積份以mL計(jì)； 優(yōu)選地，所述步驟(I)為取六味木香制劑2重量份，研細(xì)后，加こ酸こ酯20體積份，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至2體積份，作為木香、石榴子供試品溶液；另取木香、石榴子對(duì)照藥材各O. 5重量份，按照所述木香、石榴子供試品溶液的制備方法分別制成木香、石榴子對(duì)照藥材溶液；按處方比例及制備エ藝，配制不含木香、石榴子的陰性樣品，并按所述木香、石榴子供試品溶液的配制方法制成木香、石榴子陰性樣品溶液；其中，上述重量份以g計(jì)量時(shí)，體積份以mL計(jì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求I至4中任一項(xiàng)所述的檢測(cè)方法，其中 所述步驟(2)為照薄層色譜法《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B試驗(yàn)，吸取步驟(I)中制得的樣品溶液，將其分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯為展開(kāi)劑，薄層板置展開(kāi)缸中飽和，展開(kāi)，取出，晾干，噴以香草醛硫酸溶液，風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其中 所述吸取的樣品溶液中的供試品溶液和陰性樣品溶液均為5 20 μ I、對(duì)照藥材溶液為I 10 μ 1，優(yōu)選所述吸取的樣品溶液中的供試品溶液和陰性樣品溶液均為10μ I、對(duì)照藥材溶液為5μ I;所述展開(kāi)劑環(huán)己烷-ニ氯甲烷-こ酸こ酯的體積比為8 22 3 8 O. I 1，優(yōu)選體積比為15 : 5 : O. 5 ;所述薄層板置展開(kāi)缸中飽和O 40分鐘，優(yōu)選飽和20分鐘；所述香草醛硫酸溶液重量體積百分比為5%，用熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其中 所述步驟(Γ )為取六味木香制劑O. 5 5重量份，研細(xì)后，加こ醇5 40體積份，超聲處理10 60分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至O. 5 5體積份，作為余甘子、蓽茇供試品溶液；另取余甘子對(duì)照藥材O. I 3重量份，按照所述余甘子、蓽茇供試品溶液的制備方法制成余甘子對(duì)照藥材溶液；再取胡椒堿對(duì)照品適量，加甲醇制成姆Iml含胡椒堿O. 5 3mg的溶液，作為胡椒堿對(duì)照品溶液；按處方比例及制備エ藝，配制不含余甘子、蓽茇的陰性樣品，并按所述余甘子、蓽茇供試品溶液的配制方法制成余甘子、蓽茇陰性樣品溶液；其中，上述重量份以g計(jì)量吋，體積份以mL計(jì)； 優(yōu)選地，所述步驟(Γ)為取六味木香制劑2重量份，研細(xì)后，加こ醇20體積份，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至2體積份，作為余甘子、蓽茇供試品溶液；另取余甘子對(duì)照藥材O. 5重量份，按照所述余甘子、蓽茇供試品溶液的制備方法制成余甘子對(duì)照藥材溶液；再取胡椒堿對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每Iml含胡椒堿Img的溶液，作為胡椒堿對(duì)照品溶液；按處方比例及制備エ藝，配制不含余甘子、蓽茇的陰性樣品，并按所述余甘子、蓽茇供試品溶液的配制方法制成余甘子、蓽茇陰性樣品溶液；其中，上述重量份以g計(jì)量時(shí)，體積份以mL計(jì)。
8.根據(jù)權(quán)利要求I至7中任一項(xiàng)所述的檢測(cè)方法，其中 所述步驟(2’)為照薄層色譜法《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B試驗(yàn)，吸取步驟(Γ)中制得的樣品溶液，將其分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚-こ酸こ酷-甲酸為展開(kāi)劑，薄層板置展開(kāi)缸中飽和，展開(kāi)，取出，晾干，于254nm紫外光燈下檢視。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測(cè)方法，其中 所述吸取的樣品溶液均為5 20 μ 1，優(yōu)選均為10 μ I ;所述石油醚-こ酸こ酷-甲酸的體積比為I 10 : 2 6 : O. 05 O. 5，優(yōu)選體積比為6 4 O. 25，所述石油醚的沸程為60 90°C ;所述薄層板置展開(kāi)缸中飽和O 40分鐘，優(yōu)選飽和20分鐘。
10.根據(jù)權(quán)利要求I至9中任一項(xiàng)所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述檢測(cè)方法進(jìn)ー步包括用高效液相色譜法測(cè)定所述六味木香制劑中木香所含木香烴內(nèi)酯和/或去氫木香內(nèi)酯的含量，其中 所述高效液相色譜法測(cè)定的步驟包括 (I”)制備木香供試品溶液，以及木香烴內(nèi)酯和/或去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品溶液； (2”)將上步所得木香供試品溶液，以及木香烴內(nèi)酯和/或去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品溶液注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定； 優(yōu)選地，所述步驟(I”)中還包括制備木香陰性樣品溶液；所述步驟(2”)中還包括將木香陰性樣品溶液注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的檢測(cè)方法，其中 所述高效液相色譜法測(cè)定的色譜條件為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為60 70 30 40的こ腈-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為225 ±2nm;柱溫20 40°C，理論板數(shù)按木香烴內(nèi)酯峰計(jì)算不低于3000 ； 優(yōu)選地，所述高效液相色譜法測(cè)定的色譜條件為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為65 35的こ臆-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm;柱溫25°C，理論板數(shù)按木香烴內(nèi)酯峰計(jì)算不低于3000。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的檢測(cè)方法，其中 所述步驟(I”)為取六味木香制劑O. I 3重量份，研細(xì)后，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10 50體積份，稱(chēng)定重量，在功率250W，頻率40kHz下超聲處理15 45分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為木香供試品溶液；另外精密稱(chēng)取木香烴內(nèi)酯對(duì)照品和去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml含木香烴內(nèi)酯20 140 μ g和去氫木香內(nèi)酯40 200 μ g的混合溶液，作為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯混合對(duì)照品溶液；按處方比例及制備エ藝，配制不含木香的陰性樣品，并按所述木香供試品溶液的配制方法制成木香陰性樣品溶液；其中，上述重量份以g計(jì)量時(shí)，體積份以mL計(jì)； 優(yōu)選地，所述步驟(I”)為取六味木香制劑I重量份，研細(xì)后，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25體積份，稱(chēng)定重量，在功率250W，頻率40kHz下超聲處理30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為木香供試品溶液；另外精密稱(chēng)取木香烴內(nèi)酯對(duì)照品與和去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每Iml含木香烴內(nèi)酯40 μ g和去氫木香內(nèi)酯60 μ g的混合溶液，作為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯混合對(duì)照品溶液；按處方比例及制備エ藝，配制不含木香的陰性樣品，并按所述木香供試品溶液的配制方法制成木香陰性樣品溶液；其中，上述重量份以g計(jì)量時(shí)，體積份以mL計(jì)； 優(yōu)選地，所述步驟(2”)為分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液各5 20 μ 1，優(yōu)選各10 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
13.根據(jù)權(quán)利要求I至12中任一項(xiàng)所述的檢測(cè)方法，其中 所述六味木香制劑的原料藥組成包括木香200重量份、巴夏嘎360重量份、余甘子500重量份、丑蘧80重量份、石槽子400重量份和蓽發(fā)100重量份。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的檢測(cè)方法，其中 所述六味木香制劑的制備方法為將所述原料藥粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，加水適量制丸，即得丸劑；或?qū)⑺鲈纤幏鬯槌杉?xì)粉，過(guò)篩，混勻，按藥劑學(xué)常規(guī)方法，加入常規(guī)輔料，制成臨床上接受的ロ服制劑顆粒劑、丸剤、膠囊劑、片劑或散剤。
15.根據(jù)權(quán)利要求I至14中任一項(xiàng)所述的檢測(cè)方法，其中，所述六味木香制劑為顆粒齊U、丸剤、膠囊劑、片劑或散剤。
全文摘要
本發(fā)明提供一種六味木香制劑的檢測(cè)方法，所述六味木香制劑包含木香、巴夏嘎、余甘子、豆蔻、石榴子和蓽茇六種藥材成分；該方法通過(guò)薄層色譜法鑒別所述六味木香制劑中的木香、石榴子、余甘子和/或蓽茇。該檢測(cè)方法重現(xiàn)性、穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)便、精密度高、專(zhuān)屬性強(qiáng)、斑點(diǎn)顯色清晰、分離度好；通過(guò)建立方法可靠，專(zhuān)屬性強(qiáng)的質(zhì)量檢測(cè)方法，能夠有效控制六味木香制劑的質(zhì)量，使六味木香制劑的質(zhì)量達(dá)到穩(wěn)定、安全可控。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102645508SQ20121012192
公開(kāi)日2012年8月22日 申請(qǐng)日期2012年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月24日
發(fā)明者張國(guó)霞, 續(xù)艷麗, 陳麗娟 申請(qǐng)人:西藏奇正藏藥股份有限公司