專利名稱：一種冠心寧注射液中大分子物質(zhì)的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種冠心寧注射液中大分子物質(zhì)的檢測方法。
背景技術(shù)：
中藥注射劑化學(xué)成分復(fù)雜，種類繁多，本身又多為大分子物質(zhì)，這些大分子如蛋白質(zhì)、多肽、糖、鞣質(zhì)、果膠等既有免疫原性，又具有免疫反應(yīng)性，因此具有致敏的可能性。中藥注射劑直接作用于靜脈，起效快，但是一旦有副作用，就會產(chǎn)生嚴(yán)重的后果。2009年7月，國家食品藥品監(jiān)督管理局出臺了“中藥注射劑安全性再評價質(zhì)量控制要點”，明確要求對于具體品種的工藝條件下可能存在、而質(zhì)量研究中未檢出的大類成分，應(yīng)建立排除性檢查方法， 必要時，應(yīng)建立高分子量物質(zhì)檢查項。本研究正是基于這一要求展開，建立了一種簡便快捷的方法檢測冠心寧注射液中的大分子物質(zhì)，并且對于中藥注射劑中的大分子物質(zhì)的排除性檢測方法的確立，目前尚無法規(guī)性的方法可參照。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種冠心寧注射液中大分子物質(zhì)的檢測方法。本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明冠心寧注射液中大分子物質(zhì)的檢測方法為凝膠色譜測定方法，該方法包括如下步驟色譜條件色譜柱為TSKgel G3000PWXL(7. 8mmX 300mm);流動相為水溶液；流速 0. 5-0. 12ml/min ;柱溫 25-35°C ;進(jìn)樣量 3-8 U I ；蒸發(fā)光散射檢測器條件漂移管溫度108_112°C ;載氣(空氣)流速2. 5-3. 5ml/ min ；精密稱取相對分子質(zhì)量分別為2500，4600，7100，10000,21400的右旋糖酐對照品 5份，用水溶液配制成各0. 8-1. 2mg/ml的溶液，即得對照品溶液I，同時取水溶液作空白對照溶液，進(jìn)樣測試，以保留時間tK為橫坐標(biāo)，右旋糖酐分子質(zhì)量的IgMw為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理；分別精密稱量相對分子質(zhì)量為4600和10000的右旋糖酐對照品，用水溶液溶解定容，得濃度為I. 95mg/mL和2. 05mg/mL的溶液，即得對照品溶液II和對照品溶液III，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，測定保留時間，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD ；取對照品溶液II和對照品溶液III，分別稀釋至10倍、100倍、200倍、400倍、500 倍、600倍，進(jìn)樣分析，計算右旋糖酐對照品的最低檢出限；取對照品溶液II和對照品溶液III，分別放置0、2、4、8h后進(jìn)樣測定，計算保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD ；分別取5批冠心寧注射液，微孔濾膜濾過，進(jìn)樣測定。該方法中所述色譜條件優(yōu)選為色譜柱為TSKgel G3000PWXL(7. 8_X 300_);流動相為水溶液；流速0. 8ml/min ;柱溫30°C ;進(jìn)樣量5 yl ;
蒸發(fā)光散射檢測器條件漂移管溫度110°C ;載氣(空氣)流速3. Oml/min ；該方法中對照品溶液I的制備方法優(yōu)選為精密稱取相對分子質(zhì)量分別為2500， 4600，7100，10000, 21400的右旋糖酐對照品5份，用水溶液配制成各lmg/ml的溶液，即得對照品溶液I ;依據(jù)凝膠色譜的分離原理相同實驗條件下，物質(zhì)的分子質(zhì)量越大，保留時間越短；分子質(zhì)量越小，保留時間越長。蒸發(fā)光散射檢測器是高度穩(wěn)定和靈敏的液相色譜和凝膠滲透色譜檢測器，可用于檢測在紫外光范圍內(nèi)吸光度不高的化合物，如聚合物、糖、有機(jī)酸和甘油三酸酯，和示差檢測器相比，不需要平衡過長的時間，操作方便。本發(fā)明冠心寧注射液中大分子物質(zhì)的檢測方法經(jīng)過專屬性和線性考察、精密度、穩(wěn)定性等一系列考察驗證，能夠簡便快捷的檢測冠心寧注射液中的大分子物質(zhì)；從HPLC圖譜中可知所測5批冠心寧注射液樣品未檢測出分子量高于2500的大分子物質(zhì)。。下述實驗例和實施例用于進(jìn)一步證明但不限于本發(fā)明。實驗例I :a儀器與試藥Agilent 1200高效液相色譜儀，Alltech蒸發(fā)光散射檢測器，Mettler Toledo AB204-L電子天平。右旋糖酐對照品(相對分子質(zhì)量分別為2500，4600，7100，10000，21400中國藥品生物制品檢定所，批號140646-2000-01)，水為純凈水，冠心寧注射液5批(批號分別為 100102、100202、100302、100402、100502，亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供)。b方法與結(jié)果色譜條件色譜柱為TSKgel G3000PWXL(7. 8mmX300mm);流動相為水溶液；流速 0. 8ml/min ;柱溫 30°C ;進(jìn)樣量 5u I ；蒸發(fā)光散射檢測器條件漂移管溫度110°C ;載氣(空氣)流速3. Oml/min ；專屬性和線性考察精密稱取上述5份對照品用水溶液配制成各lmg/mL的溶液，即得對照品溶液I，同時取水溶液作空白對照溶液，分別進(jìn)樣，按上述色譜條件測試，圖譜見圖 1，以保留時間tK為橫坐標(biāo)，右旋糖酐分子質(zhì)量的IgMw為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理，得線性回歸方程為=IgMff = -0. 3368tE+9. 2954,r = 0. 9995，測定結(jié)果見表I。結(jié)果表明空白對照溶液在相應(yīng)的保留時間處均無干擾，右旋糖酐標(biāo)準(zhǔn)溶液在相對分子質(zhì)量2500 21400范圍內(nèi)相對分子質(zhì)量與保留時間呈良好的線性關(guān)系。表I 5種不同分子量右旋糖酐對照品的保留時間
權(quán)利要求
1.一種冠心寧注射液中大分子物質(zhì)的檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟 色譜條件色譜柱為TSKgel G3000PWXL 7. 8mmX300mm ;流動相為水溶液；流速.O.5-0. 12ml/min ;柱溫 25-35。；進(jìn)樣量 3-8 μ l ；蒸發(fā)光散射檢測器條件漂移管溫度108-112°C ;載氣流速2. 5-3. 5ml/min ；精密稱取相對分子質(zhì)量分別為2500，4600，7100，10000,21400的右旋糖酐對照品5份， 用水溶液配制成各O. 8-1. 2mg/ml的溶液，即得對照品溶液I，同時取水溶液作空白對照溶液，進(jìn)樣測試，以保留時間tK為橫坐標(biāo)，右旋糖酐分子質(zhì)量的IgMw為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理； 分別精密稱量相對分子質(zhì)量為4600和10000的右旋糖酐對照品，用水溶液溶解定容， 得濃度為I. 95mg/mL和2. 05mg/mL的溶液，即得對照品溶液II和對照品溶液III，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，測定保留時間，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD ；取對照品溶液II和對照品溶液III，分別稀釋至10倍、100倍、200倍、400倍、600倍， 進(jìn)樣分析，計算右旋糖酐對照品的最低檢出限；取對照品溶液II和對照品溶液III，分別放置0、2、4、8h后進(jìn)樣測定，計算保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD ；分別取5批冠心寧注射液，微孔濾膜濾過，進(jìn)樣測定。
2.如權(quán)利要求I所述的冠心寧注射液中大分子物質(zhì)的檢測方法，其特征在于該方法中所述色譜條件為色譜柱為TSKgel G3000PWXL7. 8mmX300mm ;流動相為水溶液；流速.O.8ml/min ;柱溫30°C ;進(jìn)樣量5 μ I ;蒸發(fā)光散射檢測器條件漂移管溫度110°C ;載氣流速.3.Oml/min。
3.如權(quán)利要求I或2所述的冠心寧注射液中大分子物質(zhì)的檢測方法，其特征在于該方法中對照品溶液I的制備方法為精密稱取相對分子質(zhì)量分別為2500，4600，7100，10000， 21400的右旋糖酐對照品5份，用水溶液配制成各lmg/ml的溶液，即得對照品溶液I。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種冠心寧注射液中大分子物質(zhì)的檢測方法，經(jīng)過專屬性和線性考察、精密度、穩(wěn)定性等一系列考察驗證，能夠簡便快捷的檢測冠心寧注射液中的大分子物質(zhì)；從HPLC圖譜中可知所測5批冠心寧注射液樣品未檢測出分子量高于2500的大分子物質(zhì)。
文檔編號G01N30/88GK102590408SQ20121000389
公開日2012年7月18日 申請日期2012年1月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月4日
發(fā)明者任武賢, 禹玉洪, 辛艷, 陳建林 申請人:亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司