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一種酶電極的制備及快速檢測(cè)植物油過(guò)氧化值的方法

文檔序號(hào):6024135閱讀:430來(lái)源:國(guó)知局
專利名稱:一種酶電極的制備及快速檢測(cè)植物油過(guò)氧化值的方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種酶電極的制備及快速檢測(cè)植物油過(guò)氧化值的方法,屬于食品檢測(cè)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
油脂在加工、貯藏、流通、使用等過(guò)程中,由于光、熱、空氣中的氧等作用常會(huì)發(fā)生酸敗變質(zhì)的復(fù)雜變化。一般油脂尤其是富含不飽和脂肪酸的植物油在空氣中氧的作用下易氧化酸敗,在氧化過(guò)程中生成過(guò)氧化物和氫過(guò)氧化物等中間產(chǎn)物,它們很容易分解而產(chǎn)生揮發(fā)性和非揮發(fā)性脂肪酸、醛、酮和醇等,這些酸敗產(chǎn)物常具有特殊的臭氣和苦澀滋味,大大影響油脂的感官性質(zhì),并且造成其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值大大下降。油脂中的脂質(zhì)過(guò)氧化物的含量是以每千克油脂中活性氧的毫克當(dāng)量即過(guò)氧化值來(lái)表示的,過(guò)氧化值是判斷油脂新鮮程度和質(zhì)量等級(jí)的重要標(biāo)準(zhǔn)。碘量法(GB/T 5538)是油脂過(guò)氧化值國(guó)際通用的分析方法,簡(jiǎn)單易行,在普通化驗(yàn)室里就可以進(jìn)行,但碘量法測(cè)定過(guò)程易受多種外界因素的影響,如溶液的PH值、溫度、加水量及搖動(dòng)速度、滴定終點(diǎn)的判斷等因素,使其測(cè)定值的波動(dòng)性大,重復(fù)性差,所以造成該法靈敏度低,同時(shí)存在取樣量大,難以適應(yīng)于現(xiàn)代社會(huì)所提出的精確、快速、便攜、現(xiàn)場(chǎng)化的食品安全檢測(cè)要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種酶電極的制備及快速檢測(cè)植物油過(guò)氧化值的方法,它能快速檢測(cè)食品植物油過(guò)氧化值。本發(fā)明的原理如下油脂屬于低導(dǎo)電或非導(dǎo)電的、疏水性的物質(zhì),因此研究測(cè)定油脂的過(guò)氧化物成分, 就是在有機(jī)相測(cè)定有機(jī)過(guò)氧化物,就需要制備有機(jī)相過(guò)氧化物酶電極。辣根過(guò)氧化物酶 (Horseradish Peroxidase,HRP)是一種相對(duì)分子量為44000的含有鐵卟啉I(X)作為強(qiáng)鍵合輔助因子的糖蛋白,HRP在室溫下很穩(wěn)定,且容易制得,價(jià)格便宜,是商品化較早、應(yīng)用范圍較廣的酶制劑,被廣泛地應(yīng)用于酶聯(lián)免疫分析和構(gòu)筑生物傳感器。玻碳裸電極在掃描電位范圍0. 1 -0. 4V內(nèi),沒(méi)有任何波峰出現(xiàn),說(shuō)明其對(duì)油脂中的過(guò)氧化物過(guò)氧化月桂酰既無(wú)氧化作用也無(wú)還原作用;辣根過(guò)氧化物酶電極的循環(huán)伏安圖上出現(xiàn)了一對(duì)形狀良好的氧化還原峰;并且,Nafion/MB/HRP酶電極的催化還原電流響應(yīng)Δ Ipred與過(guò)氧化月桂酰的濃度 Cmp在2. 5 X ΙΟ"6 2. 3 X 范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系,所以檢測(cè)出樣品油的Δ Ipred,按線性回歸方程式計(jì)算其過(guò)氧化物的摩爾濃度,即可再換算成植物油中的過(guò)氧化值。為解決上述技術(shù)問(wèn)題,本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明一種酶電極的制備方法,它包括以下步驟a.電極預(yù)處理將玻碳電極(Glass Carbon Electrode)用Al2O3粉研磨拋光,用二次蒸餾水潤(rùn)濕,接著進(jìn)行超聲清洗處理,然后再用二次蒸餾水和丙酮沖洗除去其表面吸附物質(zhì),使其成鏡面;然后將玻碳電極浸入濃度為0. 2mol/L的硫酸溶液中,用PAR 270電化學(xué)工作站進(jìn)行循環(huán)伏安法掃描處理,掃描速度為50m V/s,電壓范圍為-0. 5 +1. 5V,持續(xù)掃描lOmin,得到穩(wěn)定的循環(huán)伏安圖后,取出玻碳電極,然后用二次蒸餾水洗凈,室溫干燥后備用。b.辣根過(guò)氧化物酶Nafion膜修飾的玻碳電極的制備首先,將5%的Nafion溶液用純甲醇稀釋至0. 3%,然后用微量注射器吸取2 10 μ 1的Nafion和甲醇的混合溶液均勻地滴加到步驟a的玻碳電極的表面,然后用紅外干燥器烘干蒸發(fā)掉溶劑甲醇,在電極表面形成一薄層Nafion膜,得到Nafion膜電極。其次,配制濃度為lX10_4mol/L的亞甲基藍(lán)(MB)溶液,然后將Nafion膜電極浸入到亞甲基藍(lán)溶液中,保持lOmin,通過(guò)離子交換,將亞甲基藍(lán)固定到Nafion的膜電極內(nèi),得 Nafion-亞甲基藍(lán)膜電極。然后,采用牛血清白蛋白-戊二醛交聯(lián)方法固定辣根過(guò)氧化物酶(HRP),配制均勻混合液10ml,所述混合液由下述物質(zhì)組成二次蒸餾水10ml、牛血清白蛋白400mg、辣根過(guò)氧化物酶5 IOOmg以及戊二醛156mg ;準(zhǔn)確吸取10 μ 1的混合溶液均勻滴加到上述的 Nafion-亞甲基藍(lán)膜電極表面,在室溫下放置2h,等水分蒸發(fā)后,即形成辣根過(guò)氧化物酶 Nafion膜修飾電極(Nafion/MB/HRP電極),即得本發(fā)明的酶電極,將制備好的酶電極在4°C 溫度下保存?zhèn)溆?。?yōu)選的,所述的酶電極的制備方法,所述步驟b中選擇2 10 μ 1的Nafion甲醇溶液,使酶電極的膜厚度達(dá)到1 4 μ m。優(yōu)選的,所述的酶電極的制備方法,所述步驟b中選擇辣根過(guò)氧化物酶的濃度為 0. 5 10mg/ml。優(yōu)選的,所述的酶電極的制備方法,所述PAR 270電化學(xué)工作站包括EG & GIC83 型恒電位儀、恒電流儀、方正電腦及操作軟件M270電化學(xué)軟件部分。使用上述的酶電極快速檢測(cè)植物油過(guò)氧化值的方法,它包括以下步驟a.標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確稱取0. 398g過(guò)氧化月桂酰標(biāo)準(zhǔn)品加入到IOOml的容量瓶,用無(wú)水乙醇溶解并稀釋到刻度,其濃度為1.0X10_2mOl/L,得過(guò)氧化月桂酰溶液,避光貯存?zhèn)溆茫蝗?. 5ml的0. lmol/L硫酸的水溶液和Iml的1. Omol/L的氯化鋰的乙醇溶液加入到電解池中,然后在電解池中加入O 575μ 1的上述過(guò)氧化月桂酰溶液,接著在電解池中加入乙醇溶液15ml,1,2 二氯乙烷5ml,再加入乙腈至電解池刻度25ml,使電解池中過(guò)氧化月桂酰的濃度為O 2. 3X 10_4mol/L。然后用PAR270電化學(xué)工作站來(lái)測(cè)定權(quán)利要求1所述的酶電極的循環(huán)伏安圖,即分別記錄酶電極在空白樣和加入標(biāo)準(zhǔn)過(guò)氧化月桂酰溶液的循環(huán)伏安圖;測(cè)試條件為,掃描速度0 0. 4V,20mv/s ;在空白樣和加入標(biāo)準(zhǔn)過(guò)氧化月桂酰溶液樣品中,用PAR270電化學(xué)工作站來(lái)測(cè)定權(quán)利要求1所述的酶電極的循環(huán)伏安圖,分別進(jìn)行三次測(cè)量并記錄循環(huán)伏安圖,取其測(cè)量的峰電流平均值減去空白時(shí)亞甲基蘭的還原峰電流后即為過(guò)氧化月桂酰的還原響應(yīng)電流值,以過(guò)氧化月桂酰的電流響應(yīng)值為縱坐標(biāo),過(guò)氧化月桂酰的濃度為橫坐標(biāo),得到過(guò)氧化月桂酰的電流響應(yīng)值與其濃度之間的線性曲線,即標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性回歸方程式,試驗(yàn)過(guò)程在25士0. 5°C下進(jìn)行。b.測(cè)定
取0. 5 2g的植物油樣品置于25ml的電解池中,隨后加入0. 40ml的0. lmol/L 的乙醇硫酸溶液,1. Oml的1. Omol/L的乙醇氯化鋰溶液和5ml的1,2 二氯乙烷,然后用乙腈稀釋到最終刻度25ml,,攪拌并用N2純化5 lOmin,用PAR 270電化學(xué)工作站來(lái)測(cè)定權(quán)利要求1所述的酶電極的循環(huán)伏安圖,分別進(jìn)行三次測(cè)量并記錄循環(huán)伏安圖,取其測(cè)量的峰電流平均值減去空白時(shí)亞甲基蘭的還原峰電流后即為油樣的還原響應(yīng)電流值,取其還原電流響應(yīng)值的平均值作為最后油樣過(guò)氧化值的測(cè)定結(jié)果,按線性回歸方程式計(jì)算其過(guò)氧化物的摩爾濃度,再換算成植物油中的過(guò)氧化值,得到過(guò)氧化值,此過(guò)程在25士0. 5°C下進(jìn)行。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有的有益效果為本發(fā)明的酶電極及快速檢測(cè)植物油過(guò)氧化值的方法在靈敏度和精確性方面優(yōu)于傳統(tǒng)的碘量滴定法,其檢測(cè)下限可達(dá)亞微摩爾的水平。并且,酶電極電化學(xué)分析法由于響應(yīng)時(shí)間短,可快速完成對(duì)樣品的檢測(cè),因此可實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。而且酶電極電化學(xué)分析法中修飾電極由于可以固定化和修飾電活性物質(zhì),有效地提高了其選擇性、可以有效消除其他物質(zhì)的干擾,成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn),在食品檢測(cè)中應(yīng)用越來(lái)越多。所以本發(fā)明的酶電極及快速檢測(cè)植物油過(guò)氧化值的方法靈敏度高、選擇性好、精確度高、響應(yīng)時(shí)間短,是一種簡(jiǎn)捷快速、方便易行的過(guò)氧化值測(cè)定方法,具有實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化測(cè)定的潛力,在食品檢測(cè)領(lǐng)域?qū)?huì)發(fā)揮重要的作用。


圖1表示玻碳裸電極在3. OX 10_5mol/L過(guò)氧化月桂酰溶液中的循環(huán)伏安圖。圖2表示HRP酶電極在空白溶液中的循環(huán)伏安3表示HRP酶電極在3. OX 10_5mol/L過(guò)氧化月桂酰的溶液中的循環(huán)伏安4表示HRP酶電極對(duì)過(guò)氧化月桂酰的催化還原電流與濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。如圖所示,圖1表示玻碳裸電極在3. OX 10_5mOl/L過(guò)氧化月桂酰溶液中的循環(huán)伏安圖。橫坐標(biāo)為電壓,縱坐標(biāo)為電流,玻碳裸電極在掃描電位范圍0. 1 -0.4V內(nèi),沒(méi)有任何波峰出現(xiàn),說(shuō)明其對(duì)過(guò)氧化月桂酰既無(wú)氧化作用也無(wú)還原作用。圖2表示HRP酶電極在空白溶液中的循環(huán)伏安圖。橫坐標(biāo)為電壓,縱坐標(biāo)為電流, Nafion/MB/HRP酶電極在空白溶液中的循環(huán)伏安圖上出現(xiàn)了一對(duì)形狀良好的氧化還原峰, 這說(shuō)明亞甲基藍(lán)能有效地在HRP和電極表面?zhèn)鬟f電子。圖3表示HRP酶電極在3. OX 10_5mol/L過(guò)氧化月桂酰的溶液中的循環(huán)伏安圖。橫坐標(biāo)為電壓,縱坐標(biāo)為電流,當(dāng)溶液中含3. 0 X 10_5mOl/L的過(guò)氧化月桂酰時(shí),其還原峰電流與空白溶液時(shí)相比增加了 40%,說(shuō)明過(guò)氧化月桂酰的存在會(huì)使還原峰電流增大,而且隨著過(guò)氧化月桂酰濃度的增加,其還原峰電流會(huì)繼續(xù)增大。圖4表示HRP酶電極對(duì)過(guò)氧化月桂酰的催化還原電流與濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。橫坐標(biāo)為過(guò)氧化月桂酰的濃度,縱坐標(biāo)為電流,HRP酶電極的催化還原電流響應(yīng)Δ Ipred與過(guò)氧化月桂酰的濃度Cuip在2. 5X ΙΟ"6 2. 3X IO-4M范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。實(shí)施例1
大豆油過(guò)氧化值的測(cè)定1、酶電極的制備方法a.電極預(yù)處理將玻碳電極(Glass Carbon Electrode)用Al2O3粉研磨拋光,用二次蒸餾水潤(rùn)濕, 接著進(jìn)行超聲清洗處理,然后再用二次蒸餾水和丙酮沖洗除去其表面吸附物質(zhì),使其成鏡面;然后將玻碳電極浸入濃度為0. 2mol/L的硫酸溶液中,用PAR 270電化學(xué)工作站進(jìn)行循環(huán)伏安法掃描處理,掃描速度為50m V/s,電壓范圍為-0. 5 +1. 5V,持續(xù)掃描lOmin,得到穩(wěn)定的循環(huán)伏安圖后,取出玻碳電極,然后用二次蒸餾水洗凈,室溫干燥后備用。b.辣根過(guò)氧化物酶Nafion膜修飾的玻碳電極的制備首先,將5%的Nafion溶液用純甲醇稀釋至0. 3 %,然后用微量注射器吸取5 μ 1 的Nafion和甲醇的混合溶液均勻地滴加到步驟a的玻碳電極的表面,然后用紅外干燥器烘干蒸發(fā)掉溶劑甲醇,在電極表面形成一薄層Nafion膜,得到Nafion膜電極。其次,配制濃度為IX 10_4mol/L的亞甲基藍(lán)(MB)溶液,然后將Nafion膜電極浸入到亞甲基藍(lán)溶液中,保持lOmin,通過(guò)離子交換,將亞甲基藍(lán)固定到Nafion的膜電極內(nèi),得 Nafion-亞甲基藍(lán)膜電極。然后,采用牛血清白蛋白-戊二醛交聯(lián)方法固定辣根過(guò)氧化物酶(HRP),配制均勻混合液10ml,所述混合液由下述物質(zhì)組成二次蒸餾水10ml、牛血清白蛋白400mg、辣根過(guò)氧化物酶70mg以及戊二醛156mg ;準(zhǔn)確吸取10 μ 1的混合溶液均勻滴加到上述的 Nafion-亞甲基藍(lán)膜電極表面,在室溫下放置池,等水分蒸發(fā)后,即形成辣根過(guò)氧化物酶 Nafion膜修飾電極(Nafion/MB/HRP電極),即得本發(fā)明的酶電極,將制備好的酶電極在4°C 溫度下保存?zhèn)溆谩?、用酶電極快速檢測(cè)大豆油過(guò)氧化值a.標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確稱取0. 398g過(guò)氧化月桂酰標(biāo)準(zhǔn)品加入到IOOml的容量瓶,用無(wú)水乙醇溶解并稀釋到刻度,其濃度為ι. οX 10-2mol/L,得過(guò)氧化月桂酰溶液,避光貯存?zhèn)溆谩H?. 5ml的0. lmol/L硫酸的水溶液和Iml的1. Omol/L的氯化鋰的乙醇溶液加入到電解池中,然后在電解池中分別加入0,75 μ 1,125 μ 1,225 μ 1,375 μ 1,500 μ 1, 575 μ 1的上述過(guò)氧化月桂酰溶液,接著在電解池中加入乙醇溶液15ml,1,2 二氯乙烷5ml, 再加入乙腈至電解池刻度25ml,使電解池中過(guò)氧化月桂酰的濃度為0,3.0X10_5mol/L, 5. OX l(T5mol/L,9. OX l(T5mol/L,1· 5 X 10、ol/L,2. OX l(T4mol/L,2. 3 X l(T4mol/L。然后用PAR 270電化學(xué)工作站來(lái)測(cè)定酶電極的循環(huán)伏安圖,即分別記錄酶電極在空白樣和加入標(biāo)準(zhǔn)過(guò)氧化月桂酰溶液的循環(huán)伏安圖;測(cè)試條件為,掃描速度0 0. 4V,20mv/s ;在空白樣和加入標(biāo)準(zhǔn)過(guò)氧化月桂酰溶液樣品中,用PAR 270電化學(xué)工作站來(lái)測(cè)定酶電極的循環(huán)伏安圖,分別進(jìn)行三次測(cè)量并記錄循環(huán)伏安圖,取其測(cè)量的峰電流平均值減去空白時(shí)亞甲基蘭的還原峰電流后即為過(guò)氧化月桂酰的還原響應(yīng)電流值,以過(guò)氧化月桂酰的電流響應(yīng)值為縱坐標(biāo),過(guò)氧化月桂酰的濃度為橫坐標(biāo),得到過(guò)氧化月桂酰的電流響應(yīng)值與其濃度之間的線性曲線,即標(biāo)準(zhǔn)曲線(如圖4所示)及線性回歸方程式,Δ Ipred = 0. 0155XCLHP+0. 091此處,Δ Ipred為Nafion/MB/HRP酶電極對(duì)過(guò)氧化月桂酰的催化還原電流(為酶電極對(duì)一定濃度的過(guò)氧化月桂酰溶液的還原峰電流減去酶電極對(duì)空白溶液時(shí)的還原峰電流),μ A ;CLHp為過(guò)氧化月桂?;蚱渌^(guò)氧化物的濃度,μ mol/L ;相關(guān)系數(shù)R2 = 0. 996。試驗(yàn)過(guò)程在25 士 0.5 °C下進(jìn)行。b.測(cè)定取1. 6g大豆油置于25ml的電解池中,隨后加入0. 40ml的0. lmol/L的乙醇硫酸溶液,1. Oml的1. Omol/L的乙醇氯化鋰溶液和5ml的1,2 二氯乙烷,然后用乙腈稀釋到最終刻度25ml,攪拌并用N2純化8min,用PAR 270電化學(xué)工作站來(lái)測(cè)定酶電極的循環(huán)伏安圖, 分別進(jìn)行三次測(cè)量并記錄循環(huán)伏安圖,取其測(cè)量的峰電流平均值減去空白時(shí)亞甲基蘭的還原峰電流后即為油樣的還原響應(yīng)電流值,取其還原電流響應(yīng)值的平均值作為最后油樣過(guò)氧化值的測(cè)定結(jié)果,按線性回歸方程式計(jì)算其過(guò)氧化物的摩爾濃度,再換算成植物油中的過(guò)氧化值,得到過(guò)氧化值,此過(guò)程在25士0. 5°C下進(jìn)行。為了驗(yàn)證該方法的有效性,同時(shí)利用標(biāo)準(zhǔn)碘量法分析測(cè)定同一大豆油樣。每個(gè)油樣的分析測(cè)定重復(fù)三次,取其平均值作為最后油樣過(guò)氧化值的測(cè)定結(jié)果。表1 Nafion/MB/HRP酶電極法和標(biāo)準(zhǔn)碘量法分析大豆油樣品過(guò)氧化值的結(jié)果比較
權(quán)利要求
1.一種酶電極的制備方法,其特征是,它包括以下步驟a.電極預(yù)處理將玻碳電極(Glass Carbon Electrode)用Al2O3粉研磨拋光,用二次蒸餾水潤(rùn)濕,接著進(jìn)行超聲清洗處理,然后再用二次蒸餾水和丙酮沖洗除去其表面吸附物質(zhì),使其成鏡面;然后將玻碳電極浸入濃度為0. 2mol/L的硫酸溶液中,用PAR 270電化學(xué)工作站進(jìn)行循環(huán)伏安法掃描處理,掃描速度為50m V/s,電壓范圍為-0. 5 +1. 5V,持續(xù)掃描lOmin,得到穩(wěn)定的循環(huán)伏安圖后,取出玻碳電極,然后用二次蒸餾水洗凈,室溫干燥后備用;b.辣根過(guò)氧化物酶Nafion膜修飾的玻碳電極的制備首先,將5%的Nafion溶液用純甲醇稀釋至0. 3%,然后用微量注射器吸取2 10 μ 1 的Nafion和甲醇的混合溶液均勻地滴加到步驟a的玻碳電極的表面,然后用紅外干燥器烘干蒸發(fā)掉溶劑甲醇,在電極表面形成一薄層Nafion膜,得到Nafion膜電極;其次,配制濃度為lX10_4mol/L的亞甲基藍(lán)(MB)溶液,然后將Naf ion膜電極浸入到亞甲基藍(lán)溶液中,保持lOmin,通過(guò)離子交換,將亞甲基藍(lán)固定到Nafion的膜電極內(nèi),得 Nafion-亞甲基藍(lán)膜電極;然后,采用牛血清白蛋白-戊二醛交聯(lián)方法固定辣根過(guò)氧化物酶(HRP),配制均勻混合液10ml,所述混合液由下述物質(zhì)組成二次蒸餾水10ml、牛血清白蛋白400mg、辣根過(guò)氧化物酶5 IOOmg以及戊二醛156mg ;準(zhǔn)確吸取10 μ 1的混合溶液均勻滴加到上述的 Nafion-亞甲基藍(lán)膜電極表面,在室溫下放置池,等水分蒸發(fā)后,即形成辣根過(guò)氧化物酶 Nafion膜修飾電極(Nafion/MB/HRP電極),即得本發(fā)明的酶電極,將制備好的酶電極在4°C 溫度下保存?zhèn)溆谩?br> 2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶電極的制備方法,其特征是,所述步驟b中選擇2 10μ 1 的Nafion和甲醇的混合溶液,使酶電極的膜厚度達(dá)到1 4 μ m。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶電極的制備方法,其特征是,所述步驟b中選擇辣根過(guò)氧化物酶的濃度為0. 5 10mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶電極的制備方法,其特征是,所述PAR270電化學(xué)工作站包括EG&G M283型恒電位儀、恒電流儀、方正電腦及操作軟件M270電化學(xué)軟件部分。
5.使用權(quán)利要求1所述的酶電極快速檢測(cè)植物油過(guò)氧化值的方法,其特征是,它包括以下步驟a.標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確稱取0. 398g過(guò)氧化月桂酰標(biāo)準(zhǔn)品加入到IOOml的容量瓶,用無(wú)水乙醇溶解并稀釋到刻度,其濃度為1.0X10_2mOl/L,得過(guò)氧化月桂酰溶液,避光貯存?zhèn)溆?;?. 5ml的0. lmol/L硫酸的水溶液和Iml的1. Omol/L的氯化鋰的乙醇溶液加入到電解池中,然后在電解池中加入O 575μ 1的上述過(guò)氧化月桂酰溶液,接著在電解池中加入乙醇溶液15ml,1,2 二氯乙烷5ml,再加入乙腈至電解池刻度25ml,使電解池中過(guò)氧化月桂酰的濃度為O 2. 3X 10_4mol/L,然后用PAR 270電化學(xué)工作站來(lái)測(cè)定權(quán)利要求1所述的酶電極的循環(huán)伏安圖,即分別記錄酶電極在空白樣和加入標(biāo)準(zhǔn)過(guò)氧化月桂酰溶液的循環(huán)伏安圖;測(cè)試條件為,掃描速度0 0. 4V,20mv/s ;在空白樣和加入標(biāo)準(zhǔn)過(guò)氧化月桂酰溶液樣品中,用PAR 270電化學(xué)工作站來(lái)測(cè)定權(quán)利要求1所述的酶電極的循環(huán)伏安圖,分別進(jìn)行三次測(cè)量并記錄循環(huán)伏安圖,取其測(cè)量的峰電流平均值減去空白時(shí)亞甲基蘭的還原峰電流后即為過(guò)氧化月桂酰的還原響應(yīng)電流值,以過(guò)氧化月桂酰的電流響應(yīng)值為縱坐標(biāo),過(guò)氧化月桂酰的濃度為橫坐標(biāo),得到過(guò)氧化月桂酰的電流響應(yīng)值與其濃度之間的線性曲線,即標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性回歸方程式,試驗(yàn)過(guò)程在25士0.5°C下進(jìn)行;b.測(cè)定取0. 5 2g的植物油樣品置于25ml的電解池中,隨后加入0. 40ml的0. lmol/L的乙醇硫酸溶液,1. Oml的1. Omol/L的乙醇氯化鋰溶液和5ml的1,2 二氯乙烷,然后用乙腈稀釋到最終刻度25ml,攪拌并用&純化5 lOmin,用PAR 270電化學(xué)工作站來(lái)測(cè)定權(quán)利要求 1所述的酶電極的循環(huán)伏安圖,分別進(jìn)行三次測(cè)量并記錄循環(huán)伏安圖,取其測(cè)量的峰電流平均值減去空白時(shí)亞甲基蘭的還原峰電流后即為油樣的還原響應(yīng)電流值,取其還原電流響應(yīng)值的平均值作為最后油樣過(guò)氧化值的測(cè)定結(jié)果,按線性回歸方程式計(jì)算其過(guò)氧化物的摩爾濃度,再換算成植物油中的過(guò)氧化值,得到過(guò)氧化值,此過(guò)程在25士0. 5°C下進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明屬食品檢測(cè)領(lǐng)域,具體涉及一種酶電極的制備及快速檢測(cè)植物油過(guò)氧化值的方法,它包括選用玻碳電極,先制備Nafion-亞甲基藍(lán)膜電極,然后采用牛血清白蛋白-戊二醛交聯(lián)方法固定辣根過(guò)氧化物酶,得到最終辣根過(guò)氧化物酶電極,然后用該電極快速檢測(cè)植物油的過(guò)氧化值。該方法靈敏度高、選擇性好、精確度高、響應(yīng)時(shí)間短、干擾少,優(yōu)于傳統(tǒng)的碘量滴定法,是一種簡(jiǎn)捷快速、方便易行的過(guò)氧化值測(cè)定方法,具有實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定的潛力。
文檔編號(hào)G01N27/416GK102435650SQ201110392099
公開(kāi)日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2011年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月1日
發(fā)明者任媛媛, 李書(shū)國(guó), 石亞麗, 薛文通, 袁濤 申請(qǐng)人:河北科技大學(xué)
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